Вскрытие всей центральной и периферической нервной системы у мышей

Krystina Rhéaume; Zhiguo Chen; Yong Wang; Camille Plante; Dhanushka Hewa Bostanthirige; Maude Lévesque; Sameh Geha; Lu Q. Le; Jean-Philippe Brosseau

doi:10.3791/64974

Методическая статья

Вскрытие всей центральной и периферической нервной системы у мышей

DOI:

10.3791/64974

⸱

24 февраля 2023 г.

Krystina Rhéaume^*¹ , Zhiguo Chen^*² , Yong Wang^*² , Camille Plante¹ , Dhanushka Hewa Bostanthirige¹ , Maude Lévesque¹ , Sameh Geha³^,⁴ , Lu Q. Le²^,⁵^,⁶^,⁷ , Jean-Philippe Brosseau¹^,⁴

¹Department of Biochemistry and Functional Genomics, Université de Sherbrooke, ²Department of Dermatology, University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas, ³Department of Pathology, Université de Sherbrooke, ⁴Centre de Recherche du Centre Hospitalier de Universitaire de Sherbrooke, Université de Sherbrooke, ⁵Simmons Comprehensive Cancer Center, University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas, ⁶UTSW Comprehensive Neurofibromatosis Clinic, University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas, ⁷Hamon Center for Regenerative Science and Medicine, University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы представляем протокол для завершения вскрытия центральной и периферической нервной системы мышей. Рассеченные ткани в дальнейшем анализируются в последующих приложениях, таких как общие снимки или гистология.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Животные модели представляют собой рабочую лошадку в области нейробиологии. Несмотря на это, на сегодняшний день до сих пор не существует пошагового протокола для полного препарирования нервной системы грызуна, а также нет полной схемы, представляющей ее, которая была бы в свободном доступе. Доступны только методы забора головного мозга, спинного мозга, определенного ганглия заднего корешка и седалищного нерва (отдельно). Здесь мы приводим подробные фотографии и схему центральной и периферической нервной системы мышей. Что еще более важно, мы описываем надежную процедуру для выполнения его вскрытия. 30-минутный этап предварительного рассечения позволяет изолировать интактную нервную систему внутри позвонка с помощью мышц, свободных от внутренних органов и кожи. За этим следует 2-4-часовое вскрытие под микроскопом, чтобы обнажить спинной мозг и грудные нервы и, наконец, снять кожуру со всей центральной и периферической нервной системы. Этот протокол представляет собой значительный шаг вперед в изучении анатомии и патофизиологии нервной системы во всем мире. Например, рассеченные ганглии дорсальных корешков из модели мышей с нейрофиброматозом I типа могут быть дополнительно обработаны для гистологии, чтобы выявить изменения в прогрессировании опухоли.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Общая цель этого метода состоит в том, чтобы изолировать центральную и периферическую нервную систему мыши в целое целое. В настоящее время не существует протокола для препарирования всей нервной системы грызуна для ее изучения на глобальном уровне. Неврологи обычно используют седалищный нерв в качестве суррогата для любого периферического нерва¹, а ганглии от L3 до L5^{2 в} качестве суррогата для любых ганглий. Используя эти методы, невозможно сделать вывод, являются ли результаты специфичными для конкретного нерва/ганглия. Поскольку известно, что по крайней мере некоторые нервные патологи....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протоколы, использованные в этом исследовании, были одобрены Comité Institutionnel des Animaux de l'Université de Sherbrooke, учреждением, сертифицированным Канадским советом по уходу за животными.

1. Подготовка к микродиссекции (преддиссекция)

Провести анестезию 5% изофлураном, затем эвтаназию 2% изофлураном и 10 psi CO₂ до тех пор, пока не исчезнут жизненные показатели.
ПРИМЕЧАНИЕ: Не выполняйте вывих шейного отдела, так как это повреждает спинной мозг и шейные ганглии.
Поместите усыпленную мышь лицевой стороной вверх (вид спереди) на подушечку для вскр....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Грызуны сыграли важную роль в нашем понимании биологии нервной системы и патофизиологии¹⁰. Интересно, что ни один метод не представляет собой полного вскрытия центральной и периферической нервной системы грызуна для оценки анатомии и патологических вариаций в модели реального времени ^1,2,11. На рисунке 1 представлен обзор этапов с 1 по 4 (подготовка к микродиссекции, обнажени.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Чтобы мышцы и нервы не высыхали, тушу следует замачивать в PBS каждые 10 минут. При вывихе нижних конечностей (шаг 1.12.6) важно всегда держать в поле зрения сплетение седалищного нерва и L2, чтобы избежать его повреждения/разрыва. При вскрытии мозга (шаг 1.14.4) очень важно избегать слишком глубокого погружения, чтобы не повредить мозг. При рассечении ганглиев дорсальных корешков и периферических нервов в целом крайне важно использовать высококачественные (не поврежденные) мини-щипцы Дю.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявили об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

JPB является научным сотрудником FRSQ J1 и лауреатом премии Early Investigator Research Award от Министерства обороны США. LQL является обладателем награды за карьеру для ученых-медиков от Фонда Burroughs Wellcome и профессора дерматологии Томаса Л. Шилдса, доктора медицинских наук.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
Имя	Компания	Каталожный номер
Мини-щипцы Dumont	Fine Science Tools	#11200-10
Extra Bonn ножницы	Fine Science Tools	#14084-08
Формалин 10%	Fischer Scientific	#22-046-361
PBS 1x	BioShopCanada	#PBS404.500
Стандартные анатомические щипцы	Fine Science Tools	#91100-12
Хирургические ножницы	Fine Science Tools	#140001-12
Весенние ножницы Vannas	Kent Scientific	#INS600124

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bala, U., Tan, K. L., Ling, K. H., Cheah, P. S. Harvesting the maximum length of sciatic nerve from adult mice: a step-by-step approach. BMC Reserach Notes. 7, 714(2014).
Sleigh, J. N., Weir, G. A., Schiavo, G. A simple....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Вскрытие всей центральной и периферической нервной системы у мышей

В этой статье

Краткое содержание

Аннотация

Введение

Протокол

Результаты

Обсуждение

Раскрытие информации

Благодарности

Материалы

Ссылки

Перепечатки и разрешения

Теги

Похожие статьи