Тщательно вылепленный эволюцией, глаз состоит из сложных, но прекрасно организованных тканей, которые работают вместе для восприятия света. Сетчатка, часть глаза, представляющая собой внешнее продолжение мозга, играет центральную роль в обнаружении фотонов, преобразовании света в нейронные коды и передаче закодированной нейронной информации в мозг. Из-за своей важности в этих процессах сетчатка изучается на протяжении десятилетий как модель физиологических и патологических процессов центральной нервной системы. Тем не менее, неизлечимая слепота по-прежнему в основном вызвана дегенерацией сетчатки.
Тематическая цель этой коллекции методов заключается в предоставлении высоковоспроизводимых и согласованных методов для ученых и офтальмологов, занимающихся исследованиями глаз. В соответствии с этой целью в этот сборник были включены и обсуждены шесть статей о новых или улучшенных методах. В этих статьях рассматриваются такие методы, как мониторинг динамического роста сосудов в патологических условиях, дифференцировка iPS человека в органоиды сетчатки, подготовка фоторецепторных клеточных компартментов, оценка in vivo функций ганглиозных клеток сетчатки (ГСК) у крупных животных, оптимизация записи электроретинограммы (ЭРГ) ex vivo и упрощенное титрование частиц аденоассоциированного вируса (AAV) в терапевтических и исследовательских целях.
Вкратце, как часть этой коллекции, Ma и Li1 представляют собой метод улучшенного анализа изображений, включающий мониторинг ремоделирования сосудов сетчатки в условиях кислород-индуцированной ретинопатии (ОИР), что поможет в изучении ряда заболеваний, связанных с сосудами сетчатки, таких как пролиферативная диабетическая ретинопатия (PDR), ретинопатия недоношенных (ROP) и окклюзия вен сетчатки (RVO). Guan et al.2 описывают оптимизированный протокол индукции органоидов сетчатки для создания тканей сетчатки с высокой воспроизводимостью и эффективностью, что принесет пользу моделированию заболеваний и клеточной терапии. Rose et al.3 представляют относительно быстрый и простой метод обогащения субклеточно-специфических белковых фракций фоторецепторов в нормальных палочках, который может быть адаптирован для выделения и количественного исследования белкового состава других слоев сетчатки как из здоровой, так и из дегенерирующей сетчатки. Ye et al.4 демонстрируют in vivo оценку структуры и функции РГК и зрительного нерва (ОН) у крупных животных, включая коз и приматов, с использованием визуального вызванного потенциала (VEP), шаблонной электроретинограммы (PERG) и оптической когерентной томографии (OCT) с целью повышения экспериментальной воспроизводимости и облегчения использования моделей оптических невропатий у крупных животных. Abbas et al.5 оптимизируют настройку и условия для электроретинограмм ex vivo для улучшения анализа функции сетчатки и максимизации амплитуды и стабильности ответа, что позволяет количественно оценить вклад отдельных типов клеток в изолированную сетчатку. Эти усовершенствования облегчают исследование световых реакций в образцах сетчатки от крупных животных и человеческих донорских глаз. Наконец, Okan et al.6 предлагают метод цифровой капельной ПЦР (dd-PCR) для количественного определения числа копий генома абсолютного аденоассоциированного вируса (AAV) в инъецированной сетчатке с высокой точностью. Этот метод принесет большую пользу растущему числу исследований в области редактирования генов/терапии и в отраслях, которые регулярно используют векторы AAV для трансдукции тканей хозяина. Метод также может быть потенциально модифицирован для количественного определения числа копий митохондриальной ДНК.
Все вышеперечисленные статьи в этом сборнике методов описывают современные технологии, нацеленные на физиологию сетчатки и механизмы заболеваний, и эти технологии особенно полезны в быстро развивающейся области генной и клеточной терапии сетчатки. Однако эти методы не совсем просты, поскольку существуют значительные различия в надежности между лабораториями и установками. Тем не менее, последовательные усовершенствования, представленные в этой коллекции, в конечном итоге приведут к инновациям в разработке новых инструментов и методологий, что позволит решить будущие задачи и продвинуть эту область вперед. В заключение, это представляет собой успешную коллекцию методов, которая представляет большой интерес для аудитории в этой области.