Данный протокол представляет собой оптимизированную систему биотестирования с отрывными листьями для оценки эффективности энтомопатогенных грибов (EPF) против партеногенетического насекомого горчичной тли (Lipaphis erysimi (Kalt.)). Метод описывает процесс сбора данных во время экспериментов с чашкой Петри, что позволяет исследователям последовательно измерять вирулентность EPF против горчичной тли и других партеногенетических насекомых.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Оценка афидицидного действия энтомопатогенных грибов в отношении партеногенетического насекомого, горчичной тли, Lipaphis erysimi (Kalt.)
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Горчичная тля (L. erysimi) – вредитель, поражающий различные крестоцветные культуры и передающий вирусы растений. Для достижения экологически чистой борьбы с вредителями энтомопатогенные грибы (EPF) являются потенциальными микробными агентами для борьбы с этим вредителем. Поэтому перед полевым применением необходимо провести скрининг вирулентности изолятов EPF в условиях чашки Петри. Однако горчичная тля является партеногенетическим насекомым, что затрудняет запись данных во время экспериментов с чашкой Петри. Для решения этой проблемы была разработана модифицированная система для биопроб с отделившимися листьями, использующая микроопрыскиватель для инокуляции конидий на тлю и предотвращения утопления, облегчая сушку на воздухе после суспензии спор. Система поддерживала высокую относительную влажность на протяжении всего периода наблюдений, а листовой диск оставался свежим более десяти дней, что позволяло партеногенетического размножения тли. Для предотвращения наращивания потомства был реализован процесс ежедневного удаления с помощью малярной кисти. Этот протокол демонстрирует стабильную систему оценки вирулентности изолятов EPF против горчичной тли или других видов тли, что позволяет выбирать потенциальные изоляты для борьбы с тлей.
Введение
Горчичная тля (L. erysimi) является печально известным вредителем, который поражает различные крестоцветные культуры, нанося значительный экономический ущерб1. Несмотря на то, что для борьбы с нашествием тлей было рекомендовано несколько систематических инсектицидов, частое использование этих инсектицидов вызывает опасения по поводу устойчивости к пестицидам 2,3. Таким образом, с точки зрения экологически чистой борьбы с вредителями, энтомопатогенные грибы (EPF) могут служить подходящей альтернативной стратегией борьбы. EPF является насекомым-патогеном, способным заражать хозяе....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Полная блок-схема показана на рисунке 1.
1. Сбор и уход за горчичной тлей
- Сбор горчичной тли
- Переверните листья и визуально проверьте наличие горчичной тли на крестоцветных культурах в поле.
- Запишите информацию о месте отбора проб (например, GPS) и растениях-хозяевах, а также подтвердите историю применения инсектицидов у фермеров.
- С помощью аспиратора насекомых или тонкой малярной кисти (см. Таблицу материалов) соберите около 50 горчичных тлей в центрифужную пробирку объемом 50 мл из крестоцветных культур в поле и дост....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Представленная блок-схема иллюстрирует стабильное состояние горчичной тли от полевого сбора до скрининга вирулентности. Содержание тли от полевого сбора обеспечило стабильный рост колоний тлей при достаточной кормовой базе. Тля, собранная в полевых условиях, была подтверждена как горчичная тля с помощью молекулярных маркеров, включая размер ампликона ПЦР и секвенирование LeCO1. Скрининг вирулентности, проведенный с использованием метода отрывных листьев, показал стабильную выживаемость горчичной тли, при этом контрольная.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Крестоцветные, группа овощей, часто поражаются несколькими видами тлей, включая горчичную тлю (L. erysimi) и капустную тлю (Brevicoryne brassicae)26. Оба вида были зарегистрированы на Тайване27, и вполне возможно, что они могут сосуществовать в месте сбора. Для различения близкородственных видов тлей в этом исследовании использовался метод молекулярной идентификации с использованием мультиплексного набора праймеров21. Сконструировав.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что в данной работе отсутствует конфликт интересов.
Благодарности
Это исследование было поддержано 109-2313-B-005 -048 -MY3 Министерством науки и технологий (MOST).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 10 μ L Петля инокуляции | NEST Scientific | 718201 | |
| 100.н. Лестница ДНК III | Geneaid | DL007 | |
| 2x SuperRed PCR Master Mix | Biotools | TE-SR01 | |
| 50 мл центрифужная пробирка | Bioman Scientific | ET5050-12 | |
| 6 см чашка Петри | Alpha Plus Scientific | 16021 | |
| 6 мм аспиратор от насекомых | MegaView Science | BA6001 | |
| 70 мм фильтровальная бумага No.1 | Toyo Roshi Kaisha | ||
| 70% этанол | |||
| 9 см чашка Петри | Alpha Plus Scientific | 16001 | |
| Агар | Bioman Scientific | AGR001.1 | Микробиологический класс |
| Agarose | Bioman Scientific | PB1200 | |
| BioGreen Safe DNA Gel Buffer | Bioman Scientific | SDB001T | |
| Chromas | Technelysium | ||
| GeneDoc | |||
| GenepHlow Gel/PCR Kit Geneaid | DFH300 | https://www.geneaid.com/data/files/1605861013102532959.pdf | |
| Gene-Spin Genomic DNA Isolation Kit | Protech Technology | PT-GD112-V3 | http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf |
| Гемоцитометр | Paul Marienfeld | 640030 | |
| Листья комацуны (Brassica rapa var. perviridis)Tai | Cheng Farm | 1-010-300410 | |
| Микрораспылитель | |||
| MiniAmp Thermal Cycler | Thermo Fisher Scientific | A37834 | |
| Горчичная тля (Lipaphis erysimi)Кисть | |||
| для рисования | Tian Cheng brush company | 4716608400352 | |
| Parafilm M | Bemis | PM-996 | |
| Пеллетный пестик | Bioman Scientific | GT100R | |
| Sabouraud Dextrose Broth | HiMedia | MH033-500G | |
| SPSS Статистика | IBM | ||
| TAE buffer 50x | Bioman Scientific | TAE501000 | |
| Tween 80 | PanReac AppliChem | 142050.1661 |
Ссылки
- Ghosh, S., Roy, A., Chatterjee, A., Sikdar, S. R. Effect of regional wind circulation and meteorological factors on long-range migration of mustard aphids over indo-gangetic plain. Scientific Reports. 9, 5626(2019).
- Dhillon, M. K., Singh, N., Yadava, D. K.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
