$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Анализ отдельных клеток необходим для изучения выявления клеточной гетерогенности и оценки комплексного состояния клетки. Мгновенная реакция клетки на микроокружение также требует анализа одной клетки1. Тем не менее, существуют некоторые ограничения для существующих методов. Флуоресцентное детектирование может быть применено к анализу отдельных клеток, но оно ограничено низкой чувствительностью. Другие проблемы возникают из-за сложного флуоресцентного фона клеток и флуоресцентного фотообесцвечивания при длительном облучении2. Поверхностно-усиленное комбинационное рассеяние света (SERS) может быть квалифицировано с точки зрения анализа отдельных клеток благодаря своим преимуществам, в том числе (1) отражению внутренней молекулярной информации отпечатков пальцев и мгновенной ситуации, (2) сверхвысокой поверхностной чувствительности, (3) удобному мультиплексному обнаружению, (4) высокой фотостабильности, (5) обнаружению можно количественно оценить для сравнительного анализа, (6) предотвращению клеточной автофлуоресценции с возбуждением длины волны NIR, (7) обнаружение может быть выполнено в клеточной водной среде окружающей среды, и (8) обнаружение может быть направлено на конкретную область в ячейке 3,4,5.
Существует два общепризнанных механизма, позволяющих понять SERS как фундаментальное явление: электромагнитное усиление (ЭМ) как доминирующую причину и химическое усиление (ХМ). ЭМ относится к колебаниям коллективных электронов, вызванным электромагнитными волнами, когда частота падающего света совпадает с частотой свободных электронов, колеблющихся в металле, что приводит к возникновению поверхностного плазмонного резонанса (SPR). Когда локализованное SPR (LSPR) происходит за счет падающего лазерного удара по металлическим наночастицам (НЧ), это приводит к резонансному поглощению или рассеянию падающего света. Следовательно, напряженность поверхностного электромагнитного поля металлических НЧ может быть увеличена на два-пять порядков4. Тем не менее, ключом к огромному улучшению SERS является не один металлический NP, а зазор между двумя NP, который создает горячие точки. КМ генерируется с двух сторон, включая (1) взаимодействия между молекулами-мишенями и металлическими НЧ и (2) способность молекул-мишеней переносить электроны в/из металлических НЧ 4,5. Более подробную информацию можно найти в этих обзорных статьях 4,5. В предыдущей литературе было представлено несколько перспективных методов биозондирования и визуализации SERS в живых клетках, например, обнаружение апоптотических клеток6, белков в органеллах7, внутриклеточных микроРНК8, клеточных липидных мембран9,цитокинов10 и метаболитов11 в живых клетках, а также идентификация и мониторинг клеток с помощью конфокальной SERS визуализации2, 11,12,13. Интересно, что безметочный SERS представляет собой уникальное преимущество SERS, который может описывать внутренние молекулярные спектры5.
Основной проблемой для безметочных SERS является рациональная и надежная подложка. Типичными подложками SERS являются НЧ из благородных металлов из-за их превосходной способности рассеивать много света14. В настоящее время все больше внимания уделяется нанокомпозитам из-за их замечательных физико-химических свойств и биосовместимости. Что еще более важно, нанокомпозиты могут демонстрировать лучшую активность SERS из-за интенсивного электромагнитного излучения, индуцированного горячими точками на наногибридах, и дополнительного химического усиления, происходящего от других неметаллических материалов15. Например, Fei et al. использовали квантовые точки MoS 2(QD) в качестве редукторов для синтеза нанокомпозитов AuNP@MoS 2 QD для безметочной визуализации SERS в ближнем инфракрасном диапазоне (NIR) клеток рака молочной железы мышей 4T1 (клеток 4T1)16. Кроме того, Li et al. изготовили подложку 2D SERS, состоящую из нанолистов Au NP и 2D нанолистов дителлурида гафния для безметочных измерений SERS патогенных бактерий пищевого происхождения17. В последнее время углеродные точки (CD), хорошие доноры электронов, используются в качестве восстановителей без других восстановителей или облучения для синтеза Au@carbon точечных нанозондов (Au@CDs)18, которые, как сообщается, являются эффективными материалами для повышения активности SERS на основе эффекта переноса заряда (CT) между ядрами Au и оболочками CD19,20. Более того, CD признаны в качестве укупорочного агента и стабилизатора, предотвращающего агрегацию Au NP21. Кроме того, он открывает больше возможностей для реакций с аналитами, так как может обеспечить большое количество связывающих и активных сайтов20. Воспользовавшись вышеизложенным, Jin et al. разработали быстрый и контролируемый метод изготовления Ag@CD НЧ с уникальными свойствами SERS и превосходной каталитической активностью для мониторинга гетерогенных каталитических реакций в режиме реального времени18.
В данной работе был продемонстрирован простой и малозатратный метод изготовления субстратов Au@CD SERS для идентификации клеточных компонентов и биовизуализации живых клеток SERS без меток, а также для обнаружения и дифференциации Escherichia coli (E. coli) и Staphylococcus aureus (S. aureus), который является перспективным для ранней диагностики заболеваний и лучшего понимания клеточных процессов.