Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Мезенхимальные стромальные клетки, полученные из жировой ткани, совместно культивируемые с первичной смешанной глией для уменьшения прион-индуцированного воспаления

1.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/65565

⸱

11 августа 2023 г.

 ,  ,  , 
1Prion Research Center, Colorado State University, 2Department of Microbiology, Immunology and Pathology, College of Veterinary Medicine and Biomedical Sciences, Colorado State University, 3Department of Environmental and Radiological Health Sciences, College of Veterinary Medicine and Biomedical Sciences, Colorado State University

В этой статье

Краткое содержание

Мезенхимальные стромальные клетки (AdMSCs), полученные из жировой ткани, обладают мощными иммуномодулирующими свойствами, полезными для лечения заболеваний, связанных с воспалением. Мы демонстрируем, как выделять и культивировать мышиные AdMSCs и первичную смешанную глию, стимулировать AdMSCs для повышения регуляции противовоспалительных генов и факторов роста, оценивать миграцию AdMSC и совместно культивировать AdMSCs с первичной смешанной глией, инфицированной прионами.

Аннотация

Мезенхимальные стромальные клетки (МСК) являются мощными регуляторами воспаления за счет выработки противовоспалительных цитокинов, хемокинов и факторов роста. Эти клетки демонстрируют способность регулировать нейровоспаление в контексте нейродегенеративных заболеваний, таких как прионная болезнь и другие нарушения неправильного сворачивания белка. Прионные заболевания могут быть спорадическими, приобретенными или генетическими; Они могут быть результатом неправильного сворачивания и агрегации прионного белка в мозге. Эти заболевания неизменно приводят к летальному исходу, и нет доступных методов лечения.

Одним из самых ранних признаков заболевания является активация астроцитов и микроглии и связанное с этим воспаление, которое происходит до обнаруживаемой агрегации прионов и потери нейронов; таким образом, противовоспалительные и регуляторные свойства МСК могут быть использованы для лечения астроглиоза при прионной болезни. Недавно мы показали, что МСК, полученные из жировой ткани (AdMSCs), культивируемые совместно с клетками BV2 или первичной смешанной глией, уменьшают прион-индуцированное воспаление посредством паракринной сигнализации. В этой статье описывается надежное лечение с использованием стимулированных AdMSC для уменьшения воспаления, вызванного прионами.

Гетерозиготная популяция AdMSC может быть легко выделена из жировой ткани мышей и расширена в культуре. Стимуляция этих клеток воспалительными цитокинами усиливает их способность как мигрировать в гомогенат мозга, инфицированный прионами, так и производить противовоспалительные модуляторы в ответ. Вместе эти методы могут быть использованы для исследования терапевтического потенциала МСК в отношении прионной инфекции и могут быть адаптированы для других нарушений сворачивания белка и нейровоспалительных заболеваний.

Введение

Глиальное воспаление играет ключевую роль в развитии различных нейродегенеративных заболеваний, включая болезнь Паркинсона, Альцгеймера и прионную болезнь. Несмотря на то, что аномальная агрегация белков в значительной степени связана с патогенезом заболевания и нейродегенерацией, глиальные клетки также играют роль в усугублении этого 1,2,3. Таким образом, нацеливание на глиально-индуцированное воспаление является многообещающим терапевтическим подходом. При прионной болезни клеточный прионный белок (PrPC) неправильно сворачивается на ассоциированный с заболеванием прионный белок (PrPSc), который образует олигомеры, агрегирует и нарушает гомеостаз в мозге 4,5,6.

Одним из самых ранних признаков прионной болезни является воспалительная реакция астроцитов и микроглии. Исследования, подавляющие этот ответ путем удаления микроглии или модификации астроцитов, в целом не показали улучшения патогенеза заболевания на животных моделях 7,8,9. Модуляция глиального воспаления без его устранения является интригующей альтернативой в качестве терапевтического средства.

Мезенхимальные стромальные клетки (МСК) стали использоваться в качестве средства для лечения различных воспалительных заболеваний благодаря своей способности модулировать воспаление паракринным образом 10,11. Они показали способность мигрировать к местам воспаления и реагировать на сигнальные молекулы в этих средах, выделяя противовоспалительные молекулы, факторы роста, микроРНК и многое другое. Ранее мы продемонстрировали, что МСК, полученные из жировой ткани (обозначенные AdMSCs), способны мигрировать в гомогенат мозга, инфицированный прионами, и реагировать на этот гомогенат мозга путем повышения экспрессии генов противовоспалительных цитокинов и факторов роста.

Кроме того, AdMSCs могут снижать экспрессию генов, ассоциированных с ядерным фактором-каппа B (NF-κB), пириновым доменом семейства Nod-подобных рецепторов, содержащим передачу сигналов инфламмасом 3 (NLRP3), и глиальной активацией как в микроглии BV2, так и в первичной смешанной глии 14. В этой статье мы предоставляем протоколы о том, как изолировать AdMSCs и первичную смешанную глию от мышей, стимулировать AdMSCs к активации модулирующих генов, оценить миграцию AdMSC и совместно культивировать AdMSCs с глией, инфицированной прионами. Мы надеемся, что эти процедуры могут стать основой для дальнейших исследований роли МСК в регуляции глиально-индуцированного воспаления при нейродегенеративных и других заболеваниях.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Мыши разводились и содержались в Lab Animal Resources штата Колорадо, аккредитованном Ассоциацией по оценке и аккредитации Lab Animal Care International, в соответствии с протоколом #1138, утвержденным Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию в Университете штата Колорадо.

1. Выделение и инфицирование первичной кортикальной смешанной глии с прионами

  1. Чтобы выделить первичную смешанную глию, содержащую как астроциты, так и микроглию, получают детенышей мышей C57Bl/6 в возрасте от нуля до двух дней.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол адаптирован из предыдущих протоколов 15,16.
  2. Усыпляйте детенышей по одному, обезглавливая и извлекая их мозг, отделяя и отбрасывая мозжечок и ствол мозга.
    1. Поместите мозг в 3-сантиметровую чашку Петри, содержащую холодный MEM/EBSS с 2x пенициллином/стрептомицином/неомицином (PSN). Под препарирующим эндоскопом отделите полушария мозга и удалите и отбросьте средний мозг. Удалите и выбросьте гиппокамп и мозговые оболочки из коры головного мозга.
    2. Поместите оба корковых полушария в коническую пробирку объемом 50 мл, содержащую 5 мл MEM/EBSS + 2x PSN, и положите на лед.
  3. В вытяжке для культуры тканей удалите среду из конической пробирки объемом 50 мл путем осторожной аспирации с помощью пипетки, оставив кусочки кортикальной ткани на дне пробирки. С помощью стеклянной пипетки с покрытием добавьте 10 мл предварительно подогретой диссоциационной среды и растирайте ткань стеклянной пипеткой в 10-20 раз.
  4. Переложите суспензию в стакан объемом 50 мл с небольшой полосой для перемешивания и положите на тарелку для перемешивания при самой низкой настройке, примерно 30 оборотов в минуту, на 10 минут. Снимите стакан с пластины для перемешивания и установите его под углом 30° на 3 минуты, чтобы салфетка осела на дне. Снимите клеточную суспензию (надосадочную жидкость) и переложите в новую коническую трубку объемом 50 мл на льду.
  5. Добавьте DNase-I (4000 Ед/мл) в 10 мл диссоциативной среды и ресуспендируйте ткань и перемешайте еще 10 минут. Повторите, добавив свежую диссоциативную среду (без DNase-I) еще 2-4 раза (по одному разу на каждые два использованных детеныша мыши) и перенесите клеточную суспензию в коническую трубку объемом 50 мл на льду, пока на дне стакана не останется только волокнистая ткань.
  6. Центрифугируйте клеточную суспензию в конической пробирке в течение 10 мин при 1000 × g при 4 °C. Отсадите надосадочную жидкость и замените глиальной средой роста. Подсчитайте клетки с помощью гемоцитометра и обеспечьте обработку клеток с плотностью 106 на 10 см в обработанной клеточной культуре чашкой. Поместите в инкубатор при температуре 37 °C с 5% CO2.
  7. Через 24 ч удалите среду и замените ее свежей глиальной средой. Дайте клеткам достичь 100% слияния в течение 2 недель; Затем разделите их и наложите на тарелки для эксперимента.
  8. При прионной инфекции in vitro пластинчатая глия в 100 000 клеток на лунку в 6-луночных планшетах и позволяет достичь 80%-100% конфлюенции. Подвергайте гомогенаты мозга, как прионные, так и нормальные, разбавленные до 20% в PBS, воздействию ультрафиолетового света в течение 30 минут перед добавлением в культуру клеток. Асасируйте среду из инфицируемой глии и в каждую лунку добавьте 1,5-2 мл глиальной питательной среды, содержащей в конечном объеме 0,1% нормального или прионного гомогената мозга.
  9. Через 72 ч отсадите от среды и промойте клетки PBS, чтобы удалить остаточный гомогенат мозга. Замените свежей глиальной питательной средой (не содержащей гомогенатов мозга).
  10. Чтобы выделить клетки AdMSCs, используйте серологическую пипетку и осторожно аспирируйте жировую ткань вместе с ~1 мл раствора HBSS/Trypsin. Переложите в чашку Петри диаметром 4 см, содержащую 2 мл среды DMEM/F12 с 200 Ед/мл DNase-I и 400 Ед/мл коллагеназы/Диспазы. Маленькими ножницами разрежьте кусочки жировой ткани на небольшие кусочки (размером менее 5 мм) и выдержите при температуре 37 °C в течение 1,5 ч.
  11. Переложите содержимое чашки Петри в коническую пробирку объемом 50 мл с помощью серологической пипетки и растирайте смесь с помощью пипетки ~10 раз. Убедитесь, что ткань легко разрывается и образует относительно однородную смесь. Центрифугируйте смесь при 4 °C в течение 5 минут при 1000 × г , чтобы удалить дромальную сосудистую фракцию, которая будет выглядеть красной.
  12. Тщательно отасканируйте надосадочную жидкость и промойте гранулу 5 мл предварительно подогретого стерильного PBS и центрифугируйте при 4 °C при 1000 × г в течение 3 минут. Аспирируйте надосадочную жидкость и ресуспендируйте гранулу в 1 мл среды AdMSC (DMEM с низким содержанием глюкозы, содержащий L-глютамин и дополненный 15% инактивированной тепловой фетальной сывороткой крупного рогатого скота (hiFBS), 1% аминокислотами, 1% заменимыми аминокислотами и 1% PSN).
  13. Поместите клеточное ситечко размером 40 мкм поверх свежей стерильной конической пробирки объемом 50 мл и проведите клеточную суспензию через ситечко, чтобы удалить любую недиссоциированную ткань. Добавьте 9 мл среды AdMSC в чашку, обработанную клеточной культурой диаметром 10 см, и пипетируйте процеженную клеточную суспензию в чашку. Поместите в инкубатор при температуре 37 °C с 5% CO2.
  14. Удалите и замените новый носитель AdMSC на следующий день. Подождите, пока клетки станут слившимися на 80-90%, когда они будут готовы к прохождению между 72 ч и 96 ч.
  15. Изолируйте AdMSCs, как описано выше, и дважды пройдите для получения согласованной однородной популяции 14. Дважды промойте клетки стерильным PBS и нанесите 2 мл предварительно подогретого трипсина (0,25%) на каждую тарелку. Инкубируйте клетки при 37 °C в течение 5 минут или до тех пор, пока они полностью не выйдут из планшета. Добавьте 8 мл предварительно подогретой среды AdMSC на каждую пластину, перемешайте клеточную суспензию с помощью пипетки, переложите в коническую пробирку и центрифугируйте при 1000 × г при 4 °C до гранул.
  16. Ресуспендируйте АдМСК в 3-10 мл среды (в зависимости от количества используемых планшетов) и подсчитайте клетки с помощью гемоцитометра. Планшет 100 000 клеток/лунка в 6-луночных планшетах, содержащих среду AdMSC. Поместите в инкубатор при температуре 37 °C с 5%CO2 на ночь.
  17. На следующий день стимулируйте клетки цитокинами или гомогенатом мозга.
    1. Для цитокин-стимулированных клеток используйте среду AdMSC, содержащую либо 10 нг/мл TNFα, либо 200 нг/мл IFNγ. Используйте свежие среды для контрольных скважин.
    2. Для лечения гомогенатом мозга, инфицированным прионами, следует получить 20% гомогената мозга (в PBS) от неизлечимо инфицированных прионных мышей (штаммы 22L или RML). Для контроля приготовьте среду AdMSC с конечной концентрацией 0,1% прион-инфицированного или нормального гомогената мозга.
    3. Отсаживайте среды из лунок и пипетируйте 1,5 мл цитокин- или гомогенатсодержащих сред мозга в соответствующие лунки. Выполнять в трех экземплярах. Верните тарелки в инкубатор.
  18. Удалите среду, промойте клетки 2 раза предварительно подогретым PBS, изолируйте РНК, добавив 350 мл буфера для лизиса, содержащего 1% βME, в каждую лунку, и используйте клеточный лифтер для удаления клеточных лизатов. Выполните выделение РНК в соответствии с протоколом производителя мини-набора, включая этап расщепления ДНКазы. Для ОТ-кПЦР проводят обратную транскрибацию 25 нг РНК на образец и амплифицируют кДНК с помощью SYBR Green и праймеров для каждого гена в дозе 10 мМ. Проанализировать экспрессию мРНК с помощью метода 2-ΔΔCT и нормализовать до экспрессии референсного гена β-актина 17.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Все ОТ-ПЦР были проведены в соответствии с рекомендациями MIQE.
  19. Микроглия BV2 в дозе 50 000 клеток на лунку или первичная смешанная глия в дозе 100 000 клеток на лунку в 6-луночном планшете. Обрабатывайте клетки BV2 на следующий день средой, содержащей 0,1% инфицированного прионом или нормального гомогената мозга. При смешанной глии подождите, пока клетки не слились на 80-90%, чтобы инфицировать гомогенат мозга.
  20. Инкубировать клетки в средах, содержащих гомогенат мозга, в течение 72 ч. Промойте клетки 2 раза PBS, чтобы удалить остатки гомогената мозга, добавьте свежую среду и верните в инкубатор.
  21. Используйте AdMSC в отрывке 3 для совместной культуры. При стимуляции AdMSC используйте среды, содержащие 10 нг/мл TNFα, и обрабатывайте в течение 24 ч перед совместным культивированием с BV2 или смешанной глией. Промойте стимулированные AdMSC 3 раза с PBS для удаления остатков TNFα.
  22. Выполните трипсинизацию AdMSC, как описано в шаге 1.15, и повторно приостановите работу в среде AdMSC.
  23. Отжим суспензию AdMSC при 1 000 × g при 4 °C в течение 5 мин. За это время замените среды на ячейках BV2 или смешанной глии на 2 мл на лунку среды AdMSC и поместите вкладыши для 6-луночных планшетов с размером пор 0,4 мкм в половину лунок. Добавьте 2 мл среды AdMSC в каждую вставку, а еще 2 мл среды в лунки, которые не принимают вставки.
  24. По окончании гранулирования AdMSC повторно суспендировать гранулу в среде AdMSC. Подсчитайте AdMSCs с помощью гемоцитометра и добавьте 50 000-100 000 клеток к каждой вставке.
  25. Для клеток BV2 инкубируйте сокультуры в течение 24 ч. Для смешанной глии инкубируйте от 24 до 7 дней.
  26. После инкубации с AdMSCs в течение желаемого времени извлеките вкладыши и выбросьте их или поместите их в новую 6-луночную пластину, промойте вкладыши 2 раза PBS, добавьте буфер, предоставленный набором для выделения РНК, к смешанным клеткам глии или BV2 и соскребите вкладыши для анализа РНК AdMSC.
  27. Обрабатывайте AdMSCs в пассаже 2 средой, содержащей 10 нг/мл TNFα. На следующий день промойте клетки предварительно подогретым стерильным PBS 3x и инкубируйте в бессывороточных средах AdMSC в течение 4 ч.
  28. Чтобы провести анализ мигрирующих клеток, добавьте 25 000 AdMSCs на вкладыш и инкубируйте клетки в течение 24 ч при 37 °C. В течение этого времени мигрирующие клетки будут перемещаться из верхней камеры вкладыша и прилипать к нижней стороне вкладыша. Тщательно отасуньте содержимое лунки и вкладышей и промойте PBS 2 раза, оставив 1 мл PBS в каждой лунке, чтобы вкладыши оставались влажными с каждой стороны.
  29. По одному, используя щипцы, извлекайте вставки и аккуратно, но тщательно протирайте верхнюю камеру ватным тампоном, чтобы удалить все клетки, которые не мигрировали. Отасуньте оставшийся PBS и пипетируйте 500 мкл кристаллического фиолетового раствора как в лунку, так и в верхнюю камеру вставки, убедившись, что мембрана вставки полностью погружена в воду.
  30. Инкубировать вкладки в течение 1 ч в кристаллическом фиолетовом растворе при комнатной температуре. Чтобы наилучшим образом сохранить цвет, выполняйте следующие шаги быстро, используя только одну вставку за раз.
    1. Отсадите кристаллический фиолетовый раствор из лунки и верхней камеры вкладыша и промойте 3x с PBS. Снова протрите верхнюю камеру ватной палочкой.
    2. Поместите вкладыш в лунку в новую 24-луночную пластину, содержащую 1 мл PBS. Поместите пластину над перевернутым микроскопом с прикрепленной камерой. Используя объектив с 10-кратным увеличением, сделайте снимки четырех случайных областей ближе к центру вставки, сосредоточившись только на нижней стороне вставки.
  31. Выполнив это с каждым лункой, загрузите изображения в выбранное программное обеспечение для обработки изображений и отрегулируйте фон, чтобы усилить контраст с окрашенными в фиолетовый цвет ячейками. Подсчитайте ячейки вручную с помощью счетчика ячеек.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Стимуляция АдМСК с помощью TNFα или интерферона-гамма (ИФНγ) в течение 24 ч вызывает изменения в экспрессии противовоспалительных молекул и факторов роста. Лечение AdMSC TNFα или интерфероном-гамма (IFNγ) увеличивает мРНК TNF-стимулированного гена 6 (TSG-6), тогда как TNFα, но не IFNγ, вызывает увеличение мРНК трансформирующего фактора роста бета-1 (TGFβ-1). Стимуляция TNFα или IFNγ индуцирует увеличение мРНК фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), но не приводит к изменению экспрессии мРНК фактора рост...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В данной работе мы демонстрируем надежный и относительно недорогой протокол для оценки эффектов мезенхимальных стромальных клеток (МСК), полученных из жировой ткани, в уменьшении прион-индуцированного воспаления в модели глиальных клеток. AdMSC могут быть легко выделены и расширены в культуре для использования всего за 1 неделю. Этот протокол последовательно создает гетерологичную популяцию клеток, которые экспрессируют маркеры, совместимые с маркерами мезенхимальных стромальных клеток с помощью иммунофлуоресценции и про...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Авторы благодарят Lab Animal Resources за их животноводство. Источниками финансирования этой рукописи являются Фонд Боттчера, Фонд Мерфи Тернера, Колледж ветеринарной медицины CSU и Исследовательский совет Колледжа биомедицинских наук. Рисунки 2A, 2C и 3A были созданы с помощью BioRender.com.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
0,25% трипсинЦитиваSH30042,01
5 мл серологических пипетокCelltreat229005B
6-луночные планшетыдля культуры тканей Celltreat229106
10 см чашки для клеточных культурPeak SerumPS-4002
10 мл серологических пипетокCelltreat229210
15 мл конические пробиркиCelltreat667015B
50 мл конические пробиркиCelltreat667050B
BV2 микроглия клеточная линияAcceGen BiotechABC-TC212S
Клеточный лифтерBiologix Research Company70-2180
Кристалл фиолетовыйЭлектронная микроскопия Науки  12785
DispaseThermo Scientific17105041
DMEM/F12Caisson LabsDFL14-500ML
DNase-ISigma Aldrich11284932001
незаменимые аминокислотыThermo Scientific11130051
этанол (100%)EMD MilliporeEX0276-1
Фетальная бычья сыворотка (тепло инактивированный)Сыворотка PeakPS-FB4Может быть приобретена как термоинактивированная, так и инактивированная в лаборатории
ФормальдегидEMD Millipore1.04003.1000
Стекло 10 мл серологическая пипеткаCorning  7077-10Н
Хэнк s Балансы Солевой растворSigma AldrichH8264-500ML
Гемоцитометр/камера НейбауэраДайггерHU-3100
Высокий уровень глюкозы DMEMCytivaSH30022.01
низкий уровень глюкозы DMEM, содержащий L-глутаминCytivaSH30021.01
MEM/EBSSCytivaSH30024.
заменимые аминокислотыSigma-AldrichM7145-100M
Параформальдегид (16%)MP Biomedicals219998320
Пенициллин/стрептомицин/неомицинSigma-AldrichP4083-100ML
Фосфатный буферный растворCytiva  SH30256.01
Рекомбинантный мышиный ИФН-гамма белокR& D Systems485-MI
Рекомбинантный мышиный белок TNF-альфа (aa 80-235), CFR& D Systems410-MT
RNeasy mini kitQiagen74104
SigmacoteSigma AldrichSL2-100MLПокрытие внутри стеклянных пипеток путем двойной аспирации вверх и вниз в Sigmacote и дать полностью высохнуть. Заверните в алюминиевую фольгу и автоклавируйте пипетки через 24 часа.
StemxymeWorthington Biochemical CorporationLS004106смесь коллагеназы/диспазы
Стерильный, индивидуально упакованный ватный тампонPuritan Medical  25-8061WC
Вкладыши для культуры тканей Thincert, 24 лунки, размер пор = 8 и микро; mтканей Greiner Bio-One
Thincert, 6 лунок, размер пор = 0,4 &; mGreiner Bio-One657641
FS Вкладыши для культуры 662638

Ссылки

  1. Liddelow, S. A., et al. Neurotoxic reactive astrocytes are induced by activated microglia. Nature. 541 (7638), 481-487 (2017).
  2. Smith, H. L., et al. Astrocyte unfolded protein response induces a specific reactivity state that causes non-cell-autonomous neuronal degeneration. Neuron. 105 (5), 855-866 (2020).
  3. Hong, S., et al. Complement and microglia mediate early synapse loss in Alzheimer mouse models. Science. 352 (6286), 712-716 (2016).
  4. Collinge, J., Clarke, A. R. A general model of prion strains and their pathogenicity. Science. 318 (5852), 930-936 (2007).
  5. Gajdusek, D. C. Transmissible and non-transmissible amyloidoses: autocatalytic post-translational conversion of host precursor proteins to beta-pleated sheet configurations. J Neuroimmunol. 20 (2-3), 95-110 (1988).
  6. Come, J. H., Fraser, P. E., Lansbury, P. T. A kinetic model for amyloid formation in the prion diseases: importance of seeding. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (13), 5959-5963 (1993).
  7. Hartmann, K., et al. Complement 3(+)-astrocytes are highly abundant in prion diseases, but their abolishment led to an accelerated disease course and early dysregulation of microglia. Acta Neuropathologica Communications. 7 (1), 83(2019).
  8. Carroll, J. A., Race, B., Williams, K., Striebel, J., Chesebro, B. Microglia are critical in host defense against prion disease. Journal of Virology. 92 (15), e00549(2018).
  9. Bradford, B. M., McGuire, L. I., Hume, D. A., Pridans, C., Mabbott, N. A. Microglia deficiency accelerates prion disease but does not enhance prion accumulation in the brain. Glia. 70 (11), 2169-2187 (2022).
  10. Li, M., Chen, H., Zhu, M. Mesenchymal stem cells for regenerative medicine in central nervous system. Frontiers in Neuroscience. 16, 1068114(2022).
  11. Sanchez-Castillo, A. I., et al. Switching roles: beneficial effects of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells on microglia and their implication in neurodegenerative diseases. Biomolecules. 12 (2), 219(2022).
  12. Fu, X., et al. Mesenchymal stem cell migration and tissue repair. Cells. 8 (8), 784(2019).
  13. Xiao, Q., et al. TNF-alpha increases bone marrow mesenchymal stem cell migration to ischemic tissues. Cell Biochemistry and Biophysics. 62 (3), 409-414 (2012).
  14. Hay, A. J. D., Murphy, T. J., Popichak, K. A., Zabel, M. D., Moreno, J. A. Adipose-derived mesenchymal stromal cells decrease prion-induced glial inflammation in vitro. Scientific Reports. 12 (1), 22567(2022).
  15. Kirkley, K. S., Popichak, K. A., Afzali, M. F., Legare, M. E., Tjalkens, R. B. Microglia amplify inflammatory activation of astrocytes in manganese neurotoxicity. Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 99(2017).
  16. Popichak, K. A., Afzali, M. F., Kirkley, K. S., Tjalkens, R. B. Glial-neuronal signaling mechanisms underlying the neuroinflammatory effects of manganese. Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 324(2018).
  17. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  18. Hass, R., Otte, A. Mesenchymal stem cells as all-round supporters in a normal and neoplastic microenvironment. Cell Communication and Signaling: CCS. 10 (1), 26(2012).
  19. Carroll, J. A., et al. Prion strain differences in accumulation of PrPSc on neurons and glia are associated with similar expression profiles of neuroinflammatory genes: comparison of three prion strains. PLoS Pathogens. 12 (4), 1005551(2016).
  20. Carroll, J. A., Race, B., Williams, K., Chesebro, B. Toll-like receptor 2 confers partial neuroprotection during prion disease. PLoS One. 13 (12), e0208559(2018).
  21. Yu, Y., et al. Hypoxia and low-dose inflammatory stimulus synergistically enhance bone marrow mesenchymal stem cell migration. Cell Proliferation. 50 (1), e12309(2017).
  22. Hay, A. J. D., et al. Intranasally delivered mesenchymal stromal cells decrease glial inflammation early in prion disease. Frontiers in Neuroscience. 17, 1158408(2023).
  23. English, K., Barry, F. P., Field-Corbett, C. P., Mahon, B. P. IFN-gamma and TNF-alpha differentially regulate immunomodulation by murine mesenchymal stem cells. Immunology Letters. 110 (2), 91-100 (2007).
  24. Hemeda, H., et al. Interferon-gamma and tumor necrosis factor-alpha differentially affect cytokine expression and migration properties of mesenchymal stem cells. Stem Cells and Development. 19 (5), 693-706 (2010).
  25. Carta, M., Aguzzi, A. Molecular foundations of prion strain diversity. Current Opinion in Neurobiology. 72, 22-31 (2022).
  26. Yu, F., et al. Phagocytic microglia and macrophages in brain injury and repair. CNS Neuroscience and Therapeutics. 28 (9), 1279-1293 (2022).
  27. Sinha, A., et al. Phagocytic activities of reactive microglia and astrocytes associated with prion diseases are dysregulated in opposite directions. Cells. 10 (7), 1728(2021).
  28. Stansley, B., Post, J., Hensley, K. A comparative review of cell culture systems for the study of microglial biology in Alzheimer's disease. Journal of Neuroinflammation. 9, 115(2012).
  29. Shan, Z., et al. Therapeutic effect of autologous compact bone-derived mesenchymal stem cell transplantation on prion disease. Journal of General Virology. 98 (10), 2615-2627 (2017).
  30. Johnson, T. E., et al. Monitoring immune cells trafficking fluorescent prion rods hours after intraperitoneal infection. Journal of Visualized Experiments. (45), e2349(2010).
  31. Liu, F., et al. MSC-secreted TGF-beta regulates lipopolysaccharide-stimulated macrophage M2-like polarization via the Akt/FoxO1 pathway. Stem Cell Research and Therapy. 10, 345(2019).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

МСК из жировой тканиприонная болезньглиальное воспалениесмешанная кокультура глиинейровоспалениеактивация астроцитовактивация микроглиипаракринная сигнализациянеправильный фолдинг белков
Мезенхимальные стромальные клетки, полученные из жировой ткани, совместно культивируемые с первичной смешанной глией для уменьшения прион-индуцированного воспаления
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.