Внутрикожный микродиализ — это минимально инвазивный метод, используемый для исследования функции микрососудов в норме и при заболеваниях. Для изучения механизмов вазодилатации и сужения сосудов в кожном кровообращении могут быть использованы как протоколы «доза-реакция», так и протоколы локального нагревания.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Внутрикожный микродиализ: подход к исследованию новых механизмов микрососудистой дисфункции у человека
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Кожная сосудистая сеть является доступной тканью, которая может быть использована для оценки функции микрососудов у человека. Внутрикожный микродиализ – это минимально инвазивный метод, используемый для исследования механизмов гладкой мускулатуры и функции эндотелия сосудов в кожном кровообращении. Данная методика позволяет провести фармакологическое препарирование патофизиологии эндотелиальной дисфункции микрососудов, которая выражается снижением вазодилатации, опосредованной оксидом азота, что является индикатором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний. При этом методе микродиализный зонд помещается в дермальный слой кожи, а над зондом помещается локальный нагревательный блок с лазерным доплеровским флоуметрическим зондом для измерения потока эритроцитов. Локальная температура кожи зажимается или стимулируется прямым применением тепла, а фармакологические агенты перфузируются через зонд для стимуляции или ингибирования внутриклеточных сигнальных путей, чтобы вызвать вазодилатацию или вазоконстрикцию или исследовать интересующие механизмы (кофакторы, антиоксиданты и т. д.). Количественно оценивается кожная сосудистая проводимость и очерчиваются механизмы эндотелиальной дисфункции при болезненных состояниях.
Введение
Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) являются основной причиной смертив Соединенных Штатах 1. Гипертония (АГ) является независимым фактором риска инсульта, ишемической болезни сердца и сердечной недостаточности и, по оценкам, затрагивает более ~50% населения Соединенных Штатов 2. АГ может развиваться как самостоятельное ССЗ (первичная АГ) или в результате другого состояния, такого как поликистоз почек и/или эндокринные нарушения (вторичная АГ). Широта этиологии АГ затрудняет изучение основных механизмов и повреждений органов-мишеней, наблюдаемых при АГ. Необходимы разнообразные и новые исследовательские подходы к патофи....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все процедуры утверждаются Институциональным наблюдательным советом Университета штата Пенсильвания перед набором участников.
1. Настройка оборудования
- Включите локальный нагревательный блок и лазерный доплеровский расходомер.
ПРИМЕЧАНИЕ: Перед сбором данных оба должны быть откалиброваны в соответствии с инструкциями производителя. Лазерный доплеровский расходомер должен быть подключен к оборудованию для сбора данных с частотой дискретизации 100 Гц (100 образцов/мин) и непрерывной записью в программном обеспечении для сбора данных. Несмотря на то, что можно использовать другое оборудование и программное обеспечение для сбора да....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Ацетилхолин протокол «доза-ответ»
На рисунке 1А изображена схема, подробно описывающая протокол АЧ «доза-реакция». На рисунке 1B показана репрезентативная трассировка значений потока эритроцитов (единиц перфузии, PU; среднее значение 30 с) из стандартизированного протокола ACh «доза-ответ» для одного субъекта с течением времени. На рисунке 1С показан файл необработанных данных протокола A.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Техника внутрикожного микродиализа является универсальным инструментом в исследовании сосудов человека. Исследователи могут изменить протокол, чтобы еще больше диверсифицировать его применение. Например, мы описываем протокол АХГ «доза-реакция», но в других исследованиях механизмов вазоконстрикции или вазомоторного тонуса, а не только вазодилатации, использовались подходы «доза-ответ» норадреналина или нитропруссида натрия 26,27,28,29,30,31.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов и нечего раскрывать.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Шприцы | 1 мл BD Шприцы | 302100 | |
| Ацетлихолин | США Фармакопея | 1424511 | Пилотные данные, собранные в нашей лаборатории, указывают на то, что сушка ацетилхолина увеличивает вариабельность реакции ЦВК; не сушите, храните в влагопоглотителе |
| Спиртовые тампоны | Mckesson | 191089 | |
| Baby Bee Syringe Drive | Bioanalytical Systems, Incorporated | MD-1001 | В данном исследовании был использован дополнительный 3-шприцевой кронштейн (катальг-номер MD-1002): |
| CMA 30 Linear Microdialysion Probes | Apparatus Harvard Apparatus | CMA8010460 | |
| Connex Spot Monitor | WelchAllyn | 74CT-B | Автоматизированный монитор артериального давления |
| Hive Шприцевой насос Контроллер | биоаналитических систем, Incorporated | MD-1020 | Controls до 4 Baby Bee Шприц |
| Drive LabChart 8 | AD Instruments | ** Аппаратное обеспечение PowerLab и программное обеспечение LabChart должны быть совместимыми версиями | |
| Lactated Ringer's Solution | Avantor (VWR) | 76313-478 | |
| Лазерный допплеровский расходомер | крови Moor Instruments | MoorVMS-LDF | |
| Набор для калибровки лазерного допплеровского зонда | Moor Instruments | CAL | |
| Лазерный допплер VP12 Зонд | Moor Instruments | VP12 | |
| Зонды для линейного микродиализа | Bioanalytical Systems, Inc. | MD-2000 | |
| NG-нитро-l-аргинин метиловый эфир | Sigma Aldrich | 483125-M | L-NAME |
| Повидон-йод/бетадин | Dynarex | 1202 | |
| PowerLab C Устройство сбора данных | AD Instruments | PLC01 | ** |
| PowerLab C Интерфейс инструмента | AD Instruments | PLCI1 | ** Зонд |
| клейкие диски | Moor Instruments | прикрепляет локальный нагревательный блок к коже | |
| Контроллер обогревателя | кожи Moor Instruments | moorVMS-HEAT 1.3 | |
| Малый нагревательный щуп | Moor | Instruments VHP2 | |
| Стерильные простыни | Halyard | 89731 | |
| Стерильная марля | Dukal Corporation | 2085 | |
| Стерильные хирургические перчатки | Esteem Каталожный номер Cardinal Health | 8856N | , за которым следуют инициалы размера перчатки, затем буква «B» (например, 8856NMB для средних) |
| Хирургические ножницы | Cole-Parmer | UX-06287-26 |
Ссылки
- Xu, J. Q., Murphy, S. L., Kochanek, K. D., Arias, E. Mortality in the United States, 2021. NCHS Data Brief. 456, (2022).
- Tsao, C. W., et al. Heart disease and stroke statistics-2023 update: A report from the American heart association. Circulation. 147....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
