В данной работе подробно описаны операционные процедуры и меры предосторожности, которые необходимо предпринять во время прижигания ду-оксисессора при лечении анкилозирующего спондилоартрита у подопытных мышей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
В данной работе подробно описаны операционные процедуры и меры предосторожности, которые необходимо предпринять во время прижигания ду-оксисессора при лечении анкилозирующего спондилоартрита у подопытных мышей.
Анкилозирующий спондилит (АС) – это прогрессирующая и инвалидизирующая форма артрита, которая в первую очередь поражает осевой скелет. Это заболевание в основном поражает позвоночник и крестцово-подвздошный сочленение. Сращение позвоночника и крестцово-подвздошного сочленения может произойти на поздней стадии заболевания, что приводит к тугоподвижности позвоночника и кифозу, а также затруднению ходьбы, что серьезно сказывается на качестве работы и повседневной деятельности и накладывает тяжелую нагрузку на пациента, семью и общество. Все большее внимание уделяется немедикаментозной терапии как альтернативной терапии АС. Прижигание – это древняя терапевтическая техника, используемая в традиционной китайской медицине (ТКМ). Дю-прижигательная терапия, уникальное и инновационное наружное лечение, разработанное на основе обычного прижигания, оказывает определенное терапевтическое воздействие на АС. Дю-прижигание умело сочетает в себе совместимые методы ТКМ для интеграции меридианов, акупунктурных точек, китайской фитотерапии и прижигания. В данной работе подробно описаны операционные процедуры и меры предосторожности, которые необходимо предпринять во время прижигания ду-коксесоса у подопытных мышей, чтобы обеспечить экспериментальную основу для изучения механизма прижигания ду-оксижига при лечении АС.
Анкилозирующий спондилит (АС) – это прогрессирующая и инвалидизирующая форма артрита, которая в первую очередь поражает осевой скелет. Согласно последнему эпидемиологическому исследованию, ~0,01%-1,8% людей в мире страдаютэтим состоянием1, большинство из которых молодые мужчины (соотношение мужчин и женщин ~2-3:1)2. Заболеваемость АС в китайской популяции составляет 0,2%-0,4%. Это заболевание в основном поражает позвоночник и крестцово-подвздошный сочленение. Спондилодез позвоночника и крестцово-подвздошного сочленения может произойти на поздних стадиях заболевания, что приводит к тугоподвижности позвоночника и кифозу, а также затруднению ходьбы, что серьезно влияет на качество работы и повседневной деятельности и ложится тяжелым бременем на пациента, семью и общество1. В настоящее время не существует окончательного решения проблемы АС, и предлагаемые методы лечения, как фармакологические, так и нефармакологические, в первую очередь направлены на облегчение боли, замедление прогрессирования заболевания и улучшение качества жизни. В последние годы, в связи с тем, что фармакотерапевтические возможности былиочень ограничены, все большее внимание уделяется нефармакотерапии, которая стала альтернативной терапией АС. В Китае пациенты часто предпочитают наружное лечение, состоящее из традиционной китайской медицины (ТКМ), которое имеет незначительные побочные эффекты и большое удобство во время лечения.
Прижигание – это древняя терапевтическая техника, используемая в ТКМ. Дю-прижигание – это техника наружного лечения, состоящая из «лечебного прижигания с пеной» на сегменте позвоночника меридиана Дю. Он в основном используется при лечении АС и показал свою безопасность и эффективность. По сравнению с обычным прижиганием, Du-прижигание имеет характеристики широкой площади прижигания, большого конуса моксы, сильной огневой мощи и высокой температуры4. Систематический обзор и мета-анализ свидетельствуют о том, что прижигание является эффективным дополнительным лечением АС5. Недавнее исследование подтвердило, что клинические симптомы и некоторые воспалительные факторы у пациентов с синдромом Аспергера были улучшены с помощью прижигания6. Исследования показали, что Du-прижигание может увеличивать содержание в мозге β-эндорфина и оказывать центральное обезболивающее действие7, подавлять экспрессию гена HLA-B27 8 и задерживать частоту рецидивов АС. Дю-прижигание также оказывает улучшающее действие на прогрессирование АС, снижая воспалительный индекс СОЭ (СОЭ) и уровни С-реактивного белка (СРБ), С-концевого пептида коллагена I типа (CTX-I) и белка Dickkopf1 (DKK1)9,10.
Другое клиническое исследование показало, что Du-moxiburnion может дополнительно регулировать неупорядоченные субпопуляции Т-клеток, Ig и комплемент C3 для балансировки иммунногомеханизма. С точки зрения метаболизма костной ткани, прижигание может ингибировать повышение уровня щелочной фосфатазы (ЩФ) и фосфора в сыворотке крови (S-P), повышения уровня кальция в сыворотке крови (S-Ca), минеральной плотности костной ткани (МПК) и прочности костей12. Кроме того, Du-прижигание может восстанавливать функцию позвоночника в нескольких точках, чтобы облегчить симптомы усталости у пациентов с синдромом Аспергера13. Некоторые исследования на животных выявили потенциальный механизм прижигания при лечении АС. Исследование показало, что прижигание значительно улучшило общее состояние здоровья, уменьшило уровень толщины лапы и снизило уровни IL-1β, PGE2, IL-6 и TNF-α в образцах ткани связок позвоночника. Анализ метаболических путей связал идентифицированные метаболиты с циклом ТСА, а также с липидным, аминокислотным, кишечной флорой и пуриновым метаболизмом14. Другое исследование показало, что прижигание подавляет экспрессию провоспалительных цитокинов, IL-1β, TNF-α, IL-17 и IL-6; снижение уровней мРНК RANKL, RANK, ALP и OCN; и улучшили гистопатологические признаки у мышей с синдромом Аспергера15.
Хотя эти исследования показывают, что прижигание может быть эффективным при лечении АС, необходимы дополнительные исследования, чтобы подтвердить эти результаты и определить оптимальный протокол лечения прижигания у пациентов с АС. Наша команда создала и модифицировала прижигание, основанное на базовой теории и практическом действии традиционного китайского прижигания, которое широко проводится и применяется в китайской клинической практике уже более 35 лет. Несмотря на то, что существует мало высококачественных исследований по лечению АС с помощью Du-moxiburnion, его показания к лечению АС подтверждены доказательствами. Однако механизм лечения АС с помощью Du-прижигания заслуживает дальнейшего изучения. Исследование на животных является важным методом изучения механизма Du-прижигания при лечении АС. Клиническое действие Du-прижигания является относительно зрелым, но редко используется при изучении механизма в экспериментах на животных. В данной работе подробно описана операция и меры предосторожности, которые необходимо предпринять во время Du-прижигания при лечении экспериментальных мышей с АС.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Все эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике благополучия экспериментальных животных Шаньдунского университета традиционной китайской медицины (No. SDUTCM20230831301).
1. Подготовка животных
2. Создание модели мыши AS
ПРИМЕЧАНИЕ: Модель AS была индуцирована хрящевым протеогликаном (PG), который является классическим методом моделирования 16,17,18,19,20,21. Мышей линии BALB/c неоднократно иммунизировали ПГ для индуцирования тендинита и спондилита. См. Таблицу материалов для получения подробной информации, связанной с материалами, реагентами и инструментами, используемыми в этом протоколе.
3. Дю-прижигание
ПРИМЕЧАНИЕ: Заранее подготовьте три наиболее важных сырья для дюкоксижения (Рисунок 1).
4. Оценка индекса артрита (ИИ)
5. Тест Ротарод
ПРИМЕЧАНИЕ: Тест rotarod используется для оценки координации движений и равновесия путем регистрации времени, которое мыши проводят на вращающемся барабане. Этот эксперимент состоял из трех испытаний, разделенных 20-минутными интервалами. Официальные данные испытаний были записаны в третьем испытании, причем первые два использовались в качестве тренировочных упражнений.
6. Испытание в открытом поле (OFT)
ПРИМЕЧАНИЕ: OFT используется для оценки состояния вегетативных движений с целью выявления патологического поведения. Четыре квадратные арены открытого поля (50 см х 50 см х 40 см) были размещены вместе, чтобы сформировать снаряд. Дно ящика было разделено на девять равных квадратов.
7. Эвтаназия и сбор образцов
8. Гистологический анализ
9. Иммуноферментный анализ (ИФА)
10. Статистический анализ
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
У модельных мышей, индуцированных ПГ, развились симптомы периферического артрита, характеризующиеся покраснением и отеком конечностей и пальцев ног, и постепенно развился аксиальный артрит уже на 14-й неделе, который очень похож на проявление АС. Таким образом, мышиная модель АС считалась успешной, если индекс артрита (ИИ) был выше 3 баллов через 14 недель после последней инъекции22. Когда лапы мышей казались опухшими, обработку Du-прижиганием проводили один раз в неделю в общей сложности 3 раза. ...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Клинически АС проявляется в виде отека спины, поясницы и суставов, а в тяжелых случаях может возникать деформация позвоночника и ригидность суставов26. Ранняя диагностика и лечение могут улучшить качество жизни, снизить показатели инвалидности и улучшить прогнозы пациентов с АС. Согласно традиционной китайской медицине (ТКМ), считается, что АС вызывается дефицитом Ян в почках и меридиане Ду, а также накоплением холодного зла внутри. ТКМ придерживается мнения, что прижигание, основанное на концепци...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
У авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявлять.
Эта работа была поддержана Общей программой Национального фонда естественных наук Китая (No 82174491) и Академической школой наследования Школы традиционной китайской медицины Цилу (No 82174491). Лу Вэйхань [2020]132). Спасибо Центру лабораторных животных Шаньдунского университета традиционной китайской медицины за предоставление нам экспериментальных условий.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 10% EDTA | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd., Шанхай, Китай | ||
| спиртовые прокладки | HYNAUT, Qingdao Hainuo Biological Engineering Co., LTD, Циндао, Китай | ||
| наркозный аппарат | Медицинские принадлежности и ; Услуги INT. LTD, Keighley, Великобритания | ||
| центрифужные трубки | Axygen, Corning, Нью-Йорк, UAS | ||
| полный адъювант Фреха (CFA) | aladdin, Шанхай, Китай | F393378 | |
| ватный шарик | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd., Синьсян, Китай | ||
| хлопчатобумажная марля | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd., Синьсян, Китай | ||
| разделочная доска | для самоприготовления | ||
| декор из бычьего суставного хряща | Sigma-Aldrich, MO, США | D8428 | |
| крем для депиляции | Veet, Reckitt Benckiser (China) Investment Co. LTD, Шанхай, Китай | ||
| электронные весы | Shanghai Yajin Electronic Technology Co., Ltd., Шанхай, Китай | ||
| Eppendorf tube | Axygen, Corning, Нью-Йорк, UAS | ||
| глазная смазка | Beijing Shuangji Pharmaceutical Co., LTD., Пекин, Китай | ||
| имбирь | самоприготовление | ||
| GraphPad Prism 7 программное обеспечение | GraphPad Software, Бостон, США | ||
| машинка для стрижки волос | Super human Group CO LTD, Цзиньхуа, Китай | ||
| грелки | Shenzhen Leshuo Tech Co., Ltd., Шэньчжэнь, Китай | ||
| незавершенный Freund' s adjuvant (IFA) | aladdin, Шанхай, Китай | F393371 | |
| инъекции шприц | Shandong Xinhua Ande Medical Supplies Co., LTD, Цзыбо, Китай | ||
| изофлуран | Шэньчжэнь Rayward Life Technology Co., LTD, Шэньчжэнь, Китай | R510-22-10 | |
| джосс стик | Shijiazhuang Lidu Fragrant Industry Co., LTD., Шицзячжуан, Китай | ||
| соковыжималка | Braun (Shanghai) Co., Ltd., Шанхай, Китай | ||
| нож | самоприготовление | ||
| зажигалка | Zhejiang tiger-lighter Co. LTD | ||
| раствор | Luoyang Yinai Ceramic Technology Co., LTD., Лоян, Китай | ||
| мышь IL-17 ELISA Kit | absin, Шанхай, Китай | abs520009-96T | |
| Mouse TNF-α ИФА Кит | Ухань Саньин, Ухань, Китай | KE10002 | |
| тутовая бумага | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Линьи, Китай | ||
| OFT | Xinruan, Шанхай, Китай | XR-XZ301 | |
| бумажный стаканчик | самоприготовления | ||
| пипетки | OXFORD BIO INSTRUMENTS INC., Оксфорд, Великобритания | ||
| рафинированный мокса бархат | самоприготовление | ||
| rotarod | Синьжуань, Шанхай, Китай | XR-6C | |
| scientz-48L криогенный высокопроизводительный измельчитель тканей | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., LTD | ||
| ножницы | Shandong Jiaren Medical Supplies Co., Ltd., Цзыбо, Китай | ||
| полуавтоматическая машина для резки парафина | Leica Camera AG, Ватцнах, Германия | ||
| SPSS 25.0 программное обеспечение | International Business Machines Corporation, Нью-Йорк, UAS | ||
| TCM советы | самостоятельному приготовлению | ||
| Biosharp, Labgic, Пекин, Китай | |||
| кисть для письма | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Линьи, Китай |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.