Ускорение развития и роста крыс с детским церебральным параличом с помощью селективных манипуляций на позвоночнике

Краткое содержание

Это исследование иллюстрирует влияние селективных манипуляций с позвоночником на рост и развитие детенышей крыс с церебральным параличом, подчеркивая специфику процедуры и стандартизированный протокол. Для оценки протокола были проведены измерение массы тела, тест Ротарода, оценка ошибки стопы, другие поведенческие тесты и обнаружение гормона роста.

Аннотация

Детский церебральный паралич (ДЦП) является рефрактерным детским заболеванием с высокой распространенностью, высоким уровнем инвалидности и сложным лечением. В настоящее время для лечения ДЦП используются различные методы лечения. Лечение включает в себя медикаментозную и немедикаментозную терапию. Традиционная китайская медицина наружной терапии является весьма характерным методом лечения в немедикаментозной терапии. Как один из наружных методов традиционной китайской медицины, массаж применяется при лечении детского церебрального паралича и обладает хорошей эффективностью, небольшими побочными эффектами, сильной оперативностью. Как часть наружной терапии ТКМ, селективные манипуляции с позвоночником могут эффективно способствовать росту и развитию детенышей крыс с церебральным параличом. Операция в основном была разделена на четыре этапа: сначала метод растирания применялся к позвоночнику и обеим сторонам позвоночника в течение 1 минуты. Метод нажатия и разминания применялся к позвоночнику в течение 5 минут, а мышцы с обеих сторон позвоночника в течение 5 минут. Во-вторых, выполняли надавливание и разминание чувствительных локальных акупунктурных точек в позвоночнике в течение 2 мин. В-третьих, пораженную конечность обрабатывали методом скручивания в течение 1 минуты. В-четвертых, метод растирания применялся к средней линии от лба до задней части мозга в течение 1 минуты. Это исследование было направлено на использование селективных манипуляций с позвоночником для лечения детенышей крыс с церебральным параличом. Вес, тест Ротарода, оценка ошибки стопы и гормон роста у крыс с церебральным параличом были обнаружены для понимания влияния селективных манипуляций с позвоночником на рост и развитие крыс с церебральным параличом. Результаты показали, что он может способствовать увеличению веса, улучшению способности к равновесию и двигательной функции, способствовать росту и развитию крыс с детским церебральным параличом, способствовать секреции гормона роста и повышать температуру чувствительных частей спины.

Введение

Церебральный паралич (ДЦП), вызванный непрогрессирующим повреждением головного мозга у плода или в младенчестве, представляет собой группу нарушений, характеризующихся аномальным моторным и постуральным^{развитием1}, нарушениями развития, включая медленный набор веса ^2,3,4, и двигательной дисфункцией. Заболеваемость церебральным параличом в Китае составляет 2,48%, а распространенность – 2,46‰ (1-6 лет)⁵ соответственно. В зарубежных исследованиях сообщалось о распространенности 2,4%-3,6%⁶. Детский церебральный паралич является основной причиной физических травм и инвалидности у детей, среди которых нарушения равновесия и движения значительно влияют на повседневную жизнедеятельность¹. Детский церебральный паралич может быть вызван преждевременными родами, инфекцией, генетикой, ишемией и гипоксией новорожденных, неонатальной желтухой и другими сложными и разнообразными патогенными факторами⁷. Целью лечения детского церебрального паралича является улучшение физической функции и качества жизни ⁸. В настоящее время методы лечения ДЦП включают глубокую стимуляцию мозга⁹, роботизированную тренировку ходьбы¹⁰, иглоукалывание запястья и голеностопного сустава¹¹ и меридианную акупунктуру в сочетании с массажем¹².

Традиционная китайская медицина (ТКМ) все чаще используется в качестве эффективного лечения ЦП^13,14. Массаж, как его часть, также играет определенную роль. Например, селективные манипуляции с позвоночником могут регулировать состояние гидроксиметилирования ДНК для регулирования развития нейронов и^{улучшения функции обучения} и памяти. При лечении детенышей крыс с церебральным параличом селективные манипуляции с позвоночником могут улучшить воспалительный гомеостаз коры головного мозга и гиппокампа за счет регуляции уровня метилирования воспалительных цитокинов TNF-α и промоторной области гена IL-10¹⁶ и играть положительную терапевтическую роль в балансоспособности детенышей крыс с церебральным параличом16. Селективные манипуляции с позвоночником могут улучшить когнитивные функции у детенышей крыс с церебральным параличом¹⁷. Селективные манипуляции с позвоночником использовались при лечении крыс с церебральным параличом, и было замечено, что они также оказывают терапевтическое воздействие на их рост и развитие^.

Цель данного исследования состоит в том, чтобы проиллюстрировать влияние селективных манипуляций с позвоночником на рост и развитие детенышей крыс с церебральным параличом путем измерения массы тела, теста Ротарод¹⁹, балла^{Foot-fault 20,21} и других поведенческих тестов и выявления гормона роста, а также предоставить исследовательские идеи для соответствующего персонала.

Протокол

Это исследование было одобрено Комитетом по этике экспериментальных животных Юньнаньского университета традиционной китайской медицины. Все экспериментальные операции на животных проводились по принципу 3R по сокращению, оптимизации и замене экспериментальных животных (No R-06202018). В эксперименте использовались здоровые крысы породы Sprague Dawley (SD) (14 самцов и 7 самок) класса Specific pathogen-free (SPF) со средней массой тела 250-300 г. Крысы были выращены в комнате для животных SPF Юньнаньского университета традиционной китайской медицины, номер сертификата: SYXK (Yunnan) K2022-0004. Все крысы содержались в 12-часовом цикле свет/темнота в естественной среде с контролируемым освещением при комнатной температуре 22-26 °C и относительной влажности 40%-50%. После 1 недели адаптивного кормления соотношение самцов и самок поддерживалось на уровне 1:2. Через 1 неделю беременных крыс поместили в одну клетку, кормили нормально, они свободно ели и пили. После естественных родов отбирали здоровых крысят-детенышей, рожденных от беременных крыс. Крысы-детеныши были разделены на группы «Фикция», «Контроль» и «Лечение» для наблюдения за влиянием селективных манипуляций с позвоночником на рост и развитие крыс-младенцев с церебральным параличом. Из каждой группы для эксперимента было отобрано по 6 щенков мужского пола. Лечебная группа получала лечение с помощью селективных манипуляций на позвоночнике с^5-го дня после рождения, и лечение проводилось в течение 6 дней с последующим отдыхом в течение 1 дня.

1. Установление модели ДЦП

1. Простерилизуйте микроскоп, офтальмологические ножницы, щипцы, шовный материал, хирургическую пластину, ножницы, ватные палочки и перчатки, необходимые для операции, и поместите их в операционную.
2. Временно отделите щенка от матери на третий день жизни, поместите его в одну рамку и транспортируйте в стерильную операционную.
3. Измерьте массу тела. Включите в исследование крыс-детенышей с массой тела от 7 до 9 г и исключите тех, кто не соответствовал массе тела. Случайным образом разделите детенышей крыс на фиктивные, контрольные и лечебные группы.
4. Индуцировать анестезию изофлураном в концентрации 2% и поддерживать анестезию на уровне 1% с помощью аппарата для ингаляционной газовой анестезии мелких животных.
   Примечание: Этот эксперимент в основном направлен на наблюдение за влиянием селективных манипуляций с позвоночником на рост и развитие детенышей крыс с церебральным параличом. Обезболивание проводилось в соответствии с общими требованиями в процессе моделирования, и дополнительная анальгезия повлияет на результаты наблюдения.
   1. Подключите газовый анестетик для мелких животных к источнику питания и откройте клапан, подключенный к индукционной коробке.
   2. Поместите детеныша крысы в индукционную коробку, поверните ручку регулировки концентрации и отрегулируйте концентрацию изофлурана до 2%, чтобы вызвать анестезию.
   3. Когда детеныш крысы находится в бессознательном состоянии, извлеките его из индукционной коробки. Поместите его на операционную пластину и закройте канал 1 наркозного аппарата.
   4. Поместите детеныша крысы в положение лежа на спине. Зафиксируйте анестезиологическую ингаляционную маску для поддержания анестезии.
   5. Откройте канал, подключенный к анестезиологической ингаляционной маске. Поддерживайте анестезию, поворачивая ручку регулировки концентрации и регулируя концентрацию изофлурана до 1%.
      ПРИМЕЧАНИЕ: После анестезии оцените глубину анестезии, принудительно поднимая и зажимая пальцы ног и хвост детенышей крыс. Отсутствие реакции при поднятии и защемлении пальцев ног и хвоста подтверждает, что глубина анестезии достигнута.
5. Продезинфицируйте кожу шеи детеныша крысы трижды 75% спиртом и сделайте продольный разрез шириной 1 см на коже шеи, чтобы обнажить подкожную клетчатку.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Продольный разрез кожи шеи не вызывает дефектов кожи.
6. Разрежьте кожу левой шеи под препарирующим микроскопом, и с помощью офтальмологического пинцета тупо разделите грудиновидную мышцу и левую грудино-сосцевидную мышцу.
   1. Найдите левую общую сонную артерию и блуждающий нерв и разделите левую общую сонную артерию и блуждающий нерв.
   2. В группе Модель отрежьте левую общую сонную артерию с помощью электрической коагуляционной ручки. Очистите и зашите разрез на шее.
   3. В группе Шама отделите левую общую сонную артерию от блуждающего нерва.
7. После операции поместите крысы-детеныша в термостатическую водяную баню в положение лежа для реанимации на 1 ч.
   ПРИМЕЧАНИЕ: После естественного выздоровления цвет кожи конечностей и всего тела стал румяным. Детеныш крысы мог самостоятельно двигать своими конечностями и ползать.
8. Реанимированных крыс контрольной и лечебной групп поместить в закрытый инкубатор при температуре 37 °C в положении лежа. Введите смесь 5% кислорода и 95% газообразного азота, чтобы вызвать гипоксию, и удалите крыс через 2 часа.
9. Извлеките детеныша крысы, завершившего процесс гипоксии, из бокса для гипоксии и поместите его в положение лежа в бокс с нормальным содержанием кислорода в атмосфере. Поместите их на термостатическую водяную баню при температуре 37 °C на 1 час. После полного выздоровления переведите крысы-детеныша обратно в клетку матери.
   ПРИМЕЧАНИЕ: После естественного выздоровления цвет кожи конечностей и всего тела стал красным. Детеныши крысы могли самостоятельно передвигать конечностями и ползать самостоятельно.
10. Поместите детеныша крысы группы Шам в одну коробку с нормальным содержанием кислорода в атмосфере, и поместите коробку в термостатическую водяную баню при температуре 37 °C на 1 ч. После полного выздоровления поместите крысы-детеныша обратно в клетку матери для кормления.
    ПРИМЕЧАНИЕ: После естественного выздоровления цвет кожи конечностей и всего тела стал красным. Детеныши крысы могли самостоятельно передвигать конечностями и ползать самостоятельно. Весь процесс операции был завершен в специальной операционной комнаты для животных SPF Юньнаньского университета традиционной китайской медицины. Во время реанимации и гипоксии оператор постоянно наблюдает за детенышем крысы, чтобы предотвратить смерть, вызванную неправильной осанкой. Лактирующих самок крыс кормили кормом для разведения, свободным от специфических патогенов (SPF), а когда щенки были способны к самостоятельному питанию, щенков отлучали от груди (на 21-й день после рождения) и кормили поддерживающим кормом с SPF.

2. Эксперимент с выпрямляющим рефлексом

1. На^4-й день после рождения (на^2-й день после моделирования) проведите эксперимент по коррекционному рефлексу, чтобы проверить, была ли модель успешной (Рисунок 1 и Таблица 1).
   1. Поднимите хвост детеныша крысы, положите его спину на горизонтальную доску и большим и указательным пальцами закрепите его живот и шею. Проверьте, может ли крыса вернуться в свое нормальное положение. Неспособность крысы вернуться в нормальное положение из ненормального положения из-за потери рефлекса выпрямления зафиксирована как успешная модель^16,22.
   2. Запишите время, которое требуется каждой группе щенков, чтобы перевернуться из положения лежа на спине в положение лежа. Начинайте записывать время, когда большой и указательный пальцы отпускаются одновременно в положении лежа на спине, позволяйте детенышу крысы повернуться в положение лежа и прекращайте запись, когда передние и задние лапы опускаются на пол. Если детеныш крысы не мог вернуться в нормальное положение более 20 с, запишите время выпрямления как 20 с.

3. Подготовка перед операцией

1. После моделирования отделите детеныша крысы с ДЦП от матери и привезите его в операционную с постоянной комнатной температурой 22-26 °C на 2 минуты для адаптации к окружающей среде.
2. Надевайте одноразовые перчатки, чтобы ладонь оставалась мягкой и мягкой, а температура колебалась в пределах 36-37 °C.
3. Аккуратно положите крысу на ладонь левой руки. Согните большой палец левой руки, чтобы закрыть глаза крысы на 2 минуты, чтобы сформировать темное поле зрения, чтобы крыса могла адаптироваться к окружающей среде ладони оператора. Для манипуляций используйте указательный и средний пальцы правой руки.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Закрытие глаз детеныша крысы может создать темную среду. Это убережет детеныша крысы от возбуждения из-за небезопасной и неопределенной среды, влияющей на результаты эксперимента.

4. Разделение крыс на контрольную и лечебную группы

1. На второй день после моделирования (P5) проверьте модель с помощью теста на корректирующий рефлекс и случайным образом разделите крыс-детенышей на контрольную и лечебную группы. Проводить селективные манипуляции с позвоночником на крысах-детенышах группы Лечения.
2. Поместите крысы-детеныша в положение лежа. Следите за тем, чтобы позвоночник всегда держался на прямом уровне (рисунок 2A).
3. Массируйте позвоночник и обе стороны позвоночника в течение 1 минуты методом растирания, а затем используйте метод надавливания и разминания на позвоночник и мышцы с обеих сторон позвоночника в течение 5 минут.
   1. Массируйте позвоночник и кожу с обеих сторон, используя метод растирания, чтобы расслабить детеныша крысы и полностью снять его напряжение. Следите за тем, чтобы частота растирания составляла 100-120 раз/мин в течение 1 минуты после того, как детеныш крысы будет спокойным и без волнения.
      1. Используйте указательный, средний и безымянный пальцы правой руки в качестве контактной поверхности и совершайте круговые растирающие движения по поверхностной коже шейного отдела позвоночника, грудного отдела позвоночника и поясничного отдела позвоночника от головы до хвоста, не нарушая подкожную клетчатку.
      2. С указательным, средним и безымянным пальцами правой руки в качестве контактных поверхностей выполнять круговые движения по поверхности кожи трапециевидной мышцы, поверхностной ягодичной мышцы, шейной ромбовидной мышцы, грудной ромбовидной мышцы, широчайшей мышцы спины и наружной косой мышцы по порядку от головы к хвосту согласно анатомическому стандарту животного²³, не нарушая подкожную клетчатку.
   2. Сначала обрабатывайте позвоночный столб надавливанием и разминанием в течение 5 минут, затем надавливайте и разминайте мышцы с обеих сторон позвоночника в течение 5 минут.
      1. Применяйте метод разминания к позвоночнику с частотой 120 раз/мин в течение 5 мин. В качестве контактной поверхности используйте указательный или средний пальцы правой руки. От головы к хвосту выполнять круговое разминание по поверхностной коже шейного, грудного и поясничного позвонков в сочетании с нажатием вниз (1,77 ± 0,54 Н). Убедитесь, что сила достигает шейных позвонков, грудных позвонков, поясничных позвонков и надостных связок.
      2. Применяйте метод нажатия и разминания на мышцы с обеих сторон позвоночника с частотой 120 раз/мин в течение 5 минут. В качестве контактной поверхности используйте указательный или средний палец правой руки. Согласно животному анатомическому стандарту²³ надавить на поверхность кожи трапеции, поверхностной ягодичной мышцы, ромбовидной шейки, ромбовидной грудной мышцы, широчайших мышц спины и наружных косых мышц живота круговым разминающим движением от головы к хвосту, с силой 1,77 ± 0,54 Н, так, чтобы сила достигла трапеции, поверхностной ягодичной мышцы, ромбовидной шейки, ромбовидной грудной мышцы, широчайшие мышцы спины и наружные косые мышцы живота (Рисунок 2B)²³.
4. Надавите и разминайте чувствительные спинномозговые акупунктурные точки (такие как Ганьшу, Синьшу, Пишу, Шэньшу и Фэйшу²⁴) с частотой 100-120 раз/мин в течение 2 мин. Используя указательный или средний палец правой руки в качестве контактной поверхности, выполните круговое разминание и надавливание вниз (1,77 ± 0,54 Н) на поверхность кожи локальных акупунктурных точек (таких как Ганьшу, Синьшу, Пишу, Шэньшу и Фэйшу) у крыс с детским церебральным параличом.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Акупунктурные точки были выбраны в соответствии с «Картой точек акупунктуры животных», сформулированной Исследовательским отделением экспериментальной акупунктуры Китайского общества акупунктуры) (Рисунок 3)²⁵.
5. Местно стимулируйте пораженную конечность методом скручивания с частотой 25 раз/мин в течение 1 мин.
   1. Большим и указательным пальцами правой руки ущипните пораженную конечность детеныша крысы с ДЦП, оказывая симметричное усилие на два пальца. Убедитесь, что усилие мягкое, а действие легкое и мягкое. Растирайте правый разгибатель лучевой мышцы, разгибатель пальца обыкновенный, разгибатель локтевой кости, фалангу, межфаланговый сустав, икроножную мышцу, полусухожильную мышцу, плюсневую кость и межплюсневой сустав детеныша крысы вперед и назад.
6. Применяйте метод растирания от средней линии лба до задней части мозга с частотой 100-120 раз/мин в течение 1 минуты. Используйте указательный палец правой руки в качестве контактной поверхности и используйте метод растирания по воображаемой линии от лба до середины заднего отдела мозга детеныша крысы (а именно, по одной линии Байхуэй, Фэнфу и Дачжуй) (Рисунок 3).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Массаж в основном наносится на кожу. Представляет собой круговое движение по поверхности кожи головы детеныша крысы с ДЦП. Ему не нужно управлять движением подкожных мышц детеныша крысы с церебральным параличом.
7. В конце процедуры оставьте крысы-детеныша в покое на 30 минут, прежде чем вернуть его в клетку для крыс-матери.
   ПРИМЕЧАНИЕ: С возрастом шерсть крыс у крыс становится густой, поэтому во время операции массажа необходимо удалять заднюю шерсть всех групп крыс, чтобы не повлиять на экспериментальный эффект.

5. Определение температуры локальных акупунктурных точек

1. Используйте инфракрасный тепловизор для определения температуры локальной акупунктурной области до и после операции.
   1. Перед селективным массажем позвоночника подключите интерфейс Type-C мобильного телефона к USB-интерфейсу инфракрасного устройства обработки изображений с помощью кабеля передачи данных, и включите кнопку питания.
   2. Нажмите «Анализ», чтобы войти в терминал мобильного телефона программного обеспечения, выберите «Фото», чтобы войти в режим фотосъемки, и нажмите «Изображение в режиме изображения» в правом нижнем углу.
   3. Сфокусируйте камеру на акупунктурных точках акупунктурных точек Дачжуй, Синьшу и Шэньшу (рис. 3) на спине детеныша крысы, чтобы сделать температурные снимки. Нажмите «Фото », чтобы завершить съемку изображения, и сохраните его в формате JPG.
   4. Подключите компьютер к кабелю для передачи данных и загрузите сохраненное изображение на компьютер, на котором установлено программное обеспечение Fotric для анализа.
      1. Откройте программное обеспечение Fotric на ПК, откройте локальный файл и найдите местоположение изображения.
      2. Выберите рабочую область Термограмма, выберите изображение для анализа и войдите в интерфейс анализа.
      3. На экране «Анализ » выберите изображение в поле «Тепловизионное изображение » справа и откройте замок.
      4. Выберите функцию масштабирования, отрегулируйте размер теплового изображения и фонового изображения левого поля, чтобы они совпадали, и выключите блокировку справа.
      5. Найдите « Задать прямоугольник измерения » на панели инструментов в верхней части экрана и отметьте акупунктурную точку, которая должна быть обнаружена на рисунке.
      6. Нажмите « Отчет» справа, чтобы записать значение температуры.

6. Выявление функции двигательного равновесия у крыс с детским церебральным параличом

1. Используйте поведенческий тест Ротарод¹⁹ для выявления двигательной функции крыс в группах Симуляции, Контроля и Лечения на^61-й день после рождения.
   1. Настройки параметров: Запустите выключатель питания, выберите Выполнить эксперимент , чтобы перейти к следующему шагу, выберите Положительный, Крысы, Время 5 минут , чтобы перейти к следующему шагу, и выберите Время счета: 10 с, Скорость: 10 об/мин.
   2. Затем поместите крыс на беговую дорожку и начните тест, нажав кнопку «Бежать» после того, как они встанут на ноги. Установите состояние выполнения каждого запуска в положение ВКЛ. Тренируйте каждую крысу один раз в течение 5 минут, а затем начните выполнять тест трижды.
   3. После тренировки поместите крысят на дорожку для бега с ротародом. После того как он стабилизируется, нажмите «Выполнить» и установите состояние выполнения в положение «ВКЛ». По истечении 5 минут выберите Дата , чтобы записать время и скорость каждой крысы, впервые падающей с беговой дорожки, т. е. данные о времени бега.
2. Используйте тест Foot-fault^20,21 для оценки моторной функции равновесия правой передней конечности в группах Sham, Control и Treatment на^61-й день после рождения.
   1. Поместите детенышей крыс в начало конца горизонтальной лестницы и запишите на видео, как они переходят ее на другой конец (длина 100 см, расстояние между каждой лестницей составляет 2 см). После одной тренировки проведите формальный тест трижды для каждой крысы с интервалом в 5 минут.
   2. Наблюдайте за правой передней конечностью, когда животное пересекает лестницу, используя низкоскоростное воспроизведение, чтобы набрать очки, как показано в стандарте подсчета очков (Таблица 2).

7. Вестерн-блоттинг

1. Проведите вестерн-блоттинг образцов тканей, как описано ранее²⁶.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Количество лизата определяли в зависимости от размера тканевого блока. Использовались следующие антитела: первичные антитела против гормона роста (0,5 мкг [0,5 нг/полоса]); антитела к рецептору гормона роста (1/1000); внутреннее референтное антитело к бета-актину (1/2000) для первичных антител; Goat anti-RabbitIgG H&L (HRP) (1/10000) для вторичных антител.

8. Определение силы руки

1. Носите устройство, используемое для определения силы манипуляции на руке, используемой для массажа. Наденьте палец, используемый для массажа крысы, на сенсорный чип устройства и включите кнопку питания .
2. Подключите интерфейс жесткого диска, на котором хранится программное обеспечение ручного тестера, к компьютеру и введите выделенный IP-адрес ручного тестера в поле ввода URL .
3. Установите клиент SpringVR на компьютер, нажмите для входа в интерфейс коллекции и выберите Finger Pattern в правом нижнем углу, чтобы проверить силу манипуляции.
4. Выберите опцию Давление и нажмите кнопку Пуск , чтобы начать запись ручного усилия оператора во время работы. Программное обеспечение автоматически запишет интенсивность манипуляций и сгенерирует таблицу данных на локальном диске, где будут найдены данные в файле с именем PressureSensor .

9. Статистика данных

ПРИМЕЧАНИЕ: Программное обеспечение SPSS26.0 использовалось для статистического анализа, Graphpad Prism9.0.0 — для создания гистограмм, а Image J — для анализа значений серого белковых полос.

1. Анализируйте и представляйте все данные в виде среднего ± стандартного отклонения (Mean ± SD).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Стандарт теста составлял α = 0,05, а P ≤ 0,05 считался статистически значимым. Критерий Фишера был использован, потому что данные были проанализированы путем анализа дисперсии и нормальности и соответствовали характеристикам нормального распределения и однородности дисперсии.

Результаты

Селективные манипуляции с позвоночником могут способствовать увеличению массы тела у крыс с церебральным параличом.
Во время лечения масса тела измерялась на 3, 14, 28, 42 и 61 день после родов (Рисунок 4, Таблица 3). На третий день после рождения масса тела группы Шам составила 5,53 ± 0,035 г, а масса тела контрольной группы – 3,15 ± 0,43 г. Масса тела в группе лечения составила 4,42 ± 0,13 г и существенно не отличалась от таковой в группах Шам и Контроль до моделирования.

На 14-е сутки после родов масса тела группы Шам составила 35,97 ± 1,019 г, масса тела контрольной группы – 28,00 ± 0,7403 г, масса тела группы лечения – 33,78 ± 3,705 г. Не было существенной разницы в массе тела между группами лечения и Шама. Вес группы лечения по сравнению с контрольной группой был статистически значимым (P < 0,01).

На^28-е сутки после рождения масса тела группы Шам составила 104,9 ± 3,534 г, масса тела контрольной группы – 80,35 ± 6,767 г, масса тела группы Лечения – 96,73 ± 7,638 г. Группа лечения сравнивалась с контрольной группой, и она была статистически значимой (P < 0,01).

На 42-е сутки после родов масса тела группы Шам составила 194,1 ± 4,333 г, масса тела контрольной группы – 138,0 ± 6,029 г, масса тела группы лечения – 173,9 ± 5,433 г. Выявлена статистически значимая разница в массе тела между группой лечения и контрольной группой (P < 0,0001).

На 61-е сутки после родов масса тела группы Шам составила 321,5 ± 5,675 г, масса тела контрольной группы – 230,3 ± 5,198 г, масса тела группы лечения – 268,9 ± 15,22 г. P < 0,0001 считался статистически значимым. Наблюдалась статистически значимая разница в массе тела между группой лечения и контрольной группой при P < 0,0001.

Селективные манипуляции с позвоночником могут улучшить эффективную функцию двигательного равновесия при церебральном параличе.
На^61-й день после рождения, после окончания лечения, мы провели тест на усталость ротарода. Время первого падения в каждой группе составило 296,1 ± 1,65 с в группе Шама, 102,7 ± 7,73 с в контрольной группе и 220,1 ± 8,04 с в группе лечения. Наблюдалась значительная разница между фиктивной и контрольной группами (P < 0,0001). Разница между группой лечения и контрольной группой была статистически значимой (P < 0,0001), а разница между группой лечения и группой Шама была статистически значимой (P < 0,0001) (Рисунок 5, Таблица 4)

На^61-е сутки после рождения, после окончания лечения, баллы по ошибке стопы в группах Шам и Контроль составили 5,53 ± 0,03 и 3,15 ± 0,43 соответственно. Оценка в группе лечения составила 4,42 ± 0,13, что было значительно ниже, чем в группе Шама (P < 0,0001). Оценка в группе лечения была достоверно выше, чем в контрольной группе (P < 0,0001). По сравнению с группой лечения и группой Шама, разница была статистически значимой (P < 0,0001) (Рисунок 6, Таблица 5).

Селективные манипуляции с позвоночником могут регулировать уровень секреции гормона роста при церебральном параличе.
Образцы тканей были взяты на 32-й день после рождения, и гипоталамус крыс с церебральным параличом был выбран для вестерн-блоттинга, а также были выбраны соответствующие первичные и вторичные антитела: использовались антитела против гормона роста, антитела против рецептора гормона роста, внутреннее эталонное антитело против бета-актина для первичных антител и козье анти-RabbitIgG H&L (HRP) (1/10000) для вторичных антител. Селективные манипуляции с позвоночником могут способствовать росту и развитию детенышей крыс с церебральным параличом за счет регуляции экспрессии гормона роста (ГР) и рецептора гормона роста (ГГР) (Рисунок 7, Таблица 6)²⁶.

Стимулирование роста и развития детенышей крыс с церебральным параличом может улучшить содержание серотонина и норадреналина в гиппокампе, тем самым улучшая способность к обучению и память^.

Селективные манипуляции с позвоночником позволяют эффективно улучшить местную температуру акупунктурных точек (рис. 8, табл. 7).
Инфракрасное тепловизионное изображение использовалось для определения температуры локальной области акупунктурных точек до и после лечения в группе лечения. Установлено, что до обработки температура поддерживалась на уровне 32,92 ± 0,55 °С, сразу после обработки – 36,32 ± 0,15 °С, через 2 мин после обработки – 35,32 ± 0,28 °С. Температура составила 34,61 ± 0,17 °C через 5 мин после окончания лечения и 34,28 ± 0,60 °C через 10 мин после окончания лечения. Различия были статистически значимыми по сравнению с непосредственной температурой до окончания лечения и локальной акупунктурной зоной через 2 мин, 5 мин и 10 мин после лечения (P < 0,05). После селективных манипуляций на позвоночнике температура локальной акупунктурной области в группе лечения была повышена и поддерживалась в определенной степени.

Рисунок 1: Выпрямляющий рефлекс. (А) Схематическое изображение эксперимента с выпрямляющим рефлексом. Тест на выпрямляющий рефлекс был проведен на^4-й день после рождения (на второй день после моделирования) для проверки успешности моделирования. (B) Гистограмма теста на выпрямляющий рефлекс в каждой группе (n = 6, среднее значение ± SD). Примечание: ns указывает на P > 0,05 и отсутствие статистической разницы. указывает на P < 0,0001, что указывает на весьма значимую разницу. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 2: Селективные манипуляции с позвоночником. (А) Обращение с детенышами перед манипуляцией. Детенышей крыс помещали на ладонь оператора и держали в тишине, что было обычной обстановкой в лагере. (Б) Представление избирательных манипуляций с позвоночником. Надавите и разомните мышцы с обеих сторон позвоночника. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 3: Карта акупунктурных точек на спине человека и крысы SD. (A) Человек и (B) SD крыса. C7: седьмой шейный позвонок; GV14: Дачжуй (GV14), локализация: между седьмым шейным позвонком и первым грудным позвонком, дорсальная срединная линия; T3: третий грудной позвонок; BL13: Фэйшу (BL13), расположение: между двумя ребрами ниже третьего грудного позвонка; T5: пятый грудной позвонок; BL15: точка Синьшу, расположенная между двумя сторонами нижнего ребра пятого грудного позвонка; T7: седьмой грудной позвонок; BL17: точка Гэшу, расположение: нижние и нижние ребра седьмого грудного позвонка; BL18: точка Ганьшу, расположение: нижние и нижние ребра седьмого грудного позвонка; T11: одиннадцатый грудной позвонок; GV6: точка Цзичжун, расположенная между одиннадцатым и двенадцатым остистыми отростками грудного позвонка; BL20: точка Пишу, расположенная между двумя ребрами ниже двенадцатого грудного позвонка; L2: второй поясничный отдел позвоночника; GV4: Минмэнь (GV4), локализация: дорсальная срединная линия, углубление под вторым поясничным остистым отростком; BL23: точка Шэньшу, расположенная по обе стороны от второго поясничного отдела позвоночника. GV20: Байхуэй (GV20), локализация: срединная теменная кость; GV16, точка Фэнфу, местонахождение: дорсальное углубление затылочно-атлантоаксиального сустава за затылочным гребнем. Расположение акупунктурных точек в организме человека в высшей степени согласуется с расположением акупунктурных точек у животных с анатомической позиции. Аномальная точка отклика была близка к точке проекции иннервированной поверхности тела. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 4: Гистограмма измерения веса в каждой группе (n = 6, среднее значение ± SD). Примечание: ns P >0,05, статистической разницы нет; **P < 0,01, ***P < 0,001,****P < 0,0001, разница была статистически значимой. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 5: Гистограмма времени первого падения теста Roat-rod в каждой группе (n = 6, среднее значение ± SD). Примечание: ****P < 0,0001, разница была статистически значимой. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 6: Столбчатая диаграмма оценок Foot-fault в каждой группе (n = 6, среднее значение ± SD). Примечание: ****P < 0,0001, разница была статистически значимой. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 7: Западные блот-полосы рецептора ГР и ГР. Вестерн-блот использовали для выявления секреции гормона роста на молекулярно-биологическом уровне в каждой группе, и наблюдали влияние селективных манипуляций со спинальным позвоночником на гормон роста. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 8: Мониторинг температуры до и после обработки. (Верхняя панель) Тепловые изображения, полученные с помощью инфракрасного тепловизора. Температура (°C) области локальной акупунктурной точки регистрировалась инфракрасным тепловизором до и после лечения туйной. (А) Перед лечением туйна. (В) Температура сразу после окончания обработки. (C) Местная температура акупунктурной точки через 2 мин после лечения. (D) Местная температура акупунктурной точки через 5 мин после окончания лечения. (E) местная температура акупунктурной точки через 10 мин после лечения. (Нижняя панель) Гистограмма мониторинга температуры до и после лечения (n = 3, Mean ± SD). *P < 0,05, P < 0,01, * * * * P < 0,001, * * * *P < 0,0001, разница статистически значима. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Группа	Количество случаев заболевания (n)	Выпрямляющий рефлекс/с
Притворство	6	0,77 ± 0,10
Контроль	6	19.00 ± 2.04*
Лечение	6	19.77 ± 0.55#

Таблица 1: Временная статистика выпрямляющего рефлекса у крыс-младенцев с ДЦП (среднее значение ± SD; n = 6). Щенки в каждой группе были подвергнуты тесту на выпрямляющий рефлекс на^4-й день после рождения (на^2-й день после моделирования) для проверки успешности модели. * По сравнению с группой Шам, P < 0,0001; # по сравнению с контрольной группой, P < 0,0001.

Счёт	Стандарт для оценки
1	Когда молодая крыса помещается на горизонтальную лестницу, нога соскальзывает при переносе веса, что влияет на ходьбу
2	Когда молодую крысу ставят на лестницу, нога соскальзывает при переносе веса, но это не влияет на ходьбу
3	Когда молодая крыса помещается на горизонтальную лестницу, она быстро перемещает ногу на следующую ступень лестницы, несущей вес
4	Когда молодая крыса помещается на горизонтальную лестницу, крыса частично ставит ногу и перемещается по лестнице, несущей вес
5	Когда молодую крысу помещают на горизонтальную лестницу, крыса ставит ногу на одну ступеньку и быстро перемещается на другую ступеньку
6	Когда молодую крысу помещают на горизонтальную лестницу, она правильно располагает подушечки лап и полностью несет вес тела

Таблица 2: Стандартная таблица результатов теста на ошибку ноги

Время (день)	Количество случаев заболевания (n)	Группа
		Притворство	Контроль	Лечение
П3	6	8.52 ± 0.27	8,60 ± 0,08	8,45 ± 0,28Д
П14	6	35.97 ± 1.01	28.00 ± 0.74*	33.78 ± 3.70С
П28	6	104,9 ± 3,53	80,35 ± 6,76*	96,73 ± 7,63С
П42	6	194,1 ± 4,33	138,0 ± 6,02*	173,9 ± 5,43#D
П61	6	321,5 ± 5,67	230,3 ± 5,19*	268.9 ± 15.22#D

Таблица 3: Результаты весовых испытаний каждой группы (среднее значение ± SD) (г). Примечание: По сравнению с контрольной группой, P < 0,01; ° По сравнению с группой Шама, P < 0,01; à По сравнению с контрольной группой, P < 0,001; * По сравнению с группой Шам, P < 0,0001; # По сравнению с контрольной группой, P < 0,0001; D По сравнению с группой Шама, P < 0,0001.

Группа	Количество случаев заболевания (n)	Роат-стержень/раз/с
Притворство	6	296,1 ± 1,65
Контроль	6	102,7 ± 7,73*
Лечение	6	220.1 ± 8.04#D

Таблица 4: Тест Ротарод среди крыс-младенцев в каждой группе (среднее значение ± SD) (с). Примечание: * По сравнению с группой Шама, P < 0,0001; # По сравнению с контрольной группой, P < 0,0001; D По сравнению с группой Шама, P < 0,0001.

Группа	Количество случаев заболевания (n)	Оценка ошибки ноги
Притворство	6	5,53 ± 0,03
Контроль	6	3,15 ± 0,43*
Лечение	6	4,42 ± 0,13#D

Таблица 5: Оценка ошибок ногой каждой группы (среднее значение ± SD). Примечание: * По сравнению с группой Шама, P < 0,0001; # По сравнению с контрольной группой, P < 0,0001; D По сравнению с группой Шама, P < 0,0001.

Группа	ГР	GHR
Притворство	2,325 ± 0,830	1,469 ± 0,265
Контроль	1.563 ± 0.070#	1,563 ± 0,070С
Лечение	2,471 ± 0,956*	2,471 ± 0,956&

Таблица 6: Данные по серому значению вестерн-блот-полосы гормона роста и рецептора гормона роста (n = 10). GH:* Попарное сравнение между группой лечения и контрольной группой (P = 0,020 < 0,05) показало статистически значимую разницу; # Попарное сравнение между группой Шама и контрольной группой (P = 0,022 < 0,05) показало достоверную разницу; Попарное сравнение между группами лечения и группой Шама не показало статистической значимости (P = 0,076 > 0,05); GHR: и попарное сравнение между группой лечения и контрольной группой (P = 0,024 < 0,05) показало значительную разницу; Ñ Попарное сравнение между Шамской группой и Модельной группой (P = 0,021 < 0,05) показало статистически значимую разницу; Попарное сравнение между группой лечения и группой Шама не показало статистической значимости (P = 0,085 > 0,05).

Время терапии	Количество случаев заболевания (n)	Температура
Перед лечением	3	32.92 ± 0.55
Немедленно	3	36,32 ± 0,15*
Через 2 минуты	3	35.32 ± 0.28#
Через 5 минут	3	34.61 ± 0.17С
Через 10 минут	3	34.28 ± 0.60Dà

Таблица 7: Результаты мониторинга температуры до и после обработки (среднее значение ± SD) (°C). Примечание: * По сравнению с теми, кто был до лечения, P < 0,0001; # По сравнению с показателями до лечения, P < 0,001; D По сравнению с 0 мин после лечения, P <0,001; По сравнению с периодом до лечения, P < 0,01; à По сравнению с предварительной обработкой, P < 0,05.

Обсуждение

Поскольку ишемия и гипоксия являются важными патогенетическими факторами детского церебрального паралича, международно признанный метод создания модели детского церебрального паралича сочетается с гипоксией для подготовки модели церебрального паралича 16,28,29,30. Когда развивается церебральный паралич, он вызывает общую задержку развития, включая вес и двигательную функцию, что может быть связано с уровнем секреции гормона^роста. Селективные манипуляции с позвоночником использовались для лечения крыс с церебральным параличом. Во время лечения контролировалась масса тела, а также проводились поведенческие тесты, такие как тест Ротарода, оценка ошибки стопы и гормон роста. Температура местных акупунктурных точек наблюдалась до и после лечения. После того, как была установлена модель ишемии-гипоксии, детеныш крысы с ДЦП потерял вес. Тем не менее, с расширением массажа было обнаружено, что прибавка в весе в группе лечения была значительно лучше, чем в контрольной группе. Он также имел очевидные преимущества в регулировании секреции гормона роста. Эти результаты указывают на то, что селективные манипуляции с позвоночником могут эффективно улучшить рост и развитие детенышей крыс с церебральным параличом. Более того, поскольку левая общая сонная артерия была использована для установления модели ишемии и коагуляции в сочетании с гипоксией, должно быть повреждение левой коры, приводящее к нарушению двигательной функции. После лечения мы использовали тест Ротарод и шкалу Foot-fault для выявления поведенческих способностей детенышей крыс с церебральным параличом 32,33,34. Установлено, что моторная функция крыс с ДЦП улучшилась после селективных манипуляций со спинальным^путем35. Селективные манипуляции с позвоночником могут эффективно улучшить рост, развитие и моторную функцию крыс с церебральным параличом.

Традиционный китайский массаж основан на акупунктурных точках и системе меридианов. Цель данного эксперимента заключается в основном в наблюдении за влиянием традиционного китайского массажа на рост и развитие детенышей крыс с церебральным параличом. Массаж в основном проводится на меридиане мочевого пузыря стопы – тайян первой и второй боковых линий и меридиане Ду, но в отличие от иглоукалывания существует четкое расположение точки стимуляции. Массаж – это разновидность стимуляции лица, при которой пальцы оператора используются для операции на брюшной полости, а контактная поверхность имеет определенный диапазон площади, диаметр около 1,0 см круглой. Меридианы также имеют определенный диапазон; однако контактная поверхность человеческого пальца шире, чем площадь акупунктурной точки крысы SD. Это означает, что в некоторых местах, не являющихся акупунктурными точками, существует неизбежная операционная процедура. Поэтому мы не устанавливали отдельную группу немеридианового массажа в качестве контрольной группы при распределении групп для данного исследования.

Селективный массаж позвоночника отбирает позвоночник и мышцы с обеих сторон позвоночника для стимуляции во время операции, что может облегчить локальные мышечные спазмы, способствовать местному кровообращению и улучшить функцию соответствующей иннервационной зоны для достижения эффекта разгрузки меридиана и коллатералей, а также общей регуляции и лечения. Он полностью воплощает в себе интеграцию целостной концепции традиционной китайской медицины, теории меридианов традиционной китайской медицины и принципа иннервации спинномозговых нервов, а также учитывает все в целом при проведении местного лечения детского церебрального^{паралича.}

В процедуре метод массажа позвоночника и мышц и связок с обеих сторон лечения, то есть меридиан Ду и меридиан мочевого пузыря стопы – первая и вторая боковые линии массажной стимуляции, могут играть роль в соединении задних акупунктурных точек, спинного и головного мозга. Поэтому, когда мы выполняем манипулятивные операции на задних точках детеныша крысы, мы можем стимулировать задние точки и меридианы для движения ци и крови, регулировать функции внутренних органов тела и, таким образом, влиять на функции спинного и головного мозга, способствуя росту и развитию детеныша крысы. В целом, стимулируя меридиан Ду и меридиан мочевого пузыря первой и второй боковых линий стоп-тайян, можно мобилизовать Ян всего тела, а общую сопротивляемость организма болезням можно улучшить, что отражает общую концепцию традиционной китайской медицины 16,26,35,36,37,38. Меридиан Ду берет начало от нижней части живота человеческого тела и достигает макушки головы вдоль позвоночника, регулируя Ян ци человеческого тела³⁶. Меридиан мочевого пузыря Фут-тайян в основном проходит по обеим сторонам судна губернатора, а точки заднего шу пяти органов цзан расположены на первой боковой линии меридиана мочевого пузыря Фут-тайян, участвующих в лечении заболеваний органов цзанфу^39,40. Меридианы и коллатерали делятся на плавающие коллатерали, мелкие коллатерали и кожные области. Поэтому, когда мы выполняем процедуру на коже спины крысы с ДЦП, мы можем оперировать по направлению меридианов и эффективно стимулировать плавающие коллатерали, мельчайшие коллатерали и кожные области. Таким образом, стимулируя акупунктурные точки и меридианы для движения ци и крови, функция внутренних органов организма регулируется и приводит к увеличению веса детенышей.

Мы обнаружили шнуровидные точки реакции на меридиане мочевого пузыря стоп-тайян на спине детей с ДЦП, а для выявления аномальной температуры некоторых акупунктурных точек с помощью инфракрасной термографии была обнаружена температура. В сочетании с принципом иннервации спинномозговых нервов мы обнаружили, что эти точки реакции находятся близко к проекционным точкам на поверхности иннервации нерва, что также согласуется с принципом селективной резекции корешков спинномозговых нервов для лечения детского церебрального паралича (рис. 3)⁴¹. Акупунктурные точки наполняют меридианы, ци и кровь и соединяют поверхность тела и органы цзан-фу^42,43. Поэтому при лечении крыс-младенцев с ДЦП используются селективные манипуляции со спинальным путем, которые оперируют акупунктурные точки на спине, активируя локальные акупунктурные точки, разблокируя меридианы, ци и кровь, и акупунктурные точки находятся в термочувствительном состоянии⁴⁴. После операции и лечения еще можно поддерживать определенную температуру.

Использование метода вращения на правой конечности позволяет снять спазм местной мышечной ткани, уменьшить локальные меридианы и улучшить местную дисфункцию. Наконец, мы выбираем массаж головы, потому что голова – это голова всего Ян, где сходятся сущность ци и кровь пяти органов цзан-фу. Лечение этой части позволяет примирить Инь и Ян и достичь эффекта общей реабилитации^16,18. В заключение, селективные манипуляции с позвоночником могут эффективно улучшить массу тела, двигательную функцию и гормон роста у детенышей крыс с церебральным параличом, способствуя росту и развитию.

Есть еще несколько важных моментов, на которые следует обратить внимание во время операции. Во-первых, следует отметить, что детеныш крысы должен адаптироваться к температуре ладони и состояние возбуждения стабильно до начала лечения. Операторам необходимо использовать одноразовые перчатки, чтобы избежать отказа от самок крыс из-за отклонений от нормы после прямого контакта с кожей операторов. Перед операцией операторы должны быть единообразно обучены своим манипуляциям и могут работать после прохождения оценки. Здесь мы использовали специальный тестер манипуляций для тестирования, чтобы обеспечить стандартизацию операции. Поскольку мы наблюдали изменения веса во время роста у детенышей крыс с церебральным параличом, манипуляцию необходимо регулярно проверять. При надавливании и разминании давление вниз должно быть вертикальным, а усилие должно быть от легкого к тяжелому, стабильным и непрерывным, чтобы ощущение стимуляции могло полностью достичь глубоких тканей тела. Не используйте стремительное насилие. Диапазон разминания должен быть маленьким и большим, а сила должна быть сначала легкой и тяжелой. Диапазон разминания должен быть маленьким и большим, а сила должна быть сначала легкой и тяжелой. При проведении метода разминания необходимо достичь мышечного и связочного слоя. Ручное усилие составляло 1,77 ± 0,54 Н при контроле ручным тестером. В отличие от этого, при растирании обрабатывается только поверхность кожи. Кроме того, кожа детенышей крыс с ДЦП нежная, и неправильная эксплуатация может привести к ее повреждению.

В качестве наружного лечения традиционной китайской медицины селективные манипуляции с позвоночником являются эффективным дополнением к существующим методам лечения ДЦП, а также представляют собой диверсифицированный метод лечения ДЦП. В нем рассматривается как общее, так и местное лечение, которое может дать детям с ДЦП комплексную реабилитацию и может принести лучшие экономические выгоды и социальные эффекты для семьи и общества детей. Однако у этой техники есть и некоторые недостатки, потому что операторы имеют разное понимание и владение техникой, степень единства техники низкая, может произойти отклонение терапевтического эффекта, а лечебный эффект не точный. Следующий шаг – довести манипуляцию до единого стандарта. Хотя мы подтвердили, что селективные манипуляции с позвоночником положительно влияют на рост и развитие детенышей крыс с церебральным параличом и могут играть терапевтическую роль, регулируя воспалительный гомеостаз, механизм его действия на нейропластичность и регенерацию белого вещества все еще нуждается в изучении.

Благодаря достоверности лечебного эффекта и научной теории селективных манипуляций с позвоночником, основанной на операционной теории селективных манипуляций с позвоночником, этот набор манипуляций может быть расширен для лечения других педиатрических заболеваний, таких как задержка роста у детей, задержка речевого развития и т.д. Предоставление исследовательских идей обогащает систему лечения для большинства медицинских работников и исследователей. Поэтому данная статья способствует популяризации и применению методики.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
96-луночные планшеты	Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD	11510	Определение концентрации белка
Антитела против бета-актина	Abacm	Ab8227	Разведение: 1/2000
Антитела против гормона роста	Abacm	Ab126882	0,5 &; g (0,5 нг/полоса)
Антитело к рецептору гормона роста	Abacm	Ab202964	Разведение: 1/1000
Базовый операционный микроскоп	Shanghai YuYAN Scientific Instrument Co. Ltd	SM-101	Общая сонная артерия была выделена под микроскопом во время моделирования
разработчика BCA	Biyuntian Biological Engineering Co., LTD	P0010	Определение концентрации белка
Система хемилюминесцентной визуализации	Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD	100240073	Визуализация белковых полос
Прямая нагрузка Цветной прекрасный маркер	Beijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)	M221	Western Blot
DK-30Автоматический снежный льдогенератор	Henan Brothers инструментальное оборудование Co., LTD	SHDX0023
Комплект люминесцентной подложки для производства льда ECL	Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD	BL520B	Преобразование скрытых изображений в экспонированной пленке в видимые изображения
Термостатическая водяная баня с электрическим подогревом	TAISITE INSTRUMENT	DK-98-II	Молодые крысы были реанимированы после моделирования
Электронные весы	Kunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. Ltd	CN-LQC10002	Измеряли
массу тела молодых крыснемецкая маленькая белая электрическая коагуляционная ручка hemostat	Haohang	L55× W125× H37	Он использовался для коагуляции левой общей сонной артерии
Перчатка	Jiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTD	Q/320684 YZYL001-2017	Для массажной операции
Glycine	Beijing Soleibao Technology Co., Ltd.	Cat#G8200	Электрофоретический раствор, Настройка передаточной жидкости
Goat Anti-RabbitIgG H& L (HRP)	Abacm	AB6721	Разбавление: 1/10000
Интеллектуальная лабораторная машина для сверхчистой воды	Chongqing huachuag water treatment engineering co.,ltd	n/a	Фильтрация (15 л)
Изофлуран	Shandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD	15198	Анестезия поддерживалась путем индукции у молодых крыс
LinkIR	FOTIRC	V1.3.2.134	Программное обеспечение для анализа инфракрасных изображений
Низкотемпературный высокоскоростной измельчитель тканей	Wuhan Servicebio technology CO., LTD	SKZ3F20200191	Метанол для измельчения тканей
	Guangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd	20220519	Сконфигурировать жидкость для переноса
Mini-PROTEAN Tetra	Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd	552BR 233193	Электрофорез
Multiskan Spectrum Microplate Spectrophotometer	TECAN	Spark	Были обнаружены абсорбция и концентрация тканевого белка
Чувствительные к давлению умные перчатки	Jinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTD	Miiglove	Используются для измерения манипулятивной прочности оператора
мембраны PVDF	MerckMillipore Corporation	IPVH00010	Вестерн-блот
Охлаждаемая центрифуга	Hettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTD	MIKRO 220R	Исследовательская центрифуга
тепловизор три в одном	FOTIRC	226S (384 x 288)	Измерение температуры
RIPA lysate	Beijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)	R0010	Литическая ткань
SHA-CA цифровой дисплей водяная баня термостатический генератор	Changzhou Aohua Instrument Co. Ltd	SHA-CA	Молодые крысы использовались при гипоксии
Аппарат ротарод для усталости шести крыс	Shanghai Duoyi Industry Co., LTD	DO01104RT703	обнаружена моторная функция CP
Сухое обезжиренное молоко	Guangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)	1172GR500	Ограничивающий жидкий
SPF корм для разведения	SPF (Пекин) biotechnology co., Ltd.	A1EC30005A1S4285266	Лактирующие самки крыс получали поддерживающий
корм SPF	(Beijing) biotechnology co., Ltd.	A1EC30005A1S4285267	Щенков кормили после отлучения от груди
Хирургическая пластина	Shanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD	51002	Модель операционного стола была установлена у молодых крыс
TS-200 Orbital shaker	Haimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.	TS-8S	Фиксация гелем
Tween 80	MedChemExpress	HY-Y1819	Configure TBST
ZS-MV Портативный наркозный аппарат ZHONGSHI	НАУКА & ТЕХНОЛОГИЯ	ZS-MV-I	Анестезия индуцировалась и поддерживалась у экспериментальных животных