В этом исследовании описывается быстрый и эффективный метод анализа клеточных компонентов церебральных тромбов путем растворения сгустка, окрашивания клеток и рутинного исследования крови.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Комплексный подход к анализу клеточных компонентов церебральных тромбов
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Церебральный тромбоз, тромб в мозговой артерии или вене, является наиболее распространенным типом инфаркта головного мозга. Исследование клеточных компонентов церебральных тромбов важно для диагностики, лечения и прогноза. Однако современные подходы к изучению клеточных компонентов сгустков в основном основаны на окрашивании in situ , которое не подходит для комплексного изучения клеточных компонентов, так как клетки плотно завернуты в сгустки. Предыдущие исследования успешно выделили фибринолитический фермент (sFE) из Sipunculus nudus, который может разрушать сшитый фибрин напрямую, высвобождая клеточные компоненты. В данном исследовании был создан комплексный метод изучения клеточных компонентов церебрального тромба на основе sFE. Этот протокол включает в себя растворение сгустка, высвобождение клеток, окрашивание клеток и рутинный анализ крови. Согласно этому методу, компоненты клетки могут быть изучены количественно и качественно. Приведены репрезентативные результаты экспериментов с использованием данного метода.
Введение
Цереброваскулярная болезнь является одним из трех основных заболеваний, которые могут угрожать здоровью человека, среди которых более 80% приходится на ишемическую цереброваскулярную болезнь. Церебральный тромбоз и тромбоз церебральных вен являются наиболее распространенными ишемическими цереброваскулярными заболеваниями на сегодняшний день, в основном вызываемыми церебральными тромбами 1,2. Если лечение не проводится должным образом, оно будет иметь высокие показатели инвалидности и смертности, а также высокую частоту рецидивовпосле выписки.
В последнее врем....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Исследование выполнено в соответствии с руководящими принципами Комитета по медицинской этике Университета Хуацяо. Тромбы головного мозга были удалены хирургическим путем и собраны в Первой больнице Цюаньчжоу, филиале Фуцзяньского медицинского университета, с информированного согласия пациентов.
1. Предварительная обработка сгустков крови
- Поместите сгустки на чистую посуду, добавьте пинцетом 5 мл физиологического раствора, аккуратно встряхните посуду и удалите физиологический раствор пипеткой.
ПРИМЕЧАНИЕ: Повторите полоскание три раза. - Разрежьте сгустки на более мелкие кусочки (размером менее 5 мм x 5....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
На начальном этапе процесса деградации было установлено, что тромбы имели красную компактную структуру, а рабочий раствор был бесцветным. После инкубации в течение 30 мин рабочий раствор становился светло-красным, что указывало на то, что скрещенные клетки крови были высвобождены в рабочий раствор. Большинство сгустков растворялось при удлинении времени инкубации до 5 ч, а рабочий раствор становился светло-красным. Напротив, даже после 10-часовой инкубации не было выявлено существенных изменений в физиологической группе .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
sFE является фибринолитическим агентом, который может непосредственно и эффективно разрушать фибрин12,16. Здесь sFE использовали для разрушения сшитого фибрина церебральных тромбов, высвобождения заключенных клеток внутри сгустков и качественного и количественного анализа клеточных компонентов сгустков. Данные микроскопии и рутинного исследования крови показали, что заключенные клетки были высвобождены из сгустков крови. Кроме того, типы клеток и структуры высвоб.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.
Благодарности
Это исследование финансировалось Бюро науки и технологий города Сямынь (3502Z20227197) и Бюро науки и технологий провинции Фуцзянь (No 2019J01070, No 2021Y0027).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Реакционная пластина для агглютинации | ROTEST | RTB-4003 | |
| Автоматический гематологический анализатор | SYSMEX | XNB2 | |
| Автоматический вертикальный паровой стерилизатор под давлением | SANYO | MLS-3750 | |
| (1,5 мл) | Biosharp | BS-15-M | |
| Чистый стенд | AIRTECH | BLB-1600 | |
| Инкубатор постоянной температуры | JINGHONG | JHS-400 | |
| Тарелка для культивирования (100 мм) | |||
| SENXIN | DGG-9140AD | ||
| Электронные аналитические весы | DENVER | TP-213 | |
| Фильтрующая мембрана (0.22 &; m) | Millex GP | SLGP033NK | |
| микроохлаждаемая центрифуга | Cence | H1650-W | |
| Микроскоп Слайды | CITOGLAS | 01-30253-50 | |
| Milli-Q Референс | Миллипор | Z00QSV0CN | |
| Нормальный физиологический раствор | Оптический | H37022337 | |
| Оптический микроскоп | Nikon | ECLIPSE E100 | |
| Парапленка | Bemis | PM-996 | |
| Фосфатно-солевой буфер | Beyotime | C0221A | |
| Наконечник для пипетки (1 мл ) | Axygene | T-1000XT-C | |
| Наконечник для пипетки (200 &; L) | Пипетка Axygene | T-200XT-C | |
| (1 мл) | Пипетка Thermo Fisher Scientific | ZY18723 | |
| (200 &; L) | Thermo Fisher Scientific | ZY20280 | |
| Scalpel | MARTOR | 23111 | |
| Малогабаритный вихревой генератор | Kylin-Bell | VORTEX KB3 | |
| Пинцет | Hystic | HKQS-180 | |
| Wright Раствор для окрашивания | Beyotime | C0135-500мл |
Ссылки
- Park, D. W., et al. Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial. Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).
- Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
