Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Инструмент для автоматического создания стабильных и воспроизводимых бесклеточных промежутков для повышения надежности анализа заживления клеточных ран

1.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/65794

⸱

4 октября 2024 г.

 ,  ,  , 
1Faculty of Art and Communication, Kunming University of Science and Technology, 2The School of Integrated Chinese and Western Clinical Medicine, Anhui University of Chinese Medicine, 3School of Industrial Design, Hubei University of Technology

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Благодаря интеграции дизайна взаимодействия и анализа требований пользователя, мы представляем инновационный скребок для клеток, который улучшает анализы заживления клеточных ран с точки зрения воспроизводимости, надежности, практичности, клеточной целостности и удобства использования.

Аннотация

Надежность измерения миграции клеток в анализах заживления ран часто подрывается преобладающей методологической нестабильностью, т.е. методом, основанным на наконечниках. Мы представляем инновационный инструмент, предназначенный для устранения этих ограничений. Наш новый скребок для ячеек превосходит существующий подход, создавая более равномерный и стабильный бесклеточный зазор. Повторные биологические эксперименты показали, что бесклеточный зазор, образованный клеточным скребком, имеет более прямые края и однородный размер и форму по сравнению с методом, основанным на наконечнике (p < 0,05). Что касается дизайна продукта, скребок для клеток может похвастаться усовершенствованной цветовой гаммой, подходящей для лабораторных условий, улучшающей мониторинг результатов экспериментов, и позволяет стерилизовать путем автоклавирования для повторного использования. Примечательно, что после обработки скребок для клеток демонстрирует незначительное влияние на жизнеспособность и пролиферацию клеток (97,31% и 24,41% соответственно). И наоборот, метод, основанный на наконечнике, дает более низкую жизнеспособность клеток (91,37%) и пролиферацию (18,79%). Это исследование представляет скребок для клеток как новое многоразовое устройство, способное генерировать воспроизводимые бесклеточные промежутки при сохранении жизнеспособности клеток, тем самым повышая надежность анализов заживления ран по сравнению с существующими методами.

Введение

Опухоли характеризуются отличительными признаками, такими как преимущества избирательного роста, метаболическая перестройка и иммунная модуляция, которые интригующе способствуют усиленной миграции клеток, что является критическим злокачественным поведением опухолевых клеток. Эта особенность напрямую влияет на отдаленное метастазирование первичной опухоли, ставя под угрозу долгосрочную выживаемость пациентов 1,2,3. Преимущества селективного роста позволяют раковым клеткам вытеснять нормальные клетки, в то время как метаболическая перестройка поддерживает эту быструю пролиферацию, изменяя энергетические пути. В то же время, иммунная модуляция позволяет опухолям уклоняться от защитных сил организма. Исследования подчеркивают серьезность этой проблемы, показывая, что метастазирование в легкие, часто являющееся результатом усиленной миграции клеток, является терминальным событием, приводящим к смерти пациентов с различными видами рака4. Например, рак молочной железы5, карцинома шейки матки4 и остеосаркома6 составляют 20%, 9% и 30% таких случаев соответственно. Таким образом, оценка миграции опухолевых клеток стала неотъемлемой частью современных исследований в области онкологии, что еще раз подчеркивает многогранный характер прогрессирования опухоли.

Анализ заживления клеточных ран является простым в использовании методом измерения миграции клеток in vitro, часто используемым в онкологических исследованиях7. Большинство экспериментаторов используют наконечники для пипеток для создания клеточных ран вручную8. Несмотря на то, что такой метод может быстро и удобно формировать клеточные раны, он все еще имеет много ограничений, которые влияют на воспроизводимость и точность оценки миграции клеток. Во-первых, использование наконечников для пипеток для создания царапин вручную сильно зависит от рабочего угла, силы и скорости оператора, что влияет на повторяемость метода8. Во-вторых, дефекты клеток, генерируемые наконечником, обычно имеют зубчатые, а не прямые края, потому что наконечники пипеток представляют собой пластиковые изделия с определенной эластичностью. В некоторых исследованиях раны образуются путем помещения сборных культуральных вставок непосредственно в планшет для клеточной культуры для ограничения диапазона пролиферации клеток. Такой подход позволяет обойти ограничения метода, основанного на зондах, такие как неровные края и воспроизводимость. Тем не менее, даже при использовании биосовместимых материалов долгосрочное сосуществование встраиваемых материалов с клетками по-прежнему влияетна рост клеток. Кроме того, встраивание может также вызывать клеточные эпигенетические изменения в маргинальной зоне из-за ограничения контакта12. Кроме того, контактные вставки, изготовленные из биосовместимых материалов, дороги и сложны в повторном использовании, что ограничиваетих целесообразность. Таким образом, необходим новый, воспроизводимый и практичный инструмент для простой количественной оценки миграции клеток in vitro.

Основной целью данного метода является внедрение инновационного инструмента для количественной оценки миграции клеток in vitro в онкологических исследованиях, устранение ограничений существующих методов и повышение воспроизводимости и точности оценки клеточной миграции.

Обоснование разработки этой методики заключается в критической важности оценки миграции опухолевых клеток в онкологии. Опухоли демонстрируют отличительные признаки, в том числе преимущества избирательного роста, метаболическую перестройку и иммунную модуляцию, что способствует усиленной миграции клеток, что является фундаментальным аспектом злокачественных опухолей. Этот метод направлен на то, чтобы предоставить более надежные средства изучения клеточной миграции, способствуя более глубокому пониманию поведения опухоли.

Этот метод имеет существенные преимущества по сравнению с существующими методами. Ручные анализы царапин могут страдать от зависимой от оператора интерференции, в то время как вставки культур могут влиять на рост клеток и экспрессию генов. В отличие от этого, этот метод обеспечивает улучшенную повторяемость, точность и практичность, представляя собой экономически эффективное решение для измерения миграции клеток in vitro в онкологических исследованиях. Он удовлетворяет насущную потребность в надежном и доступном инструменте для изучения миграции клеток при различных типах рака, что делает его ценным дополнением к этой области.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Полное письменное информированное согласие было предоставлено всеми участниками. Этическое одобрение не было применимо, поскольку в настоящее исследование не были включены образцы тканей животных или человека.

1. Изучение требований сообщества пользователей

  1. Раздайте анкеты биологам/экспериментаторам, работающим над анализами заживления клеточных ран. Соберите заполненные анкеты и используйте их для исследования. Для этого исследования с 12 октября 2021 года по 3 февраля 2022 года было доставлено 100 анкет 100 биологам. Процент ответов составил 97%.
  2. Попросите респондентов ответить на такие вопросы, как: какой из экспериментов с царапинами на клетках вас беспокоил больше всего? И какой инструмент использовался для выполнения царапания клеток? Дополните эти вопросы подвопросами, чтобы проследить причины.
  3. Изучите восприятие экспериментаторами таких инструментов, как наконечники для пипеток и вставки для клеточных культур, в экспериментах по заживлению клеточных ран. Поймите и соберите причины, по которым они выбрали один инструмент вместо другого, используя теорию «средство-конечная цепь», основанную на методах лестничной лестницы, в разделах14,15 анкет.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Метод лестницы делится на два типа: метод мягкой лестницы с глубинными интервью и метод жесткой лестницы с анкетами или викторинами на бумаге и карандаше. Метод жесткой лестницы был основным методом, использованным в этом исследовании. Теория «средства и цепочка» предполагает, что явные знания, которыми обладают целевые пользователи, являются поверхностными и конкретными, в то время как неявные знания являются глубокими и абстрактными.

2. Проектирование и трехмерное моделирование

  1. Нарисуйте эскиз на основе выводов, полученных в ходе предыдущего опроса, и начните процесс проектирования. Используйте этот предварительный эскиз в качестве основного плана.
    1. Уточните размеры и компоновку каждого компонента, применив функции Dim, DimRadius и DimDiameter в программном обеспечении для моделирования.
    2. Выполните измерения штангенциркулем с точностью до 0,02 мм на реальных 6-луночных планшетах для определения окончательных размеров скребка ячеек. Убедитесь, что они имеют длину 42,1 мм, ширину 42,1 мм и высоту 18,5 мм. Обратите внимание на детали на этапе проектирования, особенно на высоту продукта и физическую форму в скважине, чтобы обеспечить более плавную сборку.
  2. Постройте трехмерную модель и выполните ее рендеринг.
    1. Начните 3D-проектирование в программном обеспечении с создания базовой модели. Нажмите такие кнопки, как ExtrudeCrv для растяжения и Loft для формирования дизайна. Уточните модель, а затем нажмите кнопку СкруглениеКромки для сглаживания краев.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Другие используемые функциональные кнопки включают в себя: Линии - Для рисования прямых линейных сегментов, Полилинии - Для создания непрерывных линий, состоящих из нескольких сегментов, Прямоугольники - Для рисования прямоугольных фигур, Круги - Для рисования круглых фигур, Дуги - Для рисования дуговых или эллиптических форм, Точки - Для размещения маркеров с одной точкой, Текст - Для добавления текстовых меток, Размеры - Для добавления измеренных размеров к моделям, Массив - Для создания скопированных шаблонов объектов, Поворот - Поворот - Поворот объектов на нужные углы, Перемещение - Перемещение - Перемещение - Перемещение объектов на новые места, Масштаб - Увеличение или уменьшение размера объектов, Обрезка/Удлинение - Обрезка или удлинение объектов в соответствии с другой геометрией, Булево объединение/Разница/Пересечение - Объединение, вычитание или нахождение пересечения объектов, Слои - Организация объектов на разных слоях, Рендеринг — для создания визуализированных видов с материалами и освещением и Экспорт — для экспорта геометрии модели в другие форматы файлов.
    2. Импортируйте модель в программу для 3D-рендеринга. Примените такие материалы, как пластик, губка и сталь, а затем отрегулируйте освещение для реалистичного рендеринга.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Обобщенный список функциональных кнопок включает в себя: Drag & Drop - Для применения материалов непосредственно к деталям или моделям путем перетаскивания материала из библиотеки на нужный компонент в режиме реального времени, Щелчок правой кнопкой мыши - При щелчке правой кнопкой мыши по материалу в библиотеке, как правило, отображаются следующие параметры: Применить к выбору - Применить материал к выбранной детали в режиме реального времени. Edit Material - Настройка свойств материала. Свойства материала (после выбора материала) — доступ к определенным свойствам материала, таким как цвет, шероховатость, показатель преломления и другие атрибуты, и их изменение. Строка поиска - Для быстрого поиска материала в библиотеке путем ввода его названия или связанных ключевых слов. Категории/Папки - Для навигации по различным категориям или папкам с материалами, такими как металлы, пластик, стекло и т. д. Добавить в избранное - Чтобы отметить определенные материалы как избранные для легкого доступа во время будущих сеансов. Горячие клавиши - Доступ к некоторым операциям можно получить с помощью горячих клавиш. Например, M обычно является горячей клавишей для быстрого вызова свойств материала выбранной детали.
    3. Наконец, увеличьте контрастность (+56) и насыщенность изображения (Vibrance +19, Saturation +7) в программах для работы с фотографиями и дизайном, а также добавьте элементы фона (текстовую информацию и цвет от белого до светло-серого градиентного фона) для контекста, чтобы обеспечить высококачественное и реалистичное представление продукта.
      1. Используйте Настройки изображения >, Яркость/Контрастность , чтобы настроить контрастность изображения. Используйте инструмент «Изображение > Оттенок/Насыщенность » для изменения уровня насыщенности изображения. Используйте инструмент «Текст» (значок T) для добавления текстовой информации к изображению.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Обобщенный список функциональных кнопок включает в себя Инструмент «Эллипс» (U) - Для рисования точек/кругов. Настройте инструмент на рисование фигуры, выберите желаемый цвет заливки, а затем щелкните и перетащите (удерживая клавишу Shift для сохранения идеального круга), чтобы создать точку. Line Tool (U) - Для рисования прямых линий на изображении. Выберите инструмент, установите желаемую ширину линии, а затем щелкните и перетащите, чтобы нарисовать линию. Кисть (Кисть) (В) - Альтернативный способ рисования точек и линий. Выберите размер и форму кисти, затем щелкните (для точек) или щелкните и перетащите (для линий).
  3. После завершения трехмерной модели приступайте к изготовлению скребка для ячеек методом шлифовки и сборки 20,21,22.

3. Производство

  1. Используйте теорию цвета, материалов, отделки (CMF) в текущем исследовании для разработки прототипов скребка для клеток. Теория CMF служит методологией проектирования в научных исследованиях. Он повышает удобство использования продукта, формирует восприятие пользователя и направляет выбор материалов 23,24,25.
    1. Выберите цвета, которые будут использоваться в скребке ячеек из стандартной цветовой системы, включая Black 6 C, Cool Gray 6 C и 11-0601TPG26,27.
    2. Чтобы построить скребок для ячеек, соответствующий лабораторным стандартам, выберите подходящие материалы, включая полипропилен (ПП), губку и высокоуглеродистую сталь. Для изготовления физических прототипов начните с использования 3D-принтера для изготовления структурного каркаса. Затем используйте соединители или клеящие средства для завершения сборки скребка.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для подготовки физического продукта скребка для ячеек измельчите и соберите необходимые материалы. Протоколы безопасности должны соблюдаться на протяжении всего процесса, чтобы обеспечить безопасный и эффективный конечный продукт.
    3. Переходите к процессу отделки, который может включать в себя резку, шлифовку, полировку, штамповку или другие техники. Начните с шлифовки модели наждачной бумагой со средней зернистостью 120, чтобы удалить любые шероховатости.
    4. Затем нанесите наждачную бумагу с зернистостью 220 мелкозернистая, чтобы получить гладкую поверхность.
    5. Последующая шлифовка для сглаживания поверхностей, обеспечения правильной согласованности штекерных или встроенных соединителей.
    6. Надежно соедините ползуны I и II с помощью соединителей (неподвижных стержней), чтобы обеспечить прочную и долговечную сборку скребка для ячеек. Получите окончательную фиксированную форму скребка для ячеек с помощью комбинации механического крепления и клеевого соединения. Используйте крепежные элементы, в частности, врезную и шиповую конструкцию, чтобы закрепить детали вместе с помощью механической силы. Кроме того, чтобы повысить прочность сборки, нанесите клей (клей) для дальнейшего склеивания компонентов.
    7. Автоклавируйте скребок при температуре 121,3 °C в течение 30 минут, чтобы он сохранил свою первоначальную форму и физические свойства.

4. Культура клеток

  1. Выращивайте клетки HOS в минимально необходимой среде с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% пенициллин-стрептомицина. Культивируйте их при температуре 37 °C с 5%CO2.
  2. Меняйте питательную среду каждые 2 дня.
  3. Когда рост клеток превысит 80% конфлюенции, добавьте 1 мл трипсина с 0,25% ЭДТА и переваривайте в течение 60 с. После этого центрифугируйте клетки при 300 x g в течение 5 мин для субкультуры. Удалите надосадочную жидкость и добавьте питательную среду, чтобы получить конечную концентрацию 5 x 104 клеток на лунку. Используйте автоматический счетчик ячеек для подсчета ячеек.

5. Оценка потенциала клеточного скребка и метод на основе наконечников

  1. Подготовьте все материалы для нанесения ран и простерилизуйте их ультрафиолетовым излучением путем выдержки в течение 30 минут.
  2. После стерилизации наматывают 100% сливающиеся клетки HOS в 6-луночные планшеты в концентрации 5 x 104 клеток на лунку с использованием либо метода скребка для клеток, либо метода на основе наконечников.
    1. Для метода на основе наконечника используйте наконечник объемом 100 мкл и проведите им по ячейке, содержащей среду, 1 штрихом в горизонтальном направлении, а другим — в вертикальном.
    2. При использовании клеточного скребкового метода поместите прототип скребка в одну из лунок и с помощью пинцета аккуратно нажмите один раз. Камеры ранены. Проводите каждый эксперимент с ранением в трех экземплярах.
  3. Анализируйте все клеточные раны с помощью системы цифрового микроскопа и программного обеспечения для визуализации.

6. Измерение жизнеспособности клеток и пролиферации клеток

  1. Проводите все анализы жизнеспособности клеток в соответствии с протоколом, представленным в наборе CCK-8.
  2. Инкубируйте клетки с раствором CCK-8 в течение 2 ч при 37 °C, затем измерьте их поглощение при длине волны 450 нм с помощью считывателя микропланшетов для количественной оценки жизнеспособности клеток.
  3. Разработайте анализ включения 5-этинил-20-дезоксиуридина (EdU) для точного количественного определения дупликации ДНК и прямого количественного определения коэффициента пролиферации клеток. Определите влияние различных методов генерации клеточных ран на пролиферацию клеток с помощью анализа EdU, следуя протоколу, описанному в предыдущей публикации28.
  4. Окрашивайте клетки и визуализируйте их с помощью цифрового микроскопа. Следите за тем, чтобы каждый эксперимент проводился в трех экземплярах.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Анализ потребностей пользователей в инструментах для создания клеточных ран
Текущий экспериментальный метод получения клеточных ран требует дальнейшего совершенствования для решения многих проблем, которые ставят под угрозу биологическую воспроизводимость, надежность, экономичность потребления и пользовательский опыт анализа заживления клеточных ран. Мы использовали метод жесткой лестницы для анализа требований пользователей, участвующих в биологических экспериментах, с помощью анкет...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Целью настоящего исследования была разработка автоматического механизированного инструмента для анализа заживления клеточных ран. Насколько нам известно, это первая попытка применить механизированную приводную структуру для автоматического создания клеточных ран одним щелчком мыши. Таким образом, мы стремимся устранить недостатки традиционного метода, основанного на подсказках, такие как низкая воспроизводимость и нестабильное состояние царапин. Ожидается, что благодаря положительным рез...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.

Благодарности

Данное исследование поддержано грантом Национального фонда социальных наук (22FYSB023), Исследовательского фонда Центра промышленного дизайна провинции Хубэй (08hqt201412046) и Фонда гуманитарных и социальных наук Департамента образования провинции Хубэй (15Y054).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
CCK-8 KitBeyotime Company, КитайC0037
цифровой микроскопOlympusIX81
фетальная бычья сывороткаGibco, США16000044
HOS Procell Медико-биологические науки и Technology Co., LtdCL-0360
Image-Pro PlusMedia Cyberneticsversion 6.0
KeyShotLuxionversion 11.0Программное обеспечение для 3D-рендеринга
Считыватель микропланшетовBioTek, немецкийELX808
Minimum Essential MediumGibco, США11095080
Система согласования PantonePantoneПодбор коммерческих цветов
пенициллин-стрептомицинBeyotime Company, КитайST488
PhotoshopAdobeпрограммное обеспечение для фото и дизайна
Rhinoceros 3D RobertMcNeel & Associatesверсии 7.0Программное обеспечение для 3D-проектирования
TC20 Автоматизированный счетчик клетокBio-RadTC20
ТрипсинЦитива  HyClone, Соединенные ШтатыSH30042.01
система

Ссылки

  1. Trepat, X., Chen, Z., Jacobson, K. Cell migration. Compr Physiol. 2 (4), 2369-2392 (2012).
  2. Moncharmont, C., et al. Radiation-enhanced cell migration/invasion process: a review. Crit Rev Oncol Hematol. 92 (2), 133-142 (2014).
  3. Verbeek, B. S., Adriaansen-Slot, S. S., Vroom, T. M., Beckers, T., Rijksen, G. J. F. I. Overexpression of EGFR and c-erbB2 causes enhanced cell migration in human breast cancer cells and NIH3T3 fibroblasts. FEBS Lett. 425 (1), 145-150 (1998).
  4. Vaideeswar, P., Aswani, Y., Damani, S., Singaravel, S. Pulmonary microvascular metastases in cervical carcinoma: A case series. J Postgrad Med. 66 (3), 155-158 (2020).
  5. Liang, Y., Zhang, H., Song, X., Yang, Q. Metastatic heterogeneity of breast cancer: Molecular mechanism and potential therapeutic targets. Semin Cancer Biol. 60, 14-27 (2020).
  6. Sasaki, R., Osaki, M., Okada, F. MicroRNA-based diagnosis and treatment of metastatic human osteosarcoma. Cancers (Basel). 11 (4), 553(2019).
  7. Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells. Gene Ther. 15 (10), 730-738 (2008).
  8. Zhang, M., Li, H., Ma, H., Qin, J. A simple microfluidic strategy for cell migration assay in an in vitro wound-healing model. Wound Repair Regen. 21 (6), 897-903 (2013).
  9. Yue, P. Y., Leung, E. P., Mak, N., Wong, R. N. A simplified method for quantifying cell migration/wound healing in 96-well plates. J Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).
  10. Roch, T., et al. Immunological evaluation of polystyrene and poly (ether imide) cell culture inserts with different roughness. Clin Hemorheol Microcirc. 52 (2-4), 375-389 (2012).
  11. Jonkman, J. E., et al. An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy. Cell Adh Migr. 8 (5), 440-451 (2014).
  12. Freshney, R. I. Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications. , John Wiley & Sons, Inc. (2015).
  13. Kato, T., et al. Reuse of cell culture inserts for in vitro human primary airway epithelial cell studies. Am J Respir Cell. 64 (6), 760-764 (2021).
  14. Veludo-de-Oliveira, T. M., Ikeda, A. A., Campomar, M. C. Discussing laddering application by the means-end chain theory. Qualit Rep. 11 (4), 626-642 (2006).
  15. Yang, T., Yang, F., Men, J. Recommendation content matters! Exploring the impact of the recommendation content on consumer decisions from the means-end chain perspective. Int J Info Manage. 68, 102589(2023).
  16. Sadeghlou, S., Emami, A. Residential preferences and satisfaction: a qualitative study using means-end chain theory. J Housing Built Env. 38, 1711-1734 (2023).
  17. Pieters, R., Baumgartner, H., Allen, D. A means-end chain approach to consumer goal structures. Int J Res Market. 12 (3), 227-244 (1995).
  18. Valette-Florence, P., Rapacchi, B. J. J. Improvements in means-end chain analysis: using graph theory and correspondence analysis. J Advert Res. 31, 30-45 (1991).
  19. Nunkoo, R., Ramkissoon, H. Applying the means-end chain theory and the laddering technique to the study of host attitudes to tourism. J Sustain Tourism. 17 (3), 337-355 (2009).
  20. Development of an automatic mold polishing system. Tsai, M. J., Chang, J. L., Haung, J. F. IEEE Int Conf Robot Auto, 3, 3517-3522 (2005).
  21. Altan, T., et al. Advanced techniques for die and mold manufacturing. CIRP Annals. 42 (2), 707-716 (1993).
  22. Kalt, E., Monfared, R., Jackson, M. Towards an automated polishing system: Capturing manual polishing operations. Int J Res Eng Tech. 5 (7), 182-192 (2016).
  23. Becerra, L. CMF design: the fundamental principles of colour, material and finish design. , Frame Publishers, UK. (2016).
  24. Pan, C., et al. Next-generation immuno-oncology agents: current momentum shifts in cancer immunotherapy. J Hematol Oncol. 13 (1), 29(2020).
  25. Kim, S., Nah, K. The development direction of emotional materials by increasing sensorial experiences-Focusing on the case study of CMF design. Arch Des Res. 27 (2), 121-135 (2014).
  26. Eiseman, L. The complete color harmony, pantone edition: expert color information for professional results. , Rockport Publishers. (2017).
  27. Eiseman, L., Recker, K. Pantone: The twentieth century in color:(coffee table books, design books, best books about color). , Chronicle Books. (2011).
  28. Deng, P., Jin, W., Liu, Z., Gao, M., Zhou, J. Novel multifunctional adenine-modified chitosan dressings for promoting wound healing. Carbohydr Polym. 260, 117767(2021).
  29. Ares, G., Giménez, A., Gámbaro, A. Understanding consumers' perception of conventional and functional yogurts using word association and hard laddering. Food Quality Prefer. 19 (7), 636-643 (2008).
  30. Lee, W. J. A study on word cloud techniques for analysis of unstructured text data. J Converg Culture Tech. 6 (4), 715-720 (2020).
  31. Word Cloud Explorer: Text Analytics Based on Word Clouds. Heimerl, F., Lohmann, S., Lange, S., Ertl, T. 47th Hawaii international conference on system sciences, , IEEE. (2014).
  32. Kulevicz, R. A., et al. Influence of sustainability reports on social and environmental issues: bibliometric analysis and the word cloud approach. Env Rev. 28 (4), 380-386 (2020).
  33. Rubbo, S. D., Gardner, J. F. A review of sterilization and disinfection. Lloyd-Luke. , (1965).
  34. Kelsey, J. C. Sterilization by ethylene oxide. J Clin Pathol. 14 (1), 59-61 (1961).
  35. Shintani, H. Ethylene oxide gas sterilization of medical devices. Biocontrol Sci. 22 (1), 1-16 (2017).
  36. Rutala, W. A., Gergen, M. F., Weber, D. J. Comparative evaluation of the sporicidal activity of new low-temperature sterilization technologies: ethylene oxide, 2 plasma sterilization systems, and liquid peracetic acid. Am J Infect Control. 26 (4), 393-398 (1998).
  37. Dion, M., Parker, W. Steam sterilization principles. Pharm Eng. 33 (6), 1-8 (2013).
  38. Környei, Z., et al. Cell sorting in a Petri dish controlled by computer vision. Sci Rep. 3, 1088(2013).
  39. Hsu, J. T., et al. Chronic wound assessment and infection detection method. BMC Med Inform Decis Mak. 19 (1), 99(2019).
  40. Katoh, M. Test-retest reliability of isometric ankle plantar flexion strength measurement performed by a hand-held dynamometer considering fixation: examination of healthy young participants. J Phys Ther Sci. 34 (6), 463-466 (2022).
  41. Li, X., Zhao, J., Ma, G., Huang, S. Experimental study on the traditional timber mortise-tenon joints. Adv Str Eng. 18 (12), 2089-2102 (2016).
  42. Cottle, R. W. The principal pivoting method revisited. Mathematical Prog. 48, 369-385 (1990).
  43. Cross, N. Engineering design methods: strategies for product design. , John Wiley & Sons. (2021).
  44. Otto, K., Wood, K. Product design: techniques in reverse engineering and new product development. , Pearson. (2001).
  45. Tariq, M., et al. Gefitinib inhibits M2-like polarization of tumor-associated macrophages in Lewis lung cancer by targeting the STAT6 signaling pathway. Acta Pharmacol Sin. 38 (11), 1501-1511 (2017).
  46. Rahimi, S., et al. CRISPR/Cas9-mediated knockout of Lcn2 effectively enhanced CDDP-induced apoptosis and reduced cell migration capacity of PC3 cells. Life Sci. 231, 116586(2019).
  47. Cormier, N., Yeo, A., Fiorentino, E., Paxson, J. Optimization of the wound scratch assay to detect changes in murine mesenchymal stromal cell migration after damage by soluble cigarette smoke extract. J Vis Exp. (106), e53414(2015).
  48. Pinto, B. I., Cruz, N. D., Lujan, O. R., Propper, C. R., Kellar, R. S. In vitro scratch assay to demonstrate effects of arsenic on skin cell migration. J Vis Exp. (144), e58838(2019).
  49. Rodriguez, L. G., Wu, X., Guan, J. L. Wound healing assay. Methods Mol Biol. 294, 23-29 (2005).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

скрепер для клетокбесклеточный зазормиграция клетокжизнеспособность клетокпролиферация клетоквоспроизводимый анализметод на основе наконечникаанализ с EdU
Инструмент для автоматического создания стабильных и воспроизводимых бесклеточных промежутков для повышения надежности анализа заживления клеточных ран
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.