Моделирование расстройств алкогольного спектра плода у рыбок данио с целью охарактеризовать влияние неблагоприятной эмбриональной среды на социальное поведение взрослого человека

Mindy Rampersad; Yohaan Fernandes

doi:10.3791/65834

Методическая статья

Моделирование расстройств алкогольного спектра плода у рыбок данио с целью охарактеризовать влияние неблагоприятной эмбриональной среды на социальное поведение взрослого человека

955 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/65834

⸱

9 февраля 2024 г.

Mindy Rampersad¹ , Yohaan Fernandes¹

¹Department of Biology, University of South Dakota

В этой статье

Краткое содержание

Цель настоящего протокола состоит в том, чтобы наметить шаги, необходимые для создания и использования теста социальных предпочтений для взрослых рыбок данио, и продемонстрировать, что он может быть использован для характеристики социальных дефектов, вызванных этанолом.

Аннотация

Фетальные расстройства алкогольного спектра (ФАСН) описывают все врожденные дефекты, вызванные алкоголем. Врожденные дефекты, такие как нарушения роста, краниофациальные, поведенческие и когнитивные аномалии, связаны с ФАСН. Социальные трудности являются распространенными поведенческими аномалиями, связанными с ФАСН и часто приводят к серьезным проблемам со здоровьем. Животные модели имеют решающее значение для понимания механизмов, ответственных за социальные дефекты, вызванные этанолом. Данио-рерио — это социальные позвоночные, которые производят внешне оплодотворенные прозрачные яйца; эти характеристики предоставляют исследователям точную, но простую процедуру создания фенотипа ФАСН и врожденного поведения, которое может быть использовано для моделирования социального дефицита, связанного с ФАСН. Таким образом, рыбки данио идеально подходят для характеристики социального дефицита ФАСН. Цель текущего протокола состоит в том, чтобы предоставить пользователю простой поведенческий анализ, который может быть использован для характеристики последствий негативной среды на ранних этапах развития и ее влияния на социальное поведение во взрослой жизни. Протокол может быть использован для характеристики влияния мутаций или тератогенов на социальное поведение взрослого человека. Описанный здесь протокол демонстрирует, как охарактеризовать социальное поведение отдельных рыб во время 20-минутного социального анализа. Кроме того, данные, полученные с использованием настоящего протокола, свидетельствуют о том, что протокол может быть использован для характеристики эффектов социальных дефектов, вызванных эмбриональным этанолом, у взрослых рыбок данио.

Введение

Пренатальное воздействие алкоголя может привести к различным врожденным дефектам, известным как расстройства фетального алкогольного спектра (FASD)¹. Нарушение поведения, такое как социальные трудности, являются распространенными врожденными дефектами, связанными с FASD ^2,3. К сожалению, социальные трудности часто приводят к серьезным проблемам с психическим здоровьем⁴, которые могут негативно повлиять на качество жизни людей с ФАСН. Таким образом, понимание механизмов, ответственных за социальные дефекты, вызванные этанолом, имеет первостепенное значение.

Рыбки данио обладают биологическими и поведенческими характеристиками, которые делают их хорошо подходящими для углубления нашего понимания механизмов, ответственных за социальные дефекты, вызванные этанолом. Например, рыбки данио производят большое количество прозрачных внешне оплодотворенных яиц; эти биологические характеристики позволяют исследователям легко создавать точные и воспроизводимые фенотипы FASD⁵. Чтобы подвергнуть эмбрионы воздействию этанола через 24 часа после оплодотворения (HPF), достаточно использовать препарирующий микроскоп для изучения прозрачной яйцеклетки и определения стадии эмбриона на основе ранее опубликованных работ, таких как Kimmel et ^al.6, а затем поместить яйцеклетку в желаемую концентрацию этанола на желаемый срок. Поскольку хорион является слабым барьером для алкоголя⁷, этанол легко подкупает эмбрион. Чтобы остановить воздействие, нужно просто удалить яйца из раствора этанола. Помимо предоставления исследователям простого, но точного метода создания фенотипов FASD, рыбки данио также позволяют исследователям проводить генетические сравнения с людьми, потому что 70% человеческих генов имеют ортолог рыбок данио, таким образом, они являются ценным инструментом для понимания^генов, связанных с заболеваниями человека. Кроме того, в отличие от других животных моделей, данио-рерио образуют социальные группы⁹ , называемые стаями¹⁰. Поведение отмельчания может быть использовано для характеристики влияния воздействия этанола на эмбрион на социальное поведение¹¹. Кроме того, у рыбок данио рерио социальная реакция может быть вызвана с помощью управляемых компьютером социальных стимулов¹² или живых социальных стимулов¹³.

В предыдущих работах была дана характеристика социальной реакции взрослых рыбок данио в группах¹⁴, однако ограничением этого подхода является невозможность соотнести поведение отдельной рыбы с конкретным показателем, таким как изменения уровня нейротрансмиттеров¹¹. Следующий протокол даст пользователям возможность охарактеризовать социальное поведение отдельной взрослой рыбки данио. Поскольку социальное поведение приобретается для отдельных рыб, пользователи протокола теперь могут соотносить приобретенный поведенческий профиль каждой рыбы с зависимым результатом. Например, предыдущая работа показала, что воздействие этанола на эмбрион ухудшает дофаминергическую реакцию на социальный^{стимул.} В то время как приведенные здесь данные используют воздействие этанола на эмбрион в качестве независимой переменной, пользователи протокола могут охарактеризовать влияние других фармакологических методов лечения или генетических мутаций на социальное поведение. Кроме того, пользователи протокола не ограничиваются изучением того, как эмбриональное лечение изменяет поведение, но также могут определить, как острое фармакологическое лечение взрослых рыбок данио влияет на социальное поведение^.

Протокол

Все описанные здесь методы были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) Университета Южной Дакоты.

1. Содержание, уход за рыбками данио-рерио и воздействие этанола на эмбрионы

Выращивание и разведение данио-рерио в соответствии с описанием¹⁶.
Воздействие этанола
1. Выберите подходящую стадию развития, на которой будет проводиться воздействие этанола. В этом протоколе эмбрионы подвергались воздействию этанола при дозе 24 hpf.
2. Поместите яйца в 1,0% этанол объем/объем на 2 ч¹⁵. Хорошей практикой является соотношение 1 яйцо на мл ЭМ. В частности, поместите эмбрионы в 50 мл эмбриональной среды (ЭМ; рецепт ЭМ см. в Westerfield¹⁶ ), затем удалите 500 мкл ЭМ и замените 500 мл этанола.
3. После воздействия этанола вырастить эмбрионы, как описано¹⁷. Анализ социального поведения, когда рыбам исполнилось 16 недель.

2. Рандомизация и настройка аквариума

Используя онлайн-генератор случайных последовательностей, рандомизируйте все испытания априори для проведения поведенческих анализов. Убедитесь, что сторона стимула и группы лечения изменяются случайным образом.
Чтобы избежать каких-либо искажающих факторов, таких как время суток или день тестирования, начинайте и заканчивайте поведенческий анализ в одно и то же время каждый день и проводите поведенческое тестирование в последовательные дни, пока не будут протестированы все экспериментальные рыбы.
Для этого анализа (Рисунок 1) используйте бак объемом 37 л (50 см x 25 см x 30 см, Д x Ш x В) с баками объемом 1,4 л, расположенными снаружи по ширине бака, как описано ранее¹⁷.
Выровняйте заднюю часть и дно аквариума объемом 37 л белым гофрированным пластиком, чтобы увеличить контраст между экспериментальной рыбой и фоном для улучшения видеослежения.
Поместите гофрированный пластик на внешнюю стенку аквариума объемом 1,4 л, чтобы увеличить контрастность социального стимула для подопытных рыб. Наконец, поместите белый гофрированный пластик между баками объемом 1,4 л и баками 37 л; Этот непрозрачный барьер используется для того, чтобы подопытные рыбы не могли видеть социальный стимул во время привыкания.
Расположите камеру на расстоянии, достаточном для захвата всей длины аквариума объемом 37 л плюс половины аквариума объемом 1,4 л и точного отслеживания взрослых подопытных рыб.
ПРИМЕЧАНИЕ: Наблюдение за тем, какая сторона удерживает стимул, гарантирует, что исследователи правильно пометили зоны слежения и обеспечивает резервирование в качестве резерва.
Если инфракрасное отслеживание не используется, обязательно подсвечивайте бак объемом 37 л. Используйте любые имеющиеся в продаже светильники для аквариумных вытяжек с лампой полного спектра T8 мощностью 15 Вт.
ПРИМЕЧАНИЕ: Если устанавливается несколько арен, используйте идентичные вытяжки для аквариума с идентичными лампами.

3. Проведение социального анализа

Начните с заполнения бака объемом 37 л, используемого для поведенческого анализа, водой, идентичной воде, используемой в корпусной стойке. Убедитесь, что температура воды находится в пределах 2 °C от стойки корпуса.
В конце дня опустошите бак объемом 37 л. Начинайте каждый день тестирования с пресной воды. Убедитесь, что уровень воды в баке объемом 37 л и уровень воды в баке объемом 1,4 л идентичны. Если температура помещения не позволяет удерживать воду в баке объемом 37 л на уровне 28,5 °C 2 °C, то замените воду теплой водой с температурой 28,5 °C.
Далее настройте зоны интереса. Обратитесь к выбранному пользователем программному обеспечению для отслеживания для создания зон. В этом протоколе по длине бака объемом 37 л, сверху и снизу, рулеткой отмечались 5-сантиметровые приращения. Учитывая, что испытательный бак составляет 50 см, шаг в 5 см приводит к 10 зонам по 5 см каждая.
Используя в качестве ориентира отметки, сделанные на баке объемом 37 л, используйте программное обеспечение для создания зон, соединив точку 5 см вверху с соответствующей точкой 5 см внизу. Дополнительно создайте зону по дну и вдоль раздражителя. Настройка зон интереса.
Используйте программное обеспечение для слежения в этом протоколе для измерения расстояния от зоны и продолжительности пребывания в ней. В этом протоколе было использовано 12 зон.
Количественно оцените время, проведенное в зонах с 1 по 10, и расстояние от стимула и дна как зону 1, как зону, ближайшую к стимулу, в то время как зону 10 — самую удаленную от стимула.
Затем выберите двух самцов и двух самок, которые будут использоваться для социального стимула. Лучшей практикой было бы использовать самцов и самок из той же когорты, что и подопытные рыбы. Если это невозможно, попытайтесь найти рыбу, которая соответствует штамму, возрасту и размеру подопытной рыбы.
Перенесите подопытных рыб из резервуара для содержания в испытательный манеж (резервуар объемом 37 л). Используйте сачок для ловли рыбы в аквариуме с корпусом. Поместите сачок с рыбой в него, в емкость с рыбной водой.
ПРИМЕЧАНИЕ: Использование этого подхода снизит нагрузку на подопытных рыб при перемещении между аквариумами.
Поместите подопытных рыб в центр испытательной арены.
Как только настройки обнаружения станут удовлетворительными в зависимости от выбранного пользователем программного обеспечения (см. руководство пользователя), начните 20-минутное испытание. В течение первых 10 минут оставьте на месте непрозрачный барьер между баком объемом 37 л и баком объемом 1,4 л. Это не позволит подопытным рыбам увидеть социальный стимул, состоящий из двух самцов и двух самок данио-рерио, и позволит рыбам акклиматизироваться к испытательной арене^13,17.
Через 10 мин осторожно снять непрозрачные преграды, вытащив их из-за бака; Это позволит подопытным рыбам увидеть социальный стимул.
Используйте программное обеспечение для слежения для отслеживания и количественной оценки поведения подопытных рыб ¹¹^, ¹²^, ¹⁷ на основе предпочтений пользователя и руководства по программному обеспечению. В текущем протоколе количественно оцените расстояние от социального стимула и дна резервуара, а также время, проведенное во всех зонах.
Анализируйте данные с помощью традиционных инструментов анализа данных.

Результаты

Рисунок 2 был модифицирован по материалам Fernandes et ^al.17 и показывает, что воздействие этанола на эмбрион притупляет реакцию отмели за счет изучения расстояния от стимула. Данные на рисунке 2 представляют собой расстояние от социального стимула в течение 20-минутного исследования. Ось Y показывает расстояние в сантиметрах, а ось X показывает 20-минутное испытание, разбитое на интервалы по 1 минуте. Черная полоса по оси X представляет время, когда непрозрачные барьеры были удалены и социальный стимул стал виден испытуемой рыбе. Во всех группах первоначально наблюдается быстрое снижение социального стимула, как только он становится видимым, что можно определить по резкому уменьшению расстояния между 9 и 10 минутами, однако, в то время как контрольные рыбы остаются очень близкими к социальному стимулу, обработанные алкоголем нет; Это говорит о том, что воздействие этанола на эмбрионы влияет на социальное поведение взрослого человека^12,18.

Рисунок 3 был модифицирован по материалам работы Fernandes et ^al.17 и использует данные, собранные при измерении расстояния до стимула, чтобы еще раз продемонстрировать влияние воздействия этанола на эмбриональный уровень этанола на реакцию отмеливания. Данные на рисунке 3 представляют собой уменьшение расстояния до социального стимула, когда он становится видимым. Рассчитать среднее сокращение расстояния до стимула; Среднее расстояние до стимула в течение периода действия стимула (когда стимул виден) было вычтено из среднего расстояния до стимула во время привыкания (когда социальный стимул не виден), таким образом, большее отрицательное значение представляет более сильную социальную реакцию.

На рисунке 4 показано время, проведенное в зонах, в зависимости от расстояния до стимула. Рисунок 4 был изменен по сравнению с Fernandes et ^al.17. На рисунке 4А показано количество времени (ось Y), которое рыбы проводят в каждой зоне (ось X), пока стимул виден. В то время как рыбы из всех групп, по-видимому, отдают предпочтение зоне, ближайшей к контрольной зоне, рыбы проводят почти в два раза больше времени в зоне 1 по сравнению с рыбами, получавшими алкоголь (рисунок 4B). На рисунке 4C показано, что воздействие этанола на эмбрионы не ухудшало подвижность, поскольку не было различий между группами в разных зонах. Наконец, на рисунке 4D показано, что при отсутствии социального стимула рыбы не проводят время в зоне, наиболее близкой к социальному стимулу. Таким образом, результаты показывают, что рыбы контрольной группы приближаются и остаются очень близко к социальному стимулу, когда они видимы, в то время как рыбы, обработанные этанолом, этого не делают. Кроме того, данные, представленные на рисунках 2 и 4C , свидетельствуют о том, что воздействие этанола на эмбрионы не ухудшает способность рыб видеть социальные стимулы (рисунок 2) или двигаться (рисунок 4C), что является убедительным доказательством того, что воздействие этанола на эмбрион ухудшает социальное поведение у взрослых рыбок данио.

figure-results-1
Рисунок 1: Схема поведенческого аппарата. Резервуар объемом 37 л использовался для анализа социального поведения взрослых рыбок данио (называемых ZT140) с воздействием этанола на эмбрионы и без них. Эта цифра была изменена по сравнению с Fernandes et ^al.17. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-2
Рисунок 2: Воздействие этанола на эмбрион притупляет социальное поведение у взрослых рыбок данио. Среднее расстояние между взрослой подопытной рыбой и живой косякой построено с интервалом в 1 минуту из 20-минутного поведенческого сеанса. Отображаются средние значения ± SEM. Контроль (n = 12); 1% этанол (EtOH; n = 11). Горизонтальная полоса над осью X, от 10 до 20 минут, изображает временную шкалу, в течение которой живая косяк видна подопытным. Концентрация алкоголя показана над графиками. Эта цифра была изменена по сравнению с Fernandes et ^al.17. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-3
Рисунок 3: Рыба, обработанная алкоголем, находится значительно дальше от живого косяка. Столбцы представляют разницу между расстоянием от рыбы до и после того, как живая косяк становится видимой. Более крупные отрицательные значения указывают на более сильную реакцию на сородичей. Отображаются средние значения ± SEM. Отображаются средние значения ± SEM. Контроль (n = 12); 1% этанол (EtOH; n = 11). Эта цифра была изменена по сравнению с Fernandes et ^al.17. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

figure-results-4
Рисунок 4: Воздействие эмбрионального этанола изменяет продолжительность времени, проведенного в зоне 1 только тогда, когда виден живой косяк. (A) Столбцы представляют время, проведенное во всех 10 зонах во время предъявления стимула. (В) Столбцы обозначают время, проведенное в зоне 1 во время предъявления стимула. Зона 1 — это зона, ближайшая к живому косяку, а зона 10 — самая дальняя от живой косяки. Обратите внимание на существенную разницу в количестве времени, которое рыбы контролируют в зоне. (C) Столбцы представляют средний процент времени, проведенного во всех зонах во время привыкания, первые 10 минут. (D) Столбцы представляют время, проведенное в зоне 1 во время привыкания. Отображаются средние значения ± SEM. Размеры выборки следующие: Контроль (n = 12); этанол (EtOH; n = 11). Эта цифра была изменена по сравнению с Fernandes et ^al.17. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Обсуждение

Рыбки данио-рерио обладают рядом биологических и поведенческих характеристик, что делает их очень привлекательным организмом для исследований, связанных с генами, окружающей средой и поведением ^5,19. Этот протокол дает конечному пользователю относительно простое руководство по анализу социального поведения, множество способов количественного измерения социального поведения и может связать поведенческие реакции отдельных рыб с такими методами лечения, как воздействие этанола в эмбрионах, генетические мутации или другие фармакологические вещества.

Чтобы оценить социальное поведение взрослых рыбок данио, тщательно следуйте этому протоколу в сочетании с руководством пользователя выбранного программного обеспечения для слежения. Чтобы построить испытательную арену, нужен просто бак объемом 37 л с крышкой и подсветкой, гофрированный пластик, два бака поменьше для социального стимула и камера; Большинство из этих товаров можно приобрести в зоомагазинах и в любом крупном розничном магазине. Когда одна рыбка данио преподносится группе рыбок данио-рерио, естественное поведение одной рыбки данио заключается в уменьшении расстояния до группы при одновременном увеличении времени, проводимого в непосредственной близости от группы¹⁹, что называется реакцией стаи¹⁹. Реакция стаи представляет собой социальное поведение, которое можно охарактеризовать двумя способами: во-первых, когда социальный стимул виден, измеряется расстояние между социальным стимулом и одной рыбой^, а во-вторых, измеряется время, проведенное в зоне, ближайшей к социальному стимулу, когда он виден. Возможность количественно оценить время, которое рыбки данио рерио проводят в зоне 5 см, когда виден социальный стимул, является убедительным доказательством социальной реакции, учитывая, что эти рыбы в среднем имеют длину около 4 см.

Разделение аквариума 50 см на участки по 10 5 см помогает в статистическом анализе, потому что вероятность того, что испытуемая рыба находится в любой зоне, одинакова. На первый взгляд, наличие двух показателей для одного и того же результата кажется излишним. Тем не менее, избыточность может обеспечить проверку. Кроме того, измерения расстояния и продолжительности во время привыкания могут быть использованы для определения того, влияет ли лечение на зрение или движение. В этом протоколе используется коммерчески доступное программное обеспечение для автоматизированного слежения^13,18, но он поддается другим системам слежения или даже ручному слежению обученным наблюдателем.

Независимо от используемого программного обеспечения для отслеживания, необходимо предпринять критически важные шаги для оптимизации отслеживания. Во-первых, выберите фон, который обеспечивает значительный контраст по сравнению с записываемой рыбой. Дикие данио-рерио имеют горизонтальные полосы золотистого и синего^{цвета 20}; Они также имеют мозаику из желтых ксантофор, серебристых или голубых иридофоров и черных меланофоров²⁰. Так, при характеристике поведения рыб дикого типа АВ используют белый фон 12,13,17, с другой — при характеристике социального поведения рыбок данио-рерио, у которых отсутствует пигмент, используют черный фон¹⁷. Во-вторых, убедитесь, что есть достаточное освещение для отслеживания подопытных рыб. Если арен слежения несколько, убедитесь, что освещение между аренами одинаково. Еще одним важным шагом является обеспечение того, чтобы уровень воды в аквариуме объемом 37 литров соответствовал уровню воды в резервуарах объемом 1,4 литра, чтобы гарантировать, что испытуемые рыбы не смогут плавать в местах, где нет социальных стимулов. Кроме того, убедитесь, что бак объемом 1,4 л находится в кадре, при записи видео; Это обеспечит резервную копию на случай, если потребуется ручное кодирование данных или потребуется проверка стимульной стороны.

Типичными проблемами в протоколе являются неправильное отслеживание объекта, недостаточный период привыкания и короткая временная задержка при преодолении непрозрачных барьеров при создании нескольких арен. Чтобы избежать неправильного отслеживания объекта, убедитесь, что существует достаточный контраст между рыбой и фоном, как упоминалось ранее, и следуйте рекомендациям программного обеспечения. Кроме того, если программное обеспечение пользователя позволяет инфракрасное слежение, это может уменьшить проблемы, связанные с контрастностью. Хотя 10 минут может показаться долгим временем для периода привыкания, наша неопубликованная работа предполагает, что сокращение времени привыкания негативно влияет на протокол. Наконец, если непрозрачный барьер между баками объемом 37 л и 1,4 л тянется вручную и если установлено несколько арен, все барьеры не могут быть вытянуты точно одновременно, если только несколько человек не тянут барьеры. В качестве альтернативы, если анализ проводит только один человек, то следует принять меры по уравновешиванию того, какие барьеры на арене будут удалены в первую очередь.

Несмотря на то, что протокол прост, стоимость программного обеспечения для отслеживания и дополнительное время, необходимое для индивидуальной характеристики рыбы, являются потенциальными ловушками. В этом протоколе использовалось коммерчески доступное программное обеспечение для отслеживания поведения экспериментальных рыб, что позволяет избежать предвзятости наблюдателя и увеличить пропускную способность за счет создания нескольких арен и, таким образом, регистрации нескольких рыб. Несмотря на то, что в этом протоколе использовалось коммерческое программное обеспечение, доступно и другое программное обеспечение для слежения, в том числе бесплатное. Использование этого протокола с отслеживанием по выбору конечного пользователя позволит воспроизвести социальный анализ. В этом протоколе характеризовалось поведение отдельной рыбы; Другие сосредоточились на изучении групп рыбок данио¹⁴ , что является одним из способов устранения потенциальной ловушки характеристики одной рыбы за раз. В качестве альтернативы, как упоминалось ранее, одновременное использование нескольких испытательных арен может увеличить пропускную способность, сохраняя при этом возможность присвоения поведенческого профиля отдельной рыбе. Поддержание способности коррелировать поведенческий профиль отдельной рыбы важно, потому что это дает исследователю возможность искать изменчивость в пределах группы лечения. Несмотря на то, что воздействие этанола на эмбрионы использовалось в качестве независимой переменной в репрезентативных данных, будущие применения метода, описанного в настоящем протоколе, не ограничиваются простой характеристикой влияния воздействия этанола на эмбриональное поведение в обществе. Например, можно определить влияние генетических мутаций²¹ или других фармакологических методов^{лечения 22} на социальное поведение. Кроме того, помимо воздействия этанола на эмбрионы, будущие работы могут охарактеризовать влияние других тератогенов на социальное поведение. Таким образом, текущий протокол полезен для любого исследователя, заинтересованного в понимании того, как гены и/или окружающая среда влияют на социальное поведение.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Финансирование для поддержки этого исследования было предоставлено Национальным институтом здравоохранения (NIH)/Национальным институтом злоупотребления алкоголем (NIAAA) [R00AA027567] Y.F.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
1,4-литровые ZT140 Акванеринговые баки	Aquaneering	ZT140	Танки для социального стимулирования
Aqueon 20" Deluxe Fluorescent Full Hood аквариумный светильник	https://www.petco.com/shop/en/petcostore/product/aqueon-aquarium-black-24-fluorescent-deluxe-full-hood-215740		светильник для 37-го аквариума
Aqueon Standard Open-glass стеклянный аквариумный аквариум, 10 галлонов	https://www.petco.com/shop/en/petcostore/product/aga-10g-20x10x12bk-tank-170917		37-литровый аквариум для социального анализа
Ethanol	Fisher Scienticfic
Система слежения Ethovision XT	https://www.noldus.com/ethovision-xt
цветная камера Basler GigE с поддержкой R-совместимых https://www.noldus.com/ethovision-xt
белым гофрированным пластиком			Пластиковая облицовка задней и нижней части 37-го бака и задней части баков, используемых для социального стимулирования

BP28184 https://www.homedepot.com/p/Coroplast-48-in-x-96-in-x-0-157-in-4mm-White-Corrugated-Twinwall-Plastic-Sheet-CP4896S/205351385

Ссылки

Institue Med. Fetal alcohol syndrome: diagnosis, epidemiology, prevention, and treatment. , National Academies Press. Washington, D.C. (1996).
Abel, E. L. Fetal alcohol syndrome and fetal alcohol effects. , Springer. (1984).
Stevens, S. A., Clairman, H., Nash, K., Rovet, J. Social perception in children with fetal alcohol spectrum disorder. Child Neuropsychol. 23 (8), 980-993 (2017).
Streissguth, A. P., et al. Risk factors for adverse life outcomes in fetal alcohol syndrome and fetal alcohol effects. J Dev Behav Pediatr. 25 (4), 228-238 (2004).
Lovely, C. B., Fernandes, Y., Eberhart, J. K. Fishing for fetal alcohol spectrum disorders: zebrafish as a model for ethanol teratogenesis. Zebrafish. 13 (5), 391-398 (2016).
Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev Dyn. 203 (3), 253-310 (1995).
Lovely, C. B., Nobles, R. D., Eberhart, J. K. Developmental age strengthens barriers to ethanol accumulation in zebrafish. Alcohol. 48 (6), 595-602 (2014).
Howe, K., et al. The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome. Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).
Norton, W., Bally-Cuif, L. Adult zebrafish as a model organism for behavioural genetics. BMC Neurosci. 11 (1), 90(2010).
Pitcher, T. J. Heuristic definitions of fish shoaling behaviour. Animal Behav. 31 (2), 611-613 (1983).
Fernandes, Y., Rampersad, M., Gerlai, R. Embryonic alcohol exposure impairs the dopaminergic system and social behavioral responses in adult zebrafish. Int J Neuropsychopharmacol. 18 (6), pyu089(2015).
Fernandes, Y., Gerlai, R. Long-term behavioral changes in response to early developmental exposure to ethanol in zebrafish. Alcohol Clin Exp Res. 33 (4), 601-609 (2009).
Fernandes, Y., Rampersad, M., Jones, E. M., Eberhart, J. K. Social deficits following embryonic ethanol exposure arise in post-larval zebrafish. Addict Biol. 24 (5), 898-907 (2019).
Buske, C., Gerlai, R. Early embryonic ethanol exposure impairs shoaling and the dopaminergic and serotoninergic systems in adult zebrafish. Neurotoxicol Teratol. 33 (6), 698-707 (2011).
Pannia, E., Tran, S., Rampersad, M., Gerlai, R. Acute ethanol exposure induces behavioural differences in two zebrafish (Danio rerio) strains: A time course analysis. Behav Brain Res. 259, 174-185 (2014).
Westerfield, M. The zebrafish book: a guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio)/Monte Westerfield. , University of Oregon Press. Eugene, OR. (2007).
Fernandes, Y., Rampersad, M., Eberhart, J. K. Social behavioral phenotyping of the zebrafish casper mutant following embryonic alcohol exposure. Behav Brain Res. 356, 46-50 (2019).
Fernandes, Y., Rampersad, M., Gerlai, R. Impairment of social behaviour persists two years after embryonic alcohol exposure in zebrafish: A model of fetal alcohol spectrum disorders. Behav Brain Res. 292, 102-108 (2015).
Fernandes, Y., Buckley, D. M., Eberhart, J. K. Diving into the world of alcohol teratogenesis: a review of zebrafish models of fetal alcohol spectrum disorder. Biochem Cell Biol. 96 (2), 88-97 (2018).
Park, J. S., et al. Innate color preference of zebrafish and its use in behavioral analyses. Mol Cells. 39 (10), 750-755 (2016).
Gerlai, R., et al. Forward genetic screening using behavioral tests in zebrafish: a proof of concept analysis of mutants. Behav Genet. 47 (1), 125-139 (2017).
Scerbina, T., Chatterjee, D., Gerlai, R. Dopamine receptor antagonism disrupts social preference in zebrafish: a strain comparison study. Amino Acids. 43 (5), 2059-2072 (2012).