Данный протокол описывает модель транзиторной фокальной ишемии головного мозга у мышей через внутрипросветную окклюзию средней мозговой артерии. Кроме того, показаны примеры оценки результатов с использованием магнитно-резонансной томографии и поведенческих тестов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Модель транзиторной окклюзии средней мозговой артерии при инсульте
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Инсульт является одной из основных причин смерти или хронической инвалидности во всем мире. Тем не менее, существующие оптимальные методы лечения ограничиваются реперфузионной терапией во время острой фазы ишемического инсульта. Для получения информации о физиопатологии инсульта и разработки инновационных терапевтических подходов фундаментальную роль играют модели инсульта у грызунов in vivo . Доступность генетически модифицированных животных особенно стимулировала использование мышей в качестве экспериментальных моделей инсульта.
У пациентов, перенесших инсульт, окклюзия средней мозговой артерии (МЦА) является распространенным явлением. Следовательно, наиболее распространенная экспериментальная модель включает внутрипросветную окклюзию MCA, минимально инвазивный метод, который не требует краниэктомии. Эта процедура включает в себя введение мононити через внешнюю сонную артерию (ЭКА) и продвижение ее через внутреннюю сонную артерию (ВСА) до тех пор, пока она не достигнет точки разветвления МКА. После 45-минутной артериальной окклюзии монофиламент удаляют для проведения реперфузии. На протяжении всего процесса контролируется мозговой кровоток для подтверждения уменьшения во время окклюзии и последующего восстановления после реперфузии. Неврологические и тканевые исходы оцениваются с помощью поведенческих тестов и магнитно-резонансной томографии (МРТ).
Введение
По данным ВОЗ, инсульт является разрушительным заболеванием, от которого ежегодно страдают около 15 миллионов человек во всем мире. Около трети пациентов умирают от этого заболевания, в то время как другая треть испытывает постоянную инвалидность. Инсульт — это сложная патология, в которой участвуют различные типы клеток, такие как нейронные и периферические иммунные клетки, сосудистая сеть и системные реакции1. Сложная сеть реакций, вызванных инсультом на системном уровне, в настоящее время не может быть воспроизведена с помощью моделей in vitro . Таким образом, экспериментальные модели на животных необходимы для изучения механизмов з....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Работа с животными проводилась в соответствии с законами Каталонии и Испании (Real Decreto 53/2013) и Европейскими директивами, с одобрения этического комитета (Comité Ètic d'Experimentació Animal, CEEA) Университета Барселоны и местных регулирующих органов Женералитата Каталонии. Результаты исследований публикуются в соответствии с рекомендациями ARRIVE. Эта процедура предназначена для проведения у взрослых мышей, начиная с 8-недельного возраста, без возрастных ограничений. Примеры хирургического вмешательства, разработанного на мышах C57BL/6 в возрасте 10-12 недель, приведены здесь. Следует учитывать анатомические различия в зависимости от штамма мышей.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Существуют различные подходы к оценке результатов процедуры tMCAo. Здесь используются методы нейровизуализации in vivo (МРТ) и поведенческое тестирование.
У мышей развиваются ишемические поражения в головном мозге, в основном затрагивающие территорию, поставляемую MCA ипсилатеральной к окклюзии, такую как полосатое тело и дорсолатеральная кора. Существует несколько методов определения степени поражения, включая окрашивание тканей с помощью 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида (ТТК), гисто.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Внутрипросветная процедура tMCAo является наиболее часто используемой моделью фокальной ишемии головного мозга с реперфузией в фундаментальных исследованиях. В настоящее время мыши являются предпочтительной животной моделью из-за наличия генетически модифицированных штаммов. Тем не менее, важно признать, что генетически модифицированные мыши и их генетический фон могут влиять на васкуляризацию мозга. Наличие коллатерального кровообращения и анастомозов между различными артериальными территориями может существенно влиять .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Благодарности
Исследование поддержано грантом PID2020-113202RB-I00, финансируемым Ministerio de Ciencia e Innovación (MCIN)/Agencia Estatal de Investigación (AEI), Gobierno de España/10.13039/501100011033 и «Европейским фондом регионального развития (ЕФРР). Способ сделать Европу». NCC и MAR получили стипендии (PRE2021-099481 и PRE2018-085737 соответственно), финансируемые MCIN/AEI/ 10.13039/501100011033 и «Европейским социальным фондом (ESF) Инвестиции в ваше будущее». Благодарим Франциску Руис-Хаэн и Леонардо Маркес-Кисиновски за техническую поддержку. Мы выражаем признательность за поддержку центра МРТ-визуализации Института биомедицинских исследований ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 6/0 шов | Arago | Сосудистые лигатуры | |
| 6/0 шовный материал с изогнутой иглой | Arago | Skin шовные материалы | |
| 9 мг/мл Физиологический раствор | Fresenius Kabi | CN616003 EC | Для увлажнения |
| Анестезиологическая система | SurgiVet | ||
| Тупые ретракторы, шириной 1 мм | Fine Science Tools | 18200-09 | |
| Buprenorfine | Buprex | For | |
| обезболивание Зажимные щипцы | Fine Science Tools | S& T CAF4 | |
| Dumont мини щипцы | Fine Science Tools | M3S 11200-10 | |
| Щипцы | Fine Science Tools | 91106-12 | |
| Клей | Loctite | Для приклеивания зонда LDF к черепу | |
| Измеритель прочности захвата | IITC Life Science Inc. | #2200 | |
| Изофлуран | B-Braun | CN571105.8 | |
| LDF Perimed | Perimed | Periflux System 5000 | |
| LDF Держатели зондов | Perimed | PH 07-4 | |
| Медицинская лента | |||
| магнит для МРТ | Bruker BioSpin, Ettlingen, Германия | BioSpec 70/30 горизонтальный сканер для животных | |
| Иглодержатель с резаком для швов | Fine Science Tools | 12002-14 | |
| Нейлоновая нить | Doccol | 701912PK5Re | |
| Клетка для восстановления с грелкой | |||
| Sirgical Scissics | Tools | 91401-12 | |
| Набор для прижигания малого сосуда | Fine Science Tools | 18000-00 | |
| Стереомикроскоп и холодный свет | Leica | M60 | |
| Щипцы для завязывания швов | Fine Science Tools | 18025-10 | |
| Термостат, ректальный зонд и коврик для мыши | Letica Science Instruments | LE 13206 | |
| Пружинные ножницы Vannas (режущая кромка 4 мм) | Fine Science Tools | 15019-10 | |
| Сосудистые зажимы | Fine Science Tools | 00396-01 |
Ссылки
- Siddiqi, A. Z., Wadhwa, A. Treatment of acute stroke: current practices and future horizons. Cardiovascular Revascularization Medicine. 49, 56-65 (2023).
- Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
