В данной статье мы представляем протокол применения огнеигольчатой терапии Линнань при вмешательстве на крысах с моделью остеопороза.
Методическая статья
* These authors contributed equally
В данной статье мы представляем протокол применения огнеигольчатой терапии Линнань при вмешательстве на крысах с моделью остеопороза.
По сравнению с нитевидной иглотерапией, огнеигольчатая терапия обладает как стимуляцией иглами, так и согревающим эффектом тепла, что делает ее неожиданными эффектами при некоторых хронических и неизлечимых заболеваниях. Остеопороз (ОП) имеет высокую частоту встречаемости у женщин в постменопаузе, а также у мужчин среднего и пожилого возраста, а цикл лечения длительный. Согласно традиционной китайской медицине (ТКМ), терапия огненными иглами Линнань показала потенциал в лечении остеопороза. Тем не менее, еще предстоит пройти долгий путь, прежде чем его можно будет широко использовать. Данная статья посвящена применению огнеигольчатой терапии Линнань при проведении ОП у крыс. Он охватывает выбор игольчатых инструментов, выбор точки акупунктуры, позиционирование тел крыс и методы фиксации. Мы также описываем шаги и меры предосторожности, которые необходимо предпринять во время и после иглоукалывания огненными иглами. Эксперимент проводился с тремя группами: нормальной группой, модельной группой и группой с огненными иглами, каждая из которых содержала по 10 крыс. Крысы в группе огненной иглы получали лечение с помощью огненной иглы в течение шести сеансов. После периода вмешательства мы собрали образцы бедренной кости и провели микрокомпьютерную томографию. Полученные результаты свидетельствуют о том, что иглоукалывание может улучшить морфологию костей и минеральную плотность у крыс с ОП. Эта информация может послужить методологической основой для проведения фундаментальных исследований по огненно-игольчатой терапии.
Китайская медицина считает, что такие факторы, как климат и окружающая среда, могут влиять на телосложение человека, что в свою очередь влияет на возникновение и развитие заболеваний. Регион Линнань в Китае, в основном включающий в себя провинции Гуандун, Гуанси и остров Хайнань, расположен в регионе тропического муссонного климата. В результате люди, проживающие в этом регионе в течение длительного времени, склонны к той или иной форме дефицита селезенки. В некоторых случаях он распространяется на почки и печень, что приводит к распространенности остеопороза1. Селезенка и желудок функционируют в транспортировке и поглощении воды и зерновых, которые являются источником ци и биохимии крови, в то время как печень помогает поддерживать работу костного мозга. Таким образом, питание костей зависит от снабжения селезенки, желудка и печени. В китайской медицине почка способна вырабатывать костный мозг и укреплять кости, а ее жизненная сила напрямую влияет на прочность и функцию костей. Таким образом, почечная недостаточность напрямую связана с остеопорозом. Согласно ТКМ, основными причинами являются дефицит печени (Гань) и почек (Шэнь) и недостаток эссенции (Цзин). В некоторых случаях недоедание может возникать из-за дефицита селезенки (Pi) и желудка (Wei) или их дисбаланса. То есть, первопричинами являются дефицит печени (Гань), почек (Шэнь), селезенки (Пи) и желудка (Вэй), в то время как внешняя ци (Се ци) блокирует меридианы и повреждает кости и мышцы. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), ОП – это заболевание, характеризующееся низкой костной массойи ухудшением состояния тканей2, что вызывает серьезную озабоченность у пожилых людей. Выбор соответствующих вмешательств имеет решающее значение для профилактики и лечения остеопороза.
Современные специалисты по иглоукалыванию разработали уникальную характеристику Линнань для терапии огненными иглами, сочетая климат Линнань и физическиехарактеристики жителей Линнаня. Огненная игольчатая терапия – это разновидность метода лечения, при котором специальные иглы обжигаются красного цвета и быстро прокалываются в определенные участки или акупунктурные точки человеческого тела для лечения различных недугов. Этот метод широко применяется при кожных заболеваниях, заболеваниях опорно-двигательного аппарата и суставов, неврологических заболеваниях и других системных заболеваниях и показывает хорошую эффективность4. Лечение остеопороза огненными иглами используется в клиниках уже давно, и оно имеет лучший лечебный эффект, чем простое иглоукалывание или пероральный прием традиционной китайской медицины 5,6,7. Терапия огненными иглами Линнань сочетает в себе иглоукалывание, трехлезвийные иглы и прижигание рубцов. Он может улучшить ци и циркуляцию крови в меридианах, одновременно нагревая почки. Это лечение может быть направлено как на застой крови, так и на дефицит почек (Шен), которые способствуют патогенезу ОП при ТКМ. Более того, он имеет такие преимущества, как низкая стоимость, быстрый эффект, короткий период лечения и безопасность. Тем не менее, существует недостаток исследований его механизма. В данной работе представлена специфическая методика использования огненной иглы Линнань на крысах с остеопорозом и дана методологическая основа для проведения соответствующих фундаментальных исследований.
Все эксперименты проводились в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных Национальным институтом здравоохранения и были одобрены Хубэйским университетом TCM - Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию. Для эксперимента использовали взрослых самок крыс породы Спрэг-Доули (SD) массой тела 220 ± 20 г. Все крысы содержались в 12-часовом цикле свет/темнота при температуре 23 ± 1 °C и влажности 40%-50%, со свободным доступом к пище и воде.
1. Предоперационная подготовка
2. Лечение иглоукалыванием
3. Лечение после иглоукалывания
4. Сбор и анализ данных
Данные в таблице 1 показывают, что по сравнению с нормальной группой, толщина трабекулярной кости (Tb.Th), количество трабекулярной кости (Tb.N) и статический параметр объемной доли трабекулярной кости (BV/TV) в модельной группе были значительно снижены (p <0,05), а разделение трабекулярной кости (Tb.Sp) было повышено (p <0,05); Это указывает на то, что костная структура трабекулярной кости в обогащенных трабекулярными костями участках бедренного эпифиза крысы была значительно нарушена после деостеопороза, что свидетельствует об очевидных повреждениях.
По сравнению с модельной группой, трабекулярная толщина, трабекулярное число и трабекулярный статический параметр костного объема бедренной кости в группе огненной акупунктуры были достоверно увеличены (p <0,05), а трабекулярное разделение уменьшено (p <0,05). Это позволяет предположить, что терапия огненными иглами может улучшить повреждение губчатой костной структуры бедренной кости у крыс с остеопорозом, вызванным удалением кости.
На рисунке 4 показаны трехмерные изображения структуры губчатого матрикса костей крысы в каждой группе. Рисунок 4А — нормальная группа, рисунок 4В — модельная группа, а рисунок 4С — группа огненных игл. Как видно из рисунка, по сравнению с нормальной группой, в модельной группе было утрачено большое количество трабекул в центре и даже на периферии бедренной губчатой матрицы, а в нижней части появилось большое количество полостей. Общая непрерывность костной структуры была нарушена, с появлением части свободных костных трабекул. По сравнению с модельной группой наблюдалось значительное увеличение толщины трабекул в центре и периферии губчатой кости бедренной кости в группе огненных игл, а также улучшалась непрерывность общей костной структуры. Это говорит о том, что огненные иглы могут защитить трабекулярную структуру губчатой кости бедренной кости в модели остеопороза, вызванного овариоэктомией, у крыс.

Рисунок 1: Метод фиксации крысы: крысы-качели, связанные шерстью. После одевания крысы в крысиную шубу, крысу закрепляют и подвешивают в воздухе, зацепив крысиную шубу двумя S-образными крючками. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 2: Огненная игла Линнань. (А) Игольчатые инструменты. Выберите тонкую огнестрельную иглу размером 0,40 мм х 13 мм. (В) Горящие иглы. Наденьте кончик иглы и корпус иглы на смоченные спиртом ватные шарики и нагрейте их. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 3: Процедура акупунктуры огненной иглой в четырех акупунктурных точках. (A) Pishu (BL 20): Расположен между ребрами на двух нижних сторонах12-го грудного позвонка, в 6 мм от средней дорсальной линии (B) Shenshu (BL 23): Расположен на двух нижних сторонах второго поясничного позвонка, в 6 мм от среднедорсальной линии (C) Zusanli (ST 36): Расположена на задней и боковой стороне колена, примерно на 3 мм ниже небольшой головки малоберцовой кости. (D) Саньинцзяо (SP 6): Расположен примерно в 10 мм прямо вверх от кончика внутренней лодыжки задней конечности. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 4: Сравнение трехмерной структуры губчатой кости дистального отдела бедренной кости крыс в различных группах. (А) Нормальная группа. (B) Модельная группа. (В) Группа огненных игл. Масштабные линейки: 500 μм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
| Группа | Tb.N (мм) | Tb.Sp (мм) | Tb.Th (мм) | БВ/ТВ |
| нормальная группа | 3,29±0,47 | 0,23±0,06 | 0,12±0,03 | 0,39±0,14 |
| Модельная группа | 0,96±0,78* | 0,66±0,44* | 0,09±0,01* | 0,17±0,11* |
| Огнестрельная игольчатая группа | 2.73±0.76Δ | 0.33±0.20Δ | 0.12±0.02Δ | 0.33±0.16Δ |
Таблица 1: Влияние иглоукалывания на микроструктурные показатели остеопороза бедренной кости. Данные показывают среднее значение ± SD, n= 10. Для сравнения с нормальной группой, *p<0,05; Для сравнения выполнено с модельной группой, Δp<0,05.
Огнеигольчатая терапия Линнань имеет глубокую историческую подоплеку. Записи об огненных иглах и методах иглоукалывания можно проследить до Хуанди Нэйцзина. Современные специалисты по иглоукалыванию Ситу Белл и Чжан Цзявэй объединили климат Линнань и физические характеристики его жителей, чтобы создать Линнаньскую терапию огненными иглами3. Линь Гохуа подытожил терапию огненными иглами Линнань как согревание, вытягивание, тонизирование, очищение и устранение, с согреванием в качестве эссенции24.
Первым шагом к использованию огненных игл является выбор подходящего типа иглы. Огнестрельные иглы можно разделить на три основные категории: одноголовочные, многоголовочные и плоские. Огнестрельная игла с одной головкой широко используется в клинической практике и обычно применяется при мультисистемных заболеваниях. Огнестрельная игла с несколькими головками сочетает в себе три тонкие или три среднекрупные огненные иглы треугольной формы, в основном используемые для лечения кожных заболеваний. Огнестрельная игла с плоской головкой обычно используется для удаления различного рода родинок, бородавок и других чрезмерных организмов на коже25,26. В исследовании были выбраны иглы с одной головкой, потому что они имеют более широкий спектр применения и больше функций, что облегчает получение тонких игл, подходящих для размера крыс.
Во-вторых, правильное использование огнеигольчатой терапии требует критических критериев для прижигания иглами. Исследователи27 выяснили, что прижигание игл до определенной температуры необходимо для их эффективности. Стимуляция может не облегчить соответствующие патологические изменения, если температура недостаточно высока. Поэтому для достижения желаемого терапевтического эффекта иглы, используемые в огненно-игольчатой терапии, необходимо обжечь до красноватого или ярко-белого цвета, а затем быстро ввести в выбранные акупунктурные точки или части. Кроме того, поскольку критерии для сжигания игл огненными иглами варьируются в зависимости от инструментов для иглоукалывания, мест иглоукалывания и лечащихся заболеваний, мы составили полный набор критериев для сжигания игл с помощью огненных игл, которые можно привести в таблице 2. В настоящем исследовании мы использовали огнестрельную иглу с одной головкой для многоточечной стимуляции вместо огнестрельной иглы с несколькими головками. Это было связано с тем, что нахождение нескольких игл слишком близко друг к другу не могло гарантировать, что каждая игла будет прижигаться равномерно.
| Игольчатые инструменты | Степень ожога иглой | Показания |
| Огнестрельная игла с одной головкой | Красновато-красный. | Заболевания костей и суставов и болезненные заболевания |
| Огнестрельная игла с несколькими головками | Кончик иглы слегка горячий. | Кожные заболевания, такие как акне |
| Огнестрельная игла с плоской головкой | Ярко-белый. Ручка иглы слегка горячая. | Новообразования, такие как нитевидные бородавки |
Таблица 2: Критерии для обжига хвои.
Что касается угла введения иглы для огня, то он, как правило, вертикальный. Что касается того, насколько глубоко вводить иглу, то установленных стандартов пока нет. Тем не менее, обычно считается, что более глубокое введение лучше подходит для областей с большим количеством мышц и толстой кожей, тогда как более поверхностное введение больше подходит для областей с более тонкой кожей и мышцами. Кроме того, многие специалисты в этой области считают, что глубина иглоукалывания должна быть такой же, как у нитевидного игольчатого иглоукалывания28. Исследование предполагает, что глубина залегания игл должна быть меньше, чем нитевидных игл при иглоукалывании акупунктурных точек, и немного глубже, чем нитевидных игл при иглоукалывании болевых точек22. В результате, что касается фактического применения огненных игл, целесообразно сначала обратиться к стандарту для нитевидных игл, а затем определить глубину иглоукалывания на основе клинического опыта.
По коллективному мнению 192 экспертов в Линнане, основной причиной ОП в группах высокого риска является дефицит почек (Шэнь), который приводит к вторичному застою крови. Таким образом, лечение ОП включает в себя одновременное устранение почечной недостаточности (Шена) и застоя в крови29. В настоящее время иглоукалывание является широко используемым методом лечения ОП. Различные виды лечения иглоукалыванием включают нитевидную игольчатую терапию, прижигание, теплое иглоукалывание, электроакупунктуру (ЭА), терапию с внедрением нитей, инъекцию акупунктурных точек, комбинацию иглоукалывания и лекарств, а также комбинацию иглоукалывания и прижигания. Среди них наиболее часто используемыми методами лечения в клинической практике являются терапия с внедрением нитей, прижигание и комбинация иглоукалыванияи медицины. Клинически терапия огненными иглами широко используется при 137 различных заболеваниях, нацеленных на несколько систем органов, таких как двигательная система, нервная система, эндокринная система, пищеварительная система, акушерство и гинекология, среди которых наиболее применяемыми являются двигательныезаболевания. Терапия огненными иглами Линнань — это лечение, которое сочетает в себе преимущества иглоукалывания, трехлезвийных игл и прижигания от рубцов. Он может улучшить ци и циркуляцию крови в меридианах и согреть почку (Шэнь). Это лечение может быть направлено как на застой крови, так и на дефицит почек (Шен), которые способствуют патогенезу ОП при ТКМ. Кроме того, он имеет такие преимущества, как низкая стоимость, быстрый эффект, короткий период лечения и безопасность. Клинические испытания также показывают, что сочетание терапии огненными иглами и лечения иглоукалыванием более эффективно в лечении ОП, чем простое иглоукалывание илимедикаментозное лечение. Боль в суставах является одним из типичных симптомов ОП, и было подтверждено, что эффективность терапии огненными иглами значительно выше, чем нитевидной игольчатой терапии прилечении боли в суставах.
Прочность кости зависит от плотности кости, количества кости на единицу объема. Количество и распределение костных трабекул, составляющих костной массы, существенно влияет на объем кости и, следовательно, на плотность кости. Объемная фракция кости указывает на процент объема кости на единицу объема ткани и является важным ориентиром для определения костной массы23. Являясь частью скелетной системы, основная функция губчатой кости заключается в поддержке и облегчении движения. Однако увеличение его размера может снизить плотность костей, снижая прочность костей. Скелетная структура губчатой кости губчатая и состоит из трабекул. Поэтому строение губчатой кости определяется по трабекулам. Для поддержания прочности губчатой кости крайне важно обеспечить наличие достаточного количества трабекул в качестве каркаса. Во-вторых, необходимо сохранить относительно достаточное количество соединений между трабекулами для обеспечения структурной стабильности кости33. Чтобы трабекулы могли нести определенное количество нагрузки, необходимо поддерживать их толщину. Структура губчатой кости оценивается на основе количества присутствующих трабекул, их связности и толщины34. После сравнения структурных параметров губчатой кости (табл. 1) наши результаты выявили достоверные различия между модельной группой крыс и нормальной группой. Количество трабекул, толщина трабекуляра и объемная доля кости бедренной кости были снижены, в то время как трабекулярное разделение было увеличено в модельной группе. Эти данные свидетельствуют о том, что губчатая костная структура изменяет модельную группу, что может привести к остеопорозу или другим заболеваниям костей. На основании трехмерного структурного изображения губчатой кости было замечено, что в средней части отсутствуют трабекулы, а также более половины трабекул в верхней части периферии. Это указывает на то, что целостность костной структуры бедренной кости у крыс после овариэктомии была нарушена. По сравнению с модельной группой, бедренная кость в группе огненной иглы показала увеличенные трабекулы, толщину трабекуляра, объемную долю кости и уменьшенное трабекулярное разделение. Кроме того, при рассмотрении трехмерной структурной схемы губчатой кости было замечено, что центральная полость группы огненных игл была уменьшена, а периферические костные трабекулы были завершены (рис. 4). Это исследование демонстрирует, что терапия огненными иглами эффективно предотвращает и контролирует повреждение губчатой костной структуры бедренной кости у крыс, перенесших овариэктомию.
Ограничения крыс модели овариоэктомии, отобранных для данного исследования, заключаются в следующем. Снижение уровня эстрогена является одним из факторов риска развития первичного ОП35. По этой причине операция овариэктомии является надежным методом для создания моделей ОП крыс 8,9,10. Кроме того, крысы SD не только легкодоступны, но и послушны, с расслабленными условиями кормления. Следовательно, мы первоначально изучили эту модель и рекомендовали использовать тонкие огненные иглы для стимуляции акупунктурных точек. Наш долгосрочный план состоит в том, чтобы расширить область наших исследований за счет дальнейшей проверки эффективности терапии с использованием игл в облегчении ОП у других моделей, таких как стареющие крысы. Наконец, в таблице 3 обобщена эффективность только иглоукалывания на крысах с моделью остеопороза и механизм его действия. Мы намерены провести более глубокое исследование возможных механизмов в ближайшем будущем 36,37,38,39,40,41,42.
| Показатель результата | Механизм действия | Ссылка | ||||
| резорбция кости | Иглоукалывание предотвращает потерю костной массы и структурные изменения, подавляя резорбцию кости. | 36 | ||||
| Прочность костей | Иглоукалывание увеличивало объем и толщину трабекулярной кости, снижало трабекулярное разделение большеберцовых костей и ограничивало выведение фосфора и Dpd, одновременно повышая концентрацию остеокальцина в сыворотке крови. | 37 | ||||
| костный метаболизм | Иглоукалывание может значительно снизить уровень ALP, BGP и TRAP в сыворотке крови у крыс OVX. | 38 | ||||
| сигнальный путь | Иглоукалывание улучшает минеральную плотность костей, ослабляет in vivo воспалительную реакцию и повышает уровень фактора, влияющего на остеогенез, у крыс за счет модуляции сигнального пути Wnt. | 39,40 | ||||
| эндокринно-модулирующий эффект | Иглоукалывание модулировало сывороточные уровни эстрадиола, кортикотропин-рилизинг-гормона (CRH), адренокортикотропного гормона (АКТГ) и кортикостерона (CORT). | 41 | ||||
| Веса | Иглоукалывание модулирует изменения уровня лептина, чтобы отменить увеличение массы тела. | 36,41 | ||||
| нейротрофический фактор головного мозга | иглоукалывание может повысить уровень экспрессии BDNF и TrkB и ускорить процесс заживления переломов после остеопороза. | 42 | ||||
Таблица 3: Влияние простой акупунктуры на эффективность остеопороза на модельных крысах.
Авторы заявляют, что им нечего раскрывать.
Эта работа была поддержана за счет средств Национального фонда естественных наук Китая (NSFC) NoNo 82374564 (для YJD) и NoNo 82074566 (для YJD) и от Базы наследования Сунь Гоцзе для акупунктуры-прижигания ТКМ Всемирной федерации обществ акупунктуры-прижигания в Ухане, Китай (World Federation of Acupuncture-Moxiurgion Societies [2019] No. 26) до YJD и проекта строительства Национальной знаменитой студии наследования ТКМ Национального управления традиционной китайской медицины. Китай (Национальное управление традиционной китайской медицины [2022] No 5) в YJD.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 75% спирт | Shandong Lircon medicaltechnology co., ltd | Дезинфекция | |
| 95% спирт | Shandong Lircon medicaltechnology co., ltd | Ожоговые иглы | |
| Взрослая самка крыс Sprague-Dawley (SD) | Ляонин Changsheng biotechnology co., Ltd. | SCXK 2020-0001 | Моделирование остеопороза |
| Термостат Deluxe тепловой коврик | Zhenhua Инструменты | для поддержания температуры тела крыс. | |
| Диклофенак натрия для инъекций | провинция Шаньдун, Цзяньму, биофармацевтическая компания. | 150182913 | Жаропонижающий и обезболивающий |
| штатив повышенной фиксации | Taizhou Shi Ai Scientific and Educational Instruments and Equipment Co. | Фиксированные крысы | |
| Огненные иглы | Beijing Luoya Shanchuan Medical Equipment Co., Ltd. | 20190240 | Инструмент для иглоукалывания |
| гемостатических щипцов | Qingdao Schultz Biotechnology Co. | Фикс крыс | |
| Лигутер | Шанхай Мачи Трейдинг Ко. | H5 | Ignite спирт |
| Лодофор дезинфицирующий раствор | Qingdao Hai's Hainuo Inovation Disinfection Technology Co., Ltd. | 2016-0604 | Дезинфекция |
| Медицинский ватный тампон | Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd. | 20172142357 | Дезинфекция |
| пентобарбитала натрия | Beijing Jiehui Biotechnology Co. | P3761 | анестезиологическая |
| электрическая машинка для стрижки домашних животных | Fenghua Xikou Lubao Ножи и Ножницы Фабрика | электроприборов Сбрить шерсть крыс | |
| Самодельная крысиная шерсть | Фикс крыс | ||
| Пинцет | Qingdao Schultz Biotechnology Co. | Защипните ватные шарики |
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение