В этом исследовании используется технология двумерной высокоэффективной жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (2D-ВЭЖХ-МС) в сочетании с молекулярными сетями для разгадки сложного химического состава тибетского лекарственного растения Aconitum pendulum Busch (APB). В статье представлен подробный протокол систематического исследования и идентификации сложных химических компонентов лекарственных препаратов растительного происхождения.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Технология 2D-ВЭЖХ-МС в сочетании с молекулярной сетью для идентификации компонентов маятника аконита тибетской медицины
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
В этом исследовании был использован комплексный подход с использованием технологии 2D-ВЭЖХ-МС в сочетании с молекулярной сетью для раскрытия сложного химического состава тибетского лекарственного растения APB. Благодаря внедрению 2D-ВЭЖХ было достигнуто улучшенное разделение сложных смесей, что позволило выделить отдельные соединения для последующего анализа. Молекулярно-сетевой подход также помог выяснить структурные отношения между этими соединениями, способствуя определению потенциальных биологически активных молекул. Эта интегрированная стратегия позволила эффективно идентифицировать широкий спектр химических компонентов, присутствующих на заводе. Полученные данные выявили разнообразный спектр химических компонентов в APB, включая, среди прочего, алкалоиды. Это исследование не только углубляет понимание фитохимического профиля этой традиционной тибетской медицины, но и дает ценную информацию о ее потенциальных терапевтических свойствах. Интеграция 2D-ВЭЖХ-МС и молекулярной сети оказывается мощным инструментом для систематического изучения и идентификации сложных химических составов в растительных лекарственных средствах, прокладывая путь для дальнейших исследований и разработок в области открытия натуральных продуктов.
Введение
Тибетская медицина является составной частью традиционной китайской медицины, придерживаясь принципов тибетской медицинской практики, и используется для профилактики и лечения заболеваний1. Тем не менее, тибетская фитотерапия содержит сложные растительные химические компоненты, характеризующиеся значительными колебаниями содержания. Ограниченное понимание фундаментальных биологически активных элементов стало узким местом в модернизации тибетской медицины2. Применение жидкостной хромато-масс-спектрометрии (ЖХ-МС), сочетающей в себе сильную разделительную способность хроматографии с высокой чувствительностью масс-спектроме....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка
- Подготовка образцов
- Весы с чувствительностью 1/10 000 весят 0,25 г (сухой вес) APB в микроцентрифужной пробирке объемом 3 мл, добавляют 2,5 мл метанола, а затем обрабатывают ультразвуком в течение 30 мин (мощность 240 Вт, частота 40 кГц).
- Проведите центрифугирование при плотности 1,2 x g в течение 5 мин, соберите надосадочную жидкость и отфильтруйте через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм.
- Подготовка экспериментальных материалов
- Приготовьте двумерную подвижную фазу, используйте ацетонитрил в качестве органической фазы В и сконфигурируйте 0,1% ультрачистой воды мура....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
APB был использован в качестве модельного организма для проверки осуществимости технологии 2D-ВЭЖХ-МС в сочетании с методом MN. Путем импорта исходных данных MS в MN с параметрами, установленными по умолчанию, был сгенерирован MN. MN — это визуальная вычислительная стратегия, которая визуализирует все молекулярные ионы, обнаруженные в полном эксперименте LC-MS-MS, и химические отношения между этими молекулярными ионами13.
В основе МН лежат фрагменты вторичного масс-спек.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Основным направлением данного эксперимента была оптимизация частичного метода в рамках двумерного разделения жидкой фазы. Для достижения этой цели новый модулятор разбавления в колонке был бесшовно интегрирован в систему двумерной жидкостной хроматографии (2D-LC). Эта техническая корректировка имела первостепенное значение, так как она значительно повысила мастерство в профилировании химических компонентов, присутствующих в тибетской медицине, известных как APB. Внедрение технологии 2D-ВЭЖХ-МС позволило провести всесторо.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Эта работа финансировалась Национальным фондом естественных наук Китая (82130113), Национальным фондом естественных наук Китая (82204765), Фондом естественных наук провинции Сычуань (2022NSFSC1470), Специальным проектом специального финансирования постдокторантуры провинции Сычуань (TB2023020) и Программой содействия научным исследованиям ученых Синлинь Университета традиционной китайской медицины Чэнду (BSH2021030). Эти фонды обеспечивают поддержку в виде экспериментального оборудования, экспериментальных материалов и публикационных сборов.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Ацетонитрил | Фишер химический | F22M81203 | подвижной фазе |
| Aconitum pendulum | / | / | Травяной препарат |
| Agilent 1290 Infinity (II) 2D-LC | Agilent Technologies | G2198-90001 | Жидкостная хроматография |
| Одноразовые шприцы | Экспериментальное оборудование Chengdu Keen | / | 1 мл |
| EP пробирка | Chengdu Keen экспериментальное оборудование | 3 мл | |
| Бутылка для впрыска жидкой фазы | Chengdu Keen экспериментальное оборудование / | 1,5 мл | |
| LTQ XL Масс-спектрометр | Thermo Fisher | LTQ21991 | Масс-спектрометр |
| Микропористые мембраны | Экспериментальное оборудование Chengdu Keen | / | 0.22μ m |
| Ultimate XB-C18,5 μ m,2.1 x 200 мм | Welch | 00201-31015 | Ультразвуковой очиститель с обратной фазой GT |
| Sonic | UGT20DEC048Y | Ультразвуковой очиститель 240 Вт 40 кГц | |
| XAmide,3 μ m,100A | Далянь Монди Технология | D2019110601 | Гидрофильная колонна |
Ссылки
- Luo, H., et al. Correlation between Tibetan and traditional Chinese medicine body constitutions: A cross-sectional study of Tibetan college students in the Tibet Autonomous Region. J Tradl Chinese Med Sci. 5 (3), 215-221 (2018).
- Fu, X., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
