Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Раскрытие терапевтических возможностей с помощью моделей органоидов, полученных от пациентов с меланомой

2.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/66509

⸱

6 сентября 2024 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology and Laboratory Medicine, Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол получения органоидов, полученных от пациента с меланомой, путем культивирования диссоциированных клеточных суспензий из свежих тканей меланомы. Эти органоиды точно повторяют специфические для пациента опухоли in vitro, предлагая инновационный подход к изучению иммуносупрессивных механизмов опухолей, скрининга лекарств, механизмов лекарственной устойчивости и подходов к надзору за раком.

Аннотация

С развитием иммунотерапии существует постоянная потребность в разработке моделей, которые могут повторять опухолевое микроокружение нативных опухолей. В то время как традиционные двух- и трехмерные модели могут дать представление о развитии и прогрессировании рака, им не хватает важных аспектов, которые препятствуют точной имитации нативных опухолей. Альтернативной моделью, которая привлекла много внимания, является органоид, полученный от пациента. Развитие этих органоидов отражает сложную межклеточную коммуникацию, микроокружение опухоли и гистоархитектуру опухолей. В данной статье описан протокол создания моделей органоидов, полученных от пациента с меланомой. Чтобы проверить эти модели, мы оценили состав иммунных клеток, включая уровни экспрессии маркеров активации Т-клеток, чтобы подтвердить клеточную гетерогенность органоидов. Кроме того, чтобы описать потенциальную полезность MPDO в клеточной терапии, мы оценили цитотоксические возможности обработки органоидов γδ Т-клетками. В заключение следует отметить, что модели MPDO предлагают многообещающие возможности для понимания сложности опухоли, валидации терапевтических стратегий и потенциального продвижения персонализированного лечения.

Введение

Традиционные двумерные модели клеточных культур являются важными инструментами в исследованиях рака для изучения прогрессирования рака и его терапии1. Эти модели не только позволяют в контролируемых экспериментальных условиях исследовать молекулярные и клеточные механизмы, лежащие в основе развития и прогрессирования рака, но и обеспечивают экономически эффективные и относительно быстрые экспериментальные результаты. Их использование, однако, ограничено из-за ограниченного клеточного разнообразия в опухолевом микроокружении (ТМЭ), которое не может быть воспроизведено в компланарном характере монокультурных моделей2. Кроме того, модели клеточных культур предлагают чрезмерно упрощенную среду по сравнению с человеческим телом3. Таким образом, чтобы лучше понять прогрессирование рака и разработать эффективные методы лечения, исследователи обратились к инновационным моделям, которые нацелены на то, чтобы точно повторить ТМЭ в природе. Следовательно, поддержание верности нативным опухолям имеет первостепенное значение в этих моделях. Учитывая сложную природу рака, любое значительное отклонение от исходной опухоли может привести к непредвиденным переменным, которые могут исказить значимые выводы о поведении опухоли.

В то время как ксенотрансплантаты, полученные от пациента (PDX), стали модельной системой, позволяющей отслеживать прогрессирование опухоли in vivo, некоторые ограничения ставят под сомнение то, насколько хорошо развитая опухоль повторяет биологию ракачеловека. Например, меланома TME содержит инфильтрирующие опухоль иммунные клетки и стромальные клетки. При прохождении в виде ксенотрансплантата нераковые клетки пациента будут постепенно теряться, что может привести к адаптациям, отличающимся от тех, которые используются в опухолях пациента. Хотя эти ограничения могут быть смягчены путем выполнения ограниченного пассажа PDX in vivo, различия между видами все же могут представлять риск генетических изменений PDX, которые отклоняются от таковых у нативной опухоли5. Кроме того, PDX-модели обычно создаются на мышах с ослабленным иммунитетом для предотвращения отторжения тканей человека. Это ограничивает возможность изучения роли иммунной системы хозяина в развитии рака, особенно в иммунотерапевтических исследованиях6. Мы и другие привили PDX «гуманизированным» мышам 7,8. Тем не менее, создание PDX-моделей на гуманизированных мышах занимает много времени и денег. Разработка одной модели PDX на основе образца опухоли пациента может занять от нескольких месяцев до нескольких лет, что ограничивает скорость и масштаб исследования. Несмотря на эти ограничения, было показано, что модели PDX точно представляют биологию ТМЭ, таким образом, широко используются для разработки методов лечения рака, персонализированной медицины и иммунотерапии, среди прочего9.

Альтернативным методом 3D-культивирования является органоид пациента (PDO), при котором свежерезецированная опухоль пациента культивируется для создания моделей, поддерживающих фенотипическую гетерогенность, гистоархитектуру и межклеточные коммуникации. Его способность быть очень похожим на нативные опухоли была продемонстрирована ранее, когда культивируемые органоиды из немышечно-инвазивного (NMIBC) и мышечно-инвазивного рака мочевого пузыря (MIBC) успешно повторили ключевые аспекты родительских опухолей11. Благодаря своему потенциалу и преимуществам по сравнению с другими моделями, PDO предлагают широкий спектр специализированных приложений, которых нет в других моделях, включая, помимо прочего, изучение и разработку ингибиторов иммунных контрольных точек наряду с клеточной и таргетной терапией. Например, ранее мы использовали органоиды, полученные от пациентов с меланомой (MPDOs), для изучения способности инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TILs) расширяться антителами IL-2 и анти-PD1 (αPD-1). Результаты показали, что TILs, расширенные IL-2 и αPD-1, не только имеют большее количество, но также могут успешно инфильтровать MPDO и убивать клетки меланомы с более высокой эффективностью, чем TILs, расширенные другими методами. Другие группы показали аналогичные результаты, когда использование анти-PD-1 и/или анти-PD-L1 приводит к тому, что TILs остаются функциональными в PDO, что впоследствии приводит к уничтожению опухоли13. Кроме того, наша группа также использовала MPDO для оценки инфильтрации γδ Т-клеток и их убивающей способности14. Применимость PDO охватывает широкий спектр областей, включая расширение TIL, исследования цитотоксичности и скрининг малых молекул. Все эти приложения подчеркивают потенциал и удобство использования, которые предоставляет эта модель. Таким образом, мы описываем подробный протокол для культуры MPDO.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Ткани меланомы человека были получены от пациентов, проходящих лечение в Университете Пенсильвании, с использованием протокола сбора тканей (UPCC08607), который одобрен Институциональным наблюдательным советом Университета Пенсильвании. Все пациенты подписали информированное согласие. После резекции тканей меланомы человека опухолевую ткань помещают в модифицированную среду Dulbecco Eagle Medium (DMEM) и выдерживают при температуре 4 °C до обработки (в течение 6 часов). Органоиды (MPDO) пациента с меланомой были получены из свежей опухоли, как показано на рисунке 1.

1. Выделение клеток из ткани меланомы человека

  1. Подготовка перед началом процедуры
    ПРИМЕЧАНИЕ: Два метода культивирования (Матригель и коллагеновый гель) могут быть использованы для культивирования диссоциированной ткани меланомы:
    1. Для метода Матригель: Приготовьте раствор покрытия матрицы базальной мембраны с пониженным фактором роста (GFR) путем разбавления матрицы базальной мембраны GFR органоидной питательной средой (см. таблицу 1) в соотношении 1:2. Добавьте приблизительно 115 мкл размороженного раствора в каждую из нескольких лунок 48-луночного планшета и оставьте его затвердевать на 30 мин при 37 °C в увлажненном инкубаторе.
    2. Для метода с коллагеновым гелем: Добавьте 1 мл коллагенового геля (см. Таблицу 1) во внутреннюю мембранную вставку диаметром 30 мм. Дайте гелю застыть в течение 30 минут при температуре 37 °C в увлажненном инкубаторе.
  2. Приготовьте кондиционированную среду L-WRN15. Кондиционированная среда L-WRN производится из клеточной линии L-WRN, сконструированной для секреции Wnt3a, R-спондина 3 и ноггина в единую кондиционированную среду, которая широко используется для культивирования клеток.
    1. Разморозьте криопробирку с клетками L-WRN на водяной бане при температуре 37 °C. Добавьте 5 мл среды L-клеток (см. Таблицу 1) и суспензию клеток L-WRN в коническую пробирку объемом 15 мл и центрифугируйте при 120 × г в течение 5 мин при 4 °C. Аспирируйте надосадочную жидкость, следя за тем, чтобы ~500 мкл осталось на дне для ресуспендии гранул клеток.
    2. Перенесите клеточную гранулу в надосадочную жидкость в 30 мл L-клеточной среды на льду и добавьте 150 мкл гигромицина (500 мкг/мл) и 300 мкл G418 (500 мкг/мл). Засейте клетки при плотности 3 × 106 в колбе Т-150 и инкубируйте при 37 °C в увлажненном инкубаторе с 5%CO2 до ~90% конфлюента.
    3. После того, как клетки слились на ~90%, разделите клетки на пять колб Т-150 путем промывания 20 мл фосфатно-солевого буфера (PBS), аспирации и расщепления 3 мл заменителя трипсина. Через 5 мин нейтрализовать 9 мл среды L-клеток с последующим центрифугированием в течение 5 мин при 120 × г при 4 °C. Когда ~100% сливается, разделите пять колб Т-150 на 10 3-слойных колб Т-175.
    4. После слияния промойте ячейки 2 x 50 мл PBS, а затем 25 мл моющего средства (см. Таблицу 1).
    5. Добавьте по 75 мл первичной питательной среды в каждую 3-слойную колбу T-175 и инкубируйте в течение 3 дней при 37 °C в увлажненном инкубаторе с 5%CO2 (см. Таблицу 1).
    6. Через 3 дня соберите кондиционированную среду в коническую форму объемом 50 мл и отжимайте при 1 100 × г в течение 5 минут при 4 °C. Соберите надосадочную жидкость (кондиционированную среду), следя за тем, чтобы осталось 5 мл жидкости.
    7. Добавьте свежее 75 мл первичной среды для культивирования клеток в каждую 3-слойную колбу T-175 и инкубируйте еще 3 дня для сбора дополнительной кондиционированной среды.
    8. К собранной кондиционированной среде добавить равный объем первичной среды для клеточных культур (50% объема) и вакуумировать содержимое с помощью фильтра 0,22 мкм. Храните аликвоты в пробирках объемом 50 мл и храните при температуре -20 °C для длительного использования или при 4 °C в течение 2-3 недель. Используйте эту среду в качестве дополнения к органоидным питательным средам (см. Таблицу 1).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Разморозьте аликвоты при 4 °C в течение ночи перед использованием.
  3. Заготовка клеточной смеси из свежей ткани меланомы
    1. Промойте только что резецированную ткань меланомы в чашке Петри объемом 10 мл с моющим средством. После первого полоскания с помощью стерильного пинцета перенесите опухоль во вторую чашку Петри для дальнейшего промывания и повторите этот процесс 3 раза на льду, чтобы сохранить целостность и жизнеспособность опухоли. На протяжении всех циклов полоскания используйте стерильные ножницы и лезвие для удаления излишков соединительной ткани, жира и остаточной крови. После трех мытья поместите опухоль в пустую чашку Петри и с помощью стерильных лезвий мелко измельчите ее.
      ПРИМЕЧАНИЕ: После измельчения опухоль должна иметь гелеобразную консистенцию. Чем мельче измельчение опухоли, тем выше будет выход клеток. Это связано с тем, что большие скопления опухоли будут более сложными для переваривания и могут не пройти через 70 μм нейлоновый клеточный фильтр на следующем этапе.
    2. После того, как опухолевая ткань будет тщательно промыта и измельчена, переложите ее в коническую пробирку объемом 50 мл, содержащую 10 мл приготовленной среды для разложения (см. Таблицу 1). Поместите конус на водяную баню при температуре 37 °C, следя за тем, чтобы содержимое переливалось каждые 5 минут.
    3. Через 25 минут добавьте 30 мл среды ADMEM/F12, содержащей 10% FBS, чтобы остановить пищеварение.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Указанные количества предназначены для опухолей массой не более 0,2 г.
    4. Отфильтруйте расщепленную клеточную суспензию через нейлоновое клеточное ситечко размером 70 мкм, затем промойте ситечко средой с уменьшенным содержанием сыворотки ADMEM/F12 (1x) (1:1), содержащей 10% FBS. После промывки с помощью пипетки удалите остатки фильтра на дне фильтра, чтобы обеспечить извлечение максимально возможного количества клеток. Затем центрифугируйте при 300 × г в течение 7 мин при 4 °C. Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу в органоидной питательной среде (см. табл. 1).
    5. Культивируйте суспензию одиночных клеток меланомы в системах культивирования Matrigel или коллагена:
      1. Матригель: Подсчитайте суспензию одиночных клеток, чтобы убедиться, что примерно 2 × 105 клеток засеяны в предварительно подогретые лунки, покрытые Матригелем, с добавлением 200 мкл органоидной питательной среды.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Органоиды на основе матригеля используются для изучения патофизиологии, скрининга эффективности лекарств и проверки токсичности лекарств16.
      2. Коллагеновый гель: Подсчитайте суспензию одиночных клеток, чтобы убедиться, что примерно 10-6 клеток смешаны с 1 мл коллагенового геля. Добавьте смесь в предварительно затвердевшие мембранные вставки из коллагенового геля и поместите их в 6-луночную пластину. Добавьте достаточное количество органоидной питательной среды, чтобы погрузить вставки, содержащие клетки и коллагеновый гель.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Органоиды коллагенового геля используются для измерения миграции Т-клеток и изучения развития тканей16.
    6. Дайте органоидам вырасти, добавляя свежую среду каждые 3 дня.
    7. Пропустите органоиды, как только они достигнут размера 150-200 мкм, или криоконсервируйте их до дальнейшего использования.
      1. Для прохождения органоидов переложите органоиды в коническую форму объемом 15 мл и промойте 1x DPSB. Центрифугируйте смесь при 300 × г в течение 7 мин при 4 °C. Удалите надосадочную жидкость и добавьте заменитель трипсина (50-100 мкл на органоид) в течение 10 минут на водяной бане при температуре 37 °C, следя за тем, чтобы содержимое переполнялось каждые 3 минуты.
      2. Остановите пищеварение с помощью среды ADMEM/F12 (1x) Reduced Serum Medium (1:1), содержащей 10% FBS. Смесь центрифугировать при 300 × г в течение 7 мин и повторно суспендировать в органоидной питательной среде.
      3. Засейте суспензию одиночных клеток в новую лунку, покрытую Матригелем/Коллагеном, при той же начальной плотности посева (2 × 105 клеток в 200 мкл органоидных питательных сред для лунок, покрытых Матригелем, в 48-луночном планшете или 106 клеток в 1 мл органоидных питательных сред для 30 мм внутренней мембранной вставки, покрытой коллагеном).
      4. Для криоконсервации МПДО с использованием заменителя трипсина превращают в одиночные клеточные суспензии с последующей ресуспензией 106 клеток в 1 мл замораживающей среды (см. таблицу 1).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Форма и размер MPDO контролировались с течением времени для изучения динамики их роста. Как видно на рисунке 2, в течение начального периода роста размер органоидов значительно увеличился в течение изображенных 7 дней. После наблюдения за динамикой роста MPDO внимание было обращено на оценку состава иммунных клеток для проверки верной рекапитуляции органоидов к исходным опухолям. Эта оценка, в первую очередь сосредоточенная на распространенности αβ Т-клеток, позволила получить представление ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Появление PDO устранило многочисленные ограничения, связанные с другими ранее установленными методами исследования рака, и в то же время представило преобразующие потенциальные приложения в этой области. Эта органоидная технология была первоначально предложена в 2009 году Гансом Клеверсом и его коллегами, которые смогли успешно создать систему кишечной органоидной культуры путем культивирования стволовых клеток Lgr5+ , полученных из кишечника мышей, в 3D-матричном геле, содерж...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявить.

Благодарности

Это исследование было частично профинансировано за счет грантов от R01 (CA258113), SPORE (CA261608) и P01 (CA114046). Рисунок 1 был подготовлен в BioRender.com году.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
2 мл красный колпачок с внутренней резьбой полипропиленовый криогенный флаконcorning431420
50 мл полипропиленовая коническая трубкаCorning352070
100 мм обработанный TC чашка для клеточных культурCorning353003
105 мм Полистирольные щипцы стерильныезаглушки Evergreen 222-1121-B1I
150 см<суп>2 колба для клеточных культурCorningCLS430825
A83-01Tocris2939
Advanced DMEM/F12 (1x) Среда с пониженным содержанием сыворотки (1:1)Gibco12634-010
B-27 Добавка (50x)Gibco17504-044
Brilliant Violet 510 античеловеческое антителок перфоринуBioLegend308120
Brilliant Violet 605 античеловеческое антитело Ki-67BioLegend350522
Brilliant Violet 650 античеловеческое CD366 (Tim-3) АнтителоBioLegend345028
Brilliant Violet 711 античеловеческое антитело CD45 BioLegend304050
Вставки для клеточных культур 0,4 &микро; m, диаметр 30 ммMillipore SigmaPIHP03050
Буфер для окрашивания клетокBioLegend420201
Cell Sither 40 µ m НейлонCorning 352340
Сетчатый фильтр 70 и микро; m НейлонCorning 352350
Коллагеназа, тип IV, порошокGibco17104019
Cultrex Rat Collagen ITrevigen3440-100-01
Культуральный планшет, PS, 48 лунок, TC обработан крышкой, стерильныйMax Scientific 07-6048
Диметилсульфоксид (ДМСО) Hybri-MaxSigma-AldrichD2650
DMEM - с высоким содержанием глюкозы 4,5 мг/млCorningMT10-0130CV
Dnase I - Grade IIMillipore Sigma10104159001
DPBS, 1% Corning21-031-CV
Фетальная сыворотка крупного рогатого скота, FBSCorningMT35-010-CV
FITC Аннексин V Набор для обнаружения апоптоза IBD Biosciences 
ForskolinTocris1099
Geneticin селективный антибиотик (G418 Sulfate) (50 мг/мл)ThermoFisher10131035
GlutaMAX ДобавкаThermoFisher35050061
Ham's F12 Питательная смесьThermoFisher11765054
HEPES (1 мес)Gibco15630-080
Гигромицин B (50 мг/мл)ThermoFisher10687010
L-глютамин 200 мМ (100x)Gibco25030-081
L-WRN-клеткаATCCCRL-3276
Matrigel Phenol Free & Факт роста. Шприцевойуменьшенным содержанием Corning356231
, 0,22 дюйма; MMillipore SigmaSLGVR33RB
N-ацетилцистеинSigma-AldrichA9165-5G
никотинамидSigma-AldrichN0636-100G
Nunc TripleFlask обработанная колба для клеточных культурThermoFisher132867
PE/Cyanine5 античеловеческое антитело CD8aBioLegend301010
PE-Cy 7 Мышь против человека CD279 (PD-1)BD Biosciences 
Pen StrepGibco15140-122
Рекомбинантный человеческий EGFPeprotechAF-100-15-1MG
Рекомбинантный человеческий FGF-кислыйPeprotech100-17A
Раствор бикарбоната натрия (NaHCO3) (7,5%)Качество биологический 118-085-721
Хирургические лезвия из нержавеющей стали No 22Integra4-322
TrypLE Express Гибко12604-021
556547 фильтр Millex PVDF с 561272

Ссылки

  1. Mirabelli, P., Coppola, L., Salvatore, M. Cancer Cell Lines Are Useful Model Systems for Medical Research. Cancers (Basel). 11 (8), 1098(2019).
  2. Shannon, A. E., Boos, C. E., Hummon, A. B. Co-culturing multicellular tumor models: Modeling the tumor microenvironment and analysis techniques. Proteomics. 21 (9), e2000103(2021).
  3. Jubelin, C., Muñoz-Garcia, J., Griscom, L. Three-dimensional in vitro culture models in oncology research. Cell Biosci. 12, 155(2022).
  4. Jin, J., Yoshimura, K., Sewastjanow-Silva, M., Song, S., Ajani, J. A. Challenges and prospects of patient-derived xenografts for cancer research. Cancers (Basel). 15 (17), 4352(2023).
  5. Nabel, C. S., Heiden, M. G. V. Patient-derived xenografts to study cancer metabolism: when does X mark the spot). Cancer Res. 81 (17), 4399(2021).
  6. Choi, Y., et al. Studying cancer immunotherapy using patient-derived xenografts (PDXs) in humanized mice. Exp Mol Med. 50 (8), 99(2018).
  7. Woo, X. Y., et al. Conservation of copy number profiles during engraftment and passaging of patient-derived cancer xenografts. Nat Genet. 53 (1), 86(2021).
  8. Somasundaram, R. Tumor-infiltrating mast cells are associated with resistance to anti-PD-1 therapy. Nat Commun. 12 (1), 346(2021).
  9. Abdolahi, S. Patient-derived xenograft (PDX) models, applications and challenges in cancer research. J Transl Med. 20 (1), 206(2022).
  10. Yang, S., et al. Organoids: The current status and biomedical applications. Med Comm. 4 (3), e274(2023).
  11. Minoli, M. Bladder cancer organoids as a functional system to model different disease stages and therapy response. Nat Commun. 14, 2214(2023).
  12. Ou, L., et al. Patient-derived melanoma organoid models facilitate the assessment of immunotherapies. eBioMedicine. 92, 104614(2023).
  13. Grönholm, M., et al. Patient-derived organoids for precision cancer immunotherapy. Cancer Res. 81 (12), 3149-3155 (2021).
  14. Ou, L., et al. Preclinical platforms to study therapeutic efficacy of human γδ T cells. Clin Transl Med. 12 (6), e814(2022).
  15. Murine L-Wrn conditioned medium protocol. The University of Texas MD Anderson Cancer Center. , Available from: https://www.mdanderson.org/documents/Labs/Taniguchi%20Laboratory/Mouse%20CM.pdf (2024).
  16. Jee, J. H., et al. Development of collagen-based 3D matrix for gastrointestinal tract-derived organoid culture. Stem Cells Int. 13 (2019), 8472712(2019).
  17. Pipkin, M. E., Rao, A., Lichtenheld, M. G. The transcriptional control of the perforin locus. Immunol Rev. 235 (1), 55(2010).
  18. Li, X., et al. Tim-3 suppresses the killing effect of Vγ9Vδ2 cells on colon cancer cells by reducing perforin and granzyme B expression. Exp Cell Res. 386 (1), 111719(2020).
  19. Li, L. T., Jiang, G., Chen, Q., Zheng, J. N. Ki67 is a promising molecular target in the diagnosis of cancer (Review). Mol Med Rep. 11 (3), 1566-1572 (2015).
  20. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
  21. Li, H. Y., Ren, K., Wang, C., Bu, W. B. Skin organoid research progress and potential applications. International Journal of Dermatology and Venereology. 5 (2), 101-106 (2022).
  22. Sun, L., et al. A human mucosal melanoma organoid platform for modeling tumor heterogeneity and exploring immunotherapy combination options. Sci Adv. 9 (43), eadg6686 (2023).
  23. Vlachogiannis, G., et al. Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers. Science. 359 (6378), 920-926 (2018).
  24. Ganesh, K., et al. A rectal cancer organoid platform to study individual responses to chemoradiation. Nat Med. 25 (10), 1607-1614 (2019).
  25. Vilgelm, A. E., et al. Fine-needle aspiration-based patient-derived cancer organoids. iScience. 23 (8), 101408(2020).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Органоидные модели меланомыорганоидыполученные от пациентовмикроокружение опухоликультивирование органоидовсостав иммунных клетокактивация Т-клетокскрининг лекарственных препаратовперсонализированное лечение ракаметод коллагенового геляпокрытие Matrigel
Раскрытие терапевтических возможностей с помощью моделей органоидов, полученных от пациентов с меланомой
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.