Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Установление гепатокарциномы у мышей BALB/c-nu и исследование терапевтического эффекта формулы Sanleng Jiashen

1.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/66599

⸱

26 января 2024 г.

 ,  ,  , 

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем пошаговый протокол исследования терапевтических и сосудистых ингибирующих эффектов формулы Sanleng Jiashen на мышах BALB/c-nu с ортотопической гепатоцеллюлярной карциномой.

Аннотация

Летальность рака печени и устойчивость к химическим препаратам заставили искать эффективные рецепты традиционных трав при раке печени. Животные модели, которые являются повторяемыми, простыми в манипулировании и в высокой степени имитируют патофизиологические процессы рака печени, являются предпосылкой для успешного скрининга эффективных кандидатов в лекарства. Между тем, надежные показатели и средства оценки эффективности лекарств также являются гарантией исследований и разработок лекарств против рака печени.

Формула Sanleng Jiashen, репрезентативный рецепт традиционной китайской медицины, содержащий Sparganium stoloni erum, Buch. -Ветчина. (Sanleng), Panax ginseng C. A. Mey. (женьшень), Rheum officinale Baill. (ревень) и Ligusticum chuanxiong Hort. (Chuanxiong) назначают для питания печени и очистки тепла, выведения токсинов и улучшения кровообращения для лечения рака печени. В этом экспериментальном протоколе описывается приготовление лиофилизированной формулы Sanleng Jiashen и процесс развития рака печени in situ у мышей BALB/c-nu. Гистопатологическое окрашивание, иммуногистохимическое обнаружение онкомаркеров, визуализация in vivo мышей и хориоаллантоисный мембранный тест куриного эмбриона были использованы для изучения ингибирующего и антиангиогенезного эффекта формулы Sanleng Jiashen на злокачественную пролиферацию ткани рака печени. Данные показывают, что формула Sanleng Jiashen может эффективно противостоять злокачественной пролиферации раковой ткани печени, которая проявляется уменьшением объема опухолевой массы, улучшением патологического повреждения и снижением уровня маркера рака ki67.

Превосходное ингибирование ангиогенеза также предполагает, что формула Sanleng Jiashen может иметь потенциал для лечения и предотвращения прогрессирования и ухудшения состояния рака печени. Вся экспериментальная схема показывает комплексный процесс использования компонентов традиционной китайской медицины в лечении рака печени у мышей, что служит основой для создания и оптимизации модели рака печени, а также для исследования и разработки лекарств для профилактики и лечения рака печени.

Введение

Рак печени — это смертельно опасный рак, который возникает в печени и является второй по распространенности причиной смерти от рака во всем мире1. Показатели заболеваемости печени в Соединенных Штатах и некоторых развивающихся странах демонстрируют высокий уровень, и к 2030 году во всем мире может быть зарегистрировано более 1 миллиона случаев заболевания раком печени2. Из-за нездоровых привычек, таких как курение, ожирение и употребление алкоголя, а также разрушительного воздействия гепатита В, гепатита С и других вирусов, заболеваемость и смертность от рака печени значительно увеличива....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Голых мышей-самцов BALB/c-nu, не содержащих специфических патогенов, в возрасте 5 недель и весом 18-22 г, кормили в Центре экспериментальных исследований животных Медицинского колледжа трансформации Цзилиньского университета; условия кормления составляли 22-24 °C при относительной влажности 40%-60%. Номер лицензии на экспериментальное животное - SYXK(Ji) 2018-0006, а экспериментальный процесс соответствует правилам и положениям Комитета по этике Цзилиньского университета, а номер утверждения этики животных - 20221228-01.

1. Приготовление сублимированного Sanleng Jiashen formula15

  1. Поместит....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Как показано на рисунке 2A, мы создали модель рака печени in-situ у мышей BALB/c-nu и оценили противоопухолевый эффект формулы Sanleng Jiashen. На рисунке 2B показано, что формула Sanleng Jiashen может значительно подавлять рост опухолей печени. Результаты патологоанатомического исследования показали, что по сравнению с контрольной группой опухолевые очаги в модельной группе имели четкие границы с окружающими тканями, более крупные опухолевые очаги, узл.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Большое количество доказательств подтвердило, что Sanleng, женьшень, ревень и чуаньсюн в формуле Sanleng Jiashen оказывают фармакологическое воздействие на лечение рака печени. Исследования показали, что Sanleng может значительно ингибировать пролиферацию и рост опухолевых клеток, предотвращая инвазию и метастазирование опухолевых клеток, индуцируя апоптоз клеток и регулируя клеточный цикл и микроокружение опухоли20. Было доказано, что кемпферол, активный ингредие.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана Фондом философии и социальных наук Китая (20VYJ070), проектом Департамента образования провинции Цзилинь (JJKH20230963KJ) и вторым пакетом инженерного проекта ученых Синлинь в Чанчуньском университете китайской медицины (QNKXJ2-2021+ZR25).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
0,25% раствор трипсинаHyClone, АмерикаSH30042.01B
1 мл одноразовый шприцMingankang Medical Equipment Co., Ltd., КитайRWSB
1% раствор пенициллина и стрептомицинаHyclone, АмерикаSV30010
1,5 мл центрифужная пробиркаCorning, АмерикаMCT-150-C-S
12 см щипцыдля иглыHesdick, КитайHKQS-211
6-0 хирургические шовные нитиShanghai Jinhuan Medical Equipment Co., Ltd., Шанхай, КитайCR631
75% спиртSichuan Youbang Enterprise Co., Ltd., Сычуань, Китай1.00009E+11
96-луночные планшетыNEST, Китай701001
АцетонТяньцзинь Динфу Химический завод общего назначения, Тяньцзинь, КитайGB686-89
BALB/c-nu самцы обнаженных мышейBeijing Weitonglihua Experimental Animal Technology Co., Ltd., Пекин, КитайSYXK(Ji) 2018-0006
Машина для выпечки биологических тканейLeica, ГерманияLeica HI1220
Чашка для клеточных культурNEST, КитайNEST.706001
Раствор лимонной кислотыWuhan Canos Technology Co., Ltd., Ухань, Китайsj1074
D-люциферинГолд Биотехнология®, Inc., КитайLUCK-100
DMEMHyclone, АмерикаSH30243.01
Осветитель яицShandong Weizhen Incubation Equipment Company, Шаньдун, КитайWZSDT
Раствор для окрашивания эозинаHunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Хунань, Китай110703061
Эритромициновая глазная мазь  Cisen Pharmaceutical Co., Ltd., Шанхай, КитайH37022025
Фетальная бычья сывороткаClark, АмерикаFB25015 
Полностью автоматический интеллектуальный инкубатор для цыплятShandong Weizhen Incubation Equipment Company, Шаньдун, Китай29538
GFP решение для лентивирусаSuzhou GenePharma Co., Ltd., Сучжоу, КитайF22AZ
Сыворотка для козShenyang Wanlei Biotechnology Co., Ltd., Шэнъян, КитайWLA067
Ручная дрель для черепа мышиSTRONGWT, Китай190
HCCLM3 клеточная линияWheLab, Шанхай, КитайC1010
ГрелкаZhongke Life Technology Co., Ltd., Ханчжоу, КитайGEJRD-10W
ГематоксилинHunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Хунань, КитайB-YH250-1
Интеллектуальный горшок для отвараHangzhou Jiuyang living Appliance Co., Ltd., Ханчжоу, Китай3003BQ
  Инвертированный флуоресцентный микроскопOlympus, ЯпонияIX73
ki67 первичное антителоWuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Ухань, КитайGB121141-100
Дезинфицирующее средство LodophorCofoe Medical Technology Co., Ltd., Хунань, Китай202110073
LuciferaseSuzhou GenePharma Co., Ltd., Сучжоу, КитайE26JZ
МатричныйклейCorning, Америка356234
Медицинская марляYunnan Chenye Biotechnology Co., Ltd., Юньнань, Китай71712049971
метанолGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd., Гуандун, Китай1.17001.023
Офтальмологические ножницыHesdick, КитайHKQS-209
Офтальмологический пинцетHesdick, КитайHKCL-20
Машина для заделки парафинаLeica, Германия 
Машина для нарезки парафинаLeica, ГерманияLeica CM1950
ПараформальдегидBiosharp, КитайBL539A
PBS буферWuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Ухань, КитайG2156-1L
ПуромицинBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Пекин, КитайP8230
ХолодильникThermo Scientific, АмерикаTDE40086FV-ULTS
СкальпельHesdick, КитайHKCL-93
Вторичное антителоWuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Ухань, КитайGB23301
Система визуализации мелких животных в реальном времениCaliper Life Sciences, АмерикаIVIS Lumina XR
SorafenibShanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd., Шанхай, Китай284461-73-0 
Прозрачная повязка3M, Америка9534HP
Triton X-100Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Пекин, КитайT8200
Вакуумная сублимационная сушилка Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., Ltd., Нинбо, Китайsz-10N
Яйца курицы с белым перомShandong Haotai Experimental Animal Breeding Co., Ltd., Шаньдун, КитайSCXK(Lu) 20180004
XyleneSigma-Aldrich, , Америка534056
EG1150H

Ссылки

  1. Sia, D., Villanueva, A., Friedman, S. L., Llovet, J. M. Liver cancer cell of origin, molecular class, and effects on patient prognosis. Gastroenterology. 152 (4), 745-761 (2017).
  2. Starley, B. Q., Calcagno, C. J., Harrison, S. A. Nonalcoholic fatty l....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Рак печенимодель гепатокарциномытрадиционная китайская медицинаингибирование опухолиингибирование ангиогенезагистопатологическое окрашиваниеиммуногистохимическая детекциявизуализация in vivo

Эта статья была опубликована

Видео скоро будет доступно