Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Применение тандемной масс-спектрометрии с помощью жидкостной хроматографии в исследованиях природных продуктов: тропановые алкалоиды на примере

2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/66620

⸱

8 марта 2024 г.

 ,  , 
1Department of Chemistry, Northern Michigan University

В этой статье

Краткое содержание

Мы представляем метод быстрой масс-спектрометрии (МС)/масс-спектрометрии (МС) аннотации и классификации тропановых алкалоидов, полезный как для предварительной дерепликации образцов, содержащих тропан, так и для обнаружения новых алкалоидов для выделения.

Аннотация

Несмотря на то, что многие лекарства, используемые сегодня, имеют синтетическое происхождение, натуральные продукты по-прежнему являются богатым источником нового химического разнообразия и биологической активности, а также могут дать многообещающие результаты в борьбе с устойчивыми или новыми заболеваниями. Проблема, однако, двоякая: исследователи должны не только найти натуральные продукты и выяснить их структуру, но и определить, что стоит выделить и проанализировать (и что уже известно – процесс, известный как дерепликация). С появлением современных аналитических приборов темпы обнаружения и дерепликации натуральных продуктов ускорились. Жидкостная хроматография-тандемная масс-спектрометрия (ЖХ-МС/МС) стала особенно ценным методом для идентификации и классификации химических структур. Тропановые алкалоиды (ТА) являются соединениями растительного происхождения, имеющими большое медицинское и токсикологическое значение. В этом исследовании мы разработали процесс скрининга на основе LC-MS/MS, используя несколько конфигураций MS/MS, доступных на тройном квадрупольном масс-спектрометре (QQQ), для аннотирования и классификации структур TA на основе их различных паттернов фрагментации. Используя комбинацию сканирования ионов, зависящих от данных (DD), сканирования ионов-предшественников (PrIS) и сканирования нейтральных потерь (NLS), мы применили этот метод к богатым TA экстрактам пасленовых Datura stramonium и Datura metel. Этот метод является быстрым, чувствительным и был успешно использован как для предварительной дерепликации сложных образцов, содержащих ТА, так и для открытия нового кандидата для выделения, очистки (и последующего биоанализа).

Введение

Несмотря на то, что в последние десятилетия полностью синтетические молекулы стали играть все более заметную роль в разработке лекарств, почти две трети всех одобренных лекарств за последние 39 лет являются натуральными продуктами или продуктами, вдохновленными натуральными продуктами,1,2  что подчеркивает сохраняющуюся важность исследований в области натуральных продуктов. Алкалоиды, некоторые азотсодержащие природные продукты, особенно ценятся за свои лечебные свойства. Тропановые алкалоиды (ТА), содержащие [3.2.1.]-бициклические азотсодержащие системы, продуцируются в основном растениями семейств Пасленовые, Эритроксиловые и Вьюнковые (Convolvulaceae). Примеры включают атропин, скополамин и кокаин; Многократные полусинтетические или синтетические тропаны также используются в клинической практике3. ТА и их производные используются для лечения многих состояний 3,4, и некоторые из этих препаратов включены в Список основных лекарственных средств ВОЗ на 2023 год5. Из-за своей мощной активности ТК также используются в рекреационных целях (в качестве стимуляторов или делириантов) и могут вызвать отравление при употреблении в пищу растений (или препаратов), которые их содержат 6,7. ТК нежелательны в пище человека и животных8 и могут испортить чаи, специи, зерновые, мед и травяные добавки 9,10. Из-за их лечебных возможностей и способности отравлять, аналитические методы, которые могут помочь в открытии новых ТА (и идентификации известных ТА), являются полезными.

В тандемной масс-спектрометрии (МС/МС) «масс-фильтры» (например, квадруполи, времяпролетные трубки) физически связаны друг с другом («в космосе»), или в приборе используются дополнительные «временные» этапы реакции/разделения. В космосе МС/МС использует различные режимы для отбора и фрагментации различных ионов на различных массовых фильтрах (например, квадруполях тройного квадруполя или инструмента QQQ). Эти различные режимы могут использоваться для определения того, какие конкретные фрагменты образуются данным ионом (сканирование ионов продукта), какие ионы в образце дают определенные фрагменты (сканирование ионов-предшественников или PrIS) или претерпевают потери характерной массы (сканирование нейтральными потерями или NLS), или какие конкретные соединения обладают какими конкретными фрагментами (мониторинг множественных реакций). Таким образом, MS/MS предоставляет фрагменты, которые полезны для предложения структур для новых соединений или подтверждения присутствия существующего соединения. МС/МС все чаще используется в области разработки лекарственных препаратов, химии природных продуктов и метаболомики 11,12, а также используется для профилирования веществ, содержащих алкалоиды (для фитохимической характеристики или хемотаксономического анализа), а также для обнаружения и количественного определения специфических алкалоидов в пищевых или лекарственных растениях 10,13,14,15,16.

Несмотря на множество доступных методов масс-спектрометрии, существуют проблемы с поиском новых алкалоидов. В дополнение к поиску организма-кандидата для скрининга, полное структурное подтверждение алкалоида является трудоемким процессом, который может включать в себя множество различных аналитических методов. Кроме того, исследователи могут изолировать соединение, которое уже известно, тратя впустую труд, время и ресурсы. Это особенно сложно для ТА, где регистрируются сотни, если не тысячи ТА, многие из которых изомерны друг другу. Процесс «идентификации известного и отличия его от неизвестного» известен как дерепликация. Для помощи в этом процессе публикуются базы данных о времени удержания (r.t.s) и массовых фрагментах различных TA и других соединений17,18. Тем не менее, дерепликация трудоемка; простое аннотирование (т.е. присвоение предполагаемых структур) алкалоидов во всей хроматограмме LC-MS/MS образца занимает много времени. В последнее время для бензилизохинолина, монотерпена индола и тропановых алкалоидов были использованы как молекулярная сеть1 9,20, так и ручная дерепликация 18,21,22. Тем не менее, не существует специальных методов или рабочих процессов, доступных для быстрой дерепликации образцов, содержащих ТА, на основе ЖХ-МС/МС, даже несмотря на то, что ТА обладают общими, легко идентифицируемыми фрагментами (рис. 1). В описанном здесь методе используется комбинация зависящих от данных (DD) сканирования ионов продуктов, PrIS и NLS для аннотирования и классификации структур TA в растениях на основе как различных структур фрагментации моно-, ди- и тризамещенных тропанов (рисунок 1A), так и потерь общих эфирных групп, обнаруженных в этих алкалоидах (рисунок 1B). Исследуемыми организмами являются несколько видов пасленовых рода Datura. Богатый источник разнообразных ТА, дурман использовался на протяжении всей мировой истории в медицинских икультурных целях, и его трудно воспроизвести из-за его многочисленных, структурно схожих ТА, что дает нам привлекательные образцы для тестирования нашего метода.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ВНИМАНИЕ: Пожалуйста, ознакомьтесь со всеми соответствующими паспортами безопасности материалов (MSDS) перед использованием перечисленных химикатов.

1. Подготовка образцов

ВНИМАНИЕ: Жидкий азот может вызвать криогенные ожоги. Используйте криогенные перчатки и средства защиты глаз в хорошо проветриваемом помещении. Содержащие алкалоиды образцы растений могут раздражать кожу; Всегда обращайтесь с ними в перчатках. Метанол токсичен и легковоспламеняющ, поэтому с ним следует обращаться в вытяжном шкафу вдали от потенциальных источников возгорания.

ПРИМЕЧАНИЕ: Теоретически можно использовать культурную или дикую растительную ткань (сушеную или молотую свежую); Приведенная ниже процедура как раз и используется при разработке метода.

  1. Если интересующая растительная ткань свежая, заморозьте ее, поместив в полипропиленовую коническую трубку и погрузив в жидкий азот на 2-3 минуты.
  2. Поместите замороженную растительную ткань в предварительно охлажденную ступку (в полистирольный холодильник с жидким азотом), и с помощью предварительно охлажденного пестика измельчите ткань до однородного порошка.
  3. Быстро взвесьте нужное количество ткани в тарированную полипропиленовую микроцентрифужную пробирку с помощью предварительно охлажденного шпателя и немедленно добавьте 20% метанола (при комнатной температуре [RT]) в концентрации 1 мл на каждые 100 мг ткани.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Метанол (20%) обычно используется для извлечения ТЖ25. Иногда добавляют 0,1% муравьиной кислоты, хотя никакой разницы в эффективности экстракции при разработке этого и других методов не наблюдалось.
  4. Поместите закрытые пробирки на качающийся шейкер (средняя скорость) минимум на 3 часа при RT.
  5. Центрифугируйте пробирки при давлении 9464 x g в течение 10 минут. Отпидайте надосадочную жидкость в флакон автосамплера LC-MS или, если по-прежнему мутно, сначала профильтруйте через шприцевой фильтр 0,45 мкм.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Протокол может быть приостановлен на этом этапе, хотя обработанные свежие образцы растений и экстракты должны храниться в морозильной камере при температуре -80 °C перед анализом, чтобы избежать любой потенциальной деградации алкалоидов.

2. Конфигурация прибора LC-MS и сбор данных

ВНИМАНИЕ: Ацетонитрил токсичен и легковоспламеняющ; Держите подальше от источников возгорания и контролируйте пары с помощью вытяжного шкафа. Муравьиная кислота вызывает коррозию; Избегайте контакта с кожей и глазами и носите соответствующие средства индивидуальной защиты.

  1. Используйте прибор LC-MS с источником ионизации с электрораспылением (ESI) и колонкой ВЭЖХ с обратной фазой (C18, 4,6 x 100 мм).
  2. Для ВЭЖХ используйте 0,1% муравьиной кислоты в H2O в качестве растворителя А и 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле в качестве растворителя В; Уравновесьте столбец с 99% A и 1% B. Настройте 30-минутный градиент 1%-50% B в течение 26 мин, возвращаясь к 1% B через 26,01 мин и удерживая на уровне 1% B в течение 4 мин. Используйте температуру духового шкафа 45 °C и расход 0,5 мл/мин.
  3. В методе ЖХ-МС используются следующие рабочие параметры масс-спектрометра: напряжение на границе раздела: 4,0 кВ, расход распыляющего газа: 3 л/мин, расход нагревательного газа: 10 л/мин, температура DL: 250 °C, температура теплового блока: 400 °C, температура границы раздела: 300 °C, расход осушающего газа: 10 л/мин, давление газа (аргона), вызванного столкновением (CID), составляет 17 кПа.
  4. Создание метода МС в позитивном режиме ESI, включающего в себя сканирование Q3 и сканирование Q1 (100-1000 Да), функционирующее как событие обследования (заданное по длине метода LC), с включенным автоматическим исключением изотопов. В качестве зависимого события сканирования Q1 (анализ DD) включите сканирование ионов продукта с массовым окном 50-1000 Да, энергией ячейки столкновения -20 В и временем события <0,2 с.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Порог подсчета для запуска сканирования ионов продукта DD Q1 может варьироваться, но, как правило, используется уровень 7 000-10 000 отсчетов. На некоторых приборах, таких как тот, который использовался для разработки метода, сканирование Q3 обеспечивает большую массовую точность и чувствительность, чем Q1, и включено для подтверждения ионов, наблюдаемых при сканировании Q1, хотя его можно без проблем пропустить на шаге 2.4.
  5. К описанному выше методу МС добавим PrIS положительной моды, равные длине метода LC с энергиями столкновений ячеек -20 В и временами событий 0,75 с. Убедитесь, что во всех случаях включены функции автоматического исключения изотопов или деизотопирования . Убедитесь, что интересующие нас значения m/z для фрагментов TA (в Da, см. рисунок 1A) составляют 124,1 (для монозамещенных TA, массовое окно 125-1000 Da), 122,1 и 140,1 (для дизамещенных TA, массовые окна, начинающиеся с 123 и 141 Da, соответственно), и 156,1 и 138,1 (для тризамещенных TA, массовые окна, начинающиеся с 157 и 139 Da, соответственно).
    Примечание: Во время разработки метода PrIS были разделены на два различных метода, один для моно- и дизамещенных ТЖ, а другой для тризамещенных ТД, хотя они могут быть разделены или объединены любым способом.
  6. Создайте второй метод MS, который включает в себя параметры, описанные в шаге 2.4.
    1. К этому методу MS/MS добавьте NLS с положительной модой, равную длине метода LC, с энергиями ячеек столкновений -20 В и временем событий 0,75 с. Убедитесь, что во всех случаях включены функции автоматического исключения изотопов или деизотопирования .
    2. Убедитесь, что представляющие интерес нейтральные массы потерь для сложных эфиров на ТА (в Да, см. рисунок 1В) составляют 100,05 (для сложных эфиров, полученных из тиглиевой кислоты, массовое окно 110-1000 Да), 60,03 (для ацетильных групп, массовое окно 100-1000 Да) и 166,06 (сложные эфиры фенилмолочной или тропной кислоты, массовое окно 170-1000 Да).
  7. Загрузите метод LC-MS и создайте файлы данных для интересующих образцов. После того как колонка ВЭЖХ уравновесится при температуре 45 °C, запустите интересующие образцы в пакете или файле проекта с соответствующими заготовками растворителей экстракции между различными видами или типами тканей. Типичный объем инъекции составляет 10-20 мкл.
    ПРИМЕЧАНИЕ: При особенно больших объемах детектор масс-спектрометра может быть насыщенным. Если вы работаете с очень концентрированными образцами, убедитесь, что источник ESI очищен и прибор регулярно настраивается. Здесь протокол может быть приостановлен после того, как все данные будут собраны.

3. Анализ данных

  1. Изучите общую ионную хроматограмму сканирования Q1 и Q3 (и сканирования ионов продукта DD) и обратите внимание на родительскую массу любых обильных ионов, которые имеют TA-подобные особенности: а) масса <500 Да для иона [M+H]+ , обычно четная масса, б) типичные ОТК от 2 до 22 мин при использовании вышеуказанного метода ЛК, и в) фрагменты из следующего списка: м/з 93, 124, 142, 140, 122, 138, 156, 174, 110 или 128 Да.
  2. Изучите хроматограмму/канал PrIS для m/z 124 и обратите внимание, какие пики/ионы находятся на которых r.t.s (записанные на шаге 3.1) производят этот фрагмент. Просматривайте хроматограмму методом сканирования по сканированию, а также изучайте полные спектры МС/МС, полученные при сканировании ионов продукта DD, особенно для веществ с более низкой численностью.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Настоящий вид, содержащий этот фрагмент, будет существовать в течение нескольких сканирований и появится как в Q1, так и в Q3 сканированиях (если используется последний). Электронная таблица прилагается к вспомогательной информации (Дополнительный файл 1) для помощи в составлении аннотаций.
  3. Повторите шаг 3.2 с другими хроматограммами PrIS. Поскольку оба m/z 122 и 140 указывают на дизамещенные ТА, а m/z 138 и 156 указывают на тризамещенные ТА, изучите эти хроматограммы/каналы вместе.
  4. Изучите хроматограмму/каналы NLS для m/z 100, 60 и 166 и обратите внимание, какие пики/ионы, при которых r.t.s (зарегистрированные на шаге 3.1) вызывают эти нейтральные потери. Как и в случае с PrIS, щелкните по хроматограмме сканированием и сравните с фрагментацией, полученной при сканировании ионов продукта DD, особенно для веществ с более низкой численностью.
  5. Используя комбинацию данных PrIS и NLS, подкрепленных результатами ионного сканирования продукта DD, сделать предполагаемые аннотации наблюдаемых алкалоидов путем добавления наименьшей массы тропана (например, 124, 122 или 138) и нейтральных потерь, а затем учесть оставшуюся остаточную массу.
    Примечание: Типичными группами, замещающими ТК (и их массой в Да), являются гидроксил (18), ацетил (60), пропионил (74), изобутирил (88), тиглоил (100), насыщенный тиглоил/2-метилбутирил (102) или фениллактат/тропная кислота (166).
  6. Сравните аннотации для алкалоидов с аннотациями, приведенными в литературе17 и базах данных (например, MoNA)26 , чтобы определить, какие модели замещения TA представлены (и какие потенциально являются новыми). Кроме того, используйте стандарты некоторых распространенных тропановых алкалоидов (например, атропина, литорина, скополамина), которые коммерчески доступны для подтверждения.
  7. Для получения дополнительной структурной информации для образцов с низким содержанием (PrIS и NLS могут регистрировать ионы ниже зависимых пороговых значений событий) соберите сканирование ионов конкретного продукта (используя интересующую массу в качестве иона-предшественника) на более концентрированном образце.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот метод был разработан на приборе QQQ с низким разрешением. Для всех предполагаемых новых соединений следует использовать прибор МС с высоким разрешением для получения точных масс-спектров.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Чтобы продемонстрировать эффективность метода, в качестве положительного контроля была проанализирована стандартная смесь ТЖК (10 мкг/мл каждой из смеси ацетилтропина/ацетилпсевдотропина [монозамещенная], по 10 мкг/мл каждой из смеси двух изомеров анизодамина, а также гиосциамин [монозамещенный], литорин [монозамещенный] и скополамин [тризамещенный]) (рис. 2). Полная хроматограмма сканирования Q1 (отображается в виде базовой пиковой хроматограммы) показана на рисунке 2A<...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Несмотря на то, что параметры прибора, представленные в протоколе, позволяют обеспечить удовлетворительную производительность, успешное использование этого метода может потребовать тщательного внимания или оптимизации нескольких критических этапов. Хотя градиент растворителя ВЭЖХ, представленный на шаге 2.2, в целом подходит для тропановых алкалоидов, его может потребоваться модификация в зависимости от профиля тропановых алкалоидов исследуемого образца или вида растения. Объем ввода обр...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.

Благодарности

Эта работа была профинансирована за счет исследовательского гранта факультета (Университет Северного Мичигана, присужденный M.A.C.), исследовательской стипендии для студентов (Университет Северного Мичигана, присужден J.C.) и факультета химии. Авторы хотели бы поблагодарить Джона Бергера (NMU) за помощь в подготовке растительных тканей, Ханну Хокинс (NMU) за обслуживание LC-MS и помощь в устранении неполадок, а также доктора Райана Форнвальда и его студентов CH 495 (Синтез натуральных продуктов) за приготовление ацетилтропиновой смеси. Авторы также выражают благодарность доктору Дэниелу Джонсу (Университет штата Мичиган) за получение спектров MS/MS с высоким разрешением.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Ацетонитрил, Для УВЭЖХ, подходит для масс-спектрометрииSigma-Aldrich900667ВЭЖХ растворитель
Аргон газообразныйAirGasAR UHP300CID газ
Муравьиная кислота, 99% для анализаThermo ScientificAC270480010добавка ВЭЖХ
Защитный держатель колонкиRestek25812
ВЭЖХ, Shimadzu LC-2030C 3D PlusShimadzu228-65802-58ВЭЖХ колонка
LCMS, Shimdazu LCMS-8045Shimadzu225-31800-44Масс-спектрометр; мы запустили программное обеспечение LabSolutions, которое является стандартным для Shimadzu instruments
Жидкий азотAirGasNI 180LT22
Метанол, для ВЭЖХ/УВЭЖХ/ЛКМСVWRBDH 85800.400Для изготовления экстракционного растворителя
Микроцентрифуга VWR2400-37
Микроцентрифужные пробирки, 1,5 млFisher Scientific05-408-129
Раствор Fisher ScientificFB961CДля измельчения растительных тканей
ПестикFisher ScientificFB961MДля измельчения растительных тканей
Пипетка 1000 млGilson 
Наконечник для пипетки 1000 млFisher scientific02-707-404
Растительные тканиРазличные источникиН/ДМожет быть что угодно дикорастущие или культивируемые
полипропиленовые конические трубки, 15 млFisher Scientific05-539-4
Охладитель из полистиролаULINES-18312Тип охладителей, в которых поставляются реагенты для молекулярной биологии, будет следующим соответствующий
Roc C18 3 &микро; m, 100 мм x 4,6 ммRestek9534315колонка для ВЭЖХ
Roc C18, 10 мм x 4 ммRestek953450210Guard колонка
КачалкаThemo Scientific11-676-680
Набор для удобства флакона с винтовой резьбой (9 мм)Fisher scientific13-622-190Флаконы с автопробником LCMS
Шприц, 3 млFisher Scientific03-377-27
Шприцевой фильтр 0,45 & микро; М Avantor/VWR76479-008
Вода, для использования в жидкостной хроматографии и масс-спектрометрииJT Baker9831-03Для приготовления экстракционного растворителя
Вода, содержит 0,1% v/v муравьиной кислоты, для УВЭЖХ, подходит для масс-спектрометрииSigma-Aldrich900687-1LВЭЖХ растворитель
F144059M

Ссылки

  1. Newman, D. J., Cragg, G. M. Natural products as sources of new drugs over the 30 years from 1981 to 2010. J Nat Prod. 75, 311-335 (2012).
  2. Newman, D. J., Cragg, G. M. Natural products as sources of new drugs over the nearly four decades from 01/1981 to 09/2019. J Nat Prod. 83 (3), 770-803 (2020).
  3. Kohnen-Johannsen, K., Kayser, O. Tropane alkaloids: Chemistry, pharmacology, biosynthesis and production. Molecules. 24 (4), 796(2019).
  4. Shim, K. H., Kang, M. J., Sharma, N., An, S. S. A. Beauty of the beast: anticholinergic tropane alkaloids in therapeutics. Nat Prod Bioprospect. 12 (1), 33(2022).
  5. Web Annex A. World Health Organization Model List of Essential Medicines - 23rd List, 2023. The Selection and Use of Essential Medicines 2023: Executive Summary of the Report of the 24th WHO Expert Committee on the Selection and Use of Essential Medicines. , World Health Organization. Geneva. 24-28 (2023).
  6. Kerchner, A., Farkas, A. Worldwide poisoning potential of Brugmansia and Datura. Forensic Toxicol. 38, 30-41 (2020).
  7. Hanna, J. P., Schmidley, J. W., Braselton, W. E. Datura delirium. Clin Neuropharmacol. 15, 109-113 (1992).
  8. Alexander, J., et al. Scientific opinion of the panel on contaminants in the food chain on a request from the European Commission on tropane alkaloids (from Datura sp.) as undesirable substances in animal feed. EFSA J. 691, 1-55 (2008).
  9. González-Gómez, L., Morante-Zarcero, S., Pérez-Quintanilla, D., Sierra, I. Occurrence and chemistry of Tropane alkaloids in foods, with a focus on sample analysis methods: A review on recent trends and technological advances. Foods. 11 (3), 407(2022).
  10. Cirlini, M., Cappucci, V., Galaverna, G., Dall'Asta, C., Bruni, R. A sensitive UHPLC-ESI-MS/MS method for the determination of tropane alkaloids in herbal teas and extracts. Food Control. 105, 285-291 (2019).
  11. Amorim Madiera, P. J., Florencio, M. H. Applications of Tandem Mass Spectrometry: From Structural Analysis to Fundamental Studies. Tandem Mass Spectrometry - Applications and Principles. Prasain, J. , InTech. London. (2012).
  12. Xing, J., Xie, C., Lou, H. Recent applications of liquid chromatography-mass spectrometry in natural products bioanalysis. J Pharm Biomed Anal. 44 (2), 368-378 (2007).
  13. Negrin, A., Long, C., Motley, T. J., Kennelly, E. J. LC-MS metabolomics and chemotaxonomy of caffeine-containing holly (Ilex) species and related taxa in the Aquifoliaceae. J. Agric. Food Chem. 67 (19), 5687-5699 (2019).
  14. Och, A., Szewczyk, K., Pecio, L., Stochmal, A., Zaluski, D., Bogucka-Kocka, A. UPLC-MS/MS profile of alkaloids with cytotoxic properties of selected medicinal plants of the Berberidaceae and Papaveraceae families. Oxid Med Cell Longevity. 2017, 9369872(2017).
  15. Li, Y., Pang, T., Shi, J., Liu, X., Deng, J., Lin, Q. Simultaneous determination of alkaloids and their related tobacco-specific nitrosamines in tobacco leaves using LC-MS-MS. J Chromatogr Sci. 53 (10), 1730-1736 (2015).
  16. González-Gómez, L., Morante-Zarcero, S., Pereira, J. A. M., Câmara, J. S., Sierra, I. Improved analytical approach for determination of tropane alkaloids in leafy vegetables based on µ-QuEChERS combined with HPLC-MS/MS. Toxins. 14 (10), 650(2022).
  17. Cinelli, M. A., Jones, A. D. Alkaloids of the Genus Datura: Review of a rich resource for natural product discovery. Molecules. 26, 2629(2021).
  18. Gonçalves Dantas, C., et al. Dereplication of tropane alkaloids from four Erythroxylum species using liquid chromatography coupled with ESI-MSn and HRESIMS. Rapid Commun Mass Spectrom. 37 (21), e9629(2023).
  19. Santos, C. L. G., et al. Molecular networking-based dereplication of strictosidine-derived monoterpene indole alkaloids from the curare ingredient Strychnos peckii. Rapid Commun Mass Spectrom. 34 (3), e8683(2020).
  20. Qin, G. F., et al. MS/MS-based molecular networking: An efficient approach for natural products dereplication. Molecules. 28, 157(2023).
  21. Du, N., Zhou, W., Jin, H., Liu, Y., Zhou, H., Liang, X. Characterization of tropane and cinnamamide alkaloids from Scopolia tangutica by high-performance liquid chromatography with quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry. J Sep Sci. 42 (6), 1163-1173 (2019).
  22. Agnes, S. A., et al. Implementation of a MS/MS database for isoquinoline alkaloids and other annonaceous metabolites. Sci Data. 9 (1), 270(2022).
  23. Sixto, A., Pérez-Parada, A., Niell, S., Heinzen, H. GC-MS and LC-MS/MS workflows for the identification and quantitation of pyrrolizidine alkaloids in plant extracts, a case study: Echium plantagineum. Rev Bras Farmacog. 29 (4), 500-503 (2019).
  24. Wang, H., Xu, X., Wang, X., Guo, W., Jia, W., Zhang, F. An analytical strategy for discovering structural analogues of alkaloids in plant food using characteristic structural fragments extraction by high resolution orbitrap mass spectrometry. LWT- Sci Technol. 154, 112329(2022).
  25. Parks, H. M., et al. Redirecting tropane alkaloid metabolism reveals pyrrolidine alkaloid diversity in Atropa belladonna. New Phytol. 237 (5), 1810-1825 (2023).
  26. MassBank of North America. , Available from: https://mona.fiehnlab.ucdavis.edu (2024).
  27. Maier, I., et al. Fluorodaturatin und Homofluorodaturatin - zwei neue β-carbolinderivate in Samen von Datura stramonium L. var. stramonium. Monatsh Chem. 112, 1425-1439 (1981).
  28. Jennett-Siems, K., et al. Chemotaxonomy of the pantropical genus Merremia (Convolvulaceae) based on the distribution of tropane alkaloids. Phytochemistry. 66, 1448-1464 (2005).
  29. Kohnen, K. L., Sezgin, S., Spiteller, M., Hagels, H., Kayser, O. Localization and organization of scopolamine biosynthesis in Duboisia myoporoides R. Br. Plant Cell Physiol. 59 (1), 107-118 (2018).
  30. Guan, P., et al. Full collision energy ramp-MS2 spectrum in structural analysis relying on MS/MS. Anal Chem. 93 (46), 15381-15389 (2021).
  31. Al Balkhi, M. H., Schlitz, S., Lesur, D., Lanoue, A., Wadouachi, M., Boitel-Conti, M. Norlittorine and norhyoscyamine identified as products of littorine and hyoscyamine metabolism by 13C-labeling in Datura innoxia hairy roots. Phytochemistry. 74, 105-114 (2012).
  32. Sumner, L. W., et al. Proposed minimum reporting standards for chemical analysis. Metabolomics. 3, 211-221 (2007).
  33. Gambaro, V., Labbe, C., Castillo, M. Angeloyl, Tigloyl and Senecioyloxytropane Alkaloids from Schizanthus hookerii. Phytochemistry. 22 (8), 1838-1839 (1983).
  34. Christen, P., Cretton, S., Humam, M., Bieri, S., Muñoz, O., Joseph-Nathan, P. Chemistry and biological activity of alkaloids from the genus Schizanthus. Phytochem Rev. 19, 615-641 (2020).
  35. Lounasmaa, M., Tamminen, T. The Tropane Alkaloids. The Alkaloids: Chemistry and Pharmacology. , Academic Press. New York, NY. (1993).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

ЖХ-МС/МСсканирование по ионам-предшественникамсканирование по нейтральным потерямсканирование по ионам-продуктамDatura StramoniumDatura Metel
Применение тандемной масс-спектрометрии с помощью жидкостной хроматографии в исследованиях природных продуктов: тропановые алкалоиды на примере
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.