Бактерии колонизируют ткани хозяина, которые различаются по биодоступности кислорода и железа, однако в большинстве подходов к изучению бактерий используется аэрированная, обогащенная среда. В этом протоколе описывается культивирование патогена человека Yersinia pseudotuberculosis при различных концентрациях железа и напряжении кислорода, а также количественная оценка активности системы секреции Yersinia III типа, которая является важным фактором вирулентности.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Количественная оценка активности секреционной системы Yersinia pseudotuberculosis III типа после железного голодания и анаэробного роста
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Ключевым механизмом вирулентности для многих грамотрицательных патогенов является система секреции III типа (T3SS), игольчатый придаток, который перемещает цитотоксические или иммуномодулирующие эффекторные белки в клетки хозяина. T3SS является мишенью для кампаний по открытию противомикробных препаратов, поскольку он доступен внеклеточно и в значительной степени отсутствует у непатогенных бактерий. Недавние исследования показали, что T3SS Yersinia и Salmonella регулируются факторами, реагирующими на железо и кислород, которые являются важными специфическими для ниши сигналами, возникающими во время инфекции млекопитающих. Здесь описан способ лечения железного голодания при Yersinia pseudotuberculosis с последующим факультативным приемом неорганического железа. Чтобы оценить влияние доступности кислорода, этот процесс железного голодания демонстрируется как в аэробных, так и в анаэробных условиях. Наконец, инкубация культур при температуре хозяина млекопитающих 37 °C индуцирует экспрессию T3SS и позволяет количественно оценить активность Yersinia T3SS путем визуализации эффекторных белков, высвобождаемых в надосадочную жидкость. Описанные здесь шаги дают преимущество по сравнению с использованием хелаторов железа при отсутствии железного голодания, которое недостаточно для того, чтобы вызвать сильное железное голодание, предположительно из-за эффективных систем поглощения и удаления железа Yersinia . Кроме того, лабораторная посуда с кислотной промывкой тщательно продумана для обеспечения удаления остатков железа, которые необходимы для вызова сильного железного голодания. Кроме того, описано использование хелатирующего агента для удаления остаточного железа из сред и культивирование бактерий в течение нескольких поколений в отсутствие железа для истощения бактериальных запасов железа. Используя стандартные протоколы осаждения белка, индуцированного трихлоруксусной кислотой, SDS-PAGE и окрашивания серебром, эта процедура демонстрирует доступные способы измерения активности T3SS. Хотя эта процедура оптимизирована для Y. pseudotuberculosis, она предлагает основу для исследований патогенов с аналогичными надежными системами поглощения железа. В эпоху устойчивости к антибиотикам эти методы могут быть расширены для оценки эффективности антимикробных соединений, нацеленных на T3SS в условиях, связанных с хозяином.
Введение
Многие клинически значимые грамотрицательные патогены, такие как Yersinia, Vibrio, Escherichia, Pseudomonas и Shigella, кодируют систему секреции III типа (T3SS) для введения эффекторных белков в клетки-хозяева1. У многих видов бактерий T3SS находится под строгимрегуляторным контролем2. Например, транслокация эффекторных белков Yersinia T3SS в клетки-мишени хозяина имеет решающее значение для подрыва защитных механизмов хозяина и обеспечения бактериальной колонизации тканей хозяина. Тем не менее, активность Yersinia T3SS метаболически обременительна и может вызывать распознавание иммунными рецепторами хозяина3. Соответственно, регуляторы, которые ощущают специфические сигналы окружающей среды, контролируют экспрессию генов T3SS у многих видов бактерий. Поскольку патогены, такие как Yersinia, испытывают изменения окружающей среды во время цикла заражения, которые влияют на экспрессию критических факторов вирулентности, важно разработать лабораторные условия, которые имитируют характерные особенности ниш хозяина, занимаемых бактериальными патогенами. В частности, напряжение кислорода и доступность железа различаются между различными участками тканей пространственно-временным образом и влияют на экспрессию генов вирулентности, таких как T3SS 4,5,6. Таким образом, цель этого метода состоит в том, чтобы оценить, как кислород и железо влияют на экспрессию Yersinia T3SS. Это позволит получить представление о динамике взаимодействия хозяина и патогена.
Описанный здесь метод подробно описывает, как культивировать Yersinia pseudotuberculosis аэробно и анаэробно, а также как истощить запасы железа Yersinia во время аэробного или анаэробного роста. Здесь выделено несколько важных соображений относительно успешного культивирования бактерий в этих изменчивых условиях. Во-первых, анаэробное культивирование требует дополнительного приема глюкозы, модификация которой отмечена в рецепте среды. Во-вторых, поскольку Y. pseudotuberculosis использует сидерофоры и другие системы поглощения железа, которые могут надежно поглощать железо из окружающей среды, особое внимание уделяется тому, чтобы питательные среды и лабораторная посуда были как можно более свободными от железа. В предыдущих исследованиях использовались хелаторы железа, такие как дипиридил, для истощения железа из богатых бактериальных культур для имитации железного голодания 8,9. Тем не менее, истощение запасов железа Yersinia для вызова железного голодания требует удаления остатков железа из стеклянной посуды и сред, а также длительного роста в отсутствие железа. В этом протоколе подробно описано, как мыть кислотой стеклянную посуду и хелатировать среду для удаления остатков железа, а также культивировать бактерии в течение нескольких поколений для обеспечения полного железного голодания. Железное голодание может быть обеспечено путем измерения относительных уровней транскриптов хорошо охарактеризованных железочувствительных генов в различных условиях, как показано здесь на примере yfeA и bfd.
Кульминация этого протокола демонстрирует, как осаждать секретируемые эффекторные белки T3SS из каждого из этих состояний путем обработки надосадочной жидкости культуры трихлоруксусной кислотой (TCA) и визуализации секретируемых белков с помощью SDS-PAGE. Наконец, относительная активность T3SS оценивается путем визуализации секретируемых белков с помощью окрашивания серебром и количественного определения относительных уровней эффекторных белков T3SS, называемых внешними белками Yersinia (Yops)10.
В анализах активности T3SS обычно используются специфические антитела для определения уровней эффекторного белка T3SS в надосадочной жидкости культуры. Тем не менее, антитела вестерн-блоттинга к эффекторным белкам T3SS часто не доступны в продаже. Поэтому особое внимание было уделено тому, чтобы окончательная визуализация активности T3SS в этом методе не требовала специфических антител, а вместо этого могла использовать окрашивание серебром, которое позволяет визуализировать все секретируемые белки. Хотя этот метод специально разработан и оптимизирован для Y. pseudotuberculosis, он может быть адаптирован и к другим видам бактерий, хотя точные условия среды и время инкубации могут варьироваться.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Подробная информация о реагентах, составе среды, последовательностях праймеров и оборудовании приведена в Таблице материалов. На рисунке 1 показан общий рабочий процесс эксперимента.
1. Приготовление посуды, промытой кислотой, и хелатных сред М9
ПРИМЕЧАНИЕ: Прежде чем начать, обратитесь к разделу материалов для получения точных реагентов и рецептов, которые будут использоваться. Среда M9 впервые была использована для анализа Yersinia T3SS в Cheng et al.11.
- Налейте 100 мл 6 Н HCl в стеклянную колбу объемом 250 мл.
ВНИМАНИЕ: HCl чрезвычайно опасен; Убедитесь, что при работе с этим веществом приняты соответствующие меры предосторожности. - Закройте горлышко стеклянной емкости стеклянной пробкой и осторожно поворачивайте колбу в течение 1 минуты, чтобы тщательно распределить HCl, периодически меняя направление.
- Утилизируйте 6 N HCl надлежащим образом.
- Промойте стеклянную емкость, добавив 100 мл деионизированного H2O, запечатайте горлышко, встряхивайте в течение 20 с, затем слейте воду.
- Повторите этап полоскания в общей сложности 3 раза.
- Дайте высохнуть на воздухе. Автоклав для стерилизации.
- Для хелатирования среды смешайте компоненты M9 с хелатирующим реагентом и перемешайте с помощью магнитной мешалки при комнатной температуре в течение ~18 часов. Процедить-простерилизовать и добавить MgSO4 до конечной концентрации 1 мМ.
2. Культивирование Y. pseudotuberculosis при различных уровнях железа и напряжении кислорода
- Нанесите полосу Y. pseudotuberculosis (в данном исследовании используется штамм IP2666pIB1) на агаровых планшетах Lysogeny Broth (LB) и инкубируйте при комнатной температуре.
ПРИМЕЧАНИЕ: Инкубация Yersinia при 37 °C, особенно в среде с низким содержанием кальция, приводит к активности T3SS, остановке роста и, в конечном итоге, к потере плазмиды для Yersinia virulence (pYV), которая кодирует T3SS12. Таким образом, в этом протоколе используется инкубация Yersinia при 26 °C до тех пор, пока не потребуется измерить активность T3SS. - Через 48 ч, после того как сформируются видимые колонии, ввести 4 мл среды М9, содержащей 0,2% глюкозы, 1 мг/л FeSO 4,7Н2 О и дополненной казаминокислотами (здесь именуемыми средами М9) из одной изолированной колонии и культурой в течение ночи при 26 °С с аэрацией при 250 об/мин в течение примерно 18 ч.
ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте стеклянную посуду, промытую кислотой, начиная со следующего шага и далее. - Субкультура в хелатные медиа M9, следуя следующим шагам.
ПРИМЕЧАНИЕ: Для всех последующих этапов используется среда М9 с 0,9% глюкозы, а не стандартными 0,2% глюкозы.- С помощью спектрофотометра измерьте оптическую плотность (OD600) ночной культуры.
- Разведите ночную культуру до значения OD600 0,1 в общей сложности 14 мл стерильной хелатной среды M9, содержащей 0,9% глюкозы и не содержащую FeSO4,7H 2O, в колбе объемом 250 мл с кислотной промывкой без добавления железа.
- Выдерживать в течение 8 ч при 26 °C с аэрацией при 250 об/мин.
- Субкультура на аэробную и анаэробную культуры параллельно.
- Измерьте наружный диаметр600 растущих культур.
- Для продолжения аэробной инкубации субкультуру выращивают до значения OD600 0,1 в 14 мл стерильной хелатной среды M9, содержащей 0,9% глюкозы и не содержащей FeSO4,7H 2O, в промытой кислотой колбе объемом 250 мл и культурой с аэрацией при 26 °C в течение 12 ч без добавления железа.
- Для анаэробного культивирования субкультуру со значением наружного диаметра600 0,1 в 14 мл стерильной хелатированной среды M9 поместить в две стеклянные пробирки, промытые кислотой. В первую пробирку добавьте стерилизованный фильтром (с использованием 0,22 мкм полиэфирсульфоновой мембраны) FeSO 4,7H2O до конечной концентрации 1 мг/л (называемый «высоким содержанием железа»). Во вторую пробирку добавьте FeSO4,7H 2O до конечной концентрации 0,01 мг/л (так называемая «низкое содержание железа»). Это можно сделать с помощью стокового раствора FeSO4.7H 2O в дозе 10 мг/мл. Обе пробирки анаэробно инкубировать в анаэробной камере при комнатной температуре в течение 12 часов.
ПРИМЕЧАНИЕ: 1 мг/л FeSO 4,7H 2O обеспечивает богатые железом условия для устойчивого роста Yersinia. И наоборот, добавление всего 0,01 мг/л FeSO 4,7H 2O к анаэробным культурам обеспечивает достаточный рост в анаэробных условиях, но все же способствует реакции на железоистое голодание, в то время как аэробные культуры выращивают в течение 12 ч в отсутствие добавления железа для стимуляции реакции железного голодания до стимуляции активности T3SS.
- Индуцирует активность системы секреции III типа.
- Переместите анаэробные культуры до 37 °C и продолжайте анаэробную инкубацию в течение 4 ч, чтобы индуцировать T3SS.
- Измерьте внешний диаметр600 аэробно растущей культуры.
- В двух промытых кислотой колбах субкультивируют аэробно растущие культуры до значения наружного диаметра600 0,2 на 14 мл стерильных хелатных сред М9. В первую колбу добавить стерилизованный фильтром FeSO4,7H 2O до конечной концентрации 1 мг/л. Во вторую колбу добавить FeSO4,7H 2O до конечной концентрации 0,01 мг/л. Инкубировать обе колбы с аэрацией при 26 °C при 250 об/мин в течение 2 ч.
- Через 2 ч перенесите аэробные культуры до 37 °C с аэрацией при 250 об/мин и инкубируйте в течение 4 ч, чтобы вызвать T3SS.
3. Осаждение трихлоруксусной кислотой (ТСА) эффекторных белков T3SS
- После завершения анаэробной инкубации измерьте внешний диаметр600 культур.
- Нормализуйте все анаэробные образцы для достижения одинаковой массы клеток (см. пример, приведенный в таблице 1). Для анаэробного культивирования обычно ожидайте значение наружного диаметра600 ~0,5 для культур с недостаточным содержанием железа и ~1 для культур, богатых железом. В этом случае используйте 6 мл культур с железным голоданием и 3 мл культур, богатых железом.
ПРИМЕЧАНИЕ: Оставшаяся культура может быть использована для других целей, таких как сбор общей РНК и использование количественной ПЦР для измерения стационарных уровней мишени мРНК (не описано здесь). - Переложите нормализованные объемы каждой культуры в пробирки объемом 15 мл.
- Для контроля эффективности осаждения секретируемого белка добавьте 4 мкл 0,5 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (БСА) в каждую пробирку.
- Гранулированные культуры при 3200 х г в течение 15 мин при 4 °C.
- Присоедините фильтр PVDF 0,22 мкм к шприцу объемом 10 мл и отфильтруйте надосадочную жидкость каждой гранулированной культуры в свежую пробирку объемом 15 мл.
ПРИМЕЧАНИЕ: Этот этап фильтрации сводит к минимуму вероятность переноса целых бактериальных клеток, что может привести к нежелательным цитоплазматическим белкам в образце. - Добавьте в каждый образец 10% от объема надосадочной жидкости 6,1 Н ТСА.
- Энергично вихрь в течение 1 мин. Инкубируйте пробирки на льду в холодном помещении при температуре 4 °C на ночь.
ПРИМЕЧАНИЕ: Продолжительность инкубации может быть оптимизирована в зависимости от необходимости. Всего 1 час инкубации может работать для состояний или штаммов, где секреция стабильна. - Повторите этапы сбора гранул и осаждения ТСА с аэробными культурами после завершения 4-часовой инкубации.
ПРИМЕЧАНИЕ: Нормализуйте аэробные культуры путем гранулирования объемов с эквивалентной клеточной массой. - Добавьте по 2 мл каждого образца в свежую пробирку объемом 2 мл и центрифугируйте при температуре 21 000 x g в течение 15 минут при 4 °C.
- Аспирируйте надосадочную жидкость с помощью вакуумной насадки, и будьте осторожны, чтобы не касаться дна или боковых сторон трубки.
ПРИМЕЧАНИЕ: Гранулу может быть трудно визуализировать, и она может выглядеть в виде дымки по всей длине трубки. - Повторяйте шаги 3.10 и 3.11 до тех пор, пока все содержимое каждой реакции осаждения не осаждается в одну пробирку объемом 2 мл. Это может занять три или четыре последовательных этапа центрифугирования, но позволяет концентрировать все секретируемые белки из каждого образца в пробирке объемом 2 мл.
- Чтобы промыть гранулы, аккуратно добавьте 1 мл ледяного 100% ацетона в каждую трубку. Во избежание потери пробы не суспендируйте повторно и не прикасайтесь к стенкам пробирки.
- Центрифугируйте образцы при концентрации 21 000 x g в течение 15 минут при 4 °C.
- Отсадите надосадочную жидкость и будьте осторожны, чтобы не касаться дна или боковых сторон трубки.
- Повторите шаги промывания ледяным ацетоном 3.13 и 3.14.
- После окончательной аспирации надосадочной жидкости откройте трубки и дайте грануле полностью высохнуть на стенде в течение примерно 1 часа.
- Добавьте 50 μL раствора FSB:DTT в каждый высушенный образец. Чтобы избежать потери белка, не применяйте повторную супсию.
- Тщательно оберните каждый образец в течение 1 минуты, убедившись, что раствор FSB:DTT покрывает стенки всей пробирки. Это можно оптимизировать, используя вихревую насадку, способную удерживать несколько трубок одновременно.
- Кипятите образцы при температуре 95 °C в течение 15 минут.
- Кратковременно центрифугируйте образцы в течение 30 с на максимальной скорости при комнатной температуре.
- Хранить при температуре -80 °C до дальнейшего использования.
4. SDS-PAGE и окрашивание серебром для визуализации эффекторных белков T3SS
- Загрузите 15 мкл каждого анаэробного образца и 10 мкл каждого аэробного образца в 12,5% гель SDS-PAGE вместе с 3 мкл коммерчески доступного неокрашенного стандарта в качестве лестницы.
- Запустите гель около 90 минут при 100 В. Эти настройки могут варьироваться в зависимости от используемого аппарата.
- Следуйте протоколу окрашивания серебра в соответствии с инструкциями производителя, в результате чего получится гель, как показано на рисунке 2.
5. Количественная оценка относительной активности T3SS
- Поместите гель в систему визуализации, убедившись, что все полосы, предназначенные для количественной оценки, находятся в кадре изображения.
Примечание: Молекулярная масса BSA составляет ~66 кДа, в то время как молекулярная масса эффекторного белка T3SS YopE составляет ~23 кДа. - В программном обеспечении выберите все полосы YopE по всем скважинам.
- Установите референсный диапазон YopE на соответствующий образец.
- Экспортируйте относительные количественные значения, рассчитанные программным обеспечением для всех диапазонов YopE.
- Вернувшись в программу, выберите все полосы BSA для всех скважин.
- Установите референсный канал BSA так, чтобы он был из того же образца, что и эталонный канал YopE.
- Экспортируйте относительные количественные значения, рассчитанные программным обеспечением для всех диапазонов BSA.
- Чтобы вычислить относительные уровни экспрессии YopE, разделите значение относительной величины YopE на значение относительной величины BSA для каждого образца.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Этот метод позволяет проводить относительное сравнение секретируемых Йоп в различных условиях относительно референсного условия, представляющего интерес. Общий рабочий процесс эксперимента представлен на рисунке 1. В таблице 1 показано, как нормализация клеточной культуры обычно происходит в случае каждого условия культивирования и объем ТСА, который будет добавлен к каждой надосадочной жидкости. Здесь представлены репрезентативные результаты с использованием дикого типа (WT...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
T3SS является важным фактором вирулентности у многих патогенных бактерий; Таким образом, разработка лабораторных методов для изучения его регуляции важна для понимания патогенеза и разработки потенциальных терапевтических средств1. Железо и кислород, как известно, являются важными сигналами хозяина, воспринимаемыми бактериальными патогенами для регуляции экспрессии T3SS5; Таким образом, данный метод представляет стратегию культивирования
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Графические изображения, созданные с использованием BioRender.com. Это исследование было поддержано грантом Национальных институтов здравоохранения (www.NIH.gov) R01AI119082.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 10 мл шприц с наконечником Luer-Lok | BD | 301029 | |
| 10x SDS Running Buffer | Домашняя | 0,25 М Трис основа, 1,92 М Глицин, 1% SDS в объеме 1 л | |
| 12,5% SDS-Page Гель | Домашняя культура | ||
| 15 мл Пробирки для культуры | Falcon | 352059 | Для начальной ночи |
| 15 мл пробирок Falcon | Falcom | 352196 | Для сбора надосадочной жидкости |
| 250 мл колбы | для культур Belco | 251000250 | |
| 500 мл Фильтрующая система | Corning | 431097 | |
| 6 Н раствор соляной кислоты | Fisher Scientific | 7732185 | |
| Ацетон | Fisher Chemical | A949-4 | 4 л |
| Bio Rad ChemiDoc MP Imaging Система | Bio Rad | Номер модели: Универсальная вытяжка III | |
| Пробирки для культивирования боросиликатного стекла | Fisherbrand | 14-961-34 | Для анаэробного культивирования |
| Chelex 100 Смола | Bio Rad | 142-1253 | |
| Chelex M9 +0,9% Глюкоза среда | домашнего производства | 6 г/л Na2HPO4, 3 г/л KH2PO4, 0,5 г/л NaCl, 1 г/л NH4Cl, 1% казаминокислот, <сильная>0,9% декстроза, 0,0005% тиамин, 5 г/л смолы Chelex 100. Перемешайте среду в течение 18 часов при комнатной температуре, отфильтруйте с помощью фильтрующего устройства Corning объемом 500 мл, затем добавьте MgSO4 для получения 1 мМ MgSO4 final solution | |
| Final Sample Buffer (FSB) | Домашнее производство | 0,1 M Tris-HCl, 4% SDS, 20% глицерина, 0,2% бромофенола Blue | |
| FSB: Решение DTT | Домашнее | FSB+0,2M | |
| DTT Image Lab программное обеспечение | Bio Rad | https://www.bio-rad.com/en-us/product/image-lab-software?ID=KRE6P5E8Z | программное обеспечение |
| Isotemp Heat Block | Fisher Scientific | 88860021 | |
| LB Agar Plates | Home made | 10 г триптона, 5 г дрожжевого экстракта, 10 г NaCl, 15 г агара в общем объеме 1 л. Автоклавный | |
| M9+0,2% глюкозный медиатор | домашний производства | 6 г/л Na2HPO4, 3 г/л KH2PO4, 0,5 г/л NaCl, 1 г/л NH4Cl, 1 мМ MgSO4, 1 мг/л FeSO47H2O, 1% казаминокислоты, <сильная>0,2% декстроза, 0,0005% тиамина | |
| Millex-GP PES 0,22 мкм фильтр для шприца | Millipore | SLGPR33RS | Для фильтрации FeSO47H2O |
| Millex-GV PVDF 0,22 мкм фильтр для шприца | Millipore | SLGVR33RS | Для надосадочной жидкости |
| Precision Plus Protein Unstained Standard | Bio Rad | 1610363 | |
| SDS-PAGE Gel Apparatus | Bio Rad | Номер модели: Mini PROTEAN Tetra Cell | |
| SilverXpress Набор для окрашивания серебра | Invitrogen | LC6100 | |
| The BellyDancer Shaker | IBI Scientific | BDRAA1155 | |
| раствор трихлоруксусной кислоты 6.1N | Sigma Aldrich | T0699 | |
| Виниловая анаэробная камера | Coy Lab Продукты | https://coylab.com/products/anaerobic-chambers/vinyl-anaerobic-chambers/#details | |
| qPCR Праймерные последовательности | |||
| yfeA forward - CAC AGT CAG CAG ACC TTA TCT T | |||
| yfeA reverse - GGC AGA CGG GAC ATT aat a | |||
| bfd forward - ccagcatcagccccatacag | |||
| bfd reverse - tggcttgtcggatgcacttc | |||
| yopE forward - CCATAAACCGGTGGTGAC | |||
| yopE reverse - CTTGGCATTGAGTGATACTG |
Ссылки
- Deng, W., et al. Assembly, structure, function regulation of type III secretion systems. Nat Rev Microbiol. 15 (6), 323-337 (2017).
- Springer International Publishing. Bacterial Type III Protein Secretion Systems. 427, Springer International Publishing. Cham. (2020).
- Schubert, K. A., Xu, Y., Shao, F., Auerbuch, V. The Yersinia type III secretion system as a tool for studying cytosolic innate immune surveillance. Annu Rev Microbiol. 74, 221-245 (2020).
- Cassat, J. E., Skaar, E. P. Iron in infection and immunity. Cell Host Microbe. 13 (5), 509-519 (2013).
- Singhal, R., Shah, Y. M. Oxygen battle in the gut: Hypoxia and hypoxia-inducible factors in metabolic and inflammatory responses in the intestine. J Biol Chem. 295 (30), 10493-10505 (2020).
- Marteyn, B., et al. Modulation of Shigella virulence in response to available oxygen in vivo. Nature. 465 (7296), 355-358 (2010).
- Rakin, A., Schneider, L., Podladchikova, O. Hunger for iron: the alternative siderophore iron scavenging systems in highly virulent Yersinia. Front Cell Infect Microbiol. 2, (2012).
- Lesic, B., Carniel, E. Horizontal Transfer of the high-pathogenicity island of Yersinia pseudotuberculosis. J Bacteriol. 187 (10), 3352-3358 (2005).
- Green, E. R., et al. Fis is essential for Yersinia pseudotuberculosis virulence and protects against reactive oxygen species produced by phagocytic cells during infection. PLOS Pathog. 12 (9), e1005898(2016).
- Cornelis, G. R. The Yersinia Ysc-Yop "Type III" weaponry. Nat Rev Mol Cell Biol. 3 (10), 742-753 (2002).
- Cheng, L. W., Anderson, D. M., Schneewind, O. Two independent type III secretion mechanisms for YopE in Yersinia enterocolitica. Mol Microbiol. 24 (4), 757-765 (1997).
- Straley, S. C. The low-Ca2+ response virulence regulon of human-pathogenic yersiniae. Microbial Pathog. 10 (2), 87-91 (1991).
- Balada-Llasat, J. -M., Mecsas, J. Yersinia has a tropism for B and T cell zones of lymph nodes that is independent of the type III secretion system. PLoS Pathog. 2 (9), e86(2006).
- Adams, W., Morgan, J., Kwuan, L., Auerbuch, V. Yersinia pseudotuberculosis YopD mutants that genetically separate effector protein translocation from host membrane disruption: YopD central region promotes Yop translocation. Mol Microbiol. 96 (4), 764-778 (2015).
- Hooker-Romero, D., et al. Iron availability and oxygen tension regulate the Yersinia Ysc type III secretion system to enable disseminated infection. PLOS Pathog. 15 (12), e1008001(2019).
- Balderas, D., et al. Genome scale analysis reveals IscR directly and indirectly regulates virulence factor genes in pathogenic Yersinia. mBio. 12 (3), e00633-00721 (2021).
- Bearden, S. W., Perry, R. D. The Yfe system of Yersinia pestis transports iron and manganese and is required for full virulence of plague. Mol Microbiol. 32 (2), 403-414 (1999).
- Zhou, D., et al. Global analysis of iron assimilation and fur regulation in Yersinia pestis: Global analysis of iron assimilation and fur regulation in Yersinia pestis. FEMS Microbiol Lett. 258 (1), 9-17 (2006).
- Wijerathne, H., et al. a new class of [2Fe-2S] protein that functions in bacterial iron homeostasis, requires a structural anion binding site. Biochemistry. 57 (38), 5533-5543 (2018).
- Bearden, S. W., Staggs, T. M., Perry, R. D. An ABC transporter system of Yersinia pestis allows utilization of chelated iron by Escherichia coli SAB11. J Bacteriol. 180 (5), 1135-1147 (1998).
- Miller, H. K., et al. IscR is essential for Yersinia pseudotuberculosis type III secretion and virulence. PLoS Pathog. 10 (6), e1004194(2014).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
