Представлен протокол операции остеотомии бедренной кости с применением фиксации внутренней пластины у зрелых аксолотлей. Процедура может быть использована для проведения сравнительных исследований по регенерации конечностей и заживлению переломов у водных амфибий.
Методическая статья
Стабилизация остеотомии бедренной кости с фиксацией пластины при Ambystoma mexicanum
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Аксолотль (Ambystoma mexicanum) является перспективным модельным организмом для регенеративной медицины благодаря своей замечательной способности регенерировать утраченные или поврежденные органы, включая конечности, мозг, сердце, хвост и другие. Исследования аксолотлей проливают свет на клеточные и молекулярные пути, управляющие активацией предшественников и восстановлением тканей после травмы. Эти знания могут быть применены для облегчения заживления травм, неспособных к регенерации, таких как несращение костей. В действующем протоколе описана стабилизация остеотомии бедренной кости с помощью системы фиксации внутренней пластины. Процедура была адаптирована для использования у водных животных (аксолотль, Ambystoma mexicanum). Использовались аксолотли длиной ≥20 см от рыла до кончика хвоста с полностью окостеневшими, сопоставимыми по размеру бедренными костями, при этом особое внимание уделялось позиционированию и фиксации пластин, а также послеоперационному уходу. Этот хирургический метод позволяет обеспечить стандартизированную и стабилизированную фиксацию кости и может быть полезен для прямого сравнения с регенерацией конечностей аксолотля и аналогичными исследованиями заживления костей у амфибий и млекопитающих.
Введение
Аксолотль (Ambystoma mexicanum) является важной моделью для регенерации органов, включая хвост, спинной мозг, головной мозг, сердце, жабры и конечности 1,2,3,4,5. Детальные исследования регенерации конечностей аксолотля выявили механизмы дедифференцировки клеток и формирования пула стволовых клеток – бластемы – в месте ампутации. Благодаря способности клеток бластамы реконструировать все отсутствующие части конечностей, включая узорчатый скелет 6,7, аксолотль представляется привлекательным модельным организмом для исследований заживления костей. В последнее время несколько исследований были сосредоточены на биологии костей у аксолотлей, описывая морфологию скелета, клеточный состав и динамику окостенения.
У млекопитающих установлено, что процесс заживления костей в длинных костях происходит путем эндохондрального окостенения и состоит из нескольких стадий: гематома, грануляционная ткань и образование мягкой каллуса, окостенение мозоли в твердую мозоль и тканую кость, а такжеремоделирование кости8. Недавнее исследование показало, что подобные стадии могут наблюдаться при заживлении костей аксолотлей9.
До сих пор переломы аксолотлей изучались в нестабилизированной системе, при которой кость просто разрезается ножницами для иридэктомии. Большие переломы образовались в зеугоподе, где остеотомия выполняется на одной из костей, в то время как другая служит опорой10,11. В отличие от этого, переломы обычно изучаются у млекопитающих, включая крыс и мышей, с использованием надежных систем фиксации, таких как интрамедуллярный штифт и пластины для выравнивания костей, для контроля размера перелома и обеспечения выравнивания костей.
Таким образом, метод направлен на обеспечение стабилизированной и равномерной фиксации бедренной кости аксолотля до остеотомии. Для того, чтобы сделать исследования аксолотлей более сопоставимыми с исследованиями млекопитающих, включая мышей и человека, рассматривали интрамедуллярный штифт12, фиксатор внешней пластины13,14 и внутреннюю костную выравнивающую пластину 15,16,17. Было показано, что последний обеспечивает правильную фиксацию кости и позволяет создать зазор определенного размера с помощью одного или двух разрезов пилой Gigly определенного диаметра. Поскольку аксолотли представляют собой водные личинки Ambystoma mexicanum, внешний фиксатор мог вызвать послеоперационные осложнения из-за открытой раны и контакта с водой. Поскольку у аксолотлей не развиваются вторичные центры окостенения даже на очень поздних стадиях их развития (20 лет и18), и, таким образом, стандартный интрамедуллярный гвоздь, используемый у мышей, не может предотвратить прокол эпифизов, было принято решение применить метод фиксации внутренней пластиной к большим аксолотлям. У крупных аксолотлей размер бедренной кости и степень окостенения напоминают таковые у взрослой мыши, что позволяет проводить среднедиафизарную остеотомию с фиксацией титановой пластиной1.
Размер разрыва во многом определяет динамику заживления и результат. Например, у мышей стабилизированные переломы размером 0,25 мм заживают в основном за счет внутримембранозного окостенения из-за их малых размеров и жесткой стабилизации; перелом 0,7 мм заживает путем эндохондрального окостенения, с образованием хрящевой мозоли вокруг перелома; Большие дефекты, такие как дефекты критического размера 3,5 мм, не заживают полностью и поэтому используются для моделирования несращения перелома кости16. В этом исследовании был разработан протокол фиксации пластины бедренной кости аксолотля до остеотомии на примере разрыва 0,7 мм с конечной целью сравнения заживления кости аксолотля с заживлением кости умыши9.
После остеотомии переломы подверглись процессу эндохондрального окостенения, хотя и медленнее, чем у мышей, возможно, из-за водного образа жизни аксолотлей и более медленной скорости деления клеток. В представленном здесь методе показана остеотомия с зазором 0,7 мм с жесткой фиксацией пластины; Однако потенциально возможны другие размеры зазоров и полугибкие фиксаторы, а также пластины из разных материалов. В целом, представленный здесь метод может быть использован для стандартизированной фиксации кости и будет полезен для исследований, сравнивающих регенерацию конечностей аксолотлей с заживлением кости или изучения заживления костей у аксолотлей в различных условиях для обеспечения стандартизированной фиксации переломов.
Протокол
Следующая процедура была выполнена с одобрения магистрата Вены (GZ: MA 58-65248-2021-26). В возрасте 5-8 лет, ≥ кончиком рыла до хвоста длиной 20 см (морда до кончика хвоста) длинные аксолотли (Ambystoma mexicanum) использовались для хирургии переломов и ампутаций. Для проведения операций использовались как мужчины, так и женщины. Аксолотли были выведены в учреждении НИИ молекулярной патологии. Боль и риск инфекций контролировались с помощью надлежащих анальгетиков и антибиотиков, чтобы обеспечить успешный исход. Реагенты и оборудование, использованные для исследования, перечислены в Таблице материалов.
1. Подготовка животных
- Купать животное в 0,03% растворе бензокаина в течение примерно 15-20 мин до тех пор, пока не будет достигнута полная седация и не будет рефлекторного движения при касании конечностей пинцетом.
- Поместите животное брюшной стороной вниз на влажные бумажные полотенца, смоченные в 0,03% растворе бензокаина, и накройте его бумажными полотенцами, пропитанными бензокаином. Кожа водных животных, таких как аксолотли, чувствительна к высыханию, поэтому важно покрывать поверхность тела, чтобы предотвратить обезвоживание и обеспечить кожное (кожное) дыхание.
- Вытяните заднюю конечность для операции с помощью кольцевых щипцов. Не применяйте дезинфицирующие реагенты, такие как этанол, так как кожа аксолотля чувствительна к химическим веществам и легко раздражается. Вместо этого используйте 0,7x PBS (A-PBS) с 50 Ед/мл пенициллина и 20 мкг/мл стрептомицина для очистки конечности, а затем для орошения костей после пиления.
ПРИМЕЧАНИЕ: Инфекция, как правило, не является проблемой для операций, проводимых на аксолотлях. Тем не менее, из-за водного характера этих животных и наложения швов на поверхность кожи, мы рекомендуем использовать антибиотики для предотвращения любого загрязнения места операции.
2. Хирургия
ПРИМЕЧАНИЕ: Стерилизуйте все хирургические инструменты. Для этой цели подходят распространенные методы стерилизации, такие как термическая стерилизация, автоклавирование и промывка в 70% этаноле с последующим тщательным удалением остатков алкоголя. Если вы работаете с несколькими животными, стерилизуйте инструменты между ними, используя стерилизатор с горячими шариками или 70% этанол.
- Сделайте боковой продольный разрез (1,5-2 см) скальпелем над бедренной костью, охватывающий все бедро в верхней задней конечности. Для того чтобы сделать это, пальпируйте кость перед разрезанием кожи.
- Аккуратно сместите мышцы и нервы с места операции, не разрезая. Используйте изогнутые щипцы, чтобы сделать это эффективно.
- Аккуратно подложите изогнутые щипцы под бедренную кость, чтобы обнажить ее для операции.
- Поместите жесткую фиксирующую пластину с 4 отверстиями диаметром 7,75 мм вместе с диафизом бедренной кости, избегая прикосновения к суставам, и закрепите ее в выровненном положении щипцами.
- Используйте четыре титановых винта диаметром 2 мм, чтобы прикрепить кость к пластине.
ПРИМЕЧАНИЕ: Винты, используемые в этом протоколе, имеют сложную конструкцию и состоят из 4 частей: основная часть (будет ввинчена в кость), головка винта (позволяет удалить винты и пластину с помощью квадратного ключевого ключа), более узкая шейка (используется в качестве точки перелома после того, как винт затянут в кости) и винтовая ручка (используется для крепления к отвертке и направляющему устройству пилы). - Важен порядок крепления винтов. Начните сначала с внутренних винтов, а затем с двух внешних винтов, чтобы убедиться, что пластина совмещена с осью кости. Используйте ручное сверло, чтобы создать первое отверстие в кости для легкого введения винта, за которым следует установка1-го винта. Сверлите в середине окружности кости, чтобы избежать более тонкой кости с одной стороны, что может привести к спонтанному перелому кости. Используйте орошение 0,7x PBS + 1% Pen/Strep во время бурения. Не ломайте ручку1-го (по желанию:1-го и2-го) винта.
- Наденьте направляющее устройство пилы на1-й (опционально:1-й и2-й ) винт (винты) и совместите его с костью и пластиной.
ПРИМЕЧАНИЕ: В этом протоколе пластина, винты, устройство для направления пилы и пила поставляются одним и тем же производителем и оптимизированы для подгонки друг к другу. Направляющее устройство пилы может быть разных размеров, чтобы быть совместимым с пластинами и размерами пилы. - С помощью направляющего устройства пилы просверлите и вставьте остальные винты. Обеспечьте выравнивание пластины с косточкой. Обломайте ручки саморезов.
- Поместите под бедренную кость кусок полиэтиленовой пленки (6-7 мм на 4-5 см), стерилизованный путем протирания 70% этанолом, а затем автоклавный или термически стерилизованный (140 °C в течение 4 часов), чтобы предотвратить повреждение мягких тканей в процессе остеотомии.
ПРИМЕЧАНИЕ: Для этой цели можно использовать кусок полиэтиленовой пленки, отрезанный от пакета для термической стерилизации. - Поместите проволочную пилу Gigly между костью и защитной пленкой.
- Разрежьте кость с помощью канатной пилы Gigly 0,66 мм, создав один разрез 0,7 мм в бедренной кости. Используйте постоянное орошение 0,7x PBS + 1% Pen/Strepping во время пиления, чтобы свести к минимуму повреждение тканей и трение.
- Снимите пилу и направляющую пилы и с помощью отвертки отломите рукоятки винтов от винтов.
- Снимите защитную пленку и орошите место операции 0,7x PBS + 1% Pen/Strep.
- Покройте верхнюю часть пластины и шурупов стерильным костным пчелиным воском, чтобы защитить кожу и мышцы от раздражения краями винтов.
- Поместите мышцы и кожу поверх костного пчелиного воска.
- Закройте место разреза синтетическим (полипропиленовым/полиэтиленовым) швом 7.0 с помощью простых прерывистых швов. Синтетический шов используется для минимизации загрязнения бактериями и грибками, переносимыми водой.
3. Послеоперационное ведение
- Чтобы разбудить животное, поместите его в резервуар с пресной искусственной прудовой водой, дополненной 50 ЕД/мл пенициллина, 20 мкг/мл стрептомицина и анальгетика Буторфанола (0,5 мг/л воды).
- Наблюдайте, как животное начинает двигать жабрами, делать шаги и плавать - обычно в течение 1 часа после операции.
- Держите животное в течение 3 дней в искусственной воде пруда с 50 ЕД/мл пенициллина и 20 мкг/мл стрептомицина, прежде чем вернуть его в резервуар для содержания. Чтобы обеспечить обезболивание, добавьте Буторфанол (0,5 мг/л воды).
- Следите за тем, чтобы швы оставались на месте и происходило правильное заживление ран.
Результаты
Описанная здесь хирургическая процедура (Рисунок 1) длится от 20 до 30 минут и требует участия хирурга и ассистента. По желанию можно использовать бинокулярный диссекционный микроскоп или систему лупы.
Рисунок 1: Схема хирургической процедуры и экспериментальная установка. (A) Бедренная кость обнажается путем рассечения кожи и вытягивания мышц из операционного поля. (B) Титановая пластина выравнивается с бедренной костью. (C)1-е внутреннее отверстие создается с помощью ручного сверла. (D) Винт вставляется в1-е отверстие. (E) Направляющая пилы и дрели вставляется и прикрепляется к рукоятке1-го винта. (F) Остальные винты крепятся в указанном порядке. (G) Пила и направляющая для сверла аккуратно снимаются, а ручки винтов ломаются при повороте отвертки из-за более высокой жесткости кости по сравнению с шейкой винта. (H) Предохранительная пленка и пила Gigly помещаются под кость. (I) Остеотомия проводится при постоянном орошении места разреза. (J) Головки винтов покрываются стерильным костяным пчелиным воском перед заменой мышц и закрыванием кожи швами. (D,E,F): цифры указывают на последовательность, в которой просверлены отверстия и вставлены винты. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
Особое внимание следует уделить этапам выравнивания пластины по отношению к кости и креплению пластины (Рисунок 2). Различия в возрасте аксолотлей приводят к небольшим различиям в размере, форме и степени окостенения бедренной кости. Таким образом, в некоторых случаях было сложно найти хорошее положение пластины, чтобы обеспечить достаточно места для винтового крепления. В общей сложности неудача фиксации наблюдалась у 23,5% животных, что могло быть результатом более узких или менее окостенелых костей у более молодых животных (рис. 3). Неудача фиксации привела к смещению остеотомизированной кости. Это определялось наличием оторванных винтов, смещением костных отломков со смещением от оси кости на >20° или выраженным боковым смещением. В то время как первые могут наблюдаться при сборе образцов, другие могут быть не очевидны до тех пор, пока не будет проведен анализ микрокомпьютерной томографии. В то время как в правильно выровненных конечностях грануляционная ткань располагалась в разрыве через 3 недели после операции, в смещенных образцах она казалась намного больше, возможно, в попытке стабилизировать кость.
Рисунок 2: Обзор хирургической процедуры и последующего действия животного с остеотомией левой задней конечности. (A) Показаны основные этапы операции: обнажение бедренной кости, правильное выравнивание титановой пластины, использование пильной направляющей для создания отверстий в кости с помощью ручного сверла и наложение винтов, использование защитной пленки и пилы (желтая стрелка) для остеотомии, Перелом бедренной кости на 0,7 мм (белая стрелка), покрытие головок винтов стерильным костным пчелиным воском (фиолетовая стрелка) и конечный результат с закрытой конечностью. (В) Животное после операции. Стрелкой отмечена левая задняя конечность, где была проведена операция остеотомии. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
Использование стерильного костного пчелиного воска перед наложением швов на кожу (рис. 2) уменьшило послеоперационное повторное открытие кожи над фиксирующей пластиной. Конечность оставалась функциональной и могла использоваться для стояния и ходьбы вскоре после удаления анестезии.
Рисунок 3: Репрезентативные результаты остеотомии с фиксацией пластины аксолотля. (A) Микрокомпьютерная томография интактных и сломанных бедренных костей. Обратите внимание на разрыв в кости через 3 недели после перелома. У 23,5% конечностей наблюдалась неудачная фиксация, что приводило к смещению костей. В фиксированных образцах твердая мозоль формируется через 6-9 месяцев после перелома. (B) Сафранин О/светло-зеленое окрашивание неповрежденных и сломанных бедренных костей. Обратите внимание на разрыв с грануляционной тканью в кости через 3 недели после перелома. Через 6 месяцев после перелома твердая мозоль состоит из сплетенной кости и хряща. Масштабные линейки: 1 мм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Микрокомпьютерная томография и гистологический анализ (окрашивание Safranin O/Light Green) позволили визуализировать положение костных отломков и размер разрыва перелома, а также состояние заживления кости. Данные микрокомпьютерной томографии были получены с номинальным разрешением 10,05 мкм на коммерчески доступном сканере образцов и проанализированы с помощью совместимого программного обеспечения (см. Таблицу материалов), как описано в Polikarpova et al.9. В отличие от млекопитающих, у которых перелом того же размера (0,7 мм) закрывается хрящевой и костной мозолью через 3-5 недель после операции, у аксолотлей через 3 недели после операции мозоли не наблюдалось. Как правило, хрящевая мозоль была видна через 3 месяцапосле операции, а окостенелая костная мозоль - через 6 месяцев после операции (рис. 3).
Обсуждение
Описанный в настоящее время метод фиксации бедренной пластины и остеотомии позволяет применять его у водных животных, таких как Ambystoma mexicanum (аксолотль). Этот хирургический метод недавно был использован для сравнения заживления переломов и регенерации конечностей у аксолотлей с заживлением переломов у мышей9. Как и у мышей, фиксирующая пластина с 4 отверстиями может быть прикреплена к кости с помощью саморазрушающихся винтов, а пила Gigly может быть использована для создания перелома равномерного размера15. Фиксация пластины способствует удержанию размера промежутка и обеспечивает выравнивание костных фрагментов. Метод анальгезии также был оптимизирован за счет применения ванн с буторфанолом, поскольку он менее инвазивный (по сравнению с инъекциями бупренорфина), который, как сообщается, не влияет на заживление костей (как в случае с карпрофеном). Однако, поскольку мало что известно о лечении боли при амфибиях в целом и послеоперационной боли в частности, использование упреждающего обезболивающего лечения может быть предложено в качестве дальнейшего усовершенствования процедуры. В данном случае адаптацию протоколов, использованных у других видов амфибий, можно считать19. Для дальнейшей объективной оценки состояния здоровья животного после операции рекомендуется разработка и применение специальных оценочных листов для определения вмешательства и конечных точек для человека.
В отличие от способа, описанного для мыши16, перед остеотомией для защиты подлежащих тканей используется пластиковая пленка. Кроме того, из-за водной природы и менее выраженной мускулатуры конечностей, аксолотли требовали защитного пластыря из пчелиного воска поверх пластины и винтов, а также особое внимание пришлось уделить использованию синтетических кожных швов, так как на рассасывающихся швах собирались биопленки (на основе полиглактина 910). Пенициллин-стрептомицин используется в рамках послеоперационного лечения для предотвращения загрязнения раны и швов.
Метод был оптимизирован для 5-8-летних аксолотлей длиной ≥20 см от морды до хвоста и, таким образом, ограничен крупными, довольно старыми животными. Это также может быть причиной более медленного, чем у млекопитающих, заживления костей из-за более низких темпов пролиферации клеток у таких старых животных. Тем не менее, это может быть полезно, если нужно решить более тонкие этапы заживления костей20. Еще одной важной особенностью метода является коммерческий характер основных расходных материалов, используемых в протоколе: фиксирующей пластины, винтов, пилы Gigly. Благодаря оптимизированной совместимости этих устройств создаются костные дефекты надежного размера и расстояния от костных концов. В действующем протоколе описано наложение титановой металлической пластины на кости аксолотля. Для мышей были разработаны пластиковые пластины PEEK для облегчения микрокомпьютерной томографии образцов17. Пластины PEEK у аксолотлей также были протестированы с аналогичными результатами; Тем не менее, они могут быть применены только у крупных животных из-за немного большего объема пластиковых фиксирующих пластин по сравнению с металлическими пластинами.
В этом исследовании мы использовали животных в возрасте 5-8 лет и наблюдали неудачу фиксации в 23,5% всех операций, с более высокой частотой неудач у более молодых животных. Таким образом, мы рекомендуем использовать более старых животных с более высокой степенью окостенения костей. Частота неудач не зависела от пола; Таким образом, оба пола одинаково квалифицированы. Для планирования размера выборки следует рассчитать примерно 20% потерь выборки из-за неблагоприятного исхода. Точное количество животных зависит от плана эксперимента и количества анализируемых условий; Тем не менее, рекомендуемое минимальное количество животных в группе должно составлять 5+20% = 6 животных.
В целом, этот метод дает значительное улучшение по сравнению с ранее использовавшимися операциями без фиксации или с фиксацией соседней кости. Более того, с помощью этого метода можно изучать крупных аксолотлей, которые имеют кости, схожие по размеру и созреванию с теми, которые использовались в исследованиях на мышах. Это важно, так как микрокомпьютерная томография возможна только у крупных аксолотлей из-за степени окостенения.
Этот метод является важным достижением в этой области, поскольку он позволяет напрямую сравнивать регенерацию конечности аксолотля с заживлением переломов, с контролируемым размером разрыва и правильным выравниванием костей (в 76,5% выполненных операций). Кроме того, с помощью пластиковых фиксирующих пластин PEEK можно использовать микрокомпьютерную томографию и рентген для оценки процесса заживления костей. Наконец, описанная здесь операция может быть адаптирована для других водных амфибий, таких как тритоны и лягушки, что еще больше облегчает межвидовые исследования заживления переломов костей.
Раскрытие информации
Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.
Благодарности
Авторы хотели бы поблагодарить Сабину Штумпп за отличную техническую поддержку и Лидию Грёссер за помощь в проведении операций. Это исследование финансировалось Австрийским научным фондом [Hertha Firnberg Fellowship number T-1219], ERC [Advanced Grant, 742046 RegGeneMems], DFG [CRC 1444].
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0,66 мм Канатная пила Gigly | RISystem | RIS.590.120 | |
| 7.0 Optilene шовный материал | Браун | C3090538 | |
| Бензокаин | Sigma-Aldrich | E1501 | разбавить до 0,03% перед применением |
| Буторфанола (Бутомидор 10 мг/мл) | Richter Pharma AG-разбавить | до 0,5 мг/л перед использованием | |
| сверла 0,30 мм | RISystem | RIS.590.200 | |
| Dumont #5 Щипцы - стандарт/Inox | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Ручная дрель | RISystem | RIS.390.130 | лучше иметь не менее 3 штук |
| Микро КТ анализатор данных | Bruker, Billerica, MA, США | SkyScan NRecon программное обеспечение | |
| Micro CT сканер образцов | Bruker, Billerica, MA, США | SkyScan 1172 | |
| Moria MC31b Щипцы для радужной оболочки глаза - гладкие, изогнутые, 10 см | Инструменты для тонкой науки | 11373-12FST | 2 шт. |
| MouseFix Drill-& Направляющая для пилы 1,75 мм, жесткий | RISystem | RIS.301.102 | |
| MouseFix пластина 4 отверстия, жесткий | RISystem | RIS.401.110 | |
| MouseFix винт, L = 2,00 мм | RISystem | RIS.401.100 | нужно 4 на кость |
| Узкоспециализированные щипцы | VWR | FSCI11002-12 | |
| пенициллин/стрептомицин | Gibco | 15140-122 | |
| Кольцевые щипцы | Fine Science Tools | 11103-09 | |
| скальпель #15 | B Braun, Thermo Fischer Scientific | 5518032 | |
| Квадратный ключ 0,50 мм | RISystem | RIS.590.111 | |
| Стерильный костный воск, 2,5 г | Ethicon, Johnson & Johnson | W810 | |
| Студенческие тонкие ножницы - прямые/11,5 см | Инструменты для тонкой науки | 91460-11 |
Ссылки
- Amamoto, R., et al. Adult axolotls can regenerate original neuronal diversity in response to brain injury. Elife. 5, 13998(2016).
- Butler, E. G., Ward, M. B. Reconstitution of the spinal cord following ablation in urodele larvae. J Exp Zool. 160 (1), 47-65 (1965).
- Echeverri, K., Tanaka, E. M. Ectoderm to mesoderm lineage switching during axolotl tail regeneration. Science. 298 (5600), 1993-1996 (2002).
- Vargas-Gonzalez, A., Prado-Zayago, E., Leon-Olea, M., Guarner-Lans, V., Cano-Martinez, A. Myocardial regeneration in Ambystoma mexicanum after surgical injury. Arch Cardiol Mex. 75 (3), S321-S329 (2005).
- Vieira, W. A., Wells, K. M., McCusker, C. D. Advancements to the axolotl model for regeneration and aging. Gerontology. 66 (3), 212-222 (2020).
- Song, F., Li, B., Stocum, D. L. Amphibians as research models for regenerative medicine. Organogenesis. 6 (3), 141-150 (2010).
- McCusker, C., Bryant, S. V., Gardiner, D. M. The axolotl limb blastema: Cellular and molecular mechanisms driving blastema formation and limb regeneration in tetrapods. Regeneration (Oxf). 2 (2), 54-71 (2015).
- Einhorn, T. A., Gerstenfeld, L. C. Fracture healing: Mechanisms and interventions). Nat Rev Rheumatol. 11 (1), 45-54 (2015).
- Polikarpova, A., et al. The specialist in regeneration-the Axolotl-a suitable model to study bone healing. NPJ Regen Med. 7 (1), 35(2022).
- Chen, X., et al. The axolotl fibula as a model for the induction of regeneration across large segment defects in long bones of the extremities. PLoS One. 10 (6), e0130819(2015).
- Cosden-Decker, R. S., Bickett, M. M., Lattermann, C., MacLeod, J. N. Structural and functional analysis of intra-articular interzone tissue in axolotl salamanders. Osteoarthritis Cartilage. 20 (11), 1347-1356 (2012).
- Williams, J. N., Li, Y., Valiya Kambrath, A., Sankar, U. The generation of closed femoral fractures in mice: A model to study bone healing. J Vis Exp. (138), e58122(2018).
- Cheung, K. M., et al. An externally fixed femoral fracture model for mice. J Orthop Res. 21 (4), 685-690 (2003).
- Jiang, S., Knapstein, P., Donat, A., Tsitsilonis, S., Keller, J. An optimized protocol for a standardized, femoral osteotomy model to study fracture healing in mice. STAR Protoc. 2 (3), 100798(2021).
- Matthys, R., Perren, S. M. Internal fixator for use in the mouse. Injury. 40, Suppl 4 S103-S109 (2009).
- Manassero, M., et al. Establishment of a segmental femoral critical-size defect model in mice stabilized by plate osteosynthesis. J Vis Exp. (116), e52940(2016).
- Gunderson, Z. J., Campbell, Z. R., McKinley, T. O., Natoli, R. M., Kacena, M. A. A comprehensive review of mouse diaphyseal femur fracture models. Injury. 51 (7), 1439-1447 (2020).
- Riquelme-Guzman, C., et al. Postembryonic development and aging of the appendicular skeleton in Ambystoma mexicanum. Dev Dyn. 251 (6), 1015-1034 (2022).
- Gentz, E. J., et al. Medicine and surgery of amphibians. ILAR J. 48 (3), 255-259 (2007).
- Lang, A., et al. Collagen I-based scaffolds negatively impact fracture healing in a mouse-osteotomy-model although used routinely in research and clinical application. Acta Biomater. 86, 171-184 (2019).
Перепечатки и разрешения
