Методическая статья

Протокол эксплантации культур IDH1-мутантных диффузных низкодифференцированных глиом

DOI:

10.3791/67260

⸱

9 мая 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institut de Génomique Fonctionnelle, Université de Montpellier, CNRS, INSERM, 2Department of Neurosurgery, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University of Chongqing, 3Department of Neurosurgery, Gui de Chauliac Hospital, Montpellier University Medical Center, 4Jingfeng laboratories of Chongqing

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

IDH1-мутантные диффузные низкодифференцированные глиомы - это редкие опухоли, которые трудно культивировать. Мы представляем простой, неферментативный метод экспланта, который сохраняет экспрессию белка IDH1-мутанта и поддерживает культуры в течение нескольких месяцев. Важно отметить, что этот метод работает с криоконсервированными опухолями, предлагая ценный ресурс для исследования глиомы.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Диффузные глиомы, наиболее распространенные первичные опухоли головного мозга, классифицируются на низкие и высокие степени на основе гистопатологических критериев и генетических мутаций. Диффузные глиомы низкой степени злокачественности составляют подмножество, преимущественно поражающее молодых людей и предрасполагающее к глиомам высокой степени злокачественности. Существует два основных типа диффузных глиом низкой степени злокачественности: астроцитомы и олигодендроглиомы, каждая из которых характеризуется различными генетическими и гистологическими особенностями. Эти опухоли характерно демонстрируют мутировавший вариант метаболического фермента IDH1, нарушающий клеточную дифференцировку. Они гетерогены и включают в себя как пролиферативные стволовые клетки, так и более дифференцированные, спокойные глиальные клетки.

Специфичные для пациента модели опухолей in vitro обладают значительным потенциалом для раскрытия онкогенных механизмов и подбора лекарств для персонализированной терапии. Тем не менее, отсутствие надежных моделей in vitro, специально предназначенных для IDH1-мутантных низкодифференцированных глиом, препятствует фундаментальным и трансляционным исследованиям. В данной работе мы представляем простой метод культивирования IDH1-мутантных опухолей в виде эксплантов в определенных средах без необходимости ферментативной диссоциации. Эти экспланты могут поддерживаться в течение длительного времени, поддерживая экспрессию белка IDH1-мутанта, а также маркеров для клеток-предшественников олигодендроцитов, таких как ASCL1 (MASH1), OLIG1 и OLIG2, и для астроцитов (GFAP, SOX9). Они также могут быть установлены из замороженных опухолей в ДМСО. Эти культуры могут служить ценной платформой для скрининга лекарств, видеомикроскопии и генных исследований, тем самым способствуя прогрессу в понимании и лечении этих сложных опухолей. Они также обладают потенциалом для получения IDH1-мутантных клеточных линий.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Диффузные глиомы являются наиболее частыми первичными опухолями головного мозга. Эти опухоли в настоящее время неизлечимы, несмотря на очень интенсивное лечение (хирургия, радио и химиотерапия)1. Все больше доказательств подтверждают гипотезу о том, что глиомагенез происходит из взрослых стволовых или глиальных клеток-предшественников, находящихся в классе brain2. Хотя глиобластомы представляют собой наиболее агрессивный тип, также распространены диффузные низкодифференцированные глиомы (DLGG, опухоли 2 степени) (15% диффузных глиом)1,3. DLGG растут медленно и мигрируют по трактам белого вещества, что является отличительной чертой этого "диффузного" класса новообразований4. Эти DLGG очень часто рецидивируют, несмотря на лечение, в конечном итоге прогрессируя до злокачественных опухолей высокой степени злокачественности (степени 3 и 4)5.

DLGG характеризуются миссенс-мутацией в гене изоцитратдегидрогеназы 1 или 2 (IDH1 или IDH2), приводящей к аберрантному производству онкометаболита 2-гидроксиглутарата (2HG). Это нарушает дифференцировку клеток из-за эпигенетической дисрегуляции6. IDH1-мутантные глиомы далее классифицируются на подтипы: астроцитомы обычно имеют мутации в ATRX и P53, в то время как олигодендроглиомы характеризуются делециями 1p19q7. Эти опухоли демонстрируют гетерогенность опухолевых клеток. Секвенирование РНК одиночных клеток и иммунохарактеристика выявили разнообразную популяцию опухолевых клеток, демонстрирующих фенотипы, подобные стволовым клеткам, астроциты и олигодендроциты, в пределах этих опухолей8,9.

В отличие от глиобластомы, которая выигрывает от легкодоступных, долгосрочных культур и клеточных линий, существует заметный дефицит клеточных инструментов, предназначенных для исследования IDH1-мутантных опухолей1. Это представляет собой значительное препятствие для продвижения терапевтических разработок и углубления нашего понимания IDH1-мутантного глиомагенеза и прогрессирования заболевания. Традиционные клеточные линии, выращенные в сыворотке крови, хотя и используются давно, неадекватно реплицируют исходные опухоли, демонстрируя измененные транскрипционные профили. В качестве альтернативы, условия культивирования без сыворотки, будь то в 2D или 3D моделях опухолей, более эффективно сохраняют транскрипционные профили опухолевых клеток и их фенотипы in vivo, такие как инвазия в нормальную ткань мозга10,11.

Кроме того, краткосрочные клеточные культуры, полученные из хирургического образца пациента, сохраняют молекулярный профиль и клеточное разнообразие опухоли, тем самым лучше представляя биологические особенности опухолей по сравнению с клеточными линиями12. В данной работе мы представляем простой неферментативный метод культивирования диффузной культуры глиом низкой степени злокачественности IDH1-мутант в качестве эксплантов, полученных из свежих или замороженных резекций пациентов, с целью удовлетворения потребности в улучшенных моделях in vitro для исследований глиомы и терапевтических разработок. Они также обладают потенциалом для получения IDH1-мутантных клеточных линий.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Фрагменты опухоли, используемые в этом протоколе, были получены из хорошо охарактеризованной и этически одобренной коллекции, с согласия пациента. Исследование проводилось в рамках проекта «Глиомакульт: характеристика и первичные культуры низкодифференцированных глиом» (проект No. RECH/P722/1-5) и был одобрен научным советом биобанка опухолей 28 августа 2023 года.

1. Подготовка культуральных пластин

ПРИМЕЧАНИЕ: Выполняйте эти шаги под ламинарным колпаком для культуры стерильных тканей.

  1. Не менее чем за 1 ч до культивирования приготовьте поли-D-лизин (PDL) и покрытые ламинином 24 луночные планшеты.
    1. Разведите 10 мг порошка PDL в 100 мл боратного буфера (pH 8,4) до конечной концентрации 100 мкг/мл. После растворения отфильтруйте раствор (0,22 мкм) на стерильность. PDL готов к использованию; Приготовьте 3 мл аликвот и храните их при температуре -20 °C.
    2. Разморозьте пробирку с ламинином 1-2 мг/мл при 4 °C, чтобы избежать образования геля. Приготовьте 50 μL аликвот и храните их при температуре -20 °C.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Следует избегать многократного размораживания и замораживания.
    3. Покрытие плит
      1. Дополнительный шаг: поместите стерильные покровные стекла Ø, 13 мм, подходящие для посуды для клеточных культур, в 24-луночный планшет, по одному покровному стеклу на лунку.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг предназначен для дальнейшего иммуноокрашивания эксплантов глиомы.
      2. Для покрытия лунок смешайте 3 мл раствора PDL с 9 мл 1x PBS и добавьте 50 мкл ламина. Добавьте 500 μL этого раствора в каждую лунку для получения концентрации покрытия 1-2 μг/см². Инкубируйте пластины с покрытием при комнатной температуре, желательно с медленным покачиванием (15 об/мин), не менее 1 ч.
      3. Непосредственно перед посевом удалить раствор PDL-ламинина и дважды прополоскать стерильным 1x PBS.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Не допускайте пересыхания лунок.

2. Медиа

  1. Культивируйте IDH1-мутантные экспланты в определенной среде, содержащей DMEM/F12 с добавлением L-глутамина, а также смесь заменителей сыворотки, состоящую из N2 и B27 без витамина А. Используйте антибиотики, включая ципрофлоксацин, гентамицин и фунгин, для предотвращения бактериального и грибкового загрязнения. Кроме того, добавьте в среду факторы роста гепарин, EGF и FGF2, отфильтруйте их (0,2 мкм) и храните до 2 недель при температуре 4 °C.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для получения подробной информации об ингредиентах и приготовлении среды см. Таблицу 1 и Таблицу материалов.

3. Подготовка экспланта

  1. Перед обработкой образца подготовьте рабочее пространство и стерильные инструменты, как показано на рисунке Рисунок 1A. Продезинфицируйте прохладный пакет, распылив на него 70% этанола. Простерилизуйте ножницы и щипцы, погрузив их в 70% этанол и промыв PBS.
  2. Немедленно перенесите резекцию опухоли для посева на лед, в идеале в течение 2 часов после хирургического удаления (Рисунок 1B).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Образец опухоли должен иметь минимальный диаметр 9-10 мм для обеспечения лучших результатов. Ткань транспортируется без питательной среды, так как этот метод является предпочтительным для гистологических целей. Отсутствие жидкости предотвращает образование кристаллов льда при мгновенной заморозке, тем самым сохраняя целостность тканей для последующего гистологического исследования при необходимости.
  3. Поместите чашку для посева с образцом опухоли над прохладным пакетом и аккуратно промойте ее 1X PBS, чтобы удалить избыток крови.
  4. Резецированная опухоль часто демонстрирует значительный размер и гетерогенность, включающую опухолевую массу, инфильтрированную ткань и неопухолевые компоненты (Рисунок 1C). Выберите участки серого цвета с мягкой или желеобразной текстурой для выделения опухолевых клеток, так как они, как правило, содержат больше опухолевых клеток. И наоборот, избегайте жестких и белых областей, так как они могут содержать меньше опухолевых клеток, пригодных для культивирования (Рисунок 1D), а также почерневшие участки, так как они, вероятно, являются результатом электрокоагуляции и могут не дать надежных результатов для анализа.
  5. Переложите отобранные образцы в микропробирку объемом 1,5 мл или криовиал для измельчения. Добавьте 1 мл стерильной среды в микропробирку объемом 1,5 мл или криовиальную пробирку и измельчите образец стерильными ножницами до получения мелких кусочков (1-2мм3).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Примерно 1-2 минуты измельчения необходимо для получения крошечных фрагментов, обычно размером 1-2 мм3 (Рисунок 1E).
  6. Стерильными ножницами аккуратно обрежьте конец синего наконечника пипетки объемом 1000 мкл, чтобы создать широкое отверстие, примерно 3-4 мм в диаметре. С помощью этого модифицированного наконечника пипетируйте 50-200 μл фрагментов измельченной ткани и равномерно распределите их по каждой лунке. Поскольку более мелкие кусочки имеют тенденцию быстро оседать, аккуратно повторно гомогенизируйте суспензию в каждой лунке, чтобы обеспечить равномерное распределение.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте переполненности и поддерживайте баланс, не вводя чрезмерное количество фрагментов в каждую скважину (Рисунок 1F).
  7. Инкубируйте фрагменты опухоли при температуре 37°C в инкубаторе с 5% CO2 и влажностью 100%. Меняйте среды каждый день, если этого требует метаболическая активность опухоли (на что указывает быстрое пожелтение среды) и количество фрагментов в каждой лунке. Во время смены среды соблюдайте осторожность, осторожно отсасывая среду с помощью пипетки с наконечником объемом 200 мкл, чтобы не повредить прилипшие фрагменты опухоли.

figure-protocol-1
Рисунок 1: Процедура культивирования опухолевого экспланта. Диффузная резекция низкодифференцированной глиомы была получена от 44-летнего пациента с диагнозом астроцитома II степени по классификации ВОЗ 2021 года. Опухоль продемонстрировала мутацию IDH1 (экзон 4 c.395 G>A, p.Arg132His) и мутацию TP53 (экзон 8 c.843_844delinsGT, p.Asp281_Arg282delinsGluHis), а также отсутствие окрашивания ATRX. Мутаций в сайтах связывания Ets/TCF (C250T и C228T) гена TERT обнаружено не было. (А) Рабочая поверхность содержит охлаждающий пакет, обеспечивающий среду, которая сводит к минимуму деградацию образца и поддерживает жизнеспособность биологических компонентов. Эти меры предосторожности важны для сохранения качества и целостности ткани. (B) Транспортировка образца из больницы в лабораторию должна осуществляться на льду. (В) Фрагмент резекции опухоли. Стрелками показаны наиболее подходящие части для культуры. (D) Проводится вскрытие опухоли для выбора наиболее подходящей части для измельчения. По нашему опыту, белое вещество, как правило, с меньшей вероятностью генерирует успешные экспланты. (E) Фрагменты опухоли диаметром около 1-2 мм³ в пробирке объемом 15 мл после механического измельчения ножницами. (F) Количество фрагментов опухоли, необходимое для правильного засева, указано для лунок на 24-луночной пластине. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

4. Криоконсервация и размораживание измельченных опухолей

ПРИМЕЧАНИЕ: Криоконсервация обеспечивает резервное копирование в случае загрязнения и потери эксплантных культур или для последующей обработки образцов опухоли.

  1. Криоконсервация: Приготовьте замораживающую среду (20% v/v раствор ДМСО), добавив 2 мл ДМСО к 8 мл среды для клеточных культур.
  2. Соедините 1 объем измельченной опухолевой суспензии с равным объемом 20% замораживающей среды ДМСО для достижения конечной концентрации 10% ДМСО. Осторожно пипетируйте смесь вверх и вниз, чтобы обеспечить тщательное смешивание, затем распределите примерно 1 мл в криовиалы.
  3. Быстро переложите криовиалы в криогенный контейнер для постепенного снижения температуры, после чего следует ночная инкубация при -80 °C перед окончательным хранением в жидком азоте.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг должен быть выполнен сразу после помещения клеток в замораживающую среду, так как некоторые криопротекторы, такие как ДМСО, могут быть вредными, если клетки подвергаются воздействию их при комнатной температуре дольше, чем это необходимо.
  4. Размораживание: Удалите криовиалы из жидкого азота и немедленно поместите их на водяную баню при температуре 37 °C, пока не оттает около 80% клеток.
  5. Чтобы удалить ДМСО, быстро пипетируйте суспензию в центрифужную пробирку объемом 15 мл, содержащую 5 мл предварительно разогретого 1x PBS, и центрифугируйте при 300 × г в течение 5 минут.
  6. Удалите надосадочную жидкость и повторите промывку с 1X PBS с последующим центрифугированием (шаг 4.5). Аспирируйте надосадочную жидкость, стараясь не потревожить гранулы, и добавьте соответствующее количество среды, чтобы перелить в предварительно покрытый PDL-Laminin 24-луночный планшет и поместите в инкубатор.
  7. Через 24 ч убедитесь, что ячейки присоединены. Через несколько дней удалите неадгезивные фрагменты, заменив питательные среды.

5. Прохождение культуры

ПРИМЕЧАНИЕ: После укоренения, экспланты можно использовать для видеомикроскопии или иммуноокрашивания. В качестве альтернативы, если опухолевые клетки мигрировали из экспланта и выглядят здоровыми, эксплант может быть проведен через ферментативную диссоциацию и повторно засеян в лунки для дальнейших экспериментов. Однако важно отметить, что этот протокол не предназначен для повторного прохода. Как правило, можно попытаться провести только один пассаж, прежде чем опухолевые клетки начнут стареть или погибнут. Не все эксплантные культуры приведут к успешному прохождению.

  1. Для прохода удалите старую среду, промойте 1X PBS, добавьте (125 μл) 0,05% трипсина-ЭДТА в лунки и инкубируйте в течение 3-4 минут при 37 °C, после чего добавьте 6,5 μл ингибитора трипсина, 12 μл 20 мМ CaCl2 (окончательное разведение до 2 мМ) и 1 μл ДНКазы I.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Время инкубации, необходимое для диссоциации, может варьироваться в зависимости от культуры. Важно проверить, отделяются ли клетки хотя бы через 3 минуты. Как правило, эксплант может быть не полностью диссоциирован на одноклеточную суспензию, и часто сохраняются небольшие кластеры, которые могут генерировать новые культуры эксплантов.
  2. С помощью p1000 на 500-600 мкл аккуратно промойте для дезагрегации эксплантов. Избегайте образования пузырьков.
  3. Добавьте 5 мл 1x PBS и центрифугируйте в течение 5 минут при 300 × г. Отсадите надосадочную жидкость, повторно суспендируйте гранулу в свежей предварительно прогретой среде и засчитайте для посева.
  4. Выявляйте культуры, обладающие потенциалом для создания клеточных линий, наблюдая за делящимися клетками под фазово-контрастным микроскопом. Эти делящиеся клетки обычно имеют округлую морфологию и видимые хромосомы, как показано на рисунке Рисунок 2A.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Через несколько дней некоторые фрагменты опухоли прилипнут к поверхности лунки, инициируя рост клеток из эксплантов. Время между начальным нанесением покрытия и появлением опухолевых растущих клеток отличается от образца к образцу. Исходные культуры часто содержат значительные клеточные остатки, что затрудняет оценку наличия жизнеспособных клеток. Следовательно, культура должна сохраняться не менее 4 недель. Как только клетки начинают расти, наблюдаются удлиненные клетки с биполярным или мультиполярным внешним видом (

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Разработка in vitro и доклинических моделей IDH1-мутантных низкодифференцированных глиом является особенно сложной задачей из-за медленного роста этих опухолей и сложности репликации обширных геномных и эпигеномных изменений, вызванных мутацией IDH. Более того, эти инфильтративные опухолевые клетки активно взаимодействуют с окружающими клетками, включая иммунные, эндотелиальные, глиальные и нейрональные клетки, потенциально полагаясь на них для выживания. Это сложное взаимодействие трудно воспроизвести в лабораторных усл...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

У авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявить.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Использованные здесь фрагменты опухоли являются частью неврологической коллекции свежих образцов тканей, поддерживаемой Центром биологических ресурсов Университетской больницы Монпелье (CRB@chu-montpellier.fr). Данное исследование проводилось в рамках проекта под названием «Глиомакульт: характеристика и первичные культуры низкодифференцированных глиом» под руководством профессора Ж.. Хюгно (проект No. RECH/P722/1-5). Эта работа была поддержана La ligue contre le cancer, ARC (Ассоциация по исследованию рака), ARTC, ARTC SUD, Les Etoiles dans la mer, EMBALL'ISO, Région Occitanie, INCA. K.A.C поддерживается Национальным советом по гуманитарным наукам и технологиям (CONAHCYT), Мексика, и Ассоциацией по исследованию опухолей головного мозга (ARTC), Франция.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Anti-ASCL1BD Pharmingen™556604Разведение 1:500
Анти-ATRXSigma-AldrichHPA001906Разведение 1:100
Анти-CD68AgilentM081401-2Разведение 1:500
Анти-GFAPAves LabsAB_2313547Разведение 1:500
Антитела против IBA1Fujifilm Wako019-19741Дилитуион 1:1000
Анти-IDH1 (R132H) мышиное моноклональное антителоDianovaDIA-H09
Anti-Ki67BD Pharmingen™556003Dilituion 1:1000
Anti-OLIG1R& D Systems®AF2417Dulituion 1:300
Anti-OLIG2Sigma-AldrichMABN50Dilution 1:250
Anti-SOX9Abcam®EPR14335-78Разведение 1:100
Добавка B-27 (50x), минус витамин АThermo Fisher Scientific12587010
Бычья сыворотка альбумина (BSA)CiteAbA-421-100
Ципрофлоксацин HClSigma-AldrichPHR1044-1G
CoolCellCorning®432000Контейнер для заморозки клеток, для 12 x 1 мл или 2 мл криогенных флаконов
Cover Cover Slip Ø, 13 ммKarl Hecht™ Assistent™
Диметилсульфоксид (ДМСО)Sigma-AldrichD8418
DMEM/F-12, без глутаминаThermo Fisher Scientific21331020
DNAse ISigma-Aldrich10104159001
Dulbecco′ s Фосфатно-солевой буфер (PBS) 1xSigma-AldrichD8537
Falcon 100 мм Чашка для клеточных культур с обработкой TCCorning®
Falcon 24-луночный прозрачный плоский дноCorning®353047Обработанный TC многолуночный клеточный культуральный планшет с крышкой, стерильный 
FunginInvivoGenant-fn-1
ГентамицинThermo Fisher Scientific15750-037
ГепаринSigma-AldrichH3149-100KU
HEPESSigma-AldrichH-3375
Человеческий EGFPeproTechAF-100-15-1MG
Человек FGF-basicPeproTech100-18B-1MG
LamininSigma-AldrichL2020
L-глютаминThermo Fisher Scientific25030-024
N-2 Добавка (100x )Thermo Fisher Scientific17502-048
PDLSigma-AldrichP7886
Сыворотка акродиск 37 мм шприц фильтр с GF/0,2 и микро; m SuporPALL Corporation4525
Ингибитор трипсинаThermo Fisher Scientific17075-029
Трипсин-ЭДТА (0,05%), фенол красныйThermo Fisher Scientific25300054
Zeiss Z1 Apotome 3 микроскоппрямой широкопольный эпифлуоресцентный микроскопZeiss
328017353003 Zeiss

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dasgupta, P., Balasubramanyian, V., De Groot, J. F., Majd, N. K. Preclinical models of low-grade gliomas. Cancers (Basel). 15 (3), 596(2023).
  2. Tirosh, I., et al. Single-cell RNA-seq supports a developmental hierarchy in human oligodendroglioma. Nature. 539 (7628), 309-313 (2016).
  3. Jooma, R., Waqas, M., Khan, I. Diffuse low-grade glioma - changing concepts in diagnosis and management: A review. Asian J Neurosurg. 14 (2), 356-363 (2019).
  4. Louis, D. N. Molecular pathology of malignant gliomas. Annu Rev Pathol. 1, 97-117 (2006).
  5. Adenis, L., Plaszczynski, S., Grammaticos, B., Pallud, J., Badoual, M. The effect of radiotherapy on diffuse low-grade gliomas evolution: Confronting theory with clinical data. J Pers Med. 11 (8), 818(2021).
  6. Pirozzi, C. J., Yan, H. The implications of idh mutations for cancer development and therapy. Nat Rev Clin Oncol. 18 (10), 645-661 (2021).
  7. Van Den Bent, M. J., Smits, M., Kros, J. M., Chang, S. M. Diffuse infiltrating oligodendroglioma and astrocytoma. J Clin Oncol. 35 (21), 2394-2401 (2017).
  8. Suva, M. L., Tirosh, I. The glioma stem cell model in the era of single-cell genomics. Cancer Cell. 37 (5), 630-636 (2020).
  9. Augustus, M., et al. Identification of CRYAB+ KCNN3+ SOX9+ astrocyte-like and EGFR+ PDGFRA+ OLIG1+ oligodendrocyte-like tumoral cells in diffuse idh1-mutant gliomas and implication of NOTCH1 signalling in their genesis. Cancers (Basel). 13 (9), 2107(2021).
  10. Hubert, C. G., Rich, J. N. Patient-derived explants as tumor models. Cancer Cell. 40 (4), 348-350 (2022).
  11. Abdullah, K. G., et al. Establishment of patient-derived organoid models of lower-grade glioma. Neuro Oncol. 24 (4), 612-623 (2022).
  12. Yuzhakova, D. V., et al. Development of a 3d tumor spheroid model from the patient's glioblastoma cells and its study by metabolic fluorescence lifetime imaging. Sovrem Tekhnologii Med. 15 (2), 28-38 (2023).
  13. Kloosterman, D., et al. Morphology of microglia across contexts of health and disease. Cell. 187, 5336-5356.e30 (2024).
  14. Thomas, D. L. 2021 updates to the World Health Organization classification of adult-type and pediatric-type diffuse gliomas: A clinical practice review. Chin Clin Oncol. 12 (1), 7(2023).
  15. Azar, S., et al. Cellular and molecular characterization of IDH1-mutated diffuse low grade gliomas reveals tumor heterogeneity and absence of EGFR/PDGFRalpha activation. Glia. 66 (2), 239-255 (2018).
  16. Bhaduri, A., et al. Outer radial glia-like cancer stem cells contribute to heterogeneity of glioblastoma. Cell Stem Cell. 26 (1), 48-63.e6 (2020).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

IDH13D

Похожие статьи