Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Протокол эксплантации культур IDH1-мутантных диффузных низкодифференцированных глиом

1.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/67260

⸱

9 мая 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institut de Génomique Fonctionnelle, Université de Montpellier, CNRS, INSERM, 2Department of Neurosurgery, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University of Chongqing, 3Department of Neurosurgery, Gui de Chauliac Hospital, Montpellier University Medical Center, 4Jingfeng laboratories of Chongqing

В этой статье

Краткое содержание

IDH1-мутантные диффузные низкодифференцированные глиомы - это редкие опухоли, которые трудно культивировать. Мы представляем простой, неферментативный метод экспланта, который сохраняет экспрессию белка IDH1-мутанта и поддерживает культуры в течение нескольких месяцев. Важно отметить, что этот метод работает с криоконсервированными опухолями, предлагая ценный ресурс для исследования глиомы.

Аннотация

Диффузные глиомы, наиболее распространенные первичные опухоли головного мозга, классифицируются на низкие и высокие степени на основе гистопатологических критериев и генетических мутаций. Диффузные глиомы низкой степени злокачественности составляют подмножество, преимущественно поражающее молодых людей и предрасполагающее к глиомам высокой степени злокачественности. Существует два основных типа диффузных глиом низкой степени злокачественности: астроцитомы и олигодендроглиомы, каждая из которых характеризуется различными генетическими и гистологическими особенностями. Эти опухоли характерно демонстрируют мутировавший вариант метаболического фермента IDH1, нарушающий клеточную дифференцировку. Они гетерогены и включают в себя как пролиферативные стволовые клетки, так и более дифференцированные, спокойные глиальные клетки.

Специфичные для пациента модели опухолей in vitro обладают значительным потенциалом для раскрытия онкогенных механизмов и подбора лекарств для персонализированной терапии. Тем не менее, отсутствие надежных моделей in vitro, специально предназначенных для IDH1-мутантных низкодифференцированных глиом, препятствует фундаментальным и трансляционным исследованиям. В данной работе мы представляем простой метод культивирования IDH1-мутантных опухолей в виде эксплантов в определенных средах без необходимости ферментативной диссоциации. Эти экспланты могут поддерживаться в течение длительного времени, поддерживая экспрессию белка IDH1-мутанта, а также маркеров для клеток-предшественников олигодендроцитов, таких как ASCL1 (MASH1), OLIG1 и OLIG2, и для астроцитов (GFAP, SOX9). Они также могут быть установлены из замороженных опухолей в ДМСО. Эти культуры могут служить ценной платформой для скрининга лекарств, видеомикроскопии и генных исследований, тем самым способствуя прогрессу в понимании и лечении этих сложных опухолей. Они также обладают потенциалом для получения IDH1-мутантных клеточных линий.

Введение

Диффузные глиомы являются наиболее частыми первичными опухолями головного мозга. Эти опухоли в настоящее время неизлечимы, несмотря на очень интенсивное лечение (хирургия, радио и химиотерапия)1. Все больше доказательств подтверждают гипотезу о том, что глиомагенез происходит из взрослых стволовых или глиальных клеток-предшественников, находящихся в классе brain2. Хотя глиобластомы представляют собой наиболее агрессивный тип, также распространены диффузные низкодифференцированные глиомы (DLGG, опухоли 2 степени) (15% диффузных глиом)1,3. DLGG растут медленно и мигрируют по трактам белого вещества, что является отличительной чертой этого "диффузного" класса новообразований4. Эти DLGG очень часто рецидивируют, несмотря на лечение, в конечном итоге прогрессируя до злокачественных опухолей высокой степени злокачественности (степени 3 и 4)5.

DLGG характеризуются миссенс-мутацией в гене изоцитратдегидрогеназы 1 или 2 (IDH1 или IDH2), приводящей к аберрантному производству онкометаболита 2-гидроксиглутарата (2HG). Это нарушает дифференцировку клеток из-за эпигенетической дисрегуляции6. IDH1-мутантные глиомы далее классифицируются на подтипы: астроцитомы обычно имеют мутации в ATRX и P53, в то время как олигодендроглиомы характеризуются делециями 1p19q7. Эти опухоли демонстрируют гетерогенность опухолевых клеток. Секвенирование РНК одиночных клеток и иммунохарактеристика выявили разнообразную популяцию опухолевых клеток, демонстрирующих фенотипы, подобные стволовым клеткам, астроциты и олигодендроциты, в пределах этих опухолей8,9.

В отличие от глиобластомы, которая выигрывает от легкодоступных, долгосрочных культур и клеточных линий, существует заметный дефицит клеточных инструментов, предназначенных для исследования IDH1-мутантных опухолей1. Это представляет собой значительное препятствие для продвижения терапевтических разработок и углубления нашего понимания IDH1-мутантного глиомагенеза и прогрессирования заболевания. Традиционные клеточные линии, выращенные в сыворотке крови, хотя и используются давно, неадекватно реплицируют исходные опухоли, демонстрируя измененные транскрипционные профили. В качестве альтернативы, условия культивирования без сыворотки, будь то в 2D или 3D моделях опухолей, более эффективно сохраняют транскрипционные профили опухолевых клеток и их фенотипы in vivo, такие как инвазия в нормальную ткань мозга10,11.

Кроме того, краткосрочные клеточные культуры, полученные из хирургического образца пациента, сохраняют молекулярный профиль и клеточное разнообразие опухоли, тем самым лучше представляя биологические особенности опухолей по сравнению с клеточными линиями12. В данной работе мы представляем простой неферментативный метод культивирования диффузной культуры глиом низкой степени злокачественности IDH1-мутант в качестве эксплантов, полученных из свежих или замороженных резекций пациентов, с целью удовлетворения потребности в улучшенных моделях in vitro для исследований глиомы и терапевтических разработок. Они также обладают потенциалом для получения IDH1-мутантных клеточных линий.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Фрагменты опухоли, использованные в данном протоколе, были получены из хорошо охарактеризованной и этически одобренной коллекции при наличии согласия пациентов. Данное исследование проводилось в рамках проекта под названием Gliomacult: Characterization and Primary Cultures of Low-Grade Gliomas (проект № RECH/P722/1-5) и было одобрено научным советом биобанка опухолей 28 августа 2023 года.

1. Подготовка культуральных планшетов

ПРИМЕЧАНИЕ: Выполняйте эти этапы в стерильном ламинарном шкафу для культивирования тканей.

  1. Как минимум за 1 ч до начала культивирования подготовьте 24-луночные планшеты, покрытые поли-D-лизином (PDL) и ламинином.
    1. Растворите 10 mg порошка PDL в 100 mL боратного буфера (pH 8.4) до конечной концентрации 100 µg/mL. После растворения профильтруйте раствор (0.22 µm) для обеспечения стерильности. PDL готов к использованию; разлейте его по аликвотам по 3 mL и храните при -20 °C.
    2. Разморозьте пробирку с ламинином (1-2 mg/mL) при 4 °C, чтобы избежать образования геля. Подготовьте аликвоты по 50 µL и храните их при -20 °C.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Следует избегать повторного замораживания и размораживания.
    3. Покрытие планшета
      1. Дополнительный этап: поместите стерильные покровные стекла Ø 13 mm, подходящие для чашек для культивирования клеток, в 24-луночный планшет, по одному стеклу в каждую лунку.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Этот этап необходим для последующего иммуноокрашивания эксплантатов глиомы.
      2. Для покрытия лунок смешайте 3 mL раствора PDL с 9 mL 1x PBS и добавьте 50 µL ламинина. Добавьте по 500 µL этого раствора в каждую лунку для достижения концентрации покрытия 1-2 µg/cm². Инкубируйте покрытые планшеты при комнатной температуре, предпочтительно с медленным покачиванием (15 RPM), в течение не менее 1 ч.
      3. Непосредственно перед культивированием удалите раствор PDL-ламинина и дважды промойте лунки стерильным 1x PBS.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Не допускайте высыхания лунок.

2. Среды

  1. Культивируйте эксплантаты с мутацией в гене IDH1 в определенной среде, состоящей из DMEM/F12 с добавлением L-глутамина, а также смеси заменителей сыворотки N2 и B27 без витамина A. Для предотвращения бактериального и грибкового заражения используйте антибиотики, включая ципрофлоксацин, гентамицин и фунгин. Кроме того, добавьте в среду факторы роста гепарин, EGF и FGF2, профильтруйте ее (0,2 µm) и храните до 2 недель при 4 °C.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Подробную информацию о составе и приготовлении сред см. в Таблице 1 и в Таблице материалов.

3. Подготовка эксплантата

  1. Перед обработкой образца подготовьте рабочее пространство и стерильные инструменты, как показано на Рисунке 1A. Дезинфицируйте охлаждающий пакет, распылив на него 70% этанол. Стерилизуйте ножницы и пинцет, погрузив их в 70% этанол и промыв PBS.
  2. Незамедлительно перенесите резектированную опухоль для культивирования на лед, в идеале в течение 2 ч после хирургического извлечения (Рисунок 1B).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Образец опухоли должен иметь минимальный диаметр 9-10 mm для обеспечения лучших результатов. Ткань транспортируют без питательной среды, так как этот метод предпочтителен для гистологических целей. Отсутствие жидкости предотвращает образование кристаллов льда при мгновенном замораживании, тем самым сохраняя целостность ткани для последующего гистологического исследования в случае необходимости.
  3. Поместите чашку Петри с образцом опухоли на охлаждающий пакет и осторожно промойте его 1X PBS для удаления излишков крови.
  4. Резектированная опухоль часто характеризуется значительным размером и гетерогенностью, включая опухолевую массу, инфильтрированную ткань и не опухолевые компоненты (Рисунок 1C). Для выделения опухолевых клеток выбирайте участки серого цвета с мягкой или желеобразной текстурой, так как они обычно содержат большее количество опухолевых клеток. Напротив, избегайте твердых и белых участков, так как они могут содержать меньше опухолевых клеток, подходящих для культивирования (Рисунок 1D), а также почерневших зон, так как они, вероятно, являются результатом электрокоагуляции и могут не дать достоверных результатов анализа.
  5. Перенесите выбранные образцы в микроцентрифужную пробирку объемом 1.5 mL или криопробирку для измельчения. Добавьте 1 mL стерильной среды в пробирку и измельчите образец стерильными ножницами до получения мелких кусочков (1-2 mm3).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для получения крошечных фрагментов, обычно размером 1-2 mm3, требуется примерно 1-2 мин измельчения (Рисунок 1E).
  6. С помощью стерильных ножниц аккуратно подрежьте конец синего наконечника дозатора объемом 1,000 µL, чтобы создать широкое отверстие диаметром примерно 3-4 mm. Используя этот модифицированный наконечник, перенесите 50-200 µL измельченных фрагментов ткани и равномерно распределите их по лункам. Поскольку мелкие частицы имеют тенденцию быстро оседать, осторожно повторно гомогенизируйте суспензию в каждой лунке для обеспечения равномерного распределения.
    ​ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте переполнения и соблюдайте баланс, не внося избыточное количество фрагментов в каждую лунку (Рисунок 1F).
  7. Инкубируйте фрагменты опухоли при 37°C в инкубаторе с 5% CO2 и 100% влажностью. Меняйте среду ежедневно, если этого требует метаболическая активность опухоли (о чем свидетельствует быстрое пожелтение среды) или количество фрагментов в каждой лунке. При замене среды действуйте осторожно, аккуратно аспирируя среду пипеткой с наконечником 200 µL, стараясь не потревожить прилипшие фрагменты опухоли.

Процесс подготовки ткани опухоли; установка оборудования; образцы тканей; результаты центрифугирования; график анализа.
Рисунок 1: Процедура культивирования эксплантатов опухоли. Резецированный материал диффузной глиомы низкой степени злокачественности был получен от 44-летнего пациента с диагнозом «астроцитома II степени» согласно классификации ВОЗ 2021 года. Опухоль имела мутацию IDH1 (Экзон 4 c.395 G>A, p.Arg132His) и мутацию TP53 (Экзон 8 c.843_844delinsGT, p.Asp281_Arg282delinsGluHis), а также отсутствие окрашивания ATRX. Мутаций в сайтах связывания Ets/TCF (C250T и C228T) гена TERT обнаружено не было. (A) Рабочая поверхность состоит из хладоэлемента, обеспечивающего среду, которая сводит к минимуму деградацию образца и поддерживает жизнеспособность биологических компонентов. Эти меры предосторожности важны для сохранения качества и целостности ткани. (B) Транспортировка образца из больницы в лабораторию должна осуществляться на льду. (C) Фрагмент резецированной опухоли. Стрелками показаны наиболее подходящие части для культивирования. (D) Выполняется диссекция опухоли для выбора наиболее подходящего участка для измельчения. По нашему опыту, белое вещество, как правило, с меньшей вероятностью дает успешные эксплантаты. (E) Фрагменты опухоли диаметром примерно 1-2 mm³ в пробирке объемом 15 mL после механического измельчения ножницами. (F) Показано количество фрагментов опухоли, необходимое для правильного посева в лунки планшета на 24 лунки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

4. Криоконсервация и размораживание измельченной опухоли

ПРИМЕЧАНИЕ: Криоконсервация обеспечивает наличие резервного материала на случай контаминации и потери эксплантатов или позволяет обработать образцы опухоли позже.

  1. Криоконсервация: Приготовьте среду для заморозки (20% об. р-р DMSO), добавив 2 mL DMSO к 8 mL среды для культивирования клеток.
  2. Смешайте один объем суспензии измельченной опухоли с равным объемом 20% среды для заморозки с DMSO, чтобы получить конечную концентрацию DMSO 10%. Осторожно перемешайте смесь, несколько раз набирая и вытесняя ее пипеткой, затем разлейте примерно по 1 mL в криопробирки.
  3. Быстро перенесите криопробирки в криоконтейнер для постепенного снижения температуры с последующей инкубацией в течение ночи при -80 °C перед окончательным хранением в жидком азоте.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот этап необходимо выполнить сразу после помещения клеток в среду для заморозки, так как некоторые криопротекторы, такие как DMSO, могут быть вредны, если клетки подвергаются их воздействию при комнатной температуре дольше необходимого.
  4. Размораживание: Извлеките криопробирки из жидкого азота и немедленно поместите их в водяную баню при 37 °C до размораживания примерно 80% клеток.
  5. Для удаления DMSO быстро перенесите суспензию пипеткой в центрифужную пробирку объемом 15 mL, содержащую 5 mL предварительно нагретого 1x PBS, и центрифугируйте при 300 × g в течение 5 min.
  6. Удалите супернатант и повторите промывку с 1X PBS с последующим центрифугированием (шаг 4.5). Аспирируйте супернатант, стараясь не задеть осадок, и добавьте соответствующее количество среды, чтобы перенести клетки в предварительно покрытый PDL-Laminin 24-луночный планшет, после чего поместите его в инкубатор.
  7. Через 24 h убедитесь, что клетки прикрепились. Через несколько дней удалите неадгезивные фрагменты, заменив культуральную среду.

5. Пассаж культуры

ПРИМЕЧАНИЕ: После приживления эксплантаты можно использовать для видеомикроскопии или иммуноокрашивания. Кроме того, если опухолевые клетки мигрировали из эксплантата и выглядят жизнеспособными, эксплантат можно пассировать путем ферментативной диссоциации и повторно высеять в лунки для дальнейших экспериментов. Однако важно отметить, что данный протокол не предназначен для многократного пассирования. Как правило, можно предпринять попытку только одного пассирования, прежде чем опухолевые клетки станут сенесцентными или погибнут. Не все культуры эксплантатов приведут к успешному пассированию.

  1. Для пассажирования удалите старую среду, промойте 1X PBS, добавьте в лунки (125 µL) 0,05% трипсина-ЭДТА и инкубируйте в течение 3-4 мин при 37 °C, после чего добавьте 6,5 µL ингибитора трипсина, 12 µL 20 mM CaCl2 (конечный развод до 2mM) и 1 µL ДНКазы I.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Время инкубации, необходимое для диссоциации, может варьироваться в зависимости от культуры. Важно проверить, отделились ли клетки, по прошествии как минимум 3 мин. Как правило, эксплантат может быть не полностью диссоциирован в суспензию отдельных клеток; часто сохраняются небольшие кластеры, которые могут служить основой для новых культур эксплантатов.
  2. Используя дозатор p1000, настроенный на 500-600 µL, осторожно промывайте содержимое для дезагрегации эксплантатов. Избегайте образования пузырьков.
  3. Добавьте 5 mL 1x PBS и центрифугируйте в течение 5 мин при 300 × g. Снимите супернатант, ресуспендируйте осадок в свежей предварительно подогретой среде и подсчитайте количество клеток для посева.
  4. Выявите культуры с потенциалом к созданию клеточных линий, наблюдая за делящимися клетками с помощью фазово-контрастного микроскопа. Такие делящиеся клетки обычно имеют округлую морфологию и видимые хромосомы, как показано на Рисунке 2A.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Через несколько дней некоторые фрагменты опухоли прикрепятся к поверхностям лунок, что инициирует разрастание клеток из эксплантатов. Интервал времени между первоначальным посевом и появлением растущих опухолевых клеток варьируется от образца к образцу. Первичные культуры часто содержат значительное количество клеточного детрита, что затрудняет оценку наличия жизнеспособных клеток. Следовательно, культуру следует поддерживать в течение как минимум 4 недель. После того как клетки начнут расти, наблюдаются вытянутые клетки...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Разработка моделей in vitro и доклинических моделей для низкозлокачественных глиом с мутацией IDH1 представляет особую сложность из-за медленного роста этих опухолей и трудности воспроизведения обширных геномных и эпигеномных изменений, вызванных мутацией IDH. Более того, эти инфильтрирующие опухолевые клетки активно взаимодействуют с окружающими клетками, включая иммунные, эндотелиальные, глиальные и нейрональные клетки, потенциально полагаясь на них для выживания. Такое сложное взаимодействие трудно воспроизвести в лаб...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявить.

Благодарности

Использованные здесь фрагменты опухоли являются частью неврологической коллекции свежих образцов тканей, поддерживаемой Центром биологических ресурсов Университетской больницы Монпелье (CRB@chu-montpellier.fr). Данное исследование проводилось в рамках проекта под названием «Глиомакульт: характеристика и первичные культуры низкодифференцированных глиом» под руководством профессора Ж.. Хюгно (проект No. RECH/P722/1-5). Эта работа была поддержана La ligue contre le cancer, ARC (Ассоциация по исследованию рака), ARTC, ARTC SUD, Les Etoiles dans la mer, EMBALL'ISO, Région Occitanie, INCA. K.A.C поддерживается Национальным советом по гуманитарным наукам и технологиям (CONAHCYT), Мексика, и Ассоциацией по исследованию опухолей головного мозга (ARTC), Франция.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Anti-ASCL1BD Pharmingen™556604Разведение 1:500
Анти-ATRXSigma-AldrichHPA001906Разведение 1:100
Анти-CD68AgilentM081401-2Разведение 1:500
Анти-GFAPAves LabsAB_2313547Разведение 1:500
Антитела против IBA1Fujifilm Wako019-19741Дилитуион 1:1000
Анти-IDH1 (R132H) мышиное моноклональное антителоDianovaDIA-H09
Anti-Ki67BD Pharmingen™556003Dilituion 1:1000
Anti-OLIG1R& D Systems®AF2417Dulituion 1:300
Anti-OLIG2Sigma-AldrichMABN50Dilution 1:250
Anti-SOX9Abcam®EPR14335-78Разведение 1:100
Добавка B-27 (50x), минус витамин АThermo Fisher Scientific12587010
Бычья сыворотка альбумина (BSA)CiteAbA-421-100
Ципрофлоксацин HClSigma-AldrichPHR1044-1G
CoolCellCorning®432000Контейнер для заморозки клеток, для 12 x 1 мл или 2 мл криогенных флаконов
Cover Cover Slip Ø, 13 ммKarl Hecht™ Assistent™
Диметилсульфоксид (ДМСО)Sigma-AldrichD8418
DMEM/F-12, без глутаминаThermo Fisher Scientific21331020
DNAse ISigma-Aldrich10104159001
Dulbecco′ s Фосфатно-солевой буфер (PBS) 1xSigma-AldrichD8537
Falcon 100 мм Чашка для клеточных культур с обработкой TCCorning®
Falcon 24-луночный прозрачный плоский дноCorning®353047Обработанный TC многолуночный клеточный культуральный планшет с крышкой, стерильный 
FunginInvivoGenant-fn-1
ГентамицинThermo Fisher Scientific15750-037
ГепаринSigma-AldrichH3149-100KU
HEPESSigma-AldrichH-3375
Человеческий EGFPeproTechAF-100-15-1MG
Человек FGF-basicPeproTech100-18B-1MG
LamininSigma-AldrichL2020
L-глютаминThermo Fisher Scientific25030-024
N-2 Добавка (100x )Thermo Fisher Scientific17502-048
PDLSigma-AldrichP7886
Сыворотка акродиск 37 мм шприц фильтр с GF/0,2 и микро; m SuporPALL Corporation4525
Ингибитор трипсинаThermo Fisher Scientific17075-029
Трипсин-ЭДТА (0,05%), фенол красныйThermo Fisher Scientific25300054
Zeiss Z1 Apotome 3 микроскоппрямой широкопольный эпифлуоресцентный микроскопZeiss
328017353003 Zeiss

Ссылки

  1. Dasgupta, P., Balasubramanyian, V., De Groot, J. F., Majd, N. K. Preclinical models of low-grade gliomas. Cancers (Basel). 15 (3), 596(2023).
  2. Tirosh, I., et al. Single-cell RNA-seq supports a developmental hierarchy in human oligodendroglioma. Nature. 539 (7628), 309-313 (2016).
  3. Jooma, R., Waqas, M., Khan, I. Diffuse low-grade glioma - changing concepts in diagnosis and management: A review. Asian J Neurosurg. 14 (2), 356-363 (2019).
  4. Louis, D. N. Molecular pathology of malignant gliomas. Annu Rev Pathol. 1, 97-117 (2006).
  5. Adenis, L., Plaszczynski, S., Grammaticos, B., Pallud, J., Badoual, M. The effect of radiotherapy on diffuse low-grade gliomas evolution: Confronting theory with clinical data. J Pers Med. 11 (8), 818(2021).
  6. Pirozzi, C. J., Yan, H. The implications of idh mutations for cancer development and therapy. Nat Rev Clin Oncol. 18 (10), 645-661 (2021).
  7. Van Den Bent, M. J., Smits, M., Kros, J. M., Chang, S. M. Diffuse infiltrating oligodendroglioma and astrocytoma. J Clin Oncol. 35 (21), 2394-2401 (2017).
  8. Suva, M. L., Tirosh, I. The glioma stem cell model in the era of single-cell genomics. Cancer Cell. 37 (5), 630-636 (2020).
  9. Augustus, M., et al. Identification of CRYAB+ KCNN3+ SOX9+ astrocyte-like and EGFR+ PDGFRA+ OLIG1+ oligodendrocyte-like tumoral cells in diffuse idh1-mutant gliomas and implication of NOTCH1 signalling in their genesis. Cancers (Basel). 13 (9), 2107(2021).
  10. Hubert, C. G., Rich, J. N. Patient-derived explants as tumor models. Cancer Cell. 40 (4), 348-350 (2022).
  11. Abdullah, K. G., et al. Establishment of patient-derived organoid models of lower-grade glioma. Neuro Oncol. 24 (4), 612-623 (2022).
  12. Yuzhakova, D. V., et al. Development of a 3d tumor spheroid model from the patient's glioblastoma cells and its study by metabolic fluorescence lifetime imaging. Sovrem Tekhnologii Med. 15 (2), 28-38 (2023).
  13. Kloosterman, D., et al. Morphology of microglia across contexts of health and disease. Cell. 187, 5336-5356.e30 (2024).
  14. Thomas, D. L. 2021 updates to the World Health Organization classification of adult-type and pediatric-type diffuse gliomas: A clinical practice review. Chin Clin Oncol. 12 (1), 7(2023).
  15. Azar, S., et al. Cellular and molecular characterization of IDH1-mutated diffuse low grade gliomas reveals tumor heterogeneity and absence of EGFR/PDGFRalpha activation. Glia. 66 (2), 239-255 (2018).
  16. Bhaduri, A., et al. Outer radial glia-like cancer stem cells contribute to heterogeneity of glioblastoma. Cell Stem Cell. 26 (1), 48-63.e6 (2020).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Глиомы с мутацией IDH1протокол эксплантации опухолиолигодендроцитарные клетки-предшественникимаркеры астроцитовмикроокружение опухолипротокол криоконсервации3D-модели опухолейперсонализированный скрининг лекарственных препаратов
Протокол эксплантации культур IDH1-мутантных диффузных низкодифференцированных глиом
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.