Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Планария как животная модель для экспериментального острого припадка

1.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/67307

⸱

14 февраля 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical and Translational Sciences, Macon and Joan Brock Virginia Health Sciences Eastern Virginia Medical School, Old Dominion University

В этой статье

Краткое содержание

Судороги негативно сказываются на различных функциях и качестве жизни. Черви планарии подвергались воздействию химических конвульсантов в различных концентрациях для оценки их судорожных фенотипов и разрушительной подвижности. Это исследование предлагает использовать червей планарии в качестве модели острых припадков у людей и имеет важное значение для разработки лекарств от эпилепсии.

Аннотация

Эпилепсия является одним из наиболее распространенных неврологических расстройств, характеризующихся повторяющимися спонтанными припадками. Судороги представляют собой клиническое проявление неконтролируемой, чрезмерно синхронизированной активности нервных клеток. Степень повреждения головного мозга от судорог зависит от их продолжительности и интенсивности. К сожалению, эффективного средства от эпилепсии не существует. Цель данного исследования состоит в том, чтобы оценить, может ли червь планарии Dugesia dorotocephala служить моделью, помогающей в выявлении и разработке методов лечения эпилепсии, которые могут быть нацелены на острые припадки. В настоящее время для оценки противосудорожных препаратов (ASM) используются различные модели, такие как морские модели. Однако они очень дорогие, и есть этические проблемы. В качестве альтернативы, модели беспозвоночных предлагают экономически эффективную исследовательскую возможность в процессе разработки лекарств для ASM. Планарии принадлежат к семейству плоских червей и населяют морскую, пресную воду и наземную среду. Dugesia dorotocephala является доминирующим видом водных планарий в Северной Америке. D. dorotocephala представляет собой жизнеспособную модель беспозвоночных для исследований эпилепсии благодаря своей экономической эффективности, позвоночноподобным нейронам и количественно измеримому поведению, в отличие от других беспозвоночных или более крупных животных. Они использовались в различных фармакологических и экологических токсикологических исследованиях, связанных с возрастом, памятью и регенерацией. В этом исследовании планарии подвергались воздействию различных концентраций пилокарпина, распространенного хемоконвульсанта, для изучения их поведения при воздействии. После наблюдения планарии были усыплены и сохранены либо в формальдегиде, либо в растворе Гольджи для нейрогистологической оценки. В планариях наблюдалось шесть различных поведенческих фенотипов: дорсальные колебания, колебания головы, дорсальное расширение хвоста, С-образная форма, щелчок головой и взмах хвоста. Частоты дорсальных колебаний были достоверно увеличены в опытных группах по сравнению с контролем и показали зависимость от дозы. Кроме того, пилокарпин нарушал моторику планарий. Припадки, вызванные пилокарпином в планариях, могут служить моделью для оценки острых припадков и назначения противосудорожных препаратов, что имеет важное значение при разработке терапевтических вмешательств для пациентов, страдающих эпилепсией.

Введение

Эпилепсия, характеризующаяся двумя или более приступами в течение 24 часов без видимой причины, поражает ~50 миллионов человек во всем мире1. Среди них 10-15 миллионов человек, как сообщается, страдают лекарственно-устойчивой эпилепсией2. Поэтому исследование лекарств от эпилепсии имеет решающее значение. Это состояние влечет за собой краткие эпизоды частичного или генерализованного непроизвольного движения, варьирующиеся от пустого взгляда до скованности и дрожи тела, и связано со всплеском электрической активностив мозге.

Исторически сложилось так, что исследования эпилепсии опирались на грызунов и других млекопитающих из-за их эволюционного сходства с человеком. Однако эти методы могут быть трудоемкими и дорогостоящими, что требует альтернативного подхода 4,5. В исследованиях использовались существа, не являющиеся млекопитающими, такие как плодовые мушки, пиявки, головастики, данио-рерио и круглые черви, которые показали многообещающие результаты6. Кроме того, было показано, что планарии могут обеспечить сравнительную модель геномного исследования между геномами беспозвоночных и человека, а также возможность тестирования просудорожных, противосудорожных препаратов (ASM) и поведенческихпаттернов. Планарии (Phylum Platyhelminthes), известные как плоские черви и представители класса Turbellaria, в первую очередь известны своими регенеративными способностями; Тем не менее, это исследование сосредоточено на их реакции на вещества, вызывающие судороги.

Планарии разделяют с человеком фундаментальные неврологические механизмы, такие как реакция на серотонин и допамин, демонстрируя 95% сходство с генами, связанными с нервной системой в мозге млекопитающих, и обладая узнаваемойструктурой мозга. Кроме того, они демонстрируют наблюдаемые движения в лабораторных условиях и являются экономически эффективными, экономящими время и этичными по сравнению с грызунами или другими млекопитающими. Эти наблюдаемые поведения, такие как винтовые, С-образные и орехообразные движения, были широко задокументированы в течение десятилетий и связаны с такими веществами, как кокаин, никотин, дофамин и пилокарпин 7,8,9,10,11,12,13,14. Таким образом, планарии становятся жизнеспособной моделью для исследований лекарств от эпилепсии у людей.

Этот метод направлен на характеристику нейронов планарий, которые подверглись воздействию пилокарпина с помощью красителя Гольджи. Краситель Гольджи используется для визуализации нейронов с помощью световой микроскопии и был использован для изучения того, связано ли изменение морфологии с судорогами 15,16,17. В современной литературе нет доказательств того, что окрашивание по методу Гольджи проводилось на мозге планарий. Несмотря на то, что предыдущие исследования документально подтвердили фармакологические эффекты путем наблюдения за поведенческими фенотипами, эта рукопись является первой, в которой были охарактеризованы нейроны планарий, подвергшиеся воздействию пилокарпина, с использованием окрашивания по методу Гольджи11,18. Этот метод оказался ценным для визуализации и понимания морфологических изменений, связанных с судорогами. В этом исследовании было отмечено значительное увеличение частоты осциллирующего дорсального колебательного поведения у планарийных червей по мере увеличения концентрации пилокарпина.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Общий план эксперимента описан на рисунке 1.

1. Анализ поведенческого фенотипа

  1. Приготовьте концентрации 1 мМ и 2 мМ пилокарпина, растворенного в родниковой воде, а также контролируйте только родниковой водой.
  2. Пипеткой нанесите по 3 мл каждого раствора в луночный планшет размером 4 x 3 лунки, причем каждый ряд представляет разную концентрацию пилокарпина.
  3. Поместите по одному выращенному в лаборатории Dugesia dorotocephala возрастом около 2 недель в каждую из 12 лунок с помощью передаточной пипетки с отрезанным кончиком.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Обрежьте кончик так, чтобы конец был достаточно большим, чтобы поместиться в планарию, не повредив ее.
  4. Запишите поведение планарий в течение 1 часа с помощью любой камеры, которая хорошо фиксирует поведение и видна человеческому глазу, расположенной над планшетом 4 x 3 лунки при нормальных условиях освещения в помещении.
  5. Повторите шаги 1.1-1.4 с концентрациями 3 мМ, 4 мМ и 6 мМ пилокарпина, растворенного в родниковой воде.

2. Анализ моторики

ПРИМЕЧАНИЕ: Поведение планарий было зарегистрировано в лунках диаметром 2,5 см. Видеозаписи продолжительностью 1 час были разделены на 30-минутные части и обрезаны с помощью коммерческого программного обеспечения для индивидуального анализа планарий.

  1. Начните новый эксперимент с помощью программного обеспечения для автоматического анализа поведения. Откройте расширенную автоматизированную систему отслеживания поведения. Нажмите кнопку Создать в разделе Новый эксперимент. Назовите эксперимент.
  2. Настройте экспериментальные параметры, как описано ниже.
    1. Нажмите «Настройки эксперимента » в меню подсказки. Убедитесь, что настройки установлены по умолчанию: источник видео (из видеофайла), количество арен (1), отслеживаемые объекты (обнаружение центральной точки), техника обнаружения точки тела (на основе контура), параметры анализа (нет), единицы измерения (см, с, град).
  3. Настройте параметры арены, как описано ниже.
    1. Нажмите «Настройки арены» на вкладке «Настройки арены» на верхней левой панели настроек. При появлении запроса на загрузку видео выберите записанные кадры планарии из местоположения сохраненного файла. Выбрав видео, нажмите «Захват».
    2. Следуйте инструкциям на верхней правой панели экрана. Нажмите на 1. Нарисуйте шкалу для калибровки. На видеоизображении лунки перетащите линию шкалы от края к краю лунки. Введите реальное расстояние до колодца (2,5 см).
    3. Нажмите на 2. Выберите «Фигура» и «Нарисуйте арену». Убедитесь, что на правой панели выбрана Арена 1. Переместите курсор мыши в верхнюю середину экрана и нажмите на значок круга.
    4. Создайте круг на загруженном видеоизображении, перетащив его с одного периметра арены на другой. Убедитесь, что арена находится в оранжевой зоне. Отрегулируйте форму так, чтобы она подходила к арене. Убедитесь, что метка Arena 1 находится в пределах границ арены.
    5. В нижней части правой панели измените Форму, Размер и Положение (Ширина:2.75, Высота:2.75, X:0, Y:0) на желаемые размеры.
    6. Нажмите 3. Выберите «Фигура» и «Нарисовать зоны» (необязательно). Теперь будет выбрана группа зон 1 на правой панели. Переместите курсор мыши в верхнюю середину экрана и выберите значок круга. Создайте меньший круг на изображении арены, перетащив его внутрь.
    7. На нижней правой панели измените Форму, Размер и Положение на желаемые размеры (Ширина:1.75, Высота:1.75, X:0, Y:0).
    8. Нажмите кнопку « Добавить метку зоны » в той же строке меню, что и круг. Щелкните в центре меньшего круга. Щелкните правой кнопкой мыши тег Zone 1 на правой панели, чтобы переименовать Zone Center.
    9. Нажмите кнопку Добавить метку зоны еще раз. Нажмите на периметр арены, за пределами центральной зоны. Щелкните правой кнопкой мыши Зона 2 на правой панели, чтобы переименовать зону в Периметр.
    10. Нажмите 4. Проверьте настройку , чтобы убедиться в правильности настроек арены.
  4. Настройте параметры контроля пробной версии, как описано ниже.
    1. Нажмите «Настройки пробного контроля» на вкладке «Настройки пробного контроля» на верхней левой панели настроек. Появятся шесть блоков компонентов. Нажмите «Настройки» в четвертом поле с надписью «Условие», которое включает в себя «Время (1») и «Бесконечное время (условие никогда не выполняется»).
    2. Нажмите на пузырь рядом с надписью «После», затем введите продолжительность (30 минут) в текстовое поле справа. Справа от текстового поля времени также будет выпадающее меню для выбора между h, min и s.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Настройки обнаружения записанного материала будут зависеть от качества отснятого материала. Следующие методы можно манипулировать для получения наилучших результатов, специфичных для отдельных видеоматериалов.
  5. Настройте параметры обнаружения, как описано ниже.
    1. Нажмите «Настройки обнаружения» на вкладке «Настройки обнаружения» на верхней левой панели настроек. Нажмите кнопку «Выбрать видео» в правом верхнем углу. Загрузите нужное видео в соответствии с базовыми настройками обнаружения.
    2. Перейдите на вкладку «Дополнительно » на той же правой панели. Теперь на вкладке Метод убедитесь, что для него установлено значение Масштабирование серого. Измените диапазон (0 - 100).
    3. На вкладке Сглаживание на правой панели убедитесь, что для параметра Сглаживание пикселей видео установлено значение Нет, для параметра Коррекция пропущенных кадров установлено значение Выкл, а для параметра Подавление шума дорожки установлено значение Выкл.
    4. Под вкладкой Контур объекта на правой панели, отрегулируйте настройку последовательности и измените Эрозию, Расширение и Эрозию на 1, 1 и 0 соответственно.
    5. На вкладке Размер объекта измените Минимум (0) и Максимум (125000). Нажмите «Сохранить » в правом нижнем углу.
  6. Настройте последовательность видеопроб для наблюдения, как описано ниже.
    1. Нажмите «Список пробных версий» на верхней левой панели настроек. Загрузите видеоматериалы образцов в нужной последовательности, щелкнув многоточие в столбце «Файл системного видео». Чтобы добавить больше пробных версий, нажмите «Добавить пробные версии» в левом верхнем углу панели «Список пробных версий».
  7. Настройте параметры приобретения.
    1. Нажмите Источники трафика в левом верхнем углу вкладки Источники трафика. В разделе Параметры приобретения на правой панели нажмите Отслеживать все запланированные пробные версии.
    2. Чтобы начать сбор, нажмите на красную кнопку в нижней части экрана рядом с надписью «Готово к началу». Теперь начнется сбор видео, который займет определенное время, в зависимости от количества и продолжительности загруженных видеопроб.
  8. Настройте параметры анализа, как описано ниже.
    1. Нажмите «Профиль анализа» на вкладке «Анализ» на левой панели. Нажмите на выбранные по умолчанию зависимые переменные, Скорость и Перемещенное расстояние, и удалите их.
    2. На панели зависимых переменных на вкладке «Местоположение» нажмите «В зоне». Установите флажки Центр и Зона периметра , чтобы они были отмечены.
    3. Перейдите на вкладку «Статистика испытаний » в поле «В зоне». Нажмите, чтобы снять флажок Задержка до первого. Нажмите кнопку Добавить.
    4. На вкладке Тело нажмите кнопку Вращение. Нажмите По часовой стрелке и оставьте Порог (50,00 градусов) и минимальное расстояние перемещения (2,00 см) по умолчанию. Нажмите кнопку Добавить.
    5. Нажмите кнопку Вращение еще раз и нажмите Против часовой стрелки. Нажмите кнопку Добавить.
  9. Анализируйте треки, как описано ниже.
    1. На вкладке Результаты щелкните Визуализация трека. На правой панели в разделе «Фильтр» снимите галочку с опции «Последний». Панель управления воспроизведением в нижней средней части экрана будет отображать визуализацию следов образцов в определенное время наблюдения.
  10. Анализируйте и экспортируйте результаты. Результаты можно найти в остальных нижних левых вкладках панели. Чтобы экспортировать данные, нажмите «Необработанные данные » или «Статистика » в разделе «Экспорт» на левой панели.

3. Эвтаназия

  1. Приготовьте 22 мМ раствора эвгенола в родниковой воде. Поместите планарии в чашки Петри с 9 мл 22 мл раствора эвгенола с помощью разрезанной переводной пипетки, разделяя каждую концентрацию. Усыпляйте в течение 3 минут или до тех пор, пока все движения не прекратятся.
  2. Поместите планарии в свежую чашку Петри, наполненную 9 мл родниковой воды для полоскания в 1-2 раза, и поместите либо в раствор Гольджи, описанный ниже (окрашивание по Гольджи), либо в 4% параформальдегид (иммунофлуоресцентное окрашивание).

4. Гистологический анализ

  1. Окрашивание по методу Гольджи
    1. После того, как планарии будут усыплены, поместите их в стакан или чашку Петри, наполненную смесью растворов А и В в соотношении 1:1 из набора для окрашивания Гольджи. Замените растворы А и В на следующий день, поместив планарии в новый стакан, наполненный смесью растворов А и В.
    2. Дайте планарии постоять 1 неделю в растворах А и В.
    3. Удалите планарии из растворов А и В и поместите их в раствор С в другой стакан. Замените раствор С на следующий день. Дайте планарии постоять в растворе С минимум 72 ч и до 1 недели.
    4. Удалите планарии из раствора С с помощью переводной пипетки и заложите, поместив небольшое количество ОКТ-соединения на патрон, добавив планарии, а затем окружите планарии ОКТ-соединением. Поперечно разрезать планарии на участки по 5 мкМ с помощью криостата при температуре -24°С.
    5. Установите планарии на предметные стекла с желатиновым покрытием с помощью переводной пипетки и раствора C и дайте ей высохнуть в темноте при RT в течение 3 дней.
    6. Окрашивание горок с помощью раствора для окрашивания (1 часть раствора D, 1 часть раствора E, 2 части родниковой воды) путем погружения предметных стекол в стаканы растворами следующим образом: раствор для окрашивания на 10 минут, затем в родниковую воду 2 раза по 4 минуты, затем 50% этанол на 4 минуты, затем 75% этанол на 4 минуты, затем 95% этанол на 4 минуты, затем в 100% этаноле 4x в течение 4 мин и, наконец, в ксилоле 3x в течение 4 мин.
    7. Покровные стекла с гистологическими монтажными средами и наблюдение за тканью под микроскопией светлого поля.
  2. Иммунофлуоресцентное окрашивание
    1. После эвтаназии планарии поместите в 4% параформальдегид не менее чем на 24 часа. После этого его также можно хранить в холодильнике.
    2. Переложите планарию до 20% сахарозы из 4% PFA и оставьте в ней на 1 сутки. Удалите планарию из сахарозы и поместите ее в буфер PBS на 5 минут.
    3. Промойте 3-4 стирками буфер PBS и переложите до 20% сахарозы для хранения до готовности к окрашиванию.
    4. Поместите в 70%, 95% и 100% спиртовые растворы на 1 минуту каждый. Поместите в ксилол на 1 минуту.
    5. Поместите в 95% и 70% спирт на 1 минуту каждое. Поместите в буфер PBS 3 раза на 5 минут каждый. Поместите в раствор метанола и перекиси водорода 60:40 на 10-15 минут.
    6. Промыть в PBS 3x по 5 минут каждый. Добавьте объем 4% параформальдегида, использованный ранее в 4.2.1, в этот буфер PBS.
    7. Промыть в PBS 3x по 5 минут каждый. Залейте на 1 ч с сухим молоком, накрыв им планарии.
    8. Разбавьте первичное антитело (1H6) до 5 мкг/мл с помощью PBS и инкубируйте предметные стекла в течение ночи при 4 °C в растворе антитела. На следующий день полоскать планарии в PBS в течение 10 минут.
    9. Разбавьте вторичное антитело (козий антимышиный IgG) до 1 мкг/мл в PBS и инкубируйте предметные стекла в течение ночи в RT в растворе антитела. На следующий день полоскать планарии в PBS в течение 15 минут.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Разные антитела имеют разные оптимальные концентрации; Определите это перед началом эксперимента.
    10. Установите на предметное стекло целые планарии, накройте покровным стеклом, запечатайте водным монтажным материалом и осмотрите ткань под флуоресцентным микроскопом.

5. Анализ изображений

  1. Откройте программное обеспечение для анализа изображений с открытым исходным кодом. Установите подключаемый модуль colour_deconvolution2.jar в программное приложение для анализа изображений с открытым исходным кодом, перетащив его в приложение.
  2. Выберите изображение для анализа и перетащите его в программное приложение для анализа изображений с открытым исходным кодом. Перейдите на вкладку Изображение. Нажмите на цвет. Нажмите Деконволюция цвета2 v2.1.
  3. В опции векторов нажмите H DAB. В опции вывода нажмите 8bit_Transmittance. Убедитесь, что выбраны следующие параметры: Смоделированные таблицы таблиц таблиц данных, Перекрестное произведение для цвета 3, Показать матрицы и Скрыть легенду. Нажмите OK.
  4. Выберите черно-белое изображение, чтобы убедиться, что программное обеспечение для анализа изображений с открытым исходным кодом может эффективно анализировать изображение.
  5. Перейдите на вкладку Изображение. Нажмите Настроить. Нажмите кнопку Порог. Отрегулируйте порог таким образом, чтобы окрашивание DAB или передний план были красного цвета с белым фоном. Убедитесь, что пороговое значение одинаково для каждого изображения, если количественно оценивается несколько изображений.
  6. Нажмите кнопку Анализировать. Нажмите кнопку Установить измерения. Выберите Площадь, Минимальное и максимальное значение серого, Предел порога, Отображаемая метка, Медиана и Среднее значение серого. Нажмите OK. Нажмите кнопку Анализировать. Нажмите кнопку Измерить. Получите результат.
  7. Повторите шаги с 1.2 по 1. U6ntil все изображения количественно оцениваются. Нажмите на изображение результатов. Нажмите кнопку Файл. Нажмите кнопку Сохранить как. Сохраните файл в виде таблицы и просмотрите данные в программе для работы с электронными таблицами.

6. Статистический анализ

  1. Рассчитайте средние и стандартные ошибки среднего значения (SEM) для поведения планарий с помощью дисперсионного анализа (ANOVA) и t-критерия Стьюдента для статистической значимости (p < 0,05).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

У планарий, подвергшихся воздействию пилокарпина в различных концентрациях, наблюдалось следующее поведение:
Дорсальные колебания: пузырчатое образование, которое проходит от краниального конца тела планария к каудальному концу.
Колебания головы: пузырчатое образование у головы планария, которое образует вид, похожий на головастика.
С-образная форма: голова движется по часовой стрелке, а хвост движется против часовой стрелки, образуя букву С.
Взмах головой: голова планарии ре...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Это исследование продемонстрировало индуцированное пилокарпином поведение планарий в различных концентрациях. Наиболее значимым поведением было осциллирующее дорсальное расширение, поскольку это поведение не было задокументировано в других исследованиях судорожного поведения у планарий 9,10,11,12. Механизм, с помощью которого пилокарпин вызывает судорожное пов...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам декларировать нечего.

Благодарности

Мы хотим поблагодарить EVMS Research Incentive Fund (PI: A.E. Musto) и доктора Хорхе Жако за его полезные предложения по оптимизации протокола иммунофлуоресценции.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1,5 мл центрифужные пробирки
4% раствор параформальдегидаHimediaTCL119
Водный монтажный материалClini SciencesNB-47-02240-30ML
Стаканы (по одному для каждой протестированной концентрации)
Carolina Springwatercarolina132450
Cryostat
Разведенные первичные и вторичные антитела
Этанол (100%)sigma Aldrich
EthosVision XT 16noldus
Fiji Version 2.9.0
Желатиновые стеклаsigma Aldrich643203
Golgi Antibody 1H6DSHBAB_2619608
Краситель Гольджи kit_Neuroscience AssociatePK 401/401A
Перекись
метанол
Монтажный материалтермофишер научный
OCT компаунд
PBS буферсигма AldrichP4417
Сухое молоко
Оловянная фольга
Трансферные пипетки
ксилол
водорода

Ссылки

  1. World Health Organization. Epilepsy. , (2024).
  2. Dalic, L., Cook, M. J. Managing drug-resistant epilepsy: challenges and solutions. Neuropsychiatr Dis Treat. 12, 2605-2616 (2016).
  3. Mayo Clinic. Seizures - Symptoms and causes. , (2023).
  4. Shomrat, T., Levin, M. An automated training paradigm reveals long-term memory in planarians and its persistence through head regeneration. J Exp Biol. 216 (20), 3799-3810 (2013).
  5. Moreira-Lobo, D. C., et al. Eugenol modifies the excitability of rat sciatic nerve and superior cervical ganglion neurons. Neurosci Lett. 472 (3), 220-224 (2010).
  6. Johan Arief, M. F., Choo, B. K. M., Yap, J. L., Kumari, Y., Shaikh, M. F. A systematic review on non-mammalian models in epilepsy research. Front Pharmacol. 9, 655(2018).
  7. Mineta, K., et al. Origin and evolutionary process of the CNS elucidated by comparative genomics analysis of planarian ESTs. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 7666-7671 (2003).
  8. Wu, J. P., Lee, H. L., Li, M. H. Cadmium neurotoxicity to a freshwater planarian. Arch Environ Contam Toxicol. 67 (4), 639-650 (2014).
  9. Kim, A., Rawls, S. M. Nicotine-induced C-shape movements in planarians are reduced by antinociceptive drugs: Implications for pain in planarian paroxysm etiology. Brain Res. 1778, 147770(2022).
  10. Reho, G., Lelièvre, V., Cadiou, H. Planarian nociception: Lessons from a scrunching flatworm. Front Mol Neurosci. 15, 935918(2022).
  11. Pagán, O. R., et al. Planarians require an intact brain to behaviorally react to cocaine, but not to react to nicotine. Neuroscience. 246, 265-270 (2013).
  12. Raffa, R. B., Holland, L. J., Schulingkamp, R. J. Quantitative assessment of dopamine D2 antagonist activity using invertebrate (Planaria) locomotion as a functional endpoint. J Pharmacol Toxicol Methods. 45 (3), 223-226 (2001).
  13. Bhatt, P., Reitz, A. B., Tallarida, C. Mephedrone ("bath salt") pharmacology: insights from invertebrates. Neuroscience. 208, 79-84 (2012).
  14. Neufeld, T., Carniello, T., Dotta, B. A single hypoxic event ameliorates pilocarpine-induced hyperkinetic movements in Planaria. Nat Sci. 14, 149-156 (2022).
  15. Rossini, L., et al. Dendritic pathology, spine loss, and synaptic reorganization in human cortex from epilepsy patients. Brain. 144 (1), 251-265 (2021).
  16. Owuor, K., et al. LGI1-associated epilepsy through altered ADAM23-dependent neuronal morphology. Mol Cell Neurosci. 42 (4), 448-457 (2009).
  17. Dubey, V., et al. Dendritic reorganization in the hippocampus, anterior temporal lobe, and frontal neocortex of lithium-pilocarpine induced Status Epilepticus (SE). J Chem Neuroanat. 133, 102329(2023).
  18. Löscher, W. Critical review of current animal models of seizures and epilepsy used in the discovery and development of new antiepileptic drugs. Seizure. 20 (5), 359-368 (2011).
  19. Musto, A. E., Walker, C. P., Petasis, N. A., Bazan, N. G. Hippocampal neuro-networks and dendritic spine perturbations in epileptogenesis are attenuated by neuroprotectin D1. PLoS One. 10 (1), e0116543(2015).
  20. Omuro, K. G., et al. Novel monoclonal antibodies to study tissue regeneration in planarians. BMC Dev Biol. 15 (2), (2015).
  21. Keenan, C. L., et al. Cytoarchitecture of primitive brains: Golgi studies in flatworms. J Comp Neurol. 195, 4(1981).
  22. Pronin, A. N., Wang, Q., Slepak, V. Z. Teaching an old drug new trick: Agonism, antagonism, and biased signaling of pilocarpine through M3 muscarinic acetylcholine receptor. Mol Pharmacol. 92 (5), 601-612 (2017).
  23. Im, K., Mareninov, S., Diaz, M. F. P., Yong, W. H. An introduction to performing immunofluorescence staining. Methods Mol Biol. 1897, 299-311 (2019).
  24. Vogt, R. V., Phillips, D. L., Henderson, L. O., Whitfield, W., Spierto, F. W. Quantitative differences among various proteins as blocking agents for ELISA microtiter plates. J Immunol Meth. 101 (1), 43-50 (1987).
  25. Duhamel, R. C., Johnson, D. A. Use of nonfat dry milk to block nonspecific nuclear and membrane staining by avidin conjugates. J Histochem Cytochem. 33 (7), 711-714 (1985).
  26. Chen, T. S., Huang, T. H., Lai, M. C., Huang, C. W. The role of glutamate receptors in epilepsy. Biomedicines. 11 (3), 783(2023).
  27. Kreshchenko, N. Immunocytochemical identification of serotoninergic neurons in Planaria Girardia tigrina. Biochem. Moscow Suppl Ser A. 11, 68-76 (2017).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Модель судорог у планарийпилокарпин-индуцированные судорогиDugesia dorotocephalaтестирование противосудорожных препаратовнейрогистологическая оценкаокрашивание по Гольджииммунофлуоресцентное окрашиваниеповеденческие фенотипыпоиск лекарств от эпилепсии
Планария как животная модель для экспериментального острого припадка
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.