В данной рукописи описываются оперативные процедуры и меры предосторожности для исследования потенциальных общих патогенетических механизмов, связывающих первичный синдром Шегрена и аденокарциному легкого, с помощью биоинформатического анализа и экспериментальной проверки.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Первичный синдром Шегрена, ассоциированный с аденокарциномой легкого: исследование потенциальных общих патогенетических механизмов и экспериментальная верификация
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Это исследование было направлено на изучение потенциальных общих патогенетических механизмов, связывающих первичный синдром Шегрена (pSS) и аденокарциному легкого (LUAD) посредством биоинформатического анализа и экспериментальной проверки. Соответствующие гены, ассоциированные с pSS и LUAD, были получены из баз данных Gene Expression Omnibus (GEO) и Genecard. Впоследствии дифференциально экспрессируемые гены (DEG), ассоциированные с pSS и LUAD, были подвергнуты скринингу как pSS-LUAD-DEGs. Для выяснения значимых биологических функций pSS-LUAD-DEGs были проведены анализы обогащения Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG) и Gene Ontology (GO). Основные мишени были определены путем построения сети белок-белковых взаимодействий (PPI) с последующей оценкой диагностической точности гена-хаба с помощью анализа кривой операционной характеристики приемника (ROC). В этом исследовании мыши NOD/Ltj служили животными моделями pSS и стимулировались твердыми частицами 2,5 (PM2,5) для создания воспалительной реакции. Количественная полимеразная цепная реакция в реальном времени (кПЦР), иммуноферментный анализ (ИФА) и вестерн-блоттинг были использованы для соответствующей верификации экспериментов в молекулярной биологии. Результаты, полученные с помощью анализов обогащения KEGG и GO, указывают на то, что воспаление играет решающую роль в связывании pSS и LUAD. IL6, CCNA2, JAK2, IL1B, ASPM, CCNB2, NUSAP1 и CEP55 были определены в качестве ключевых мишеней pSS-LUAD. У мышей BALB/c и мышей NOD/Ltj наблюдалась повышенная экспрессия воспалительных цитокинов IL-6 и IL-1β в тканях легких после 21 дня стимуляции PM2,5, активируя сигнальный путь JAK2/STAT3 и повышая экспрессию ассоциированных с опухолью генов CCNA2, CCNB2 и CEP55, причем у мышей NOD/Ltj наблюдались более выраженные изменения, чем у мышей BALB/c. Этот протокол демонстрирует, что канцерогенез, индуцированный воспалительным микроокружением легких, может быть ключевой причиной высокой частоты LUAD у пациентов с псс. Кроме того, механизмы, связанные с блокированием, могут помочь предотвратить возникновение LUAD у пациентов с псс.
Введение
Первичный синдром Шегрена (ПСС) является аутоиммунным заболеванием, характеризующимся лимфоцитарной инфильтрацией экзокринных желез и приводящим к клиническим симптомам сухости глаз (ксерофтальмии) и сухости во рту (ксеростомии)1,2. ПСС также обычно сопровождается внежелезистыми проявлениями поражения, включая гиперглобулинемию3, интерстициальное заболевание легких4, почечный канальцевый ацидоз5, неврологические повреждения6 и тромбоцитопению7, которые являют....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Подопытные животные были размещены в здании Китайско-японской больницы дружбы, где условия содержания соответствовали условиям кормления животных в соответствии с национальным стандартом Китая «Требования к лабораторным животным в окружающей среде и жилищных условиях» (GB14925-2010). Все процедуры и эксперименты по уходу за животными соответствовали рекомендациям ARRIVE, и основывались на принципах 3R (сокращение, замена, доработка), придерживаясь руководящих принципов Национального закона о защите животных Китая. Мыши BALB/c были приобретены у SPF (Beijing) Biotechnology Co., Ltd., а мыши NOD/Ltj были приобретены у Huafukang (Beijing....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
В общей сложности было идентифицировано 3290 DEGs из 23348 генов in GSE84884 (pSS), включая 2659 генов с повышенной регуляцией и 631 ген с подавленной регуляцией (рис. 1A). Для GSE51092 (pSS) было идентифицировано в общей сложности 3290 DEGs из 11409 генов, включая 667 генов с повышенной регуляцией и 587 генов с подавленной регуляцией (рис. 1B). База данных GeneCards получила 102 ДЭГ, связанных с пСС яичников, а оценка корреляции критериев скрининга составила ≥2.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Хотя пСС считается заболеванием, характеризующимся в первую очередь инвазией экзокринных желез, нельзя игнорировать повреждение экстра-желез24. Легкие представляют собой орган-мишень для псс, а поражение легких является распространенным внежелезистым проявлением псс, обычно включающим лимфоцитарную инфильтрацию слизистой оболочки бронхов и легочный интерстиций25. Исследования показывают, что не менее 20% пациентов с ПС испытывают интерстици.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.
Благодарности
Это исследование было поддержано Национальным финансированием клинических исследований больницы высокого уровня (2023-NHLHCRF-BQ-01) и Молодежным проектом Больницы китайско-японской дружбы (No.2020-1-QN-8).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 3-цветный прекрасированный белковый маркер | Epizyme | WJ103 | Western Blot |
| Буфер для разведения антител | Epizyme | PS119 | Western Blot |
| BCA Набор для количественного определения белка | Epizyme | ZJ101 | Western Blot |
| Cytoscape 3.7.1 программное обеспечение | Национальный институт общих медицинских наук (NIGMS), Национальные институты здравоохранения (NIH) | Версия 3.7.1. | Программное обеспечение с открытым исходным кодом для анализа и визуализации биологических сетей |
| ECL Luminous Fluid | Epizyme | SQ203 | Western Blot |
| Electrophoresis Buffer | Epizyme | PS105S | Western Blot |
| GraphPad Prism 10.0 | GraphPad | Version 10.0 | Анализ данных |
| HRP-конъюгированный козий анти-кролик IgG (H+L) (AS014) | abclonal | AS014 | Western Blot |
| JAK2 | Антитела Клеточная сигнальная технология | 3230T | Мышь Western Blot |
| IL-1β ИФА Кит | Пекин 4А Biotech Co., Ltd | CME0015 | ELISA |
| Mouse IL-6 ELISA Kit | Beijing 4А Biotech Co., Ltd | CME0006 | |
| Коктейль ингибиторов фосфатазы ИФА (100&раз;) | Epizyme | GRF102 | Western Blot |
| Phospho-JAK2 (Tyr1007/1008) | Технология передачи сигналов клетками | 3776S | Western Blot |
| Phospho-STAT3 (Tyr705) | Технология клеточной сигнализации | 9145S | вестерн-блота |
| (100×) | Epizyme | GRF101 | Western Blot |
| Protein Free Rapid Blocking Buffer (5×) | Epizyme | PS108 | Western Blot |
| PVDF мембрана | Millipore | IPVH00010 | Western |
| Blot R программное обеспечение | R Foundation for statistical computing | Not Applicable | Программное обеспечение и язык программирования для статистического анализа, используемые для анализа данных, визуализации и машинного обучения |
| Радиоиммунопреципитационный анализ | Epizyme | PC101 | Western Blot |
| Система обратной транскрипции | Promega | A3500 | PCR |
| SDS-Page | Epizyme | LK303 | Western Blot |
| SDS-PAGE Protein Load Buffer (5×) | Epizyme | LT103 | Western Blot |
| STAT3 | Антитела Клеточная сигнальная технология | 9139S | Western Blot |
| SYBR Green Realtime PCR Master Mix | TOYOBO | QPK-201 | PCR |
| TBST (10×) | Epizyme | PS103 | Western Blot |
| Western Blot Transfer Buffer (10×) | Epizyme | PS109 | Western Blot |
| β-Actin Антитело | абклональное | AC026 | Western Blot |
Ссылки
- Thorlacius, G. E., Bjork, A., Wahren-Herlenius, M. Genetics and epigenetics of primary sjogren syndrome: Implications for future therapies. Nat Rev Rheumatol. 19 (5), 288-306 (2023).
- Bjordal, O., Norheim, K. B., Rodahl, E., Jonsson, R., Omdal, R. Primary Sjogren's syndrome and th....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
