Методическая статья

Экстракция и идентификация микроядер из лимфоцитов периферической крови человека

DOI:

10.3791/67564

⸱

28 марта 2025 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Occupational Diseases, The Second Affiliated Hospital of Chengdu Medical College Nuclear Industry 416 Hospital, 2Medicine and Engineering Interdisciplinary Research Laboratory of Nursing & Materials, West China Hospital, Sichuan University/West China School of Nursing

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом протоколе описан метод извлечения и очистки микроядер из лимфоцитов человека с помощью центрифугирования градиента плотности сахарозы. Он обеспечивает экспериментальную основу для исследования состава и функции микроядер.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Микроядро (МН) — это аномальная ядерная структура, которая образуется в клетках, особенно в клетках костного мозга или крови, при воздействии внешних повреждений, таких как радиация, из-за неразрешенного повреждения ДНК или митотических ошибок. После образования МН могут активно участвовать в различных канцерогенных процессах, включая воспалительную сигнализацию и хромосомные генетические перестройки. МН содержат ядерную ДНК, гистоны, фрагменты нуклеопротеинов и другие активные белки, которые тесно связаны с их функциями. Изучение образования и компонентов МН имеет решающее значение для понимания их роли в управлении канцерогенными процессами. Извлечение и очистка МН имеют важное значение для достижения этих исследовательских целей. Однако нестабильность ядерной мембраны MN и ее подверженность разрыву делают эти процессы технически сложными. В настоящее время только в нескольких исследованиях сообщалось об использовании центрифугирования с градиентом плотности для разделения MN. Данное исследование обобщает и упрощает процессы разделения и очистки MN. Лимфоциты периферической крови человека, подвергшиеся воздействию радиации, изолировали, а МН отделили и очистили с помощью буферов сахарозы разной концентрации в двухступенчатом процессе. Целостность и чистота МН были проверены, что обеспечило четкую и практическую демонстрацию экспериментальной процедуры для исследователей, изучающих причины и функции МН.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Микроядро (МН) — субклеточная структура цитоплазмы, содержащая ядерную ДНК, гистоны и фрагменты нуклеопротеинов, окруженная мембранными структурами 1,2. MN полностью отделен от основного ядра и обычно появляется рядом с ним в овальной или круглой форме, с размером от 1/16 до 1/3 диаметра основного ядра. Образование МН в первую очередь связано с ацентрическими фрагментами хромосом, хромосомной миссегрегацией, разрывом дицентрической хромосомы, нестабильностью хромосом и агрегацией двойных минут (ДБ)3. МН редко встречаются в здоровых клетках и вызваны преимущественно воздействием экзогенных генотоксинов, что приводит к повреждению ДНК или митотическим ошибкам 4,5. Радиационное повреждение является значительным фактором образования МН, и воздействие ионизирующего излучения (ИК) на человека увеличивается с развитием клинических и технологических применений 6,7. Инфракрасное воздействие вызывает одноцепочечные разрывы (SSB) и двухцепочечные разрывы (DSB) в клеточной ДНК, что может привести к гибели клеток или апоптозу 8,9,10. МН — это фрагменты хромосом, целых хромосом или хроматид, образующиеся в результате неотремонтированной или несоответствующей репарации DSB. Они служат критическими индикаторами степени ущерба, нанесенного ИК 7,11,12. Всестороннее понимание компонентов МН имеет важное значение для смягчения побочных эффектов лучевой терапии и минимизации воздействия нежелательного излученияна население 6,13. Тем не менее, белки и нуклеиновые кислоты, содержащиеся в МН, до сих пор остаются не полностью охарактеризованными.

Считается, что МН возникают в результате индукции различных типов повреждений ДНК. Их механизмы репликации и способности к восстановлению ДНК нарушаются, что приводит к обширному повреждению ДНК в течение короткого периодавремени 3,14,15. МН также являются важными индикаторами хромосомной нестабильности, которая неизменно присутствует в предраковых клетках 3,14,16,17,18,19. МН уже давно используются в качестве биомаркеров генотоксичности, риска развития опухолей и степенизлокачественности опухоли 3,20,21. После образования МН могут активно управлять многочисленными канцерогенными процессами, включая воспалительную сигнализацию22,23 и хромосомную генетическую перестройку 24,25,26. Например, МН инициируют воспалительный каскад, рекрутируя рецептор распознавания вирусных образов (PRR) циклическую синтазу GMP-АМФ (cGAS) из цитоплазмы 4,22,23,27. Другие белки, которые могут присутствовать в МН, включают экзонуклеазы28, транскрипционные механизмы4 и кофакторы трансляции. Остается неясным, собирают ли МН уникальный, смещенный белковый профиль из библиотеки цитоплазматических белков или пассивно приобретают белки с высоким содержанием из ядра и цитоплазмы во время их формирования. Помимо отдельных белков, таких как cGAS, степень, в которой конкретные среды влияют на общий состав MN, еще не определена. Понимание всего ландшафта микроядер ограничено, нет общедоступных наборов данных для исследования. Таким образом, извлечение полных и очищенных МН крайне необходимо для глубокого и всестороннего анализа их компонентов.

Одной из причин задержки репликации ДНК в МН может быть репликационный стресс, вызванный недостатком ферментов и кофакторов, необходимых для синтеза и репарации ДНК. Этот недостаток может быть результатом дефектной сборки ядерной оболочки MN, что приводит к отсутствию комплекса ядерных пор20. Следовательно, МН не могут импортировать ключевые белки, необходимые для поддержания целостности ядерной мембраны и стабильности генома 2,29,30,31. Неполная ядерная мембрана MN подвержена разрыву, что делает экстракцию MN очень сложной.

В настоящее время МН в основном экстрагируются с помощью центрифугирования с градиентом плотности сахарозы 27,32,33 и очищаются с помощью проточной цитометрии34. В этом исследовании процесс разделения и очистки МН был обобщен и упрощен. Лимфоциты периферической крови человека, подвергшегося воздействию радиации, были выделены, а МН дважды очищены с использованием буферов сахарозы разной концентрации. Целостность и чистота МН были проверены, что предоставило исследователям практическую и интуитивно понятную экспериментальную демонстрацию для изучения причин и функций МН.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты с образцами периферической крови человека проводились в соответствии с соответствующими руководящими принципами и правилами. Данное исследование было одобрено Этическим комитетом больницы 416 атомной отрасли, Китай (Обзор 2020 г. [No 48]), и было получено информированное согласие всех участников. Критерии исключения включали лиц с серьезными хроническими заболеваниями, такими как опухоли, подагра или заболевания крови, а также тех, кто подвергался воздействию радиоактивных или генотоксических веществ в своей профессии. Для этого исследования 10 мл периферической крови было собрано у здорового 28-летнего мужчины в пробирку для сбора крови, содержащую гепарин натрия в качестве антикоагулянта. Образец облучали in vitro 60Co γ-лучами при 37 °C с использованием стандартного устройства для терапии кинетической энергией гамма-воздуха. Доза облучения была установлена на уровне 4,0 Гр при мощности дозы 0,6350 Гр/мин. После облучения образец инкубировали при 37 °C в течение 2 ч, инокулировали в среду RPMI-1640 и культивировали при 37 °C в течение 60 ч. Подробная информация о реагентах и оборудовании, использованных в данном исследовании, представлена в Таблице материалов.

1. Получение микроядра и ядра

  1. Добавьте цитохалазин B в среду для клеток периферической крови до достижения конечной концентрации 10 мкг/мл. Выдерживать смесь в течение 45 минут при температуре 37 °C.
    Цитохалазин В является ингибитором полимеризации актина, который способствует эффективному отделению микроядер от ядра перед лизисом клетки35.
  2. Центрифугируйте клетки крови при 200 × г в течение 5 минут при 4 °C.
  3. Ресуспендируйте клетки крови в 10 мл 0,01 М PBS, предварительно охлажденном при 4 °C.

2. Выделение лимфоцитов

  1. Добавьте 15 мл раствора для разделения лимфоцитов человека в коническую пробирку объемом 50 мл. Аккуратно нанесите слой взвешенных клеток периферической крови поверх разделительного раствора.
  2. Центрифугируйте пробирку при 400 × г в течение 30 мин при 4 °C.
    ПРИМЕЧАНИЕ: После центрифугирования клетки крови в пробирке разделяются на четыре отдельных слоя сверху донизу: первый слой - это слой плазмы (тромбоциты), второй слой - это слой кольцевых молочно-белых лимфоцитов, третий слой - прозрачный слой разделительной жидкости, а четвертый слой - слой эритроцитов.
  3. Осторожно перенесите второй слой (лимфоциты) в отдельную центрифужную пробирку. Добавьте PBS (0,01 M) в три раза больше объема переносимых клеток, хорошо перемешайте и центрифугируйте при 200 × г в течение 10 мин при 4 °C. Выбросьте надосадочную жидкость с помощью пипетки.

3. Лизис лимфоцитов

  1. Поместите собранную в коническую трубку клеточную гранулу на лед.
  2. Добавьте 6 мл буфера для холодного лизиса (Таблица 1, Дополнительный файл 1) и повторно суспендируйте клеточную гранулу в буфере для лизиса.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Буфер для лизиса следует дополнить ингредиентами, перечисленными в Таблице 2, Дополнительном файле 1, непосредственно перед использованием.
  3. Переложите лизат клеток в стеклянный гомогенизатор.
  4. Аккуратно используйте рыхлый помол для ручной гомогенизации образца, перемещая гомогенизатор вверх и вниз 10 раз.
  5. Перенесите гомогенизированный лизат клеток обратно в коническую пробирку объемом 50 мл.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Выполняйте все шаги осторожно и держите образец на льду.

4. Первоначальная изоляция МН с помощью градиента плотности сахарозы

  1. Смешайте 5 мл клеточного лизата с равным объемом 1,8 М сахарозного буфера (Таблица 3, Дополнительный файл 1) для получения соотношения лизата и сахарозы 1:1.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Буфер сахарозы 1,8 М следует дополнить ингредиентами, перечисленными в Таблице 4, Дополнительном файле 1, непосредственно перед использованием.
  2. Приготовьте градиент плотности сахарозы: Добавьте 15 мл буфера сахарозы 1,6 М (Таблица 5, Дополнительный файл 1) на дно конической пробирки объемом 50 мл. Медленно добавьте 20 мл 1,8 М сахарозного буфера (Таблица 3, Дополнительный файл 1) поверх 1,6 М сахарозного буфера.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Как 1,6 М буфер сахарозы, так и 1,8 М сахарозный буфер следует дополнять ингредиентами, указанными в Таблице 4, Дополнительном файле 1, соответственно, непосредственно перед использованием. Чтобы добавить буферы сахарозы, приложите кончик пипетки к верхней внутренней стороне конической трубки и медленно пипетируйте раствор.
  3. Медленно нанесите пипеткой 10 мл смеси [Lysate 1:1 1,8 M sucrose buffer] поверх двухслойного градиента плотности сахарозы.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Медленно добавляйте слои, чтобы убедиться, что средний буферный слой 1,8 М не смешивается с нижним буферным слоем 1,6 М, а верхняя смесь лизированных клеток 1:1 и буфера сахарозы 1,8 М не смешивается с буферным слоем 1,8 М.
  4. Центрифугируйте пробирку в центрифуге с горизонтальным ротором при давлении 1000 × g в течение 20 мин при 4 °C.
    ПРИМЕЧАНИЕ: После центрифугирования жидкость разделится на три слоя: верхний слой содержит примерно 3 мл клеточного мусора, средний слой содержит примерно 3 мл микроядер (МН), нижний слой содержит примерно 39 мл ядер.
  5. Удалите верхние 3 мл жидкости у поверхности и соберите 3 мл неочищенных микроядер из среднего слоя для второго градиента плотности сахарозы.

5. Вторичная очистка МН с помощью градиента плотности сахарозы

  1. Подготовьте градиент плотности сахарозы:
    1. Добавьте 3 мл 1,8 М сахарозного буфера (Таблица 3, Дополнительный файл 1) на дно конической пробирки объемом 15 мл.
    2. Добавьте 3 мл 1,5 М сахарозного буфера (Таблица 6, Дополнительный файл 1) поверх 1,8 М сахарозного буфера.
    3. Наконец, добавьте 3 мл 1,4 М сахарозного буфера (Таблица 7, Дополнительный файл 1) поверх 1,5 М сахарозного буфера.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Расположите кончик пипетки напротив верхней внутренней стороны конической трубки и медленно пипетируйте раствор.
  2. Медленно пипеткой нанесите 3 мл среднего слоя из второго градиента плотности сахарозы на вершину трехслойного градиента плотности сахарозы.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Добавляйте слои медленно, чтобы избежать смешивания.
  3. Центрифугируйте пробирку в центрифуге с горизонтальным ротором при давлении 500 × г в течение 20 мин при температуре 4 °C.
    ПРИМЕЧАНИЕ: После центрифугирования верхний слой будет содержать 1-4 мл очищенных микроядер (МН), а нижний слой будет содержать в основном 8 мл ядер.
  4. Оставьте верхние 1-4 мл очищенных микроядер для последующего использования.

6. Идентификация МН

  1. Возьмите неочищенный раствор микроядер (полученный на шаге 4) и очищенный раствор микроядер (полученный на шаге 5) и приготовьте мазки клеток на предметном стекле.
  2. Добавьте 4% раствор параформальдегида для фиксации образца при комнатной температуре (RT) в течение 15 минут.
  3. Вымойте предметные стекла PBS (0,01 М) дважды, по 3 мин на промывку.
  4. Добавьте 0,1% Triton X-100 для проникновения в клетки при RT в течение 5 минут.
  5. Заблокируйте клетки в 5% BSA при RT на 30 минут.
  6. Добавьте первичное антитело против анти-γ-H2AX (разведенное в 5% BSA, 1:200) и инкубируйте в режиме лучевой терапии в течение 1 ч.
  7. Вымойте предметные стекла PBS (0,01 М) дважды, по 5 мин на промывку.
  8. Добавьте вторичное антитело (разведенное в 5% BSA, 1:500) и инкубируйте при RT в течение 1 ч в темноте.
  9. Добавьте раствор красителя DAPI и инкубируйте при RT в течение 15 минут.
  10. Вымойте предметные стекла PBS (0,01 М) дважды, по 3 мин на промывку.
  11. Нанесите на предметное стекло герметизирующий раствор, чтобы запечатать его.
  12. Наблюдайте за флуоресценцией под флуоресцентным микроскопом (увеличение: 400×, автофокус и автоэкспозиция) и подсчитывайте микроядра с помощью планшета для подсчета клеток.
    Примечание: 4% параформальдегида, 0,1% Triton X-100 и 5% BSA разбавляют PBS (0,01 M). γ-H2AX (Gamma H2AX) представляет собой фосфорилированную форму белка гистона H2AX, образующуюся в ответ на повреждение ДНК. В ядре фосфорилирование гистона H2AX концентрируется в определенных областях, поэтому флуоресценция против γ-H2AX может казаться пятнистой. Фосфорилирование гистона H2AX концентрируется в микроядре, что приводит к общей более яркой флуоресценции с отчетливыми пятнами36. DAPI представляет собой флуоресцентный краситель, который прочно связывается с ДНК и часто используется во флуоресцентной микроскопии. Поскольку микроядра содержат разрушенные фрагменты ДНК и гистонов, они могут быть окрашены флуоресцентными антителами против γ-H2AX и DAPI. Флуоресценция покажет количество, размер и полноту микроядер, помогая отличить их от ядер иоценить эффективность очистки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

После облучения периферическую кровь человека инкубировали с RPMI-1640 в течение 60 ч, а затем добавляли цитохалазин В для получения микроядер (МН). Лимфоциты выделяли с помощью раствора для разделения лимфоцитов с последующим лизисом специально сконфигурированным клеточным лизатом и щадящей гомогенизацией в стеклянном гомогенизаторе. Гомогенат смешивали в соотношении 1:1 с 1,8 М сахарозным буфером. Неочищенные микроядра были получены после первого центрифугирования с градиентом плотности сахарозы, а очищенные микроядра ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом методе для выделения и очистки микроядер (МН) использовались облученные лимфоциты периферической крови человека. Во многих предыдущих исследованиях сообщалось о подробных этапах лизиса клеток и первичного разделения MNs 4,32,33,34. Раствор для лизиса клетки обычно содержит 0,1% NP-40 для разрушения клеточной мембраны, оказывая при этом минимальное воздей...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все рисунки были созданы авторами через офис WPS. Эта работа была поддержана Фондом естественных наук Медицинского колледжа Чэнду (CYZ19-38) и Программой поддержки науки и технологий провинции Сычуань (2024NSFSC0592).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
15  mL коническая трубкаThermo339650
4% раствор параформальдегидаBeyotimeP0099
50  mL коническая трубкаThermo339652
Anti-γ-H2AX антителаBiossbsm-52163R
Бычья сыворотка альбуминBeyotimeST023
Хлорид кальцияBiosharpBS249
Цитохалазин BMacklin14930-96-2
DAPI раствор для окрашиванияBiossS0001
Дитиотреитол ( DTT)CoolaberCD4941
EDTABiosharpBS107Этилендиамин тетрауксусная кислота
Флуоресцентный микроскопNikonTi2-U
ГомогенизаторYbscienceYB101103-1(20 мл)
Горизонтальная центрифуга с регулируемой температуройThermoSorvall ST1R плюсСкорость торможения установлена на "5"
Раствор для разделения лимфоцитов человекаBeyotimeC0025
Ацетат магнияMacklinM833330
NP-40CoolaberSL932010% раствор
Фосфатный буферный раствор (PBS)HyCloneSH30256.01B
Ингибиторы протеазыCoolaberSL1086Коктейль (100&раз;)
Вторичное антителоBiossBs-0295GGoat Anti-rabbit IgG H& L/FITC
SpermidineCoolaberCS10431
SpermineCoolaberCS10441
SucroseCoolaberCS10581
Tris-HClBiosharpBS157
Triton X-100BeyotimeP0096

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hatch, E. M., Fischer, A. H., Deerinck, T. J. Catastrophic nuclear envelope collapse in cancer cell micronuclei. Cell. 154, 47-60 (2013).
  2. Liu, S., Kwon, M., Mannino, N. Nuclear envelope assembly defects link mitotic errors to chromothripsis. Nature. 561, 551-555 (2018).
  3. Sommer, S., Buraczewska, I., Kruszewski, M. Micronucleus assay: The state of art, and future directions. Int J Mol Sci. 21 (4), 1534(2020).
  4. MacDonald, K. M., et al. Antecedent chromatin organization determines cGAS recruitment to ruptured micronuclei. Nat. Commun. 14, 556(2023).
  5. Abdisalaam, S., Mukherjee, S., Bhattacharya, S. NBS1-CtIP–mediated DNA end resection suppresses cGAS binding to micronuclei. Nucleic Acids Res. 50, 2681-2699 (2022).
  6. Li, L., Kim, H. S., Kwon, S. W. Inhibitory effects of saeu-jeot extract on NLRP3 inflammasome activation and radiation-induced micronucleus formation. Food Sci Nutr. 10 (6), 1921-1927 (2022).
  7. Qian, Q. Z., Cao, X., Ke,, Shen, F. H. Effects of ionising radiation on micronucleus formation and chromosomal aberrations in Chinese radiation workers. Radiat Prot Dosimetry. 168 (2), 197-203 (2016).
  8. Rzeszowska-Wolny, J., Przybyszewski, W. M., Widel, M. Ionizing radiation-induced bystander effects, potential targets for modulation of radiotherapy. Eur J Pharmacol. 625 (1-3), 156-164 (2009).
  9. Zuo, Y. H., Dang, X. H., Zhang, H. F. Genomic instability induced by ionizing radiation in human hepatocytes. J Toxicol Environ Health A. 75 (12), 700-706 (2012).
  10. Eken, A., Aydin, A., Erdem, O. Cytogenetic analysis of peripheral blood lymphocytes of hospital staff occupationally exposed to low doses of ionizing radiation. Toxicol Ind Health. 26 (5), 273-280 (2010).
  11. Gutierrez-Enriquez, S., Ramon, Y. C. T., Alonso, C. Ionizing radiation or mitomycin-induced micronuclei in lymphocytes of BRCA1 or BRCA2 mutation carriers. Breast Cancer Res Treat. 127 (3), 611-622 (2011).
  12. Brzozowska, K., et al. Effect of temperature during irradiation on the level of micronuclei in human peripheral blood lymphocytes exposed to X-rays and neutrons. Int J Radiat Biol. 85 (10), 891-899 (2009).
  13. Yamini, K., Gopal, V. Natural radioprotective agents against ionizing radiation-an overview. Int J PharmTech Res. 2 (2), 1421-1426 (2010).
  14. Terradas, M., Martín, M., Genescà, A. Impaired nuclear functions in micronuclei results in genome instability and chromothripsis. Arch Toxicol. 90, 2657-2667 (2016).
  15. Crasta, K., Ganem, N. J., Dagher, R. DNA breaks and chromosome pulverization from errors in mitosis. Nature. 482, 53-58 (2012).
  16. Fenech, M., Morley, A. Measurement of micronuclei in lymphocytes. Mutat Res. 147, 29-36 (1985).
  17. Kirsch-Volders, M., Bonassi, S., Knasmueller, S. Commentary: Critical questions, misconceptions and a road map for improving the use of the lymphocyte cytokinesis-block micronucleus assay for in vivo biomonitoring of human exposure to genotoxic chemicals-a HUMN project perspective. Mutat Res Rev Mutat Res. 759, 49-58 (2014).
  18. Fenech, M., et al. Molecular mechanisms of micronucleus, nucleoplasmic bridge and nuclear bud formation in mammalian and human cells. Mutagenesis. 26, 125-132 (2011).
  19. Fenech, M. Cytokinesis-block micronucleus cytome assay. Nat Protoc. 2, 1084-1104 (2007).
  20. Fenech, M. Cytokinesis-block micronucleus cytome assay evolution into a more comprehensive method to measure chromosomal instability. Genes (Basel). 11 (10), 1203(2020).
  21. Kwon, M., Leibowitz, M. L., Lee, J. H. Small but mighty: The causes and consequences of micronucleus rupture. Exp Mol Med. 52 (11), 1777-1786 (2020).
  22. Harding, S. M., et al. Mitotic progression following DNA damage enables pattern recognition within micronuclei. Nature. 548, 466-470 (2017).
  23. Mackenzie, K. J., et al. cGAS surveillance of micronuclei links genome instability to innate immunity. Nature. 548, 461-465 (2017).
  24. Tang, S., Stokasimov, E., Cui, Y. Breakage of cytoplasmic chromosomes by pathological DNA base excision repair. Nature. 606, 930-936 (2022).
  25. Zhang, C. Z., et al. Chromothripsis from DNA damage in micronuclei. Nature. 522, 179-184 (2015).
  26. Umbreit, N. T., Zhang, C. Z. Z., Lynch, L. D. Mechanisms generating cancer genome complexity from a single cell division error. Science. 368, eaba0712(2020).
  27. Li, Q. J., Wu, P., Du, Q. J. cGAS-STING, an important signaling pathway in diseases and their therapy. Med Comm. 5 (4), e511(2024).
  28. Mohr, L., Toufektchan, E., von Morgen, P. ER-directed TREX1 limits cGAS activation at micronuclei. Mol Cell. 81, 724-738.e9 (2021).
  29. Okamoto, A., Utani, K., Shimizu, N. DNA replication occurs in all lamina positive micronuclei, but never in lamina negative micronuclei. Mutagenesis. 27, 323-327 (2012).
  30. Hatch, E. M., Fischer, A. H., Deerinck, T. J. Catastrophic nuclear envelope collapse in cancer cell micronuclei. Cell. 154, 47-60 (2013).
  31. Guo, X., Dai, X., Wu, X. Understanding the birth of rupture-prone and irreparable micronuclei. Chromosoma. 129 (3-4), 181-200 (2020).
  32. MacDonald, K. M., et al. The proteomic landscape of genotoxic stress-induced micronuclei. Molecular Cell. 84 (7), 1377-1391.e6 (2024).
  33. Agustinus, A. S., Al-Rawi, D., Dameracharla, B. Epigenetic dysregulation from chromosomal transit in micronuclei. Nature. 619 (7968), 176-183 (2023).
  34. Toufektchan, E., Maciejowski, J. Purification of micronuclei from cultured cells by flow cytometry. STAR Protoc. 2 (1), 100378(2021).
  35. Shimizu, N., Kanda, T., Wahl, G. M. Selective capture of acentric fragments by micronuclei provides a rapid method for purifying extrachromosomally amplified DNA. Nat Genet. 12, 65(1996).
  36. Samur, B. M., et al. Assessment of extracorporeal photopheresis related cell damage. Transfus Apher Sci. 61 (6), 103472(2022).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Видео скоро будет доступно

Похожие статьи