Методическая статья

Оценка антиоксидантных и антигельминтных свойств экстрактов Tithonia diversifolia в отношении яиц желудочно-кишечной нематоды с помощью тестов in vitro

845 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/67760

⸱

1 августа 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Multidisciplinary Center for Technological Research, National University of Asunción (CEMIT - UNA), 2Centre of Marine Sciences (CCMAR/CIMAR LA), University of Algarve, 3Department of Food Biochemistry, Biodiversity, Food and Health Group (BIOALSA), Faculty of Chemical Sciences, National University of Asunción (FCQ - UNA), 4Carleton College

В этой статье

Краткое содержание

В этом исследовании оценивалась биологическая активность экстрактов Tithonia diversifolia с использованием радикальных методов и анализа вывода яиц in vitro (EHA) для оценки их влияния на желудочно-кишечных нематод у мелких жвачных животных. Описана методология и основные выводы, подчеркивающие потенциал этих экстрактов для борьбы с паразитами.

Аннотация

Паразитарные заболевания, вызываемые желудочно-кишечными нематодами (ДЖИН), считаются важными ограничивающими факторами для животноводства во всем мире, поскольку они значительно ухудшают благополучие животных и увеличивают производственные затраты. В течение многих лет борьба с паразитами основывалась исключительно на использовании синтетических наркотиков. Об устойчивости ГИН к коммерческим антигельминтикам все чаще сообщается во всем мире. Таким образом, появились альтернативные подходы к контролю ГИН у сельскохозяйственных животных, включая исследование растений с биологически активным потенциалом. Титонию разнообразную можно собирать круглый год, и все части растения использовались в народной медицине при широком спектре заболеваний. В этом исследовании оценивались антиоксидантные свойства in vitro воды и 70% водных экстрактов ацетона надземных частей T. diversifolia , включая листья, ветви и цветы, с использованием радикальных методов, а также оценивался его антигельминтный потенциал с помощью модели паразита с использованием анализа вылупления яиц (EHA) с водными экстрактами. Кроме того, определяли общее содержание полифенольных экстрактов. Эти результаты подчеркивают, что T. diversifolia является многообещающим природным источником антиоксидантных и антигельминтных соединений.

Введение

Паразитарные заболевания, вызываемые желудочно-кишечными нематодами (ДЖИН), считаются важными ограничивающими факторами для животноводства во всем мире, поскольку они значительно ухудшают благополучие животных и увеличивают производственные затраты1. На отношения между паразитом и домашним скотом влияют несколько факторов, связанных с хозяином, а именно: генетические характеристики устойчивости и жизнестойкости животных, питательный статус животных, уровень паразитизма и патогенностьпопуляций паразитов.

В течение многих лет борьба с паразитами основывалась исключительно на синтетических противопаразитарных препаратах. Однако длительное и исключительное использование привело к возникновению резистентности, снижающей их эффективность и побуждающей к поиску альтернативных стратегий3. Устойчивость нематод к различным антигельминтным средствам все чаще описывается во всем мире, что представляет собой тревожный сценарий, особенно в тропических регионах4. Кроме того, потребители все больше осознают необходимость сокращения остатков противопаразитарных препаратов в мясе животных и окружающей среде5. Таким образом, появились альтернативные подходы к борьбе с паразитами нематодами у сельскохозяйственных животных6.

Tithonia diversifolia — тропический кустарник родом из Центральной Америки, обладающий уникальными характеристиками, которые делают его ценным для систем разведения жвачных животных. Его можно собирать круглый год, и все части растения традиционно использовались в народной медицине коренными общинами для лечения широкого спектра заболеваний. Местно он применяется для облегчения боли в животе, ран, дерматоза и мышечных расстройств, в то время как пероральный прием используется для лечения инфекций, малярии, лихорадки, гепатита и диабета. Такое разнообразное терапевтическое применение подчеркивает его широкий лечебный потенциал7.

Окислительный стресс играет важную роль в развитии и прогрессировании паразитарных инфекций, как в организме хозяина, так и в паразитарном организме, борющемся за выживание8. По этой причине определение антиоксидантной активности имеет решающее значение для оценки биологической активности экстрактов лекарственных растений с антигельминтным потенциалом. Из-за паразитарной инфекции концентрация антиоксидантов в организме хозяина снижается, при этом увеличивается концентрация продуктов окисления клеточных компонентов. В случае паразитов поддержание окислительного баланса имеет важное значение для продления их взаимодействия с хозяином и защиты от окислительного стресса, возникающего в организме хозяина9.

Данные о развитии и быстром распространении устойчивости к антигельминтикам вызывают опасения, что обычно используемые методы лечения могут стать неэффективными. Поэтому для оценки восприимчивости или устойчивости к бензимидазолу (BZ) у желудочно-кишечных нематод используется тест in vitro, называемый анализом вывода яиц (EHA). Этот тест обычно используется для оценки антигельминтной активности растительных экстрактов на яйца и для сравнения их активности в зависимости от дозы. Одним из основных ограничений этого анализа является изменчивость вылупления яиц между тестами. Жизнеспособность яиц ограничена максимум 3 часами, что требует быстрого восстановления и немедленного инициирования. Несмотря на это, процент вылупления может варьироваться. По этой причине установлено, что в контрольной группе должно вылупиться не менее 70% яиц, чтобы результат считался действительным10,11. Это дешевый, быстрый, простой и воспроизводимый тест 12,13,14.

Использование растительных экстрактов для изучения альтернатив для контроля GIN основано на присутствии вторичных метаболитов и их биологически активном потенциале. Одной из проблем в этой области исследований является количество и стабильность вторичных метаболитов, поскольку они варьируются в зависимости от биотических и абиотических факторов, а также из-за химического стресса, вызванного процессом экстракции 15,16,17.

В этом исследовании была выдвинута гипотеза о том, что различия в биологической активности (антиоксидантном и антигельминтном эффектах) могут возникать в зависимости от типа растворителя, используемого для экстракции, что может влиять на состав полифенолов и, следовательно, на их биологическую активность. Цель данной рукописи состояла в том, чтобы описать шаги, предпринятые при оценке экстрактов с использованием модели in vitro , которую можно было бы легко воспроизвести.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Комитет по этике животных CEMIT одобряет все эксперименты, связанные с манипуляциями с животными. Животные-доноры принадлежат фермам, которые сотрудничают с CEMIT, предоставляя образцы кала для профилактической диагностики. Эти животные являются овцами или козами (без конкретной породы), обоего пола, старше одного года, и не должны быть дегельминтизированы в течение 15 дней до сбора пробы. Все участвующие фермы проинформированы об использовании образцов в исследовательских целях и дают свое согласие на участие в исследовании. Для сбора яиц в первую очередь уведомляются близлежащие предприятия, а после получения разрешения организуются выезды на места для сбора свежих образцов кала, обеспечивающих обработку в течение трех часов. Реагенты и оборудование, использованные в данном исследовании, перечислены в Таблице материалов.

1. Подготовка растительного сырья

  1. Выберите подходящее место для сбора вида растения.
  2. Соберите не менее двух экземпляров Tithonia diversifolia для таксономической идентификации и подготовки гербария.
  3. Соберите не менее 1000 г надземной части T. diversifolia .
  4. Собранную биомассу высушить при комнатной температуре (примерно 26 °C; см. Рисунок 1).
  5. Высушенную биомассу измельчить с помощью электрической кофемолки.
  6. Храните измельченный материал в холодильнике при температуре 4 °C.

2. Приготовление экстрактов

  1. Приготовьте водный экстракт:
    1. Смешайте 10 г высушенной биомассы со 100 мл дистиллированной воды при температуре 100 °C.
    2. Дайте смеси вымачиваться в течение 24 часов при непрерывном встряхивании со скоростью 120 об/мин.
    3. Процедите экстракт через фильтровальную бумагу (ватман No 5 или аналог).
    4. Сублимационно высушите отфильтрованный экстракт.
  2. Приготовьте экстракт ацетона:
    1. Смешайте 10 г высушенного растительного сырья с 70% водным ацетоном в соотношении 1:3.
    2. Дайте смеси вымачиваться в течение 24 часов при непрерывном встряхивании со скоростью 120 об/мин.
    3. Процедите экстракт через фильтровальную бумагу (ватман No 5 или аналог).
    4. Сублимационно высушите отфильтрованный экстракт.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Храните лиофилизированные экстракты при температуре -20 °C для лучшей сохранности (см. Рисунок 2). Убедитесь, что получено не менее 5 г лиофилизированных экстрактов.

3. Приготовление исходного раствора

  1. Для проведения анализа на антиоксиданты:
    1. Солюбилизируйте высушенные экстракты в соответствующих растворителях (дистиллированная вода или 70% водный ацетон) до конечной концентрации 10 мг/мл.
  2. Для анализа на вылупление яиц:
    1. Разведите 12 мг лиофилизированных экстрактов в 5 мл дистиллированной воды до получения исходного раствора 2,4 мг/мл.
    2. Приготовьте пять концентраций: 1,2 мг/мл, 0,6 мг/мл, 0,3 мг/мл и 0,15 мг/мл (см. рисунок 3).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Отрегулируйте объем исходного раствора в зависимости от количества используемых лунок и планшетов. Например, если используется 48 скважин вместо 12, соответственно уменьшите объем; приготовьте 6 мг в 2,5 мл вместо 12 мг в 5 мл.

4. Фитохимический состав

  1. Общее фенольное содержание экстрактов (ТПК)
    1. Смешайте 5 мкл образцов со 100 мкл реагента Folin-Ciocalteu (F-C), разведенного на 10× в дистиллированной воде в 96-луночных прозрачных пластиковых планшетах.
    2. Инкубировать при комнатной температуре (RT) в течение 10 минут.
    3. Добавьте 100 μл раствора карбоната натрия (75 г/л в воду).
    4. Инкубировать при RT в течение 90 мин.
    5. Измерьте поглощение на длине волны 650 нм.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Экспрессируйте ТПК в виде эквивалентов галловой кислоты (ГПА). Постройте калибровочную кривую, используя не менее пяти концентраций галловой кислоты.
  2. Общее содержание флавоноидов (TFC)
    1. Смешайте 50 мкл экстрактов с 50 мкл 2% хлорида алюминия в метаноле в 96-луночных прозрачных пластиковых пластинах.
    2. Инкубировать в течение 10 минут при RT.
    3. Измерьте поглощение на длине волны 405 нм.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Экспрессируйте TFC в виде эквивалентов кверцетина (QE). Постройте калибровочную кривую, используя не менее пяти концентраций кверцетина.
  3. Общее содержание танинов (TTC)
    1. Смешайте 10 мкл экстрактов с 200 мкл 1% DMACA в метаноле и 100 мкл 37% HCl в 96-луночных прозрачных пластиковых пластинах.
    2. Инкубировать в течение 15 минут при RT.
    3. Измерьте поглощение на длине волны 640 нм.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Экспресс-ТТК в пересчете на мг/мл катехина.

5. Анализ на антиоксиданты - ABTS

  1. Добавьте 0,003514 г персульфата калия и 0,0203 г ABTS в 5 мл дистиллированной воды.
  2. Заверните раствор в алюминиевую фольгу и выдерживайте при температуре 4 °C в холодильнике в течение 12-16 часов.
  3. Измерьте поглощение на длине волны 734 нм и отрегулируйте его примерно до 0,7, добавив этанол. Для начала смешайте 5 μL раствора ABTS со 195 μL этанола.
  4. В 96-луночных прозрачных пластиковых планшетах смешайте 10 μл экстрактов со 190 μл раствора ABTS.
  5. Для положительного контроля (С+) смешайте 10 мкл Тролокса (определите концентрацию с помощью стандартной кривой на основе абсорбции образца) со 190 мкл раствора ABTS.
  6. Для отрицательного контроля (С-) смешайте 10 мкл растворителя, используемого для растворения экстрактов (воды или водного ацетона), со 190 мкл раствора ABTS.
  7. Инкубируйте планшеты в течение 6 минут при комнатной температуре (RT).
  8. Измерьте поглощение на длине волны 734 нм.
    ПРИМЕЧАНИЕ: На рисунке 4 показан пример анализа ABTS.

6. Паразитологические процедуры

  1. Соберите образцы кала непосредственно из прямой кишки естественно инфицированных коз.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Соберите образцы кала непосредственно из прямой кишки естественно инфицированных коз и овец, чтобы обеспечить свежесть и избежать загрязнения окружающей среды. Аккуратно удерживайте животных с помощью обученного персонала, чтобы свести к минимуму стресс. Используя чистые одноразовые перчатки, введите смазанный пальцем в перчатке в прямую кишку и извлеките примерно 5-10 г калового материала. Поместите образцы в чистые пластиковые контейнеры с маркировкой и храните при температуре 4-8 °C. Обрабатывайте все образцы в течение 3 ч после сбора, чтобы сохранить жизнеспособность яиц гельминтов. Следуйте рекомендациям учреждения по защите животных и получите информированное согласие от владельцев ферм.
  2. Определите виды животных, связанные с каждым образцом.
  3. Смешайте 30 г каждого образца кала с 50 мл насыщенного раствора соли (плотность = 1,2) для подготовки к копралогическим анализам.
  4. Используйте слайд Макмастера, чтобы посчитать яйца.
    1. Гомогенизируйте 3 г образца кала в 50 мл насыщенного раствора NaCl. Процедите смесь через марлю, заполните обе камеры горкой, и дайте ей постоять 5 минут.
    2. Рассмотрите предметное стекло под микроскопом при увеличении 10× и посчитайте яйца типа стронгил. Рассчитайте количество яиц на грамм (EPG) по формуле: EPG = (количество яиц) × 50. Этот метод стандартизирует количественное определение желудочно-кишечных нематод у мелких жвачных животных.
  5. Выразите количество яиц в виде яиц на грамм (EPG).
  6. Отбирайте образцы кала с EPG не менее 800 для подготовки каловой культуры.
  7. Получить личинки L3 из фекальных культур и определить их роды или виды.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Яйца желудочно-кишечных нематод откладываются в траве в течение жизненного цикла (см. Рисунок 5). Мелкое рогатое скотоводство обычно проявляет полипаразитарство. На рисунке 6 изображены этапы выполнения копрологического аналисиса.

7. Тесты in vitro - Egg Hatch Assay (EHA)

  1. Соберите свежие образцы кала.
  2. Кал дважды отфильтровать с помощью стерильной марли.
  3. Полученную суспензию процеживаем и перекладываем на сито.
  4. Промойте материал на сите дистиллированной водой.
  5. Соберите промытую суспензию в пробирки объемом 15 мл.
  6. Центрифугируйте образцы при температуре ~4800 × г в течение 5 минут при комнатной температуре с помощью настольной центрифуги, оснащенной ротором с качающимся ведром. Дважды центрифугируйте с дистиллированной водой и один раз с насыщенным солевым раствором, чтобы концентрировать яйца на дне (морфологию яиц см. на рисунке 7 ).
  7. Повторно суспендируйте яйца в PBS.
  8. Отрегулируйте концентрацию яиц до 100 яиц/мл для настройки анализа.
  9. Приготовьте положительный контроль, растворив тиабендазол (TBZ) в PBS в концентрации 0,025 мг/мл.
  10. Приготовьте отрицательный контроль с помощью яичной суспензии в PBS.
  11. Для анализа используйте 48-луночные многолуночные планшеты.
  12. Приготовьте окончательный объем 250 мкл в каждой лунке, используя смесь экстракта и яичной суспензии в соотношении 50/50 (v/v).
  13. Добавьте примерно 100 яиц/мл в каждую лунку.
  14. Проверьте каждую концентрацию в четыре раза (четыре повторения).
  15. Посчитайте яйца под инвертированным микроскопом при увеличении 40×.
  16. Используйте только пластины с коэффициентом вылупления ≥70%.
  17. Подсчитайте личинки (L1), невылупившиеся яйца (UnE), яйца, содержащие личинки (LFE) и омертвевшие яйца (ME) для каждой концентрации.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Репрезентативное резюме протокола анализа вывода яиц показано на рисунке 8.

8. Статистический аналисис

  1. Выполнение описательного статистического анализа с помощью Excel.
  2. Используйте односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) и t-критерий для оценки различий между концентрациями на уровне значимости 0,05.
  3. Рассчитайте эффективную концентрацию 50% (EC50) с помощью пробит-анализа на основе данных о концентрации, преобразованных в log10 (см. Дополнительный файл 1).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Общее содержание фенолов (TPC), общее содержание флавоноидов (TFC) и общее содержание танинов (TTC)
Результаты TPC, TTC, TFC и ABTS по Tithonia diversifolia приведены в таблице 1. Значения выражены в мг эквивалента галловой кислоты на грамм сухого вещества (мг ГАЕ/г СВ) для ТПК, мг эквивалента кверцетина на грамм сухого вещества (мг КЭ/г СВ) для ТФК и мг катехинового эквивалента на грамм сухого вещества (мг СЕ/г СВ) для ТТК. Антиоксидантная с...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этой статье описывается несколько основных шагов для продвижения исследований лекарственных растений. Тесты in vitro, такие как анализ вывода яйцеклеток (EHA), особенно привлекательны, поскольку они могут проводиться в контролируемых лабораторных условиях. EHA предназначена для оценки активности растительных экстрактов в различных концентрациях на яйца нематод, сравнивая результаты с положительным и отрицательным контролем. Полученные результаты дают ценную информацию о потенц...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Всем производителям, которые доверяют нам проведение отбора проб у своих животных. Луиза Кустодио получила португальские национальные средства от Фонда науки и технологий (FCT) в рамках проектов UIDB/04326/2020( D O I: 1 0 . 5 4 4 9 9 / U I D B / 0 4 3 2 6 / 2 0 2 0 ), U I D P / 0 4 3 2 6 / 2 0 2 0 (DOI:10.54499/UIDP/04326/2020), LA/P/0101/2020 (DOI:10.54499/LA/P/0101/2020) и CEECIND/00425/2017. Росио Авила получила Фонд стажировки Нини за то, что сделала этот проект возможным, предоставив мне финансовую поддержку, а также Центру карьеры Карлтона для профессиональной ориентации и поддержки. Гризельда Меза получила Beca de Investigacion BINV02 -52 CONACYT -2nd convocatoria для поездки в Португалию и проведения фитохимических анализов. Исмаэль Льяно получил форму Beca Movility PINV01-306, CONACYT, для проведения анализа вывода яиц в Бразилии.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Трубки объемом 15 млНа территории
Пластина с 48 отверстямиНа территории
96 скважинных пластинVWR 734-0126
ABTSФерментативныйA1088.0005На территории
Академический оптический микроскоп и инвертированный микроскопНа территории
АцетонФерментативныйA/0600/17
Хлорид алюминия  Сигма Олдрич6911
Реагент DMACAСигма Олдрич49825
Этанол 96%ФерментативныйVR11202
Фекалии животныхСобрано на фермах рядом с университетом
Фолин ЧокальтоСигма ОлдричF9252
Галловая кислотаСигма Олдрич91215
HClСигма Олдрич258148
Камера МакмастераНа территории
МетанолФерментативныйM/4000/17
PBSНа территории
Растительные экстрактыНа территории
Персульфат калия Сигма Олдрич216224
КверцетинСигма ОлдричQ4951
СольНа территории
Карбонат натрия Сигма Олдрич1063920500
ТиабендазолНа территории
ТролоксСигма Олдрич648471На территории
ВодаНа территории
Whatmann No 5VWR WHAT97039654

Ссылки

  1. Vineer, H. R., et al. Increasing importance of anthelmintic resistance in European livestock: Creation and meta-analysis of an open database. Parasite. 27, 69(2020).
  2. Ribeiro, W. L. C., Vilela, V. L. R. Editorial: Alternatives for the control of parasites to promote sustainable livestock. Front Vet Sci. 9, 1097432(2023).
  3. Hodgkinson, J. E., et al. Refugia and anthelmintic resistance: Concepts and challenges. Int J Parasitol Drugs Drug Resist. 10, 51-57 (2019).
  4. Molento, M. B. Parasite control in the age of drug resistance and changing agricultural practices. Vet Parasitol. 163 (3), 229-234 (2009).
  5. Morgan, E. R., van Dijk, J. Climate and the epidemiology of gastrointestinal nematode infections of sheep in Europe. Vet Parasitol. 189 (1), 8-14 (2012).
  6. Hoste, H., Torres-Acosta, J. F. J. Non-chemical control of helminths in ruminants: Adapting solutions for changing worms in a changing world. Vet Parasitol. 180 (1-2), 144-154 (2011).
  7. Mabou Tagne, A., Marino, F., Cosentino, M. Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray as a medicinal plant: A comprehensive review of its ethnopharmacology, phytochemistry, pharmacotoxicology and clinical relevance. J Ethnopharmacol. 220, 94-116 (2018).
  8. Pawłowska, M., Mila-Kierzenkowska, C., Szczegielniak, J., Woźniak, A. Oxidative stress in parasitic diseases-reactive oxygen species as mediators of interactions between the host and the parasites. Antioxidants. 13 (1), 38(2024).
  9. Maldonado, E., Rojas, D. A., Morales, S., Miralles, V., Solari, A. Dual and opposite roles of reactive oxygen species (ROS) in Chagas disease: Beneficial on the pathogen and harmful on the host. Oxid Med Cell Longev. 2020, 8867701(2020).
  10. Adamu, M., Naidoo, V., Eloff, J. N. Efficacy and toxicity of thirteen plant leaf acetone extracts used in ethnoveterinary medicine in South Africa on egg hatching and larval development of Haemonchus contortus. BMC Vet Res. 9, 38(2013).
  11. Molan, A. L. Effect of purified condensed tannins from pine bark on larval motility, egg hatching and larval development of Teladorsagia circumcincta and Trichostrongylus colubriformis (Nematoda: Trichostrongylidae). Folia Parasitol. 61 (4), 371-376 (2014).
  12. Eguale, T., Tadesse, D., Giday, M. In vitro anthelmintic activity of crude extracts of five medicinal plants against egg-hatching and larval development of Haemonchus contortus. J Ethnopharmacol. 137 (1), 108-113 (2011).
  13. von Samson-Himmelstjerna, G., et al. Standardization of the egg hatch test for the detection of benzimidazole resistance in parasitic nematodes. Parasitol. Res. 105, 825-834 (2009).
  14. Robles-Pérez, D., Martínez-Pérez, J. M., Rojo-Vázquez, F. A., Martínez-Valladares, M. Screening anthelmintic resistance to triclabendazole in Fasciola hepatica isolated from sheep by means of an egg hatch assay. BMC Vet Res. 11, 5(2015).
  15. War, A. R., Paulraj, M. G., War, M. Y., Ignacimuthu, S., Sharma, H. C. Mechanisms of plant defense against insect herbivores. Plant Signal Behav. 7, 1306-1320 (2012).
  16. Veeresham, C. Natural products derived from plants as a source of drugs. J Adv Pharm Technol Res. 3, 200-201 (2012).
  17. Barthwal, R., Mahar, R. Exploring the significance, extraction, and characterization of plant-derived secondary metabolites in complex mixtures. Metabolites. 14, 119(2024).
  18. Vargas-Magaña, J. J., et al. Anthelmintic activity of acetone-water extracts against Haemonchus contortus eggs: Interactions between tannins and other plant secondary compounds. Vet Parasitol. 206, 199-206 (2014).
  19. Gertrude, M., et al. In vitro anthelmintic activity of Bidens pilosa Linn. (Asteraceae) leaf extracts against Haemonchus contortus eggs and larvae. Eur J Med Plants. 4, 1325-1333 (2014).
  20. Castañeda-Ramírez, G. S., et al. Bio-guided fractionation to identify Senegalia gaumeri leaf extract compounds with anthelmintic activity against Haemonchus contortus eggs and larvae. Vet Parasitol. 270, 13-19 (2019).
  21. Chan-Pérez, J. I., et al. In vitro susceptibility of ten Haemonchus contortus isolates from different geographical origins towards acetone:water extracts of two tannin-rich plants. Vet Parasitol. 217, 53-60 (2016).
  22. Alonso-Díaz, M. A., Torres-Acosta, J. F. J., Sandoval-Castro, C. A., Hoste, H. Comparing the sensitivity of two in vitro assays to evaluate the anthelmintic activity of tropical tannin-rich plant extracts against Haemonchus contortus. Vet Parasitol. 181 (2-4), 360-364 (2011).
  23. Meza Ocampos, G., et al. Two in vitro anthelmintic assays of four Paraguayan medicinal plants for proof of concept of the role of polyphenols in their biological activities and LC-HRMS analysis. J Ethnopharmacol. 312, 116453(2023).
  24. Babják, M., Königová, A., Urda Dolinská, M., Vadlejch, J., Várady, M. Anthelmintic resistance in goat herds-In vivo versus in vitro detection methods. Vet Parasitol. 254, 10-14 (2018).
  25. Elfawal, M. A., et al. High-throughput screening of more than 30,000 compounds for anthelmintics against gastrointestinal nematode parasites. ACS Infect Dis. 11 (1), 1-11 (2025).
  26. de Araújo Sanchez, C., et al. In vivo anthelmintic activity of hydroethanolic extract of Piper cubeba fruits in sheep naturally infected with gastrointestinal nematodes. Vet Parasitol. 333, 110348(2025).
  27. Hördegen, P., Cabaret, J., Hertzberg, H., Langhans, W., Maurer, V. In vitro screening of six anthelmintic plant products against larval Haemonchus contortus with a modified methyl-thiazolyl-tetrazolium reduction assay. J Ethnopharmacol. 108 (1), 85-89 (2006).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи