В статье описан протокол восстановления микробиоты пастеризованного донорского молока с использованием микробиоты собственного молока матери в практических, реальных условиях. Он демонстрирует эффективный рост бактерий и модуляцию микробиома, поддерживая целесообразное применение этой процедуры в рамках рутинного ухода за родильным домом и связанного с ним банка грудного молока.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Индивидуализированное восстановление микробиоты грудного молока человека: возможный подход в реальных условиях
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Собственное материнское молоко (MOM) является наиболее полноценным пищевым ресурсом для новорожденных. В тех случаях, когда матери не могут вырабатывать достаточное количество молока или не могут кормить грудью, предпочтительной альтернативой является пастеризованное донорское грудное молоко (ПДМ), которое обычно предоставляется банками грудного молока. PDM предлагает превосходный спектр питательных и иммунологических элементов по сравнению с любой коммерчески доступной формулой. Однако для обеспечения биобезопасности PDM подвергается пастеризации — процессу, который инактивирует комменсальную микробиоту и снижает количество некоторых биологически активных соединений. В этом исследовании представлен протокол, разработанный для восстановления микробиоты ПДМ с использованием МОМ в качестве микробного источника, адаптируя подход к реальным клиническим условиям.
Протокол был внедрен в клиническое исследование, проведенное в родильном доме и связанном с ним банке грудного молока, с целью обеспечения персонализированным донорским молоком недоношенных детей, чьи матери не могут вырабатывать достаточное количество молока. Методология включает в себя инокуляцию PDM 10% MOM с последующей инкубацией при 37 °C в течение 4 ч. Микробиологический анализ продемонстрировал успешный рост бактерий в инокулированном молоке (ВМ) после инкубации, при этом профиль микробиоты восстановленного молока (РМ) очень похож на профиль МОМ, что указывает на эффективное восстановление микробиоты. Эти результаты свидетельствуют о том, что протокол восстановления осуществим для внедрения в неонатальную помощь с потенциалом для улучшения питательных и иммунологических качеств PDM, тем самым поддерживая здоровье и развитие новорожденных, не находящихся на грудном вскармливании.
Введение
Грудное молоко широко признано лучшим источником питания для новорожденных, обеспечивая не только необходимыми макро- и микроэлементами, но и сложным набором элементов, включая различные метаболиты и компоненты иммунной системы, такие как антитела, цитокиныи клетки. Кроме того, полезные свойства в грудном молоке также обусловлены сообществом комменсальных микроорганизмов. Все эти элементы грудного молока играют важнейшую роль в развитии новорожденного1. На сообщество микроорганизмов, известное как микробиота, влияет сочетание таких факторов, как диета, образ жизни матери, тип родов и гес....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Этот протокол был выполнен в рамках процедур клинического исследования, проведенного нашей исследовательской группой (Бразильский реестр клинических испытаний, ReBEC RBR-729kr8x), и получил одобрение Комитета по этике (процесс CAAE No 41063520.4.0 000.0121) и информированное согласие всех участников до рандомизации и коллетирования образцов.
Процедура восстановления микробиоты молока выполняется в три этапа:
1. Получение сырого материнского молока
ПРИМЕЧАНИЕ: С порядком получения молока можно ознакомиться в других разделах
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Анализ роста бактерий с помощью планшетного культивирования
Микробиологические тесты, проведенные для валидации метода инокуляции PDM MOM, предложенного Cacho et al.9, показали, что, исходя из количества КОЕ/мл, не было существенных различий между образцами инокулированного молока до и после 4-часовой инкубации. Тем не менее, различия в количестве колоний наблюдались в эти две временные точки, что указывает на рост бактерий во время инкубации на MSA для Staphylococcus .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Здесь мы представляем протокол, который должен применяться в родильных домах, связанных с банком грудного молока, с целью обеспечить ПДМ восстановление микробиоты молока от конкретной матери, которая по разным причинам не может обеспечить достаточного количества молока для своего новорожденного. Протокол прост и по сути основан на двух шагах. Первый включает в себя применение процедур, обычно выполняемых в банках грудного молока для надлежащего сбора и последующей пастеризации донорского.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.
Благодарности
Авторы выражают признательность за финансовую поддержку со стороны Programa de Pesquisas para o SUS, PPSUS/2020, Ministério da Saúde do Brasil; Fundação de Amparo à Pesquisa e Inovação do Estado de Santa Catarina, номер гранта: 2021TR000506; Programa de Pesquisa Universal, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) do Ministério de Ciência e Tecnologia do Brasil, Grant Number: 420996/2023-0; Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica 2022 - 2024, Номер гранта: 120815/2023-0. Мы также благодарим волонтеров за предоставленные образцы.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Электрический молокоотсос | Horigen | XN-2219M2 | Мягкий молокоотсос dual plus |
| Pyrex Бутылки для медиа | Corning | CLS1395100 | Стеклянная тара с пластиковыми крышками |
| 1000 &микро; L пипетка Labmate pro | Corning HTL SA | 5666 | Дозатор переменного объема |
| Криогенный флакон | Corning | CLS431417 | Флаконы объемом 2 мл без ДНКазы/РНКазы |
| Центрифужные пробирки 15 мл | Corning | CLS431470 | Пробирки без ДНКазы/РНКазы 15 мл |
| Водяная баня | EcoSonics | Q3.0/40A | |
| Man– Rogosa– Шарп (MRS) | Difco | 288210 | Питательная среда для молочнокислых бактерий |
| Маннитовая соль Агар (MSA) | Himedia | MH118 | Staphylococcus питательная среда |
| Анаэробная баночная | пермутация | Создайте среду с низким содержанием кислорода для роста молочнокислых бактерий | |
| Extracta Комплект – Набор | Loccus | MPTA-PV16-B Y | ДНК |
| Nanodrop | Promega | E6150 | Quantus DNA |
| GoTaqG2 | Promega | M7841 | Система ампликации ПЦР |
| Quantus Флуориметр | Promega | E5150 | Набор для количественного определения ДНК / РНК |
| MiSeq System | Illumina Inc. | M-GL-00006 v4.0 | Оборудование для секвенирования |
| MiSeq Reagent Kit v2 (300 циклов) | Illumina Inc. | MS-102-2002 | Наборы и реагенты для секвенирования |
| Название программного обеспечения | |||
| Trimmomatic http://www.usadellab.org/cms/index.php?page=trimmomatic | Инструмент для чтения данных Illumina NGS | ||
| QIIME 2 | https://docs.qiime2.org/2024.10/ | Пакет для анализа микробиома | |
| Primer name< | strong>Primer sequence | ||
| 16S_357F | TCGTCGGCAGCGTCAGA TGTGTATAAGAGACAGC CTACGGGNGGCWGCAG | ||
| 16S_805R | GTCTCGTGGGCTCGGAG ATGTGTATAAGACAGG ACTACHVGGGTATCTAATC |
Ссылки
- Szyller, H., et al. Bioactive components of human milk and their impact on child's health and development, Literature Review. Nutrients. 16 (10), 1487(2024).
- Fernández, L., Rodríguez, J. M. Human milk microbiota: Origin and potential us....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
