Характеристика pH-зависимой обратимой самосборки коллоидов золота, покрытых бета-амилоидом 1-40

Краткое содержание

В данной работе мы представляем систематический метод, описывающий квазиобратимую самосборку покрытых бета-амилоидом 1-40 (Aβ _1-40) золотых агрегатов размером 20 нм. Наноразмер-зависимая квазиобратимая сеть между пептидами коррелировала с конкретными аминокислотами или участками мономера Aβ _1-40.

Аннотация

Определение характеристик Aβ _1-40, покрытых на поверхности коллоидных частиц нанозолота, проводилось с помощью спектроскопии поверхностного плазмонного резонанса (SPR) и просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ). Наблюдаемое pH-зависимое смещение полосы SPR частиц золота размером 20 нм с покрытием Aβ _1-40 коррелировало с чередованием агрегации и дезагрегации, наблюдаемым на изображениях ПЭМ. pH ~4 индуцировал развернутую конформацию, а pH ~10 индуцировал складчатую конформацию Aβ _1-40 на поверхности золота. Этот обратимый процесс агрегации наблюдался с помощью комбинационной визуализации, поскольку pH постепенно менялся с pH 4 на pH 10. Мы наблюдали рН-зависимое изменение морфологии Aβ _1-40 на поверхности золота, где при рН 4 наблюдались четкие агрегаты. Тем не менее, мы наблюдали очень тонкие различия в спектре спектроскопии комбинационного рассеяния света (SERS) между условиями pH 4 и pH 10, причем наиболее поразительной разницей является спектральная плотность в области 250 ^см-1 и 1750 ^см-1. В частности, модальный анализ обратимой агрегации показал, что агрегаты образованы развернутой конформацией Aβ _1-40, которая включает в себя участок бензольного кольца тирозина и фенилаланина. И наоборот, разборка агрегатов была связана с конформационными изменениями в сворачивании белка Aβ _1-40 с участием гистидина, глутамина, метионина и аспарагиновой кислоты.

Введение

Фибриллогенез бета-амилоидных пептидов 1-40 (Aβ _1-40) или 1-42 (Aβ _1-42) был широко исследован в качестве критического компонента в образовании амилоидных бляшек, которые являются причиной болезни Альцгеймера 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10 ^,11. Ключевым механизмом фибриллогенеза является олигомеризация пептидов Aβ _1-40 или Aβ _1-42 с образованием нейротоксического белкового агрегата, и были проведены обширные исследования, чтобы понять механизмы того, как мономеры образуют олигомеры 12,13,14. Мы применили подход, предусматривающий изучение амилоидогенных пептидов, образующих агрегаты на поверхности нанозолота, и выявление факторов, ответственных за взаимодействие между пептидами, находящимися вдали от поверхности золота 15,16,17,18,19,20,21,22.

Aβ _1-40 принимают развернутую конформацию (A) в кислых условиях (pH ~4) и складчатую конформацию (B) в основных условиях (pH ~10). Мы наблюдали дисперсные коллоидные частицы золота с покрытием Aβ _1-40 при pH ~ 10 и крупные агрегаты коллоидного золота с покрытием Aβ _1-40 при pH ~ 4 (рис. 1)^23,24. Развернутая конформация Aβ _1-40 в кислых условиях способствует созданию пептидной сети между мономерами Aβ _1-40 на поверхности наночастиц золота, что приводит к образованию коллоидных агрегатов золота (см. А на рисунке 1). Когда мономер Aβ _1-40 удерживает свернутую конформацию при основном или нейтральном pH, Aβ _1-40, мономеры не объединяются в агрегаты, и покрытые наночастицы золота остаются в виде отдельных дисперсных частиц (см. B на рисунке 1). Таким образом, мы можем исследовать процесс того, как пептиды Aβ _1-40 претерпевают конформационные изменения в сети и образуют агрегаты, измеряя сдвиг зоны SPR в диапазоне условий pH 25,26,27,28,29,30,31.

Мы протестировали несколько наночастиц золота различных размеров и обнаружили, что коллоид золота с длиной волны 20 нм демонстрирует наиболее выраженный процесс обратимой самосборки мономеров Aβ _1-40 в ответ на внешнее изменение pH (рис. 2). Это явный признак обратимого изменения конформации пептидов, когда кислотные условия (А) индуцируют развернутую конформацию, усиливая сетчатость и приводя к агрегации коллоидов золота. Было обнаружено, что основное условие (В) индуцирует свернутую конформацию мономеров 26,27,28,29,30,31.

Протокол

1. Получение наночастиц золота с покрытием Aβ _1-40

1. Добавьте 1 мл дистиллированной деионизированной воды к 1 мг лиофилизированного Aβ _1-40 (МВт: 4,2 кДа, чистота ВЭЖХ 98%) с помощью иглы для шприца. Перемешайте раствор с помощью вихревого смесителя в течение примерно 30 с и убедитесь, что в растворе не наблюдается твердых частиц при комнатной температуре (RT; ~20 °C).
   1. Все исходные растворы готовят с использованием деионизированной и дистиллированной воды (~18 МОм·см).
   2. Спектроскопически определите концентрацию с помощью поглощения тирозина при длине волны 275 нм³², которая имеет коэффициент молекулярного экстинкции ε₂₇₅ 1390 ^см-1· ^М-1.
   3. Храните стоковые растворы Аβ _1-40 при температуре -80 °С. (См. Таблицу материалов для коммерческих продуктов Aβ _1-40.)
2. Разморозьте исходный раствор пептида примерно за 5 минут до сбора данных. Смешайте объем пептидного раствора объемом 8 мкл с 800 мкл коллоидных частиц золота в центрифужной пробирке объемом 15 мл. Добавьте объем 4,2 мл деионизированной дистиллированной воды, а затем подвергните образец вихревому воздействию в течение 10 с 30,31,33,34.
3. Установите концентрацию пептидов Aβ _1-40 равной 1,8 нмоль и варьируйте соотношение пептидов Aβ _1-40. Количество коллоидов золота колебалось от ~500:1 до ~2000:1²⁵.

2. Итеративное изменение pH и мониторинг соответствующего сдвига полосы SPR

1. Установите температуру раствора на определенном значении (например, 25 °C) с помощью терморегулятора спектрофотометра ультрафиолетового видимого ближнего инфракрасного диапазона (UV-Vis-NIR).
2. Контролируйте начальный pH раствора образца с помощью рН-метра и установите его немного ниже pH 7. Соберите спектр поглощения в диапазоне от 400 нм до 1000 нм.
3. Измените pH образца на ~pH 4 (т. е. pH 4,0 ± 0,3), добавив объем 0,1 μL HCl, и соберите спектр поглощения от 400 нм до 1000 нм.
4. Измените pH образца на ~pH 10 (т. е. pH 10 ± 0,3), добавив объем 0,1 M NaOH на 10 μL, и соберите спектр поглощения от 400 нм до 1000 нм.
5. Измените pH между pH 4 и pH 10 с HCl и NaOH 10 раз и непрерывно собирайте спектр поглощения при температуре 25 ± 0,2 °C^29,30.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Для всех образцов оптическая плотность пика диапазона SPR поддерживалась на уровне около 0,2. Ожидается эффект буфера из-за остаточного буферного раствора в растворе. Таким образом, окончательное значение рН определялось после подтверждения равновесия. Значение pH измеряли непосредственно в кювете образца с помощью микроpH-электрода, который имеет точность ±0,005 pH.
6. Получите набор данных американского стандартного кода для обмена информацией (ASCII) о длинах волн в зависимости от поглощения. Извлеките среднее положение пиков полос с помощью программы Peak Fit .
   1. Постройте график набора данных для отображения оптической плотности в зависимости от длины волны (нм) с помощью функции График .
   2. Отметьте начальные пиковые длины волн λ₁, λ₂ и λ₃ , выбрав их приблизительное положение на построенных графиках данных, и подогнайте данные с помощью функции RUN .
   3. Получим график, содержащий центральный пик каждой (λ_i), XC_i, с площадью каждой полосы (A_i).
7. Экспортируйте извлеченные пиковые положения и площади в программу для работы с электронными таблицами и рассчитайте среднее положение пика при заданном pH.
   1. Определите весовой коэффициент a_i для каждого пикового центра λ_i путем сравнения площади полосы (A_i) с общей площадью всех полос следующим образом: .
   2. Извлеките среднее пиковое положение (pH) с помощью уравнения (1).
      (1)
8. Сгенерируйте график обратимости, используя следующий процесс:
   1. Сведите в таблицу средние пиковые положения , как функцию каждого номера «операции», n as и n. Сделайте число операции, n, равным 1 для образца до добавления кислоты при ~pH 7. Каждый раз увеличивайте число операций на 1, изменяя pH на ~pH4 для HCl или pH на ~pH 10 с NaOH. Сделайте n четным при кислом состоянии (т.е. ~pH 4) и нечетным базовым условием (т.е. pH 10).
   2. Проанализируйте положение пика в каждом n, (n) = λ(n), используя формулу³⁰
      (2)
      ПРИМЕЧАНИЕ: Представьте начальное среднее положение пика при n = 1 с помощью A. Выразите параметры B и C как n-зависимый сдвиг положения пика. Сделайте параметр D амплитудой коэффициента демпфирования E, повторяющегося. Используйте функцию синуса , чтобы показать волнообразность положения пика в зависимости от n.
   3. Перенос набора данных (x, y) в программное обеспечение Origin и построение графика.
   4. Сформируйте пользовательскую функцию, приведенную в уравнении (2) в разделе Функция анализа нелинейной подгонки кривой. Введите начальные значения A, B, C, D и E и нажмите кнопку ВЫПОЛНИТЬ, чтобы завершить подгонку.
9. ПЭМ визуализация
   1. Изготовление ПЭМ-образцов коллоидов золота 20 нм с покрытием Aβ _1-40 с медными сетками с покрытием Formvar. Исследуйте образцы с помощью ПЭМ, работающего под напряжением 80 кВ.
   2. Собирайте изображения с номинальным увеличением 28 000x или 71 000x на модели XR-40 с 4-мегапиксельной цифровой CCD цифровой камерой (AMT). Соберите ПЭМ-изображения для золота 20 нм с покрытием Aβ _1-40 при каждой операции n = 1 (~pH 7), n = 2, 4, 6, 8 и 10 (pH 4) и n = 3, 5, 7 и 9 (pH 10).

3. Рамановская визуализация и исследование обратимой агрегации

1. Нанесите 100 мкл раствора на слюдяной диск (диаметр 1 см) для каждого образца под рабочим номером n. Перед измерением просушите образцы на ночь.
2. Сбор изображений в белом свете при каждой операции номер n. Подготовьте отдельный образец на слюдяном диске, так как pH непрерывно изменялся в диапазоне от ~pH 4 до ~pH 10 для каждого рабочего числа n (Рисунок 3).
3. Соберите рамановское изображение на каждом рабочем числе n лазером с длиной волны λ = 633 нм при мощности 0,5 ± 0,05 мВт с пространственным разрешением ~0,43 мкм в сетку, состоящую из 100 × 100 пикселей со временем интегрирования 500 мс/спектр для области от ~200 ^см-1 до ~2 800 ^см-1 (рис. 4).
4. Постройте репрезентативный спектр для каждого n, выровненный как функция n, и постройте трехмерный спектр SERS как функцию n для Aβ_1-40 с покрытием из золота 20 нм (рис. 5A). Используйте вид сверху трехмерного спектра SERS в качестве контурной карты (рис. 5B) для выделения специфических мод, связанных с определенным состоянием pH (т.е. ~pH 4 и ~pH 10). Извлекает любые спектральные особенности, улучшенные либо при n_четных , либо при n_{нечетных}.

Результаты

При присоединении Aβ _1-40 к поверхности наноколлоидных частиц золота полоса SPR вокруг максимума поглощения 530 нм значительно смещалась в красную сторону до пикового положения ~650 нм, когда раствор становился более кислым (pH 4)³⁵. Вместе с изображениями ПЭМ мы определили, что спектроскопические особенности, наблюдаемые при pH 4, соответствуют образованию коллоидных агрегатов золота с правдоподобно развернутой конформацией и сетью с окружающими развернутыми мономерами Aβ _1-40, адсорбированными по поверхности золота³⁰. Мы заметили, что мономеры Aβ _1-40 возвращаются к свернутой конформации в основных условиях (pH 10), что приводит к квазиобратимой деформации агрегатов. Этот квазиобратимый процесс был очевиден по чередованию среднего пика полосы ((n)), который смещался между более короткой и длинной длиной волны, а также дисперсной и совокупной морфологии на изображениях ПЭМ между основными (pH = 10) и кислыми (pH = 4) условиями. Ранее было замечено, что часть мономера Aβ _1-40 остается развернутой даже после того, как раствор был возвращен к основным условиям³⁶. На видео 1 показано pH-зависимое изменение цвета Aβ _1-40 и коллоида голого золота на длине волны 20 нм.

Для сравнения было проведено исследование pH хмеля коллоида голого золота с длиной волны 20 нм (рис. 5C и D). По мере того, как операция по изменению рН продолжалась, она показала рост кластеризации коллоидов золота в полосе SPR shoft, изображениях ПЭМ, а также изображениях в белом свете. Довольно интересно, что существовало несколько спектральных линий SERS в зависимости от n_{нечетных} и n_четных. Например, при n_чете (pH ~4) интенсивно наблюдалась линия на уровне 275 ^см-1, которая была назначена модой, связанной с Au_n (n = 5, 6, 12, 16, 20, 58)³⁷ или модой Au-Cl^- ligand³⁸ . С другой стороны,_{для n чета}, при 1008 ^см-1 C-N str наблюдалась³⁹ и CH₂ wag³⁹, деформация CH₂ ⁴⁰ широко наблюдалась при 1291 ^см-1.

В отличие от четкой pH-зависимой и обратимой агрегационной морфологии, наблюдаемой при визуализации в белом свете, наблюдались относительно тонкие различия в спектральных особенностях спектра SERS между n_{нечетными} и n_{четными}. В первом приближении плотность спектральных линий в области между 250 ^см-1 и 1750 ^см-1 была выше для n_{нечетных} , чем для n_четных. Спектральные линии в области отпечатков пальцев 1250 ^см-1 и 1750 ^см-1 (каналы амида I, II и III) для n_{нечетных} показали менее разрешенные спектральные особенности, что указывает либо на расширение, либо на увеличение спектральной плотности. На рисунке 6 контурная карта, представленная на рисунке 5B (рисунок 6B), была организована с сигналами SERS в точках 761 ^см-1 (красный) и 1395 ^см-1 (синий), представляя акценты на n_{нечетных} и n_четных соответственно (рисунок 6C). В качестве репрезентативного спектра SERS для n_{нечетных} и n_четных, спектр SERS при n = 7 (красный) и n = 4 (синий) показан вверху (рис. 6A). Чтобы показать соответствие сдвигу полосы SPR для золота Aβ_1-40 с покрытием 20 нм, график смещения полосы на рисунке 3 показан сбоку (рисунок 6D).

Хотя у нас есть предварительные данные о полном присвоении наблюдаемого спектра SERS, здесь мы отмечаем несколько заметных особенностей комбинационного сдвига. Спектральные линии и (вероятные присвоения), усиленные в n_{нечетных}, в основном находятся в области ниже 1000 ^см-1: 394 ^см-1 (Trp)41,42,43, 761 ^см-1 (His, Ala)39,44,45,46,47, 875 ^см-1 (индоловое смещение NH, C-C растяжение Met)³⁹, 974 ^см-1 (Glu, C-COO^- растяжение Asp, мода, связанная с цитратом)39,48,49. Усиленный при n рамановский сдвиг_даже показал значимые спектроскопические особенности в области отпечатков пальцев (Амид I, II и III): 1166 ^см-1 (N-H⁺ деформация Tyr)^39,41, 1227 ^см-1 (Ala-Pro-Gly, Амид III)39,50,51, 1395 ^см-1 (^COO- симметричное растяжение или CH₂- CH₃- ножницы Glu)^39,48, 1585 ^см-1 (растяжение кольца CC Phe, асимметричное растяжение карбоксилата -Au, ^COO- растяжение цитрата, деформация бензольного кольца)39,41,45,46,47,49,52, 1592 ^см-1 (Phe, Tyr, C=C растяжение Tyr, CC растяжение кольца в Phe, растяжение бензольного кольца и COO^- растяжение в Phe и Tyr, а также асимметричное растяжение OH)39,41,48,50,51 и 1628 ^см-1 (субпик амида I, характерный для межмолекулярных β-листовых структур⁵³, C=O и связанных CN/NH колебательных мод белкового каркаса, происходящих из параллельных структур β-листового типа, накопление агрегированных Aβ⁵⁴, случайных катушек, β-витков, β-шпильки⁴⁸. Последовательности, появляющиеся для n_{нечетных} или n_четных, показаны на рисунке 7. В целом, для n,_даже соответствующего обратимой агрегации или развернутой конформации Aβ _1-40, Phe/Tyr, содержащего бензольное кольцо, симметричное растяжение COO^-, CH_{2-CH 3}-, ножничный режим Glu и -NH⁺ деформация Tyr были значимо вовлечены в конформационное изменение пептида. Во время разборки агрегации, которая наблюдалась, когда пептиды принимали свернутую конформацию, соответствующую модам, заметным на n_{нечетных}, по-видимому, были задействованы Glu, Asp, Met, His и Ala.

Рисунок 1: pH-зависимая абсорбция и морфология. Показан спектр поглощения при рН 4 (А) и рН 10 (В) для наночастиц золота с покрытием Aβ _1-40 (20 нм), а также соответствующие ПЭМ-изображения, эскизы агрегационных/диспергированных частиц и изображения растворов во флаконах. A — развернутая конформация мономеров Aβ _1-40 в кислых условиях, а B — свернутая конформация в основных условиях. Диаграммы мономеров Aβ _1-40 в каждой конформации и морфологии агрегации/дисперсии показаны рядом с изображениями ПЭМ. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 2: Обратимость самосборки, зависящая от наноразмера. Смещение среднего пикового положения полосы SPR, в зависимости от рабочего числа, n, для всех испытуемых размеров коллоидных частиц золота. Также приведены приблизительные значения рН и соответствующая стадия агрегатов, показанные на рисунке 1 . Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 3: и изображения ПЭМ/белого света по каждому номеру операции. Как функция рабочего числа, n, была построена вместе для Aβ _1-40 с покрытием 20 нм золота (замкнутые круги) и 20 нм золота коллоида (открытые круги) и показана с репрезентативными изображениями TEM (A и C)/белого света (B и D) при выбранных номерах операций (n = 1, 2, 3, 7 и 8, отмеченных декодированными стрелками) для Aβ _1-40 с покрытием 20 нм золота 20 нм (A и B) и 20 нм золота коллоида (C и D). Черный шрифт обозначает pH 7, синий — pH 4, а красный — pH 10. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 4: Репрезентативный белый свет и рамановское изображение. Изображение в белом свете, рамановское изображение и спектр SERS для (A) n = 2 и (B) n = 3; i) изображение в белом свете в широком поле зрения, ii) изображение в белом свете в области, где было получено рамановское изображение (обозначено красным квадратом в i)), iii) рамановское изображение двух компонентов, объединенных вместе, iv) рамановское изображение компонента 1 и его v) спектр SERS iv), vi) рамановское изображение компонента 2, и vii) спектр SERS vi). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 5: Контурная карта спектра SERS для n_{нечетных}, n_четных и n_всех. (A) Трехмерная карта спектра SERS в районе 250 ^см-1 и 1750 ^см-1 в зависимости от n для Aβ_1-40 покрытого 20 нм золота с контурной картой, показанной на рисунке (B) сверху. (C) Трехмерная карта спектра SERS в районе 250 ^см-1 и 1750 ^см-1 в зависимости от n для золота 20 нм с контурной картой, показанной на рисунке (D) сверху. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Рисунок 6: Контурная карта спектра SERS. Контурная карта спектра SERS в зависимости от n (1-10). (A) Поглощение на 1395 ^см-1 (синий) и 761 ^см-1 (красный). (Б-Г) Нижняя панель показывает спектр SERS, а правая панель показывает амплитуду изменения интенсивности сигнала сигналов SERS в каждом n. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Рисунок 7: Примечательные последовательности Aβ_1-40. Последовательности, которым присвоено значительное участие при n_{нечетных} значениях (соответствующих образованию складчатой конформации), обозначены красными стрелками вниз, а последовательности, отнесенные к значительному участию при n_четных числах (соответствующих образованию развернутой конформации), обозначены синими стрелками. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Видео 1: pH-зависимое изменение цвета Aβ_1-40 и коллоида голого золота 20 нм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать это видео.

Обсуждение

Критическим фактором в исследованиях конформации пептидов является поддержание образцов, так как образцы могут испортиться при неправильном хранении. Образцы пептидов были получены в лиофилизированной форме и начинали денатурировать после их регидратации дистиллированной деионизированной водой, даже когда они хранились при температуре -80 °C. Чистота коллоидов золота была проверена с помощью анализа контроля качества. Чтобы сохранить стабильность коллоидов, их хранили при температуре 4 °C и не замораживали. Растворы коллоидов золота готовили свежими для каждого эксперимента, потому что буферный раствор солей дестабилизировал бы коллоид золота. Растворы HCl и NaOH готовились свежими для каждого эксперимента.

Технические трудности, связанные с ручным считыванием и регистрацией pH раствора с помощью чувствительных инструментов при изменении pH от 4 до 10, ограничивают точность наших результатов. Таким образом, мы не наблюдали последовательных результатов в интенсивности сигналов SERS. Это, вероятно, внесло ошибку в амплитуду, которая использовалась для контурного графика. Будущая работа по проверке мод, связанных с n_{четными} или n_{нечетными}, может привести к мутациям для замещения аминокислот в последовательности Aβ _1-40, которые, как мы сообщаем, участвуют в конформационных изменениях белка, таких как одиночные остатки тирозина или аспарагина.

«Взаимодействие между мономером Aβ_1-40 и поверхностью золота считается дипольным взаимодействием, а уровень водородных связей был предложен в работе Х. Шмидбауэра и ^др.55. В отдельной работе мы исследовали спектроскопию SERS в зависимости от количества Aβ_1-40 в кислом состоянии, в котором выделяется наноразмерно-зависимое адсорбционное образование⁵⁶. Предполагается, что для золота с длиной волны 20 нм связь C=C или -C-N гистидина (His) инициирует адсорбцию; Однако для золота с длиной волны 80 нм бензольное кольцо в режиме дыхания фенилаланина (Phe) или тирозина (Tyr) достигало поверхности золота для инициирования адсорбции. Считалось, что процесс адсорбции Aβ_1-40 на поверхности золота при нейтральных или основных условиях (pH ~ 10) поддерживает гидрофильность коллоида золота, покрытого покрытием Aβ_1-40 , поскольку в водном состоянии не образовываются осадки. Тем не менее, осадки наблюдались при pH 4, что означает, что агрегаты были гидрофобными.

Изображения ПЭМ и изображения в белом свете лишь косвенно свидетельствуют об агрегации. Мы попытались провести спектроскопию кругового дихроизма (CD) для корреляции морфологии, наблюдаемой в обратимой агрегации, с вторичными структурами. Однако рассеивающие базовые линии не позволили нам получить воспроизводимые сигналы CD. Поэтому вместо этого мы использовали рамановскую спектроскопию, уделяя больше внимания модам, усиливающимся либо при агрегации (развернутой конформации Aβ_1-40) при pH ~4, либо при дезагрегировании (развернутой конформации Aβ_1-40) при pH ~10. Таким образом, наилучшее предположение для идентификации вторичной структуры в этой работе было ограничено мониторингом узлов, связанных со вторичными структурами. Это было продемонстрировано при наблюдении за листом β при 1628 ^см-1, особенно при pH 4.

В этом исследовании наблюдалось изменение конформации пептидов только для коллоидов золота диаметром 20 нм и изучалось только до 10 нм. Конформационные и агрегационные свойства пептида Aβ _1-40 могут быть изменены в зависимости от размера частицы, которую они адсорбируют до⁵⁶. Таким образом, необходима дополнительная работа, чтобы понять свойства пептидов, которые основаны на сетевом соединении между мономерами и теми, на которые влияют физические характеристики адсорбционной поверхности. В условиях, которые мы тестировали, только коллоиды золота диаметром 20 нм проявляли обратимость морфологии агрегации, и механизмы влияния диаметра коллоида на обратимость этого свойства неизвестны. Увеличение n до 20 может дать более глубокое понимание модовозависимой степени обратимости морфологии агрегации. Эти исследования того, как размер коллоида золота влияет на агрегацию бета-амилоидных пептидов, позволят получить важное представление о молекулярных механизмах патологии болезни Альцгеймера.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Бета-амилоидный пептид 1-40 (Aβ 1– 40 пептид)	r-пептид (Bogart, GA, США)	A-1156-2
CCD цифровая камера	AMT	XR-40 4-мегапиксельная CCD
Дистиллированная деионизированная вода из системы Milli-Q- Millipore	Sigma (Берлингтон, Массачусетс, США)	Milli-Q IQ 7000
Freezer -86 oC	Thermo Scientific	Revco Chilly Willy  Идентификатор блока серии RLE 187004 номер сборки 40.04
Золотой коллоид (10 нм)	Ted Pella, Inc. (Реддинг, Калифорния, США)	15703-20
Золотой коллоид (100 нм)	Ted Pella, Inc. (Реддинг, Калифорния, США)	15711-22
Золотой коллоид (15 нм)	Ted Pella, Inc. (Реддинг, Калифорния, США)	15704-20
Золотой коллоид (20 нм)	Ted Pella, Inc. (Реддинг, Калифорния, США)	15705-20
Золотой коллоид (30 нм)	Ted Pella, Inc. (Реддинг, Калифорния, США)	15706-21
Золотой коллоид (40 нм)	Ted Pella, Inc. (Реддинг, Калифорния, США)	15707-21
Золотой коллоид (50 нм)	Ted Pella, Inc. (Реддинг, Калифорния, США)	15708-21
Золотой коллоид (60 нм)	Ted Pella, Inc. (Реддинг, Калифорния, США)	15709-22
Золото коллоидное (80 нм)	Ted Pella, Inc. (Реддинг, Калифорния, США)	15710-22
Слюдяные диски высшего сорта V1AFM 10 мм	Ted Pella Inc.	#50
Соляная кислота стандартный раствор, 1.0 Н	флюка	лот# SHBB4705V        318949-2L
Кварцевый кювет для макро 10 мм	Fire Fly Science	Тип1-MC-Path10 мм
Микро Н электрод	HORIBA	Модель 9618S (MFG No 9Y8E0050)
Программа Peak Fit	Origin (Нортгемптон, Массачусетс, США)	OriginPro2018b (64-бит) b9.5.5.409 (Академический)
pH 4.00 Буферный раствор	VWR	Cat No. 34170-127
pH 7.00 Буферный раствор	Fisher Chemical	SB107-4 Лот 191041
pH-метр	HORIBA	Модель F-72G (MFG No. B27M0017)
Наконечники для пипеток   Макси Советы 1– 5 мл	Fisher	02-707-467
Наконечники для пипеток 10 мл	Fisher	02-717-135
Наконечники для пипеток 1000 мл	Fisher	02-717-156
Наконечники для пипеток 1– 200 мл	Фишер	02-717-143
Пипеттер Фишер марки Elite 0.5– 5 мл	Fisher	QU05317
Pipetter Fisher Brand Elite 100– 1000 мл	Fisher	QU01672
Pipetter Fisher Brand Elite 10– 100 мл	Fisher	MU10985
Pipetter Fisher Brand Elite 1– 10 мл	раствора
1,0 м	флюка	лот#05096BPV    319511-2L
TEM	FEI Co	Morgagni модель 268
TempAssure ПЦР-пробирки, плоские колпачки, натуральные	США Научный		полипропилен. 0,2 мл индивидуальные тонкостенные пробирки с прикрепленными матовыми плоскими колпачками
UV-Vis-NIR спектрофотометр	Varian	CARY 5000 UV1106M074
WI Tec alpha300R Конфокальный рамановский микроскоп	WITec-Oxford Instrument	XMB3000-3001