Тщательная гроссинг и стандартизированное срезирование неопухолевых шариков важны для получения высококачественных воспроизводимых гистопатологических срезов. Рекомендации по стандартизированному сканированию неопухолевых шариков у взрослых и плода приведены в настоящем документе. Демонстрируются и обсуждаются различные варианты разделения глобуса, включая критерии принятия решений на основе конкретных случаев.
Методическая статья
Грифирование неопухолоевых глаз, включая глаза плода
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Гроссинг и разрезание глазных яблок плода и взрослого человека являются важнейшими этапами в гистопатологической оценке глазных заболеваний. Правильное обращение с глазным яблоком имеет важное значение для точной диагностики таких состояний, как опухоли и неопухолевые изменения, включая травмы, инфекции и предыдущие хирургические процедуры. Ориентация глазного яблока сопровождается внешним осмотром, документированием характеристик, включая размер, форму и любые видимые повреждения или аномалии. Особое внимание следует обратить на наличие опухолей, инфекционных или дегенеративных изменений, а также признаков травмы или перенесенного хирургического вмешательства. Регистрируются измерения глазного яблока и связанных с ним структур, включая роговицу и зрительный нерв, а также анатомическое и своевременное развитие в глазах плода. Трансиллюминация необходима для обнаружения тени, которая может быть вызвана образованием или кровоизлиянием, а также повышенным пропусканием света в областях атрофии, таких как колобома.
Фиксация глазного яблока обычно выполняется в 4% параформальдегиде для сохранения ткани. После фиксации в течение 24 часов глазный яблоко систематически секционируется для исследования внутриглазных структур, таких как передняя камера, состояние хрусталика, увеа, сетчатка, стекловидное тело и зрительный нерв. Взрослый глазок обычно трисекционируется по горизонтальной или - в зависимости от клинических показаний - вертикальной/косой плоскости для создания зрачково-зрительного нерва (ПО). Дополнительные срезы калотт могут быть взяты для оценки областей интереса, таких как подозрительные образования или области атрофии. В исследовательских целях могут быть рассмотрены различные протоколы фиксации и секционирования.
Каждый крупный срез тщательно проверяется, документируется и обрабатывается для микроскопического исследования, чтобы убедиться, что любая патологическая находка должным образом взята. Точное срезирование и срез имеют решающее значение для корреляции клинических и гистологических данных, облегчения диагностики, принятия решений о лечении и, в конечном итоге, улучшения результатов лечения пациентов. Стандартизация гроссинга и секционирования обеспечивает всестороннюю оценку глазного яблока и способствует развитию офтальмологии.
Введение
Общий осмотр и рассечение глазных глазных яблок являются важными процедурами при офтальмологической патологии, дающими ценную информацию о различных глазных заболеваниях и заживлении ран после хирургического вмешательства1. Глаз, как узкоспециализированный орган, подвержен широкому спектру патофизиологических и/или патологических изменений, включая опухоли (например, увеальную меланому, ретинобластому), воспалительные процессы (например, увеит, эндофтальмит) и нейродегенеративные заболевания (например, глаукому, возрастную макулярную дегенерацию)2,3,4. Заживление ран после хирургических процедур также может привести к осложнениям, угрожающим зрению.
Глаза взрослого человека, которые оцениваются в лаборатории офтальмологической патологии, обычно энуклеированы по клиническим причинам, таким как опухоль или слепой, болезненный глаз. В большинстве стран исследование донорских глаз при вскрытии ограничено исследовательскими проектами. Напротив, фетальные и неонатальные глаза обычно являются образцами аутопсии (за исключением глаз с клиническим подозрением на внутриглазную опухоль)5,6. Таким образом, глаза плода и новорожденного исследуются в связи с результатами других дисциплин, таких как детская патология или в рамках судебно-медицинской аутопсии7. Для глаз плода и взрослого человека знание анамнеза пациента до его выемки имеет решающее значение для понимания показаний к гистопатологическому анализу, который оказывает значительное влияние на то, как глаз (фото) документируется и разрезается 1,3.
Тем не менее, точное общее обследование, срез и документирование имеют решающее значение не только для гистопатологической оценки, которая способствует диагностике, прогнозу и лечению глазных заболеваний, но и для судебно-медицинских случаев (например, травма головы или судебно-медицинские аспекты)8,9. Во время сканирования проводится тщательный внешний осмотр глазного яблока под препарирующим микроскопом или отброшенным микроскопом офтальмологической хирургии, уделяя особое внимание таким особенностям, как размер, форма и характеристики поверхности (дополнительный рисунок S1). Измерения всего глобуса (передне-заднего, горизонтального и вертикального), роговицы и зрительного нерва должны быть тщательно выполнены с помощью штангенциркулярной линейки и задокументированы (рис. 1). Косые мышцы и горизонтальная цилиарная артерия помогают ориентироваться в глазном яблоке. Оставшиеся швы могут указывать на хирургическую процедуру, и их не нужно удалять во время грубости. Тем не менее, некоторые хирурги накладывают шов на одну из прямых мышц во время энуклеации, что может быть полезно не только для удаления глазного яблока, но и для ориентации (если сообщается о локализации). Точное документирование любого поражения, обесцвечивания или другой аномалии имеет решающее значение, поскольку эти результаты могут дать ранние ключи к основной патологии. Трансиллюминация является обязательной для обнаружения внутриглазных опухолей или дефектов развития, таких как колобомы, а также для определения места предыдущей хирургической процедуры.
Секция глазного яблока обычно выполняется после фиксации в 4% параформальдегиде (4% PFA) или 10% формалине для сохранения архитектуры ткани. Рутинная фиксация 4% ПФА проводится в течение 24 ч. Для электронной микроскопии для исследовательских образцов могут быть использованы альтернативные фиксаторы, например, фиксатор Карновского (в том числе глутаральдегид) или 2,5% глутаральдегид. Разрез или инъекция фиксатора не рекомендуется, так как это приводит к появлению ненужных артефактов. Тем не менее, в исследовательских целях глазный яблоко может быть открыт для лучшего проникновения ПФА, в частности, для фиксации сетчатки, но это не рекомендуется для рутинных образцов. Что касается донорских глаз, то они могут быть грубыми при полном объеме или после удаления склеророговичной пуговицы для банка глаз.
Выбор плоскости разреза – горизонтальной, вертикальной или косой – зависит от клинического подозрения и интересующих анатомических структур, включая места предыдущей операции (например, трабекулэктомия при глаукоме, обычно в положении «12 часов»)10. Как правило, глобус разрезается на горизонтальном меридиане, чтобы получить участок зрачково-оптического нерва (ПО-секция) с роговицей, зрачком, хрусталиком, макулой и зрительным нервом на одном участке. Сечение PO также может быть получено, если выполняется вертикальное или наклонное сечение. Однако в этом сценарии макула не будет находиться на том же участке, что и зрительный нерв. Секция ПО является золотым стандартом гистопатологического исследования.
После грубого сканирования и разреза интраокулярные структуры тщательно исследуются, фотографируются и описываются (Рисунок 1). Каждая структура глаза (роговица, состояние хрусталика, радужная оболочка, цилиарное тело, сосудистая оболочка, сетчатка глаза, стекловидное тело, зрительный нерв) должна быть исследована отдельно. По возможности следует получить поперечное сечение зрительного нерва и представить его отдельно. Все эти исследования дают основание, по крайней мере, для макроскопически-гистологической корреляции, если не для клинико-патологической корреляции.
Таким образом, точный процесс гроссинга и среза очень актуален в клинической практике, поскольку энуклеированные глобусы отправляются на гистопатологический анализ после тяжелой травмы, подозрения на злокачественные новообразования или резистентных к лечению инфекций. Стандартизированный протокол макроскопического обследования позволит офтальмопатологам проследить историю земного шара и поставить наиболее точные гистопатологические диагнозы, актуальные не только для пациента с другим глазом, но и для будущих пациентов. В следующем протоколе описывается и документируется обращение с (неопухолевыми) глазами плода и взрослого человека для рутинной клинической диагностики, судебно-медицинских исследований и исследовательских подходов.
Протокол
Обязательно придерживайтесь инструкций по технике безопасности при работе с фиксированными формалином образцами, так как он раздражает кожу, канцерогенен и эмбриоточен 11,12,13.
1. Ориентация
- Определите четыре прямые мышцы (рисунок 2A).
- Определите верхнюю косую мышцу по ее сухожильному виду (Рисунок 2B). Он встраивается в склеру на задневисочной поверхности глазного яблока в непосредственной близости от места прикрепления верхней прямой мышцы.
- Определите нижнюю косую мышцу. Он вводится в височную нижнюю часть склеры между латеральной прямой мышцей и зрительным нервом (рис. 2C).
- Определите длинную заднюю цилиарную артерию (рисунок 2B).
ПРИМЕЧАНИЕ: В глазах плода длинная задняя цилиарная артерия имеет решающее значение для определения горизонтального меридиана, поскольку мышцы не так заметны, какв глазах взрослого человека. - Точно определите латеральность глазного яблока на основе шагов 1.1.1-1.1.3 (правый глаз против левого).
2. Кассовые
- Измерьте передне-задний диаметр (диаметр AP), а также горизонтальный и вертикальный диаметр в мм (рис. 3A, B).
ПРИМЕЧАНИЕ: Для глаз плода диаметр AP необходимо сравнить с номограммой для оценки микрофтальмии7. - Опишите любые аномалии внешнего вида глазного яблока, включая, помимо прочего, шрамы, швы, медицинский инородный материал (например, обхватывающую ленту для отслойки сетчатки или устройство для дренирования глаукомы), инородные тела, деформации (Рисунок 4A-D).
- Измерьте диаметр роговицы по горизонтали и вертикали в мм (рисунок 3А).
- Опишите роговичный аспект, включая, помимо прочего, прозрачность, шрамы, признаки кератопластики, швы, васкуляризацию (Рисунок 3A).
- Опишите радужную оболочку глаза (если она видна) с учетом цвета, конфигурации зрачков и возможных аномалий. Используйте трансиллюминацию для оценки дефектов радужной оболочки глаза (связанных с травмой или врожденными аномалиями).
- Измерьте длину зрительного нерва и аномалии (например, кровоизлияние в оболочки зрительного нерва) (рисунок 3B).
- Если есть возможность, сделайте поперечный срез через зрительный нерв и подайте его отдельно.
- Просвечивайте земной шар с помощью светодиодной трубки, уделяя особое внимание дефектам радужной оболочки глаза и склеральной тени, которая может возникнуть в результате опухоли, кровоизлияния или инородного материала (Рисунок 3C, D).
- Выполняем фотодокументацию земного шара.
3. Срез рутинных образцов
- Поместите роговицу глобуса вниз (рисунок 5А).
- Отметьте пером горизонтальный меридиан или плоскость сечения (рисунок 5A-C) так, чтобы участок находился близко к зрительному нерву и проходил через периферическую роговицу. Это также применимо, если сечение вертикальное или сагиттальное.
ПРИМЕЧАНИЕ: Не разрезайте интересующие участки, а режьте рядом с ними, в противном случае они могут не быть закрыты на гистологическом срезе, поскольку ткань уменьшается при дальнейшей обработке. - Разрежьте аккуратно лезвием микротома по отмеченной линии, придерживая глобус другой рукой.
ПРИМЕЧАНИЕ: Ятрогенный материал, такой как опоясывающая полоса, удалять не нужно (Рисунок 4). - Извлеките калотту и внимательно осмотрите ее на наличие аномалий (рисунок 5D). Хранить в формалине или отправить на дальнейшую гистологическую обработку. Если во время операции по отслоению сетчатки глазный яблоко заполнено силиконовым маслом (используемым в качестве тампонады), позаботьтесь об оборудовании, так как оно довольно липкое.
- При увеальной меланоме удалите вихревую вену; В неопухолевых глазах это обычно не делается.
- Осмотрите внутренние структуры глаза: переднюю камеру; состояние хрусталика (факичное или псевдофакичное, афакическое, катаракта, вторичная катаракта); ирис; цилиарное тело; Хориоидея; центральная сетчатка; периферическая сетчатка; зрительный нерв (например, атрофия); склеры (могут быть утолщены при фтизиатрии глаз или истончены при травме или стафиломе).
- Удалите другую калотту, чтобы получить правильную секцию PO (Рисунок 5E и Рисунок 6A); Осторожно положите раскрытый глобус отверстием вниз.
- Держите глобус одной рукой и разделите его в параллельном направлении (но над зрительным нервом и снова в идеале через периферическую роговицу). После открытия земной шар становится менее стабильным.
- Извлеките калотту и внимательно осмотрите на наличие отклонений. Хранить в формалине или отправить на дальнейшую гистологическую обработку (рис. 6).
- Выполнить фотодокументацию разреза ПО и передать его на дальнейшую гистологическую обработку.
4. Срез образцов плода
ПРИМЕЧАНИЕ: Это всего лишь корректировки основного протокола, описанного в разделах 1 (ориентация), 2 (гроссинг) и 3 (раздел рутинных образцов).
- Расположите глобус роговицей вниз.
- Определите длинную заднюю цилиарную артерию, осторожно сдавливая глазок (Рисунок 7).
- Рассеките глобус горизонтально близко к зрительному нерву, слегка надавливая на лезвие микротома. Убедитесь, что периферия роговицы также находится в пределах разреза.
ПРИМЕЧАНИЕ: Трисекция не рекомендуется из-за небольшого размера плодного яблока. - Тщательно оцените внутриглазные структуры и сфотографируйте их, как описано в шаге 3.6.
ПРИМЕЧАНИЕ: Особое внимание следует уделять структурам плода (например, сосудистой сети плода) или аномалиям развития (например, колобоме). - Отправьте основную часть глобуса на дальнейшую обработку.
- Оставшуюся калотту заархивируйте в формалине или отправьте на дальнейшую обработку.
5. Раздел судебно-медицинских образцов
- Ознакомьтесь с вопросом криминалистической экспертизы перед разделением. При судебно-медицинской патологии подготовьтесь к токсикологическому анализу частей земного шара (стекловидное тело) или используйте их для оценки времени после смерти (роговица)2,14.
- При травме головы при жестоком обращении (АГТ) выполните горизонтальное вскрытие с последующим тщательным осмотром и фотодокументированием кровоизлияний в сетчатку и оболочек зрительного нерва. Выполните окрашивание железом (например, пятно Perl's Prussian blue), чтобы оценить признаки уже ухудшившихся кровоизлияний.
Примечание: Более подробный протокол предоставлен Gilliland et al., которые рекомендуют удалять и анализировать глаза и их орбитальное содержимое.
Существует множество других состояний, приводящих к кровоизлияниям в сетчатку у новорожденных, помимо AHT 7,16,17,18,19,20. - По вопросам, связанным с хирургическим вмешательством (например, эндофтальмит4), проведите горизонтальное вскрытие глазного яблока и оценку, как описано в разделе 3. Для глаз с трабекулэктомией в анамнезе выполните вертикальный разрез рядом с местом нахождения пузырьков (который может быть входом для бактерий).
- Инородные тела: Измерьте и сфотографируйте объект и его местоположение in situ или пустое пространство, в которое попал объект (металлические инородные тела требуют удаления перед резкой, так как их нельзя разрезать). Опишите цвет, форму и консистенцию. Храните инородное тело на хранении, так как оно может быть повторно исследовано в юридических целях.
6. Альтернативные подходы
ПРИМЕЧАНИЕ: Альтернативный подход может быть использован, если сетчатка нуждается в исследовании перед разрезами 10,21,22. Этот подход аналогичен донорским глобусам, при котором склеророговая ткань удаляется для банка глаз.
- Используйте скальпель и разрежьте по окружности в пределах pars plana (рисунок 8A).
- Удалите передний сегмент (роговицу, ободок склеры, хрусталик), рассеките пополам и отправьте на гистопатологическую рутинную оценку (рис. 8B).
- Визуализируйте сетчатку и визуализируйте ее мультимодально (до и/или после фиксации) (Рисунок 8B).
- Удалите обе калотки для дальнейшей рутинной обработки. Поскольку передний сегмент уже удален, оставшийся глазный яблоко нестабилен; Следовательно, надежно стабилизируйте его одной рукой, снимая калотту, как описано в шагах 3.1-3.4.
- Тщательно оцените внутриглазные структуры и сфотографируйте, как описано в шаге 3.6.
- Удалите вторую калотту, как описано в шагах 3.7-3.10 (рисунок 8D).
ПРИМЕЧАНИЕ: Для образцов, предназначенных только для исследований, возможны другие подходы21.
7. Дальнейшая обработка
- После рутинной обработки и заделки парафина подготовьте ступенчатые срезы толщиной 5 мкм до тех пор, пока зрительный нерв и макула не окажутся на срезе.
- Самостоятельно определите расстояние между ступенчатыми секциями.
ПРИМЕЧАНИЕ: Это расстояние между ступенчатыми участками обычно составляет ~250 μм в нашей лаборатории офтальмологических патологий. - Подготовка серийных разделов для исследовательских глобусов. Если необходимы иммуногистохимические красители, закрепите срезы на предметных стеклах с покрытием.
Результаты
После ориентации должно быть возможно определить латеральность для глаз взрослого человека. Однако для глаз плода это часто невозможно. Латеральность важна для подтверждения того, что был удален правильный глаз и что он соответствует отчету. Измерения перед разделкой документируются. В частности, для глаз плода номограмма полезна для исключения аномалий размера глаза, таких как микрофтальмия.
На основании анамнеза пациента и трансиллюминации планируется секционирование . Глобус обычно разрезается горизонтально, что требует правильной идентификации горизонтальной плоскости, как описано выше. Если есть конкретные области, представляющие интерес (например, колобома, неоподозреваемые поражения, выявленные при трансиллюминации, или хирургические участки, такие как трабекулэктомия), секционирование адаптируется соответствующим образом. Целевым результатом секционирования является правильный секция PO (рис. 5 и рис. 6).
Неуклюжий разрез глобуса ухудшает точную клинико-патологическую корреляцию и интерпретацию гистологических данных, что может повлиять на последующее наблюдение за пациентом. Например, одним из наиболее угрожающих диагнозов является симпатическая офтальмия23 , двустороннее хроническое гранулематозное воспаление увеа, потенциально приводящее к слепоте оставшегося другого глаза (симпатизирующего глаза). Эта сущность должна быть исключена на каждом земном шаре и, в частности, в слепых, болезненных глазах. Поскольку это имеет решающее значение для сохранения оставшегося глаза, репрезентативные участки земного шара являются обязательными для оценки, предпочтительно в виде секторов PO.
В случае, если разрез ошибочно сделан через всю роговицу вместо разреза периферии, сдайте калотту с роговицей и передним сегментом и неудачным участком PO. Вторую калотту необходимо снять, как описано выше, чтобы глобус поместился в кассету. Примечательно, что фтизиатрические глаза могут демонстрировать костную метаплазию пигментного эпителия сетчатки, что делает практически невозможным разрезание глазного яблока. Очистите шар от накипи в 5% азотной кислоте в течение 24 ч, а затем в 5% растворе сульфата лития или натрия в течение 24 ч, храните в водопроводной воде 24-48 ч и попробуйте снова разрезать шар. Повторяйте декальцинацию до тех пор, пока глобус не будет разделен на части. Наконец, необходимо провести фотодокументацию каждого глобуса. Это не только по судебно-медицинским причинам, но и полезно, если происходят неожиданные гистологические результаты.
Рисунок 1: Блок-схема для подготовки, ориентации и секционирования неопухолевых глаз с перечислением соответствующих этапов подхода, похожего на контрольный список. Аббревиатура: LED = светодиод. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
Рисунок 2: Ориентация. Роговица хорошо видна спереди. (А) Места вставки четырех прямых мышц выделены наконечниками стрелок. (Б) Зрительный нерв (звездочка) виден сзади. Длинная цилиарная артерия (стрелка) отмечает горизонтальный меридиан. Типично мясистое прикрепление нижней косой мышцы (наконечника стрелы) является примерно временным. Две вихревые жилы выделены тонкими стрелками. (C) Сухожильное прикрепление верхней косой мышцы (наконечника стрелы) находится выше между верхней прямой мышцей и зрительным нервом. Вихревая жила обозначается тонкой стрелкой. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
(А) Измерение горизонтального и вертикального диаметра в мм (пунктирная линия). Измерение диаметра роговицы и, например, диаметра кератопластики. (B) Измерьте передне-задний диаметр в мм (красная линия) и длину зрительного нерва (зеленая линия). Зрительный нерв получает поперечное сечение (пунктирная линия) и отдельно передается для дальнейшей обработки. (В) Регулярное освещение глобуса светодиодной лампой. (D) При трансиллюминации видна тень, вызванная опухолью хориоидеи (стрелка). Аббревиатура: LED = светодиод. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
Рисунок 4: Экстраокулярный инородный материал. (A) Глазка с круговой лентой/серкляжом (стрелка; зрительный нерв отмечен звездочкой). (B) После горизонтального рассечения круговая полоса все еще прикреплена к глобусу (стрелки). (C) Применение множественных внешних инородных материалов для хирургии отслойки сетчатки в анамнезе, состоящей из пластин (звездочка) и нескольких склеральных пряжек (стрелка). (D) Соответствующий раздел «Гематоксилин и эозин» показывает интрасклеральное расположение пряжки (стрелка), а также негативное изображение экстрасклеральной пластины (звездочка). Роговица отмечена в точках C и D тонкой стрелкой, а зрительный нерв — наконечником стрелки в D. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
Рисунок 5: Секционирование. (А) Глобус расположен роговицей вниз (тот же глаз, что и на рисунке 2) и (В) отмечены верхняя (красная) и нижняя (синяя) плоскости сечения. (C) Плоскость сечения идеально проходит через периферическую область роговицы/лимбала. (D) После удаления верхней калотты можно увидеть воронкообразную отслойку сетчатки. Срез находится только близко к периферической роговице (стрелка), но этого также достаточно для анализа. (E) Удаление нижней калотты (обратите внимание на периферическую роговицу на срезе, стрелка) дает предполагаемый зрачково-зрительный нервный участок. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
Рисунок 6: Секции ПО и калотты. (А) секция ПО, (Б) верхняя и (В) низшая калотта. pars plicata цилиарного тела выделена стрелками в точках B и C. Калотты без клинически значимых деталей не нуждаются в дальнейшей обработке и вместо этого архивируются. Сокращение: PO = зрачково-зрительный нерв. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
Рисунок 7: Фетальные и микрофтальмологические глаза. (A) Обычный глаз плода, 21 неделя гестации и диаметр AP 10 мм. (B) При мягком надавливании щипцами открывается длинная задняя цилиарная артерия (стрелки), которая указывает на горизонтальный меридиан. (C) После бисекции можно осмотреть внутриглазные структуры, включая гиалоидную артерию (стрелку). (D) Микрофтальмологический глаз взрослого человека. Роговица выделена стрелкой. (E) Глобусы были разделены пополам; Длинная задняя цилиарная артерия не может быть идентифицирована. Сокращение: AP = переднезадний. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
Рисунок 8: Короночный разрез. Коронарный разрез полезен, если предполагается посмертная визуализация глазного дна. Во время трансиллюминации pars plana цилиарного тела может быть идентифицирована как круглая полосчатая структура. (А) С помощью скальпеля делается круговой разрез в области pars plana (пунктирная линия) и удаляется передний сегмент. (B) Сетчатка и зрительный нерв могут быть задокументированы и визуализированы. (C) Затем отдельно исследуется передний сегмент. (D) Горизонтальный разрез с удаленным передним сегментом. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
Дополнительный рисунок S1: Блок препарирующего микроскопа. Рабочий блок с выброшенным микроскопом офтальмологической хирургии. (A) Светодиодная труба (стрелка) и оборудование, необходимое для резки и резки. Необходимые материалы: (B) линейка, линейка штангенциркуля, щипцы и (C) лезвия микротома/бритвы. Для секционирования взрослых глобусов рекомендуются лезвия микротома (справа); Для глаз плода или других глазных образцов достаточно бритвенных лезвий (слева). (D) Препарирующий микроскоп с подключенной камерой для документирования образца. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.
Обсуждение
Этот протокол направлен на стандартизацию грубого исследования неопухолевых глазных глазных глаз. Грубые рекомендации в литературе сосредоточены в основном на глазах с внутриглазной опухолью24,25. Соответствующие протоколы разделов можно найти на сайте Американской академии офтальмологии26, на различных университетских сайтах, на сайте Колледжа американских патологов, а также в учебниках по офтальмологической патологии 7,10. Существуют также специфические протоколы для исследовательских целей, например, световая листовая флуоресценция для сосудистой сети глаза 27,28,29.
Насколько нам известно, не существует опубликованной директивы по систематическому изъятию энуклеированных неопухолевых глобусов. В частности, наше руководство направлено на улучшение оценки образцов энуклеации, которая отличается от глаз опухоли тем, что основной фокус исследования может быть не предопределен. Кроме того, неопухолевые глаза обычно имеют долгий глазной анамнез, включая хирургическое вмешательство, с разнообразными внутриглазными изменениями, выясняющими патофизиологию глазных заболеваний и заживление ран. Эвисцерация – внутриглазные структуры удаляются, в то время как склера и зрительный нерв остаются у пациента – не позволяет точно определить местоположение глазных находок.
В случаях, когда энуклеация требуется по показаниям, отличным от опухоли, все другие доступные варианты лечения не помогают, и пациенты обычно жалуются на слепой, болезненный глаз из-за вторичной глаукомы (например, после пролиферативной диабетической ретинопатии или окклюзии центральной вены сетчатки), тяжелой травмы глаза, неконтролируемых перфоративных заболеваний роговицы или неудачной операции по отслойке сетчатки (которая стала редкостью из-за усовершенствованных методов хирургии сетчатки). Поскольку офтальмология является узкоспециализированной хирургической дисциплиной, существует множество вариантов сохранения зрения пациента или, по крайней мере, поддержания глаза в безболезненном состоянии, и вышеупомянутые причины энуклеации, к счастью, редки. Поэтому многие пациенты, перенесшие энуклеацию, имеют в анамнезе множественные хирургические вмешательства, такие как кератопластика, снижение давления или хирургия сетчатки. Отслеживание истории болезни пациента, которая не всегда подробно упоминается в форме запроса на патологию, имеет решающее значение для принятия решения о том, как рассекать глаз.
Всестороннее обследование образцов энуклеации улучшает уход за пациентами за счет лучшего понимания тяжелых заболеваний глаз, которые могут привести к этой совершенной хирургической процедуре. Адекватное гроссирование также усиливает корреляцию между мультимодальной визуализацией и гистологическими данными, как описано в Eagle21. Кроме того, общий осмотр глобусов имеет большую образовательную ценность, так как помогает студентам и ординаторам лучше понять сложность и масштабы различных глазных заболеваний и последствия хирургических вмешательств.
Для глаз плода стандартизированное обследование помогает с точной морфологической диагностикой пороков развития глаза. Вместе с другими данными, полученными во время вскрытия плода, это часто позволяет точно классифицировать синдром и, таким образом, улучшить генетическое консультирование родителей в отношении риска рецидива при последующих беременностях.
Правильное позиционирование образца является критически важным этапом в применении этого протокола. Ошибка на этом этапе обследования может поставить под угрозу описание и локализацию полученных результатов, что приведет к неверному отчету. Одним из ограничивающих ключевых факторов этого метода является сохранение земного шара. В образце, оставленном без формалина в течение многих часов, могут наблюдаться признаки аутолиза, что может поставить под угрозу гистопатологическую оценку, включая иммуногистохимическое окрашивание1. Кроме того, архитектурные искажения, которые часто обнаруживаются в фтизиатрических глазах, могут затруднить правильное расположение глобуса и сделать точный и симметричный разрез. Чтобы преодолеть это, ищите ключевые анатомические структуры.
В заключение мы предлагаем систематический протокол для комплексного обследования энуклеированных глаз, направленный на улучшение ухода за пациентами за счет повышения точности диагностики и предоставления образовательных возможностей. Наш подход сосредоточен на правильной идентификации анатомических структур и пространственной ориентации образца, обеспечении правильной оценки и документирования патологических изменений. Стандартизация общего обследования неопухолевых глазных яблок должна быть внедрена в патологоанатомических лабораториях для улучшения описательной и диагностической офтальмологической патологии в клинических и образовательных целях и поддержки будущих исследований клинико-патологических корреляций.
Раскрытие информации
Мартина К. Хервиг-Карл является соавтором книги «Патология глаз плода и новорожденного», Springer 2020; Секретарь Международного общества офтальмологической патологии (ISOP); Член секционного комитета «Офтальмологическая патология» Немецкого офтальмологического общества (DOG); Член «Программного комитета ежегодного собрания» АРВО по секции «Анатомия патологии (АП)». Франк Г. Хольц: Acucela (C,F,R), Alcon (C,F,R), Alexion, Apellis (C,R), Allergan/AbbVie company (F,R), Bayer (C,F,R), Boehringer Ingelheim (C), CenterVue (F), Ellex (R), Genentech/Roche (C,F,R), Geuder (C), Grayburg Vision (C,R), Kanghong (C,F), Heidelberg Engineering (C,F,R), Lin BioScience (C,R), NightStarX (F), Novartis (C,F,R), Optos (F), Oxurion (C,R), Pixium Vision (C,F,R), Stealth Biotherapeutics (C,R), Zeiss (F,R). У других авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявить. [С: консультант; F: финансовая поддержка; R: получатель]
Благодарности
Работа выполнена при поддержке Фонда публикаций открытого доступа Боннского университета.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Штангенциркуль | Маузер | вне рынка | INOX Messchieber 0- 200 мм |
| Препарирующий микроскоп или выброшенный микроскоп для офтальмологической хирургии | Mö ller Wedel | вне рынка | |
| Щипцы | Изобразительная наука | 11203-23 | НЕРЖАВЕЮЩАЯ СТАЛЬ |
| ГистоБонд | Мариенфельд, Германия | DIN ISO 8037-1 | горки с покрытием |
| Светодиодная труба для трансиллюминации в темном помещении | Schott, Майнц | вне рынка | КЛ150 |
| Лезвие для микротома | Перьевые лезвия микротома | Н/Д | Тип A35 |
Ссылки
- Torczynski, E. Preparation of ocular specimens for histopathologic examination. Ophthalmology. 88 (12), 1367-1371 (1981).
- Atreya, A., Ateriya, N., Menezes, R. G. The eye in forensic practice: In the dead. Med Leg J. , (2024).
- Herwig-Carl, M. C., Holz, F. G., Löffler, K. U. Die Geschichte eines Auges – Untersuchung enukleierter Bulbi. Der Ophthalmologe. 117 (12), 1171-1179 (2020).
- Herwig-Carl, M. C., Holz, F., Löffler, K. U. Endophthalmitis aus ophthalmopathologischer Sicht. Klin Monbl Augenheilkd. 239 (7), 867-875 (2022).
- Herwig-Carl, M. C., Loeffler, K. U., Müller, A. M. Bedeutung der Untersuchung fetaler Augen : Ergänzung der Fetobduktion. Pathologe. 38 (4), 231-240 (2017).
- Herwig, M. C., Müller, A. M., Holz, F. G., Loeffler, K. U. Analyse eines ophthalmopathologischen Kollektivs humaner fetaler Augen unter besonderer Berücksichtigung außergewöhnlicher Befunde. Der Ophthalmologe. 107 (11), 1051-1058 (2010).
- Verdijk, R. M., Herwig-Carl, M. C. Fetal and Neonatal Eye Pathology. , Springer International Publishing. Cham. (2020).
- Breazzano, M. P., Unkrich, K. H., Barker-Griffith, A. E. Clinicopathological findings in abusive head trauma: analysis of 110 infant autopsy eyes. Am J Ophthalmol. 158 (6), 1146-1154.e2 (2014).
- Watts, P., et al. Abusive head trauma and the eye in infants and children - clinical guideline update by the royal college of ophthalmologists and the royal college of paediatrics and child health: executive summary. Eye (Lond). 38 (10), 1783-1786 (2024).
- Spencer, W. H. Ophthalmic pathology: An atlas and textbook. , Saunders. Philadelphia, PA. (1985).
- Khoshakhlagh, A. H., Mohammadzadeh, M., Sicard, P., Bamel, U. Human exposure to formaldehyde and health risk assessment: a 46-year systematic literature review. Environ Geochem Health. 46 (6), 206(2024).
- Protano, C., et al. The carcinogenic effects of formaldehyde occupational exposure: A systematic review. Cancers. 14 (1), 165(2021).
- Duong, A., Steinmaus, C., McHale, C. M., Vaughan, C. P., Zhang, L. Reproductive and developmental toxicity of formaldehyde: a systematic review. Mutat Res. 728 (3), 118-138 (2011).
- Ang, J. L., Collis, S., Dhillon, B., Cackett, P. The eye in forensic medicine: A narrative review. Asia Pac J Ophthalmol (Phila). 10 (5), 486-494 (2021).
- Gilliland, M. G. F., et al. Guidelines for postmortem protocol for ocular investigation of sudden unexplained infant death and suspected physical child abuse. Am J Forensic Med Pathol. 28 (4), 323-329 (2007).
- Bhardwaj, G., et al. A systematic review of the diagnostic accuracy of ocular signs in pediatric abusive head trauma. Ophthalmology. 117 (5), 983-992.e17 (2010).
- Herwig, M. C., Müller, A. M., Kuchelmeister, K., Loeffler, K. U. Pre- and intraretinal haemorrhages in a 22-week-old fetus of a mother suffering from HELLP syndrome and factor V Leiden mutation with deep vein thrombosis. Acta. 95 (1), e83-e84 (2017).
- Thau, A., et al. Retinal hemorrhage and bleeding disorders in children: A review. Child abuse Negl. 112, 104901(2021).
- Mattheij, M., et al. Retinal haemorrhages in a university hospital: not always abusive head injury. Acta Neurol Belg. 117 (2), 515-522 (2017).
- Maguire, S. A., et al. Retinal haemorrhages and related findings in abusive and non-abusive head trauma: a systematic review. Eye (London). 27 (1), 28-36 (2013).
- Eagle, R. C. Optical coherence tomography: Clinicopathologic correlations - The 2016 Gordon K. Klintworth lecture. Ocul Oncol Pathol. 4 (4), 203-212 (2018).
- Stockinger, P., et al. Vergleichende In-vivo-/Ex-vivo-Bildgebung des hinteren Augenabschnitts - Version. Der Ophthalmologe. 118 (Suppl 2), 153-159 (2021).
- Agarwal, M., et al. Sympathetic ophthalmia - An Overview. Ocul Immunol Inflamm. 31 (4), 793-809 (2023).
- Albert, D., Syed, N. Protocol for the examination of specimens from patients with uveal melanoma: a basis for checklists. Arch Pathol Lab Med. 125 (9), 1177-1182 (2001).
- Albert, D., Syed, N. Protocol for the examination of specimens from patients with retinoblastoma: a basis for checklists. Arch Pathol Lab Med. 125 (9), 1183-1188 (2001).
- American Academy of Ophthalmology (AAO). , https://www.aao.org/education/image/gross-dissection-of-globe (2025).
- Lu, W., et al. Corrigendum to 'Recent progress in optical clearing of eye tissues' Exp. Eye Res (Nov; 2021) 212 108796. Exp Eye Res. 214, 108896(2022).
- Lu, W., et al. Recent progress in optical clearing of eye tissues. Exp Eye Res. 212, 108796(2021).
- Darche, M., et al. Three-dimensional characterization of developing and adult ocular vasculature in mice using in toto clearing. Commun Biol. 5 (1), 1135(2022).
Перепечатки и разрешения
