Методическая статья

Нейропротекторные эффекты интраназально вводимого аналога октадеканевропапептида на мышиной модели МФТП-индуцированной болезни Паркинсона

DOI:

10.3791/68122

⸱

29 августа 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Faculty of Sciences of Tunis, LR18ES03, Laboratory of Neurophysiology Cellular Physiopathology and Biomolecule Valorization, University Tunis El Manar, 2Inserm U1239 NorDiC, Laboratory of Neuroendocrine, Endocrine and Germinal Differentiation and Communication, PRIMACEN, Univ Rouen Normandie, 3Confocal Microscopy Unit, Faculty of Medicine of Tunis, University Tunis El Manar

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Интраназальное введение позволяет напрямую доставлять биологически активные молекулы в мозг, обеспечивая неинвазивную альтернативу внутримозговому методу. Это исследование демонстрирует, что интраназальное введение cyclo(1-8)OP, аналога ODN, оказывает сильное нейропротекторное действие против индуцированного MPTP окислительного повреждения и апоптоза в стриатуме у мышей с моделью болезни Паркинсона, подчеркивая терапевтический потенциал.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Болезнь Паркинсона (БП) является нейродегенеративным заболеванием, для которого существующие методы лечения в основном являются паллиативными и не имеют лечебной эффективности. Октадеканевропапептид (ODN) — это пептид, продуцируемый исключительно астроцитами, который защищает нейроны от окислительного повреждения клеток и апоптоза в моделях БП in vitro и in vivo . Тем не менее, ОДН не может проникать через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) и требует внутримозговой инъекции для достижения мозга, что представляет собой значительную проблему для терапевтического применения. В этом исследовании изучается нейропротекторная эффективность цикло(1-8)OP, аналога ODN, доставляемого интраназальным (IN) путем обхода ГЭБ в in vivo модели БП. Для экспериментов использовались самцы мышей C57BL/6J, которые были разделены на четыре группы: фиктивные, MPTP- (20 мг/кг массы тела, внутрибрюшинные), цикло(1-8)OP- (10 нг/10 μл, IN) и MPTP + цикло(1-8)OP животные, обработанные IN. На 0-й день (D0) животным вводили три внутрибрюшинных инъекции 100 мкл раствора МФТП с интервалом в 2 ч (мыши, обработанные МФТП и МФТП цикло(1-8)ОФ) или физиологического раствора (мыши, обработанные фиктивным и цикло(1-8)ОФ). Через час после заключительной инъекции вводили 10 мкл инстилляции цикло(1-8)OP (мыши, обработанные цикло(1-8)OP- и MPTP + цикло(1-8)OP) или раствор IN физиологического раствора (мыши, обработанные симуляцией и MPTP). На D7 был проведен тест цилиндра для оценки моторной функции. Впоследствии животных приносили в жертву, а стриатум удаляли и анализировали с помощью ОТ-кПЦР для оценки экспрессии гена каспазы-3. Образцы тканей также использовались для измерения активности антиоксидантных ферментов, активных форм кислорода (АФК), малонового диальдегида (МДА) и содержания карбонилированных белков. Однократная доза IN 10 нг цикло(1-8)OP, введенная через 1 ч после окончательной дозы МФТП, предотвратила нейротоксичность стриатума через 7 дней после лечения. Цикло(1-8)OP-опосредованная нейропротекция ассоциировалась с сильным ингибированием экспрессии каспазы-3, индуцированной MPTP в стриатуме. Кроме того, цикло(1-8)OP восстанавливал активность антиоксидантных ферментов, препятствуя накоплению АФК, продуктов перекисного окисления липидов и карбонилирования белков в стриатуме.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Болезнь Паркинсона (БП) — это нейродегенеративное заболевание, характеризующееся прогрессирующей потерей дофаминергических нейронов в черной субстанции, которая иннервирует стриатум. Эта потеря приводит к значительным неврологическим симптомам, включая серьезные двигательные дефициты, такие как ригидность мышц, акинезия и брадикинезия1. Распространенность нейродегенеративных заболеваний, таких как БП, продолжает расти, в первую очередь из-за старения населения, что представляет собойсерьезную проблему для общественного здравоохранения. Современные методы лечения БП преимущественно опираются на дофаминергические аналоги и внутримозговую высокочастотную стимуляцию 3,4. Тем не менее, эти методы лечения не обладают нейропротекторным эффектом и не могут остановить прогрессирование заболевания, что подчеркивает настоятельную необходимость инновационных стратегий для предотвращения потери нейронов, содействия регенерации и смягчения прогрессирования заболевания5.

Октадеканевропапептид (ODN) — пептид, полученный в результате протеолитического процессинга предшественника диазепам-связывающего ингибитора (DBI)6, состоящего из 86 аминокислот, экспрессируемого в основном астроглиальными клетками в центральной нервной системе млекопитающих. Эволюционное сохранение первичной структуры ОДН предполагает ее значительную биологическую роль. Было показано, что ОДН регулирует ключевые функции, такие как прием пищи, сон, агрессия и тревожное поведение. Помимо его регулирующей роли, обширные исследования продемонстрировали нейропротекторные свойства ODN при различных неврологических расстройствах, связанных с дегенерацией нейронов. Например, ODN защищает дофаминергические нейроны в модели PD8 и уменьшает размер инфаркта, улучшая функциональное восстановление после инсульта у грызунов9. Одной из ключевых особенностей ОДН является его способность противодействовать многим вредным процессам, активируемым при повреждении мозга, благодаря его антиапоптотической, противовоспалительной, антиоксидантной и иммуномодулирующейактивности. Кроме того, ОДН может действовать и после острой фазы инсульта, способствуя нейрогенезу и нейрональнойпластичности. Для потенциального клинического применения пептидов или их аналогов в качестве терапевтических агентов выбор оптимального пути введения имеет решающее значение для предотвращения быстрой деградации в кровотоке и минимизации эффекта первого прохождения. Среди различных стратегий доставки интраназальное (ИН) введение стало многообещающей неинвазивной альтернативой, позволяющей напрямую доставлять определенные биологически активные молекулы в мозг в обход гематоэнцефалического барьера (ГЭБ)13,14,15. Этот путь устраняет необходимость в инвазивных стереотаксических инъекциях и улучшает биораспределение мозга по сравнению с периферическими органами. Например, полипептид, активирующий аденилатциклазу гипофиза (PACAP), продемонстрировал большую эффективность в поглощении мозгом и нейропротекции при введении ИН по сравнению с внутривенным введением, значительно уменьшая объем инфаркта и улучшая функциональное восстановление в моделях инсульта9.

Несмотря на то, что введение ИН является минимально инвазивным и эффективным методом доставки терапевтических агентов непосредственно в мозг в обход ГЭБ, его эффективность по-прежнему зависит от нескольких практических параметров, включая дозу и общий объем введения. У грызунов рекомендуемый объем обычно колеблется от 10 до 25 мкл на ноздрю, чтобы избежать аспирации или переполнения в желудочно-кишечный тракт16,17. На эффективность захвата из носа также влияют размер животного, площадь поверхности носовой полости, мукоцилиарный клиренс и свойства соединения, такие как липофильность и молекулярная масса18,19. Эти ограничения должны быть учтены при разработке протокола, чтобы обеспечить воспроизводимость и трансляционную релевантность в доклинических моделях.

Исследование in vivo показало, что внутримозговое (ICV) введение низких доз ODN оказывает значительное нейропротекторное действие, в частности, предотвращая дегенерацию дофаминергических нейронов у мышей, получавших MPTP8. Настоящее исследование направлено на оценку целесообразности и эффективности введения ИН аналога ODN, цикло(1-8)OP, в качестве неинвазивной альтернативы инъекции ICV для доставки нейропротекторного пептидного аналога в мозг, в частности, чтобы определить, может ли этот путь предотвратить потерю дофаминергических нейронов и улучшить двигательные исходы у мышей, получавших MPTP, что является хорошо зарекомендовавшей себя моделью БП.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты проводились в соответствии с рекомендациями Американской ветеринарной медицинской ассоциации и были одобрены Комитетом по медицинской этике Института Пастера (номер одобрения: FST/LNFP/Pro 160220). Десятинедельные самцы мышей C57BL/6J были получены из Института Пастера в Тунисе. Мышей содержали по три в клетке в помещении с контролируемой температурой (21 °C ± 1 °C) с 12-часовым циклом свет/темнота и обеспечивали свободный доступ к пище и воде в течение 1 недели акклиматизации. Подробная информация об используемых реагентах и оборудовании приведена в Таблице материалов.

1. Процедура лечения

  1. Разделите животных на четыре группы: фиктивные (n = 9), MPTP- (n = 9), цикло(1-8)OP- (n = 9) и MPTP + цикло(1-8)OP-обработанные (n = 9).
  2. Введение трех внутрибрюшинных (IP) инъекций MPTP (20 мг/кг массы тела) в 100 мкл 0,9% NaCl с интервалом в 2 часа в первый день лечения (D0). Через 1 ч после заключительной инъекции МФТП введите 10 мкл интраназально (ИН) цикло(1-8)OP (10 нг) или физиологического раствора.
  3. Вводите контрольным животным физиологический раствор вместо МФТП, с цикло(1-8)OP или без него (Рисунок 1).
  4. На седьмой день (D7) подвергните мышей тесту с цилиндром. Затем глубоко обезболите мышей с помощью инъекции пентобарбитала и пожертвуйте их (в соответствии с утвержденными в учреждении протоколами) для сбора мозга для ПЦР в реальном времени и биохимического анализа20 (рис. 2).

2. Процедура инъекции

  1. Внутрибрюшинная инъекция
    1. Осторожно расположите мышь и обездвижьте ее голову во время процедуры.
    2. Наклоните мышь головой вниз, чтобы органы могли естественно смещаться под действием силы тяжести, сводя к минимуму любой контакт с иглой.
    3. Введите иглу под углом 45 градусов в нижнюю часть живота.
    4. Введите три инъекции по 100 мкл с одной и той же стороны, с интервалом в 2 часа между каждой инъекцией, все в один и тот же день.
    5. Введите 0,9% физиологический раствор для фиктивных и цикло(1-8)групп или раствор МФТП (20 мг/кг м.т.) для групп МПТП и МФТП + цикло(1-8)ФП.
  2. Интраназальное введение
    Примечание: Выбранная доза (10 нг) была основана на предыдущем исследовании, демонстрирующем нейропротективную эффективность введения ОДН8 с помощью ВКС. Общий объем 10 мкл и размер капель (5 мкл на ноздрю) подбирали в соответствии с установленными протоколами введения ИН18,21. Этот объем значительно ниже среднего объема носовой полости мыши (0,032см3), что сводит к минимуму риск обструкции ноздрей или удушья и обеспечивает безопасное и эффективное всасывание через нос22.
    1. Крепко держите мышь за загривок на шее, следя за тем, чтобы ее носик был направлен вверх, чтобы обеспечить точное дозирование и свести к минимуму движение головы.
    2. Переверните животное так, чтобы его брюшная сторона была обращена к потолку, а шея была параллельна полу. Убедитесь, что голова мыши остается надежно обездвиженной, предотвращая вертикальное или горизонтальное перемещение.
    3. Совместите кончик пипетки с ноздрей мыши и медленно нажмите на поршень, чтобы образовалась небольшая капля.
    4. Поместите каплю объемом 5 мкл (половину объема) возле каждой ноздри мыши.
    5. Дайте мыши естественным образом вдохнуть раствор.
    6. Повторите эти шаги, чтобы обеспечить равномерное дозирование, вводя 10 мкл цикло(1-8)OP (10 нг) для групп MPTP + cyclo(1-8)OP и cyclo(1-8)OP.
    7. Внимательно наблюдайте за ртом мыши на протяжении всей процедуры. Наличие жидкости во рту может свидетельствовать о неполном всасывании через нос. Это может быть результатом неправильного размера капель, быстрого введения или недостаточного вдыхания, что позволяет раствору накапливаться в носоглотке и впоследствии выходить через рот.
    8. Сведите к минимуму этот риск, уменьшив размер капель при необходимости и обеспечив достаточное время для ингаляции перед введением дополнительных объемов.
    9. Избегайте немедленного введения дополнительной дозы, чтобы предотвратить чрезмерное количество.
    10. Задокументируйте любые неправильно размещенные дозы и тщательно запишите любую выброшенную жидкость.
    11. Убедитесь, что каждая мышь полностью вдыхает обе капли (по одной на ноздрю), прежде чем продолжить дальнейшее введение.
    12. Подтвердите точное нацеливание на обонятельную луковицу, выполнив инъекцию раствора метиленового синего.
    13. Оцените точность, визуально осмотрев нанесение и распространение синей окраски.

3. Испытание цилиндра

  1. Используйте прозрачный цилиндр высотой 20 см и диаметром 15 см, расположенный в центре стола.
  2. Расположите три черные картонные панели вокруг цилиндра (на расстоянии 4-8 см), чтобы свести к минимуму окружающие световые эффекты. Оставьте одну сторону цилиндра открытой для видеозаписи.
  3. Установите камеру на расстоянии 40-60 см от цилиндра, чтобы захватить ее полный обзор.
  4. Поместите мышь в цилиндр и немедленно начните запись в течение 5 минут.
  5. После того, как каждая мышь завершит тест, очистите цилиндр водой, распылите 70% этанол для удаления запахов и вытрите его насухо перед тестированием следующей мыши.
  6. Воспроизводите запись с половинной скоростью, чтобы обеспечить детальное наблюдение.
  7. Подсчитайте каждый раз, когда мышь прижимает лапы к стенке цилиндра, чтобы оценить исследовательское поведение23.

4. Приготовление экстрактов тканей головного мозга для биохимических экспериментов

  1. Обезболивают животных пентобарбиталом (40 мг/кг, ВП), а затем обезглавливают (в соответствии с утвержденными в учреждении протоколами).
  2. Рассеките стриатум и гомогенизируйте в 2 мл TBS на грамм ткани с использованием буфера для лизиса (1% Triton X-100, 50 мМ Tris-HCl, 10 mM EDTA).
  3. Центрифуга гомогенирует при 14 000 × г в течение 15 мин при 4 °C.
  4. Измерьте концентрацию белка с помощью набора для колориметрического определения Biuret и сохраните аликвоты при температуре −20 °C для последующего анализа.

5. Измерение внутриклеточного образования АФК

  1. Инкубировать экстракт ткани мозга с 10 мкМ DCFH2-DA при 37 °C в течение 30 минут в темноте.
  2. Удалите надосадочную жидкость и дважды промойте PBS (0,1 М, pH 7,4, 37 °C).
  3. Измерьте флуоресценцию с помощью микропланшетного ридера на длине волны возбуждения 485 нм и длине волны излучения 538 нм.

6. Измерение маркеров окислительного стресса

  1. Малоновый диальдегид
    1. Смешайте 20 мкл образца (~50 мкг белка) со 125 мкл 20% ТСА и 50 мкл 0,67% ТБК.
    2. Инкубировать при температуре 95 °C в течение 30 минут, затем быстро охладить до 4 °C.
    3. Добавьте 800 мкл бутанола, вортекса и центрифугу в дозе 3000 × г в течение 10 мин при 4 °C.
    4. Измерьте поглощение на длине волны 532 нм и рассчитайте уровни MDA с использованием коэффициента экстинкции (1,65 ×10 5 М-1 см-1).
  2. Измерение карбонильного белка
    1. Смешайте 200 мкл DNPH с 50 мкл образца белка и инкубируйте в течение 1 ч.
    2. Добавьте 250 мкл 20% ТСА и охладите в течение 10 минут на льду.
    3. Центрифугируйте при 3000 × г в течение 10 минут при 4 °C и промойте гранулу 10% TCA, затем этанолом:этилацетатом (v/v).
    4. Ресуспендируйте гранулу в 250 мкл 6 М гуанидина гидрохлорида и измерьте абсорбцию при 370 нм.
    5. Рассчитайте уровни PCO, используя коэффициент экстинкции (22 000 М-1 см-1)24.

7. Измерение активности антиоксидантных ферментов

  1. Анализ супероксиддисмутазы
    1. Инкубируйте образец (~50 мкг) с бычьей каталазой (0,4 ед/л), dl-эпинефрином (5 мг/мл) и буфером Na2CO3/NaHCO3 (62,5 мМ, pH 10,2).
    2. Измерить окисление адреналина при длине волны 480 нм с с помощью спектрофотометра в течение 300 с с интервалом60 с 25.
  2. Каталазный анализ
    1. Смешайте образец с 90 мМ H2O2 в PBS.
    2. Отслеживайте снижение поглощенияH2,O2 при длине волны 240 нм в течение 3 мин с интервалом 30 с.
    3. Рассчитайте активность CAT, используя коэффициент угасания (40 М-1 см-1).

8. Анализ ПЦР в реальном времени

  1. Извлечь общую РНК из стриатума мыши методом кислотного гуанидиния тиоцианат-фенол-хлороформ.
  2. Обрабатывайте РНК ДНКазой I, чтобы удалить геномную ДНК и измерить концентрацию РНК при 260 нм.
  3. Проведите количественную ОТ-ПЦР с использованием 1 г общей РНК с помощью одноэтапного набора для Q-RT ПЦР.
  4. Амплифицируйте кДНК с помощью SYBR Green PCR Master Mix и праймеров (Таблица 1).
  5. Рассчитайте относительные уровни кДНК с помощью метода 2−ΔΔCt с GAPDH в качестве внутреннего контроля26.

9. Статистический анализ

  1. Выполняйте статистический анализ с помощью программного обеспечения GraphPad.
  2. Используйте t-критерий Стьюдента для одиночных сравнений. Для множественных сравнений используйте однофакторный или двусторонний ANOVA с последующим апостериорным тестом Бонферрони, в зависимости от обстоятельств. Во всех случаях рассматривайте P-значение 0,05 или менее как статистически значимое.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

После введения MPTP у мышей проявились характерные симптомы болезни Паркинсона, включая приподнятый и ригидный хвост Штрауба, пилоэрекцию, неподвижность и постуральные аномалии, такие как искривление позвоночника, что подтверждает успешное создание модели MPTP (Рисунок 3). Проверка доставки IN с использованием метиленового синего на мышах, умерщвленных через 10 минут после инъекции, показала эффективное распределение красителя в целевой обонятельной луковице и областях мозга...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Предыдущие исследования показали, что введение ОДН в ICV противодействует индуцированной MPTP дегенерации нигростриарных дофаминергических нейронов, окислительному повреждению и нейровоспалению8. В текущем исследовании оценивалась эффективность доставки IN аналога ODN, цикло(1-8)OP, для профилактики вызванных MPTP двигательных нарушений, окислительного повреждения и нейротоксичности в модели БП in vivo с использованием мышей C57BL/6J.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что у них нет известных конкурирующих финансовых интересов или личных отношений, которые могли бы повлиять на работу, описанную в этой статье.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана Лабораторией нейрофизиологии, клеточной физиопатологии и валоризации биомолекул, LR18ES03, NorDiC Inserm U1239, Франко-тунисской программой обмена CMCU-Campus France/PHC Utique 24G0807/50283RD (между Ольфой Масмуди-Куки и Жеромом Лепренсом), Программой Horizon-Marie Skłodowska-Curie Actions (MSCA) PsyCoMed Grant Agreement ID: 101086247 и программой исследований и инноваций Европейского Союза Horizon 2020 в рамках грантового соглашения Марии Склодовской-Кюри No 101034329.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
2', 7'-дихлорфлуоресценцин DCFH2-DAСигма Олдрич064М4008В
Спектрофотометр Bio-Rad Bio-Rad Laboratories, Филадельфия, Пенсильвания, США
Бутанол
Фотоаппарат
Каталаза из бычьей печениSIGMA для медико-биологических наукSLBZ7596
цикло(1-8)ОПINSERM U1239 NorDiC, Руан
Испытание цилиндра (стакан с градуированным покрытием)
DNPH 
ЭДТА плюсТермо Наука 11836714
Этанол 70%
Раствор этанола и этилацетата
Программное обеспечение GraphPad Ла-Хойя, Калифорния, США
Гидрохлорид гуанидинаГенОН5CCAE310
H2O2 ФармагрибAEQ10101-D
Инсулиновый шприц 2мл
L-эпинефрин MP Biomedicals151065
Метиленовый синий Термонаучные химикаты10455081
Микропипетка 
Считыватель микропланшетов Synergy LX-AgilentSynergy LX-Agilent
МПППМедХимЭкспрессHY-15608
МППП
Na2CO3/NaHCO3 buffer 
NaCl 0,9
одноступенчатый набор для ПЦР Q-RT Биолаборатории Новой Англии
Пентобарбитал Сигма Олдрич
Спектрофотометр Synergy LX Nanodrop 2000 Биотек Agilent
Тиобарбитуровая кислота (TBA, 0,67%) LOBA CHEMIE PVT. ООО626500025
Советы
Трихлоруксусная кислота (ТСА, 20%)Sisco Research laboratories SRL6740608
Три-Реагент Сигма ОлдричMFCD00213058
Трис-HClТермо Наука Дж22638. К2
Тритон Х-100Термо Наука A16046.AE

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mat Taib, C. N., Mustapha, M. M. MPTP-induced mouse model of Parkinson's disease: A promising direction of therapeutic strategies. Bosn J Basic Med Sci. 21 (4), 422-433 (2021).
  2. Dionísio, P. A., Amaral, J. D., Rodrigues, C. M. P. Oxidative stress and regulated cell death in Parkinson's disease. Ageing Res Rev. 67, 101263(2021).
  3. Charvin, D., Medori, R., Hauser, R. A., Rascol, O. Therapeutic strategies for Parkinson disease: Beyond dopaminergic drugs. Nat Rev Drug Discov. 17 (11), 804-822 (2018).
  4. Stoker, T. B., Barker, R. A. Recent developments in the treatment of Parkinson's disease. F1000Res. 9, (2020).
  5. Airavaara, M., Voutilainen, M. H., Wang, Y., Hoffer, B. J. Neurorestoration. Parkinsonism Relat Disord. 18 Suppl 1 (01), S143-S146 (2012).
  6. Guidotti, A., et al. Isolation, characterization, and purification to homogeneity of an endogenous polypeptide with agonistic action on benzodiazepine receptors. Proc Natl Acad Sci U S A. 80 (11), 3531-3535 (1983).
  7. Tonon, M. C., et al. Endozepines and their receptors: Structure, functions and pathophysiological significance. Pharmacol Ther. 208, 107386(2020).
  8. Bahdoudi, S., et al. Neuroprotective effects of the gliopeptide ODN in an in vivo model of Parkinson's disease. Cell Mol Life Sci. 75 (11), 2075-2091 (2018).
  9. Cherait, A., Maucotel, J., Lefranc, B., Leprince, J., Vaudry, D. Intranasal administration of PACAP is an efficient delivery route to reduce infarct volume and promote functional recovery after transient and permanent middle cerebral artery occlusion. Front Endocrinol. 11, 585082(2021).
  10. Bourzam, A., et al. promotes cell survival against 6-OHDA-induced oxidative stress and apoptosis by modulating the expression of miR-34b, miR-29a, and miR-21 in cultured astrocytes. Cells. 13 (14), 1188(2024).
  11. Namsi, A., et al. Octadecaneuropeptide (ODN) induces N2a cells differentiation through a PKA/PLC/PKC/MEK/ERK-dependent pathway: Incidence on peroxisome, mitochondria, and lipid profiles. Molecules. 24 (18), 3310(2019).
  12. Masmoudi-Kouki, O., et al. Cytoprotective and neurotrophic effects of octadecaneuropeptide (ODN) in in vitro and in vivo models of neurodegenerative diseases. Front Endocrinol. 11, 566026(2020).
  13. Scafidi, J., et al. Intranasal epidermal growth factor treatment rescues neonatal brain injury. Nature. 506 (7487), 230-234 (2014).
  14. Lopes, C., et al. IGF-1 intranasal administration rescues Huntington's disease phenotypes in YAC128 mice. Mol Neurobiol. 49 (3), 1126-1142 (2014).
  15. Nonaka, N., et al. Intranasal administration of PACAP: Uptake by brain and brain region targeting with cyclodextrins. Peptides. 36 (2), 168-175 (2012).
  16. Illum, L. Transport of drugs from the nasal cavity to the central nervous system. Eur J Pharm Sci. 11 (1), 1-18 (2000).
  17. Hanson, L. R., Frey, W. H. Intranasal delivery bypasses the blood-brain barrier to target therapeutic agents to the central nervous system and treat neurodegenerative disease. BMC Neurosci. 9 Suppl 3, S5(2008).
  18. Dhuria, S. V., Hanson, L. R., Frey, W. H. Intranasal delivery to the central nervous system: Mechanisms and experimental considerations. J Pharm Sci. 99 (4), 1654-1673 (2010).
  19. Lochhead, J. J., Thorne, R. G. Intranasal delivery of biologics to the central nervous system. Adv Drug Deliv Rev. 64 (7), 614-628 (2012).
  20. Spijker, S., Faliagkas, L., Rao-Ruiz, P. Dissection of rodent brain regions: Guided free-hand slicing and dissection of frozen tissue. Neuroproteomics. 146, 7-19 (2019).
  21. Eyme, K. M., Carvalho, L., Badr, C. E. Intranasal delivery of experimental compounds in orthotopic brain tumor mouse models. STAR Protoc. 2 (1), 100290(2021).
  22. Khan, A. R., Liu, M., Khan, M. W., Zhai, G. Progress in brain targeting drug delivery system by nasal route. J Controlled Release. 268, 364-389 (2017).
  23. Jiang, P. E., et al. Behavioral assessments of spontaneous locomotion in a murine MPTP-induced Parkinson's disease model. J Vis Exp. (143), e58653(2019).
  24. Colombo, G., et al. A step-by-step protocol for assaying protein carbonylation in biological samples. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 1019, 178-190 (2016).
  25. Misra, H. P., Fridovich, I. The role of superoxide anion in the autoxidation of epinephrine and a simple assay for superoxide dismutase. J Biol Chem. 247 (10), 3170-3175 (1972).
  26. Schmittgen, T. D., Livak, K. J. Analyzing real-time PCR data by the comparative CT method. Nat Protoc. 3 (6), 1101-1108 (2008).
  27. Jackson-Lewis, V., Przedborski, S. Protocol for the MPTP mouse model of Parkinson's disease. Nat Protoc. 2 (1), 141-151 (2007).
  28. Dufes, C., Olivier, J. C., Gaillard, F., Gaillard, A., Couet, W., Muller, J. M. Brain delivery of vasoactive intestinal peptide (VIP) following nasal administration to rats. Int J Pharm. 255 (1-2), 87-97 (2003).
  29. Silva, S., et al. Encapsulated escitalopram and paroxetine intranasal co-administration: In vitro/in vivo evaluation. Front Pharmacol. 12, 751321(2021).
  30. Selvaraj, K., Gowthamarajan, K., Karri, V. V. S. R. Nose to brain transport pathways an overview: Potential of nanostructured lipid carriers in nose to brain targeting. Artif Cells Nanomedicine Biotechnol. 46 (8), 2088-2095 (2017).
  31. Jeong, S. H., Jang, J. H., Lee, Y. B. Drug delivery to the brain via the nasal route of administration: Exploration of key targets and major consideration factors. J Pharm Investig. 53 (1), 119-152 (2023).
  32. Cherait, A., Banks, W. A., Vaudry, D. The potential of the nose-to-brain delivery of PACAP for the treatment of neuronal disease. Pharmaceutics. 15 (8), 2032(2023).
  33. Crowe, T. P., Hsu, W. H. Evaluation of recent intranasal drug delivery systems to the central nervous system. Pharmaceutics. 14 (3), 629(2022).
  34. Hanson, L. R., Frey, W. H. Intranasal delivery bypasses the blood-brain barrier to target therapeutic agents to the central nervous system and treat neurodegenerative disease. BMC Neurosci. 9 Suppl 3, S5(2008).
  35. Meredith, G. E., Rademacher, D. J. MPTP mouse models of Parkinson's disease: An update. J Park Dis. 1 (1), 19-33 (2011).
  36. Sarrafchi, A., Bahmani, M., Shirzad, H., Rafieian-Kopaei, M. Oxidative stress and Parkinson's disease: New hopes in treatment with herbal antioxidants. Curr Pharm Des. 22 (2), 238-246 (2016).
  37. Hirsch, E. C., Hunot, S. Neuroinflammation in Parkinson's disease: A target for neuroprotection. Lancet Neurol. 8 (4), 382-397 (2009).
  38. Baillet, A., et al. The role of oxidative stress in amyotrophic lateral sclerosis and Parkinson's disease. Neurochem Res. 35 (10), 1530-1537 (2010).
  39. Mythri, R. B., et al. Evaluation of markers of oxidative stress, antioxidant function and astrocytic proliferation in the striatum and frontal cortex of Parkinson's disease brains. Neurochem Res. 36 (8), 1452-1463 (2011).
  40. Venkateshappa, C., et al. Increased oxidative damage and decreased antioxidant function in aging human substantia nigra compared to striatum: Implications for Parkinson's disease. Neurochem Res. 37 (2), 358-369 (2012).
  41. Ghouili, I., et al. Endogenous expression of ODN-related peptides in astrocytes contributes to cell protection against oxidative stress: Astrocyte-neuron crosstalk relevance for neuronal survival. Mol Neurobiol. 55 (6), 4596-4611 (2018).
  42. Kaddour, H., et al. Antioxidant and anti-apoptotic activity of octadecaneuropeptide against 6-OHDA toxicity in cultured rat astrocytes. J Mol Neurosci MN. 69 (1), 1-16 (2019).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

MPTP3
Видео скоро будет доступно

Похожие статьи