Методическая статья

Выделение и проточная цитометрическая оценка нейроиммунных взаимодействий на мышиной модели с мини-инсультом

DOI:

10.3791/68308

⸱

20 июня 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Experimental and Translational Research Center, Beijing Friendship Hospital, Capital Medical University, 2Department of Neurology, Beijing Friendship Hospital, Capital Medical University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В данной статье мы представляем протокол оценки функции иммунных клеток после ишемического инсульта с использованием проточного цитометрического анализа в модели мини-инсульта. Этот метод позволяет детально изучить нейроиммунные взаимодействия и может быть адаптирован для изучения других нейродегенеративных заболеваний, улучшая наше понимание иммунных реакций при патологии инсульта.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Инсульт является одной из основных причин смерти и длительной инвалидности во всем мире, причем в большинстве случаев приходится на ишемический инсульт. После ишемического инсульта резидентные и инфильтрирующие иммунные клетки активируются, что способствует дальнейшему повреждению нейронов. Тем не менее, роль иммунной системы в патологии ишемического инсульта до конца не изучена, во многом из-за сложной и динамической регуляции иммунных реакций в ответ на изменения микроокружения во время нейровоспаления. Поэтому важно контролировать и анализировать активацию резидентных и инфильтрирующих иммунных клеток с течением времени после ишемического инсульта. В данном исследовании мы представляем протокол оценки функции этих иммунных клеток после ишемического инсульта с использованием проточного цитометрического анализа в модели мини-инсульта. Мы препарируем инфарктированную ткань мозга в определенные моменты времени, а затем диссоциируем ее на одноклеточную суспензию с помощью как механических, так и ферментативных методов. Клетки пропускают через клеточный фильтр размером 70 мкм и мечают коктейлями антител с флуоресцентными метками, а затем количественно оценивают с помощью проточного цитометрического анализа. Хотя этот анализ был специально разработан для изучения нейроиммунных взаимодействий после ишемического инсульта, он также может быть легко адаптирован для изучения нейроиммунных механизмов при других нейродегенеративных заболеваниях, таких как рассеянный склероз, болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Инсульт является преобладающей причиной смертности и долгосрочной инвалидности во всем мире, при этом подавляющее большинство случаев приходится на ишемический инсульт 1,2,3. Общая цель этого метода состоит в том, чтобы улучшить наше понимание нейроиммунных взаимодействий, которые происходят после ишемического инсульта, путем предоставления усовершенствованного подхода к оценке активации как резидентных, так и инфильтрирующих иммунных клеток в модели мини-инсульта у мышей 4,5. Сложное....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты на животных были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) Пекинской больницы дружбы Столичного медицинского университета. Мы рекомендуем подвергать все растворы стерильной фильтрации и стерильно использовать все пробирки.

1. Подготовка реагентов и буфера

  1. Смесь ферментов для пищеварения: растворить коллагеназу IV до получения концентрации 0,25% и разбавить ДНКазу I до конечной концентрации 2 ЕД/мл.
  2. Буфер для сортировки магнитно-активированных клеток (MACS): растворите бычий сывороточный альбумин (BSA) и этиле....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом исследовании мы представляем усовершенствованный протокол оценки функциональности иммунных клеток после ишемического инсульта с использованием проточного цитометрического анализа в рамках модели мини-инсульта. Мини-инсульт был вызван постоянным лигированием дистальной ветви правой средней мозговой артерии (МКА), за которым последовала 7-минутная окклюзия двусторонних общих сонных артерий (ОЦА). Эта методология приводит к легкому инсульту, характеризующемуся небольшими, постоянными объемами поражения и удивительно .......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом исследовании мы представляем подробный протокол оценки функции иммунных клеток после ишемического инсульта с использованием проточного цитометрического анализа в модели мини-инсульта. Важнейшие этапы этого протокола включают установление фокального ишемического инсульта путем постоянного лигирования дистальной ветви правой средней мозговой артерии (МКА) наряду с семиминутной окклюзией двусторонних общих сонных артерий (ОСА). Этот хирургический подход приводит к легкому инсульту, к.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Работа выполнена при поддержке Национального фонда естественных наук Китая (No 82201622) и Фонда естественных наук Внутренней Монголии (No 2020MS03017).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Микроцентрифужная пробирка 1,5 млНЕСТ 615601Лабораторные материалы
1&раз; ПБСКорнинг21-040-СМРеагент
96-луночный микропланшет с прозрачным круглым дном и обработанным TCКорнинг3799Лабораторные материалы
Антимышь APC CD19Биолегенда152410Антитело
APC/Cyanine7 антимышь CD45Биолегенда103116Антитело
Авертин (1.25%)Нанкин Айбэй Биотехнология М2920Реагент
BD FACSAria IIБД642510Оборудование
Антимышь Brilliant Violet 421 CD4Биолегенда100437Антитело
Brilliant Violet 605 антимышиный/человеческий CD11bБиолегенда101237Антитело
БСАСигма-ОлдричА1933-1ГХимический
Коллагеназа IVСигма-ОлдричС4-28-100МГФермент
ДНКаза IБиолаборатории Новой АнглииМ0303ЛФермент
ЭДТАСигма-ОлдричЭДС-100ГХимический
Falcon 5 мл Пробирки из полистирола с круглым дномКорнинг352052Лабораторные материалы
Фалькон  Конические центрифужные пробирки 15 млКорнинг352095Лабораторные материалы
ФлоуДжо V10БДПрограммное обеспечение
Антитела к GLAST (ACSA-1), ПЭМилтеньи Биотек130-118-344Антитело
ИзофлуранRWD Медико-биологические наукиР510-22-10Реагент
PE/Cyanine7 антимышиный CD3Биолегенда100220Антитело
PE/Dazzle 594 антимышь НК-1.1Биолегенда156518Антитело
Реагент ТРИЗОЛThermo Fisher Scientific Inc.15596026Реагент
Ультрачистая дистиллированная вода, не содержащая ДНКазы/РНКазыThermo Fisher Scientific Inc.10977015Реагент
Тканевые клеи Vetbond3 МИН.1469СБЛабораторные материалы
Зомби Аква Корректируемый Набор ЖизнеспособностиБиолегенда423102Аминоактивный флуоресцентный краситель

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kleindorfer, D. O., et al. 2021 Guideline for the prevention of stroke in patients with stroke and transient ischemic attack: A guideline from the American heart association/American Stroke Association. Stroke. 52 (7), e364-e467 (2021).
  2. Pu, L., et al.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи