В данном исследовании описывается автоматизированный процесс производства [68Ga]Ga-3BP-3940 с помощью синтезатора GAIA V2 для ПЭТ-визуализации белка активации фибробластов. Также представлены результаты контрольных испытаний, проведенных на трех тестовых партиях.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Автоматизированное получение [68Ga]Ga-3BP-3940 на модуле синтеза для ПЭТ-визуализации микроокружения опухоли
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
На модуле синтеза GAIA был разработан быстрый и эффективный метод автоматизированного радиомечения галлия-68 3BP-3940, молекулярного зонда визуализации, нацеленного на белок активации фибробластов для позитронно-эмиссионной томографической визуализации микроокружения опухоли. Условия реакции включали ацетатный буфер (конечная концентрация: 0,1 М), метионин в качестве антирадиолизного агента (конечная концентрация: 5,4 мг/мл) и 30 мкг 3BP-3940 с нагреванием в течение 8 мин при 98 °C. Заключительная стадия очистки картриджа C18 была необходима для получения продукта высокой чистоты, маркированного радиоактивными веществами. В отличие от этого, 68Ga, произведенный генератором, использовался непосредственно без ступени концентрации на катионообменном картридже. Производство трех валидационных партий подтвердило надежность метода, позволив синтезировать [68Ga]Ga-3BP-3940 за 22,3 ± 0,6 мин с высокой радиохимической чистотой (RCP), что определяется как радио-ВЭЖХ (99,1% ± 0,1%), так и радио-ТСХ (99,2% ± 0,1%). Средний радиохимический выход, основанный на значениях RCP, измеренных с помощью радио-ВЭЖХ, составил 74,4% ± 3,3%. Стабильность препарата с радиоактивной меченкой была продемонстрирована в течение 4 ч после приготовления. Этот протокол обеспечивает надежную, быструю и эффективную методологию получения [68Ga]Ga-3BP-3940, который может быть легко перенесен в клинические условия.
Введение
В последние годы воздействие на микроокружение опухоли (TME) привлекло значительный интерес в диагностических и терапевтических приложениях1. Обилие типов клеток, сигнальных молекул и макромолекул внеклеточного матрикса (ВКМ) в ТМЭ предлагает широкий спектр потенциальных молекулярных мишеней2. Среди резидентных и инфильтрирующих клеток-хозяев канцеассоциированные фибробласты (CAF) образуют отдельное подмножество фибробластов в пределах TME, фенотипически отличающееся от нормальных фибробластов. CAF играют решающую роль в прогрессировании опухоли, метастазировании, уклонении от иммунитета и резистентности к терапии благод....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол предполагает работу с радиоизотопами. Любой, кто проводит эту процедуру, должен быть должным образом обучен обращению с незапечатанными радиоактивными материалами и должен получить одобрение от сотрудника по радиационной безопасности своего учреждения. Автоматизированный синтезатор должен быть помещен в специальную экранированную горячую камеру. Любые ручные процедуры, связанные с радиоактивными материалами, также должны выполняться в экранированной горячей камере или за соответствующей радиационной защитой.
1. Приготовление реагентов
ПРИМЕЧАНИЕ: Реагенты, необходимые для ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Процесс синтеза, разработанный на модуле GAIA, позволяет быстро мечать 3BP-3940 методом 68млрд лет за 21-22 минуты. Данный протокол был разработан для работы с фармацевтическим генератором GALLIAD класса 68Ge/68Ga, который производит 1,1 мл элюата 68Ga в 0,1 М HCl. Объем и молярность реакционного буфера точно настраивали в соответствии с этим количеством кислоты для получения рН реакции от 3,5 до 4, необходимого для оптимального радиоактивного мечения45........
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В данной работе представлен соответствующий требованиям GMP протокол автоматизированной подготовки синтеза [68Ga]Ga-3BP-3940 с использованием модуля GAIA и генератора GALLIAD. Этот метод был адаптирован из протоколов, используемых в нашем центре радиоактивного мечения галлием-68 векторов, таких как ПСМА-лиганды44 и другие ингибиторы FAP43,46 для клинической ПЭТ-визуализации, с небольшими модифик.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют коммерческих партнерств или источников финансирования, которые могли бы привести к реальному или предполагаемому конфликту интересов, связанных с этой работой.
Благодарности
Авторы благодарят Ясмин Суали, Стефана Рено и Элоди Гавен за их помощь в подготовке реакций радиоактивного мечения, представленных в данной рукописи.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0,2 & микрофильтры | VWR | 514-0515 | Для фильтрации буферных и антиоксидантных растворов и конечного продукта радиоактивного мечения |
| Ацетонитрил для ВЭЖХ | Sigma Aldrich | 34851-2,5L | Для контроля ВЭЖХ радиохимической чистоты |
| ацетата аммония | Sigma Aldrich | 238074 | Для приготовления одной из подвижных фаз для контроля ТСХ |
| Колонка C18 для ВЭЖХ | VWR | EQV-3C18-1503 | Для контроля радиохимической чистоты ВЭЖХ |
| Калибратор калиброванной дозы (CRC25) | Capintec-Для | измерения радиоактивности конечного продукта и различных компонентов модуля постсинтеза | |
| Цитратный буферный раствор, pH 4 | Thermofisher | 258585000 | Подвижная фаза для контроля TLC |
| Eppendorf tube 5 мл Biopur | Sigma Aldrich | EP0030119479 | Для приготовления буферных и антиокислительных растворов |
| Удлинительная линия (30 см) | Vygon | 1159.03 | Для подключения генератора к набору трубок |
| Галлий-68 генератор | IRE Elit-For | in situ генерация [68Ga]галлия хлорида | |
| Гамма счетчик (Hidex AMG) | Hidex-For | для оценки периода полураспада и радиохимической чистоты | |
| ВЭЖХ станции | Shimadzu | - | Для ВЭЖХ контроля радиохимической чистоты |
| iTLC-SG пластины Agilent | SGI0001 | Для ТСХ контроля радиохимической чистоты | |
| L-метионин | AppliChem | A1340 | Для приготовления антиоксидантного раствора |
| Мужской/мужской адаптер | Vygon | 893.00 | Для подключения генератора к набору трубок |
| Methanol | Sigma Aldrich | 320390-1L | Для приготовления одной из подвижных фаз для контроля TLC |
| Иглы (21G, Sterican) | B Braun | 4657543B | Для переноса раствора перед радиоактивным мечением |
| pH бумага | VWR | 85409.600 | Для проверки pH продукта для радиоактивного мечения |
| Pipette 1000 µ L (Gilson PIPETMAN) | Fisher Scientific | 12346132-1000 | Для точного измерения и переноса жидкости |
| Pipette 200 µ L (Gilson PIPETMAN) | Fisher Scientific | 12326132-200 | Для точного измерения жидкости и переноса |
| Наконечники для пипеток, 100-1000 μ L | Charles River | D1000IW | Для точного измерения и переноса жидкости |
| Наконечники для пипеток, 2-200 мкм; L | Charles River | D200IW | Для точного измерения и переноса жидкости |
| Радиохроматограф | Elysia-Raytest-Для | контроля ТСХ радиохимической чистоты | |
| Радиосенсор для ВЭЖХ | Elysia-Raytest-Для | контроля ВЭЖХ радиохимической чистоты | |
| Набор реагентов | ABX | RT-101 | Содержит этанол 60%, NaCl 0,9%, пакет WFI, картридж C18, 0,2 и микро; фильтр терминальный, аэрационные иглы, концевая игла и флакон для отходов |
| Экранированный контейнер | LemerPax | Для ослабления излучения радиоактивного маркировочного продукта | |
| Одноразовый пластиковый шпатель | Corning | 3005 | Для приготовления реагентов |
| Тригидрат ацетата натрия EMPROVE | Sigma Aldrich | 1.28204 | Для реакционного буферного препарата |
| Стерильные герметичные флаконы (стеклянный тип 1) | Curium | TC-ELU-5 | Для окончательного кондиционирования буферных, антиоксидантных и радиоактивных растворов |
| Набор стерильных трубок | ABX | RT-01-H | Для автоматизированного синтеза [68Ga]Ga-3BP-3940 |
| Стерильная вода для орошения | B Braun | 0082479E | Для приготовления одной из подвижных фаз для контроля TLC |
| Модуль синтеза (GAIA) | Elysia-Raytest | - | Для автоматизированного синтеза шприца [68Ga]Ga-3BP-3940 |
| (1 мл, малый мертвый объем) | B Braun | 9166017V | Для пептида в буферном кондиционировании и добавления метионина в NaCl 0,9% |
| Шприцы (10 мл) | Becton Dickinson | 309649 | Для метионина в NaCl 0,9% и кондиционирования |
| Шприцы (3 мл) | Becton Dickinson | 309658 | Для метионина и этанола 60% кондиционирования |
| Миграционные резервуары ТСХ | Fisher Scientific | 50-212-281 | Для контроля ТСХ радиохимической чистоты |
| Трифторуксусная кислота (подходит для ВЭЖХ) | Sigma Aldrich | 302031-100ML | Для контроля ВЭЖХ радиохимической чистоты |
| Трубки для гамма-счетчика | - | -Для | анализов периода полураспада и радиохимической чистоты |
| Ультразвуковая ванна | Selecta | 3000683 | Для ультразвуковой обработки приготовленные растворы |
| Вектор молекула (3BP-3940) | MedChemExpress | HY-P10131 | Векторная молекула, подлежащая радиоактивному мечению |
| Флакон для ВЭЖХ со стеклянной вставкой | Sigma Aldrich | 29385-U и SU860066 | Для ВЭЖХ контроля радиохимической чистоты |
| Вихревой смеситель | VWR | 444-5900P | Для перемешивания приготовленных растворов |
| Вода для ВЭЖХ | Sigma Aldrich | 34877-2.5L-M | Для ВЭЖХ контроля радиохимической чистоты |
| Вода для инъекций, колбы 10 мл | Aguettan | 34009 370 641 0 1 | Для растворов подготовка |
Ссылки
- Xiao, Y., Yu, D. Tumor microenvironment as a therapeutic target in cancer. Pharmacol Ther. 221, 107753(2021).
- Zhang, L., et al. Targets of tumor microenvironment for potential drug development. MedComm Oncol. 3 (1), e68(2024).
- Fouillet, J., Torch....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
![Автоматизированное получение [68Ga]Ga-3BP-3940 на модуле синтеза для ПЭТ-визуализации микроокружения опухоли](/_next/image?url=https%3A%2F%2Fcloudfront.jove.com%2FCDNSource%2Fteasers%2F68356.jpg&w=3840&q=75)