Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Экстракция дезоксирибонуклеиновой кислоты целого генома из видов Mycobacterium с помощью техники бромида цетилтриметиламмония

1.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68409

⸱

12 декабря 2025 г.

 , 
1DST/NRF Centre of Excellence for Biomedical Tuberculosis Research, South African Medical Research Council (SAMRC), Centre for Tuberculosis Research, Division of Molecular Biology and Human Genetics, Faculty of Medicine and Health Sciences, Stellenbosch University

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает метод CTAB для извлечения высококачественной ДНК из микобактерий, преодолевая трудности, связанные с их жёсткими, богатыми миколиновой кислотой клетковыми стенками. Процесс включает ферментативное переваривание, лизис клеток с помощью CTAB и очистку ДНК посредством органической экстракции и осадки этанола. Этот метод даёт ДНК, пригодную для молекулярных исследований, и он надёжен для исследований микобактериями.

Аннотация

Эффективная и надёжная экстракция ДНК — это фундаментальный этап молекулярной биологии, обеспечивающий высококачественный генетический материал для последующих приложений, таких как ПЦР, секвенирование и геномный анализ. Однако уникальный состав клеточной стенки микобактерий, богатый липидами и миколиными кислотами, создаёт серьёзные трудности для эффективной изоляции ДНК. Метод бромида цетилтриметиламмония (CTAB) широко применяется благодаря своей эффективности в извлечении высококачественной ДНК из видов микобактерий, включая как быстрорастущие, так и медленнорастущие штаммы. Метод включает ферментативное разрушение бактериальных клеток с помощью лизоцима и протеиназы K, затем лизис компонентов клетки с помощью CTAB, который селективно связывается и образует комплекс с полисахаридами и белками. Очистка и концентрация ДНК достигаются путем экстракции органических растворителей и осадки этанола. Согласно нашим данным, протокол CTAB даёт высокие количества ДНК (200–1000 нг/мкл) с высоким качеством и минимальным загрязнением, что подтверждено гелевым электрофорезом и анализом NanoDrop. ДНК, извлеченная из различных видов микобактерий, обладает высокой чистотой и подходит для различных молекулярных исследований. Это исследование демонстрирует процедурные этапы метода CTAB, подчёркивая его полезность в преодолении уникальных трудностей, связанных с экстракцией микобактериальной ДНК.

Введение

Извлечение высококачественной ДНК является фундаментальным этапом молекулярной биологии, необходимым для последующих приложений, таких как ПЦР, секвенирование целого генома и другие геномные исследования. Для Mycobacterium, рода, включающего как патогенные виды, такие как Mycobacterium tuberculosis (M.tuberculosis), так и непатогенные экологические виды, такие как Mycobacterium smegmatis (M. smegmatis), экстракция ДНК может быть сложной из-за их толстых, богатых липидами и гидрофобных клеточныхстенок 1,2,3. Эта крепкая клеточная стенка требует использования специализированных методов лизиса для разрушения клеток и эффективного освобождения геномной ДНК.

Метод бромида цетилтриметиламмония (CTAB) доказал свою надёжность для выделения высококачественной ДНК различных видовмикобактерий 4,5. CTAB, катионное поверхностно-активное вещество, связывается с полисахаридами и другими компонентами клетки, облегчая их удаление в процессеэкстракции 6. Даже при сложных образцах протокол на основе CTAB обеспечивает эффективную изоляцию целостной и чистой ДНК, особенно в сочетании с ферментативным лизисом, термической обработкой и экстракцией органическимирастворителями 7,8. Метод CTAB сыграл ключевую роль в эффективной экстракции ДНК из видов микобактерий, особенно для исследований, связанных с секвенированием целого генома, метагеномикой и молекулярной диагностикой, требующей чистого и высококачественного входного материалаДНК 9,10. В сравнении с другими методами экстракции ДНК, такими как битение с бусинками или коммерческие наборы, представленный здесь протокол CTAB обладает явным преимуществом в сохранении целостности ДНК, что является важным фактором для секвенирования с длинным чтением и эпигенетических применений. Хотя ранние исследования сообщали о более низких результатах ДНК с помощью CTAB по сравнению с методами механического разрушения, они также подчёркивают его способность минимизировать сдвиг ДНК и сохранять целостностьДНК 11,12. Для устранения ограничений в чистоте и выходе текущий протокол был оптимизирован с сокращением времени инкубации и улучшенной согласованностью между различными типами выборок. Это уточнение было подтверждено результатами Оппермана и др., которые показали, что ДНК, экстракционная с помощью CTAB из культур Mycobacterium avium, имеет достаточную концентрацию и качество для последующих применений, таких как секвенирование 16S рРНК и линейные зондовые анализы, что дополнительно поддерживает применение протокола CTAB как универсального и масштабируемого инструмента для исследований микобактерий, особенно в исследованиях, требующих целостной геномной ДНК для продвинутого молекулярногоанализа 13. Кроме того, секвенирование следующего поколения (NGS) обычно требует 100-1000 нг высококачественной геномнойДНК 14, а в случае секвенирования с длинным чтением, таких как секвенирование PacBio, требуется ≥5 мкг высококачественнойДНК 15, поэтому при необходимости большого количества качественной и целостной ДНК CTAB остаётся эффективнымметодом 16.

Разработка эффективных, последовательных и результативных методологий экстракции ДНК из микробов, поддающихся отпорности на лиза, необходима для обеспечения воспроизводимости и надёжности в лабораториях, особенно для идентификации штаммов и эпидемиологическихисследований 5,7. Этот протокол содержит детали по извлечению целостной геномной ДНК из Mycobacteria с помощью метода CTAB. Текущий протокол направлен на то, чтобы дать исследователям возможность добиваться последовательных и надёжных результатов в своих рабочих процессах молекулярной биологии, преодолевая подводные камни и преодолевая трудности, связанные с характерной микобактериальнойклеточной стенкой 17.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Репрезентативные результаты были получены с одобрения этического комитета REC: BES Университета Стелленбоша (BES-2024-22504). Реагенты и используемое оборудование перечислены в Таблице материалов.

1. Подготовка суспензии микобактериальной культуры

ПРИМЕЧАНИЕ: В зависимости от исследуемого вида, этот этап должен проводиться либо в лаборатории уровня биобезопасности уровня 2 (BSL-2), либо в лаборатории уровня биобезопасности уровня 3 (BSL-3). Время инкубации и условия культуры также зависят от потребностей микобактерий в росте из-за их различных скоростей роста и физиологических особенностей.

  1. Подготовьте 5 мл или 8 мл бактериальной культуры в жидкой среде Middlebrook 7H9 или MGIT соответственно, с добавлением OADC и инкубировать при 37 °C в течение необходимого периода для обеспечения роста бактерий. Медленнорастущие микобактерии требуют 10-14 дней, а быстрорастущие — примерно 2-5 дней.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Суспензия микобактериальных клеток может быть подготовлена, соскребав целый цикл колоний в стерильную двойную дистиллированную воду, если исходная культура взята из твёрдых агарных пластин (например, Middlebrook 7H10 agar).
  2. Налейте жидкую культуру в пробирки по 15 мл.
  3. Поглощайте культуру теплом при 80 °C в течение 1 часа в инкубаторе.
  4. В случае Mycobacterium tuberculosis или других патогенных видов, требующих BSL-3, переведите культуры, убитые теплом, в лабораторию BSL-2.

2. Переваривание клеточной стенки и экстракция ДНК

ПРИМЕЧАНИЕ: После инактивации посева можно безопасно выполнить следующие шаги в лаборатории уровня биобезопасности 2 (BSL-2). Если цель — экстракция для секвенирования с длинным чтением или альтернативных применений, требующих высокой молекулярной массы ДНК, обязательно используйте широкоствольные наконечники пипеток, а на этапах вихря заменяйте вихрь на инверсию или смешивание пипеток.

  1. Центрифугуйте трубку на 15 мл при 3220 x g на 15-30 минут при комнатной температуре (RT). Отбросьте прозрачный супернатант (убедитесь, что все носители удалены).
  2. Тщательно суспензируйте гранулу культуры в 300 мкл буфера Tris-EDTA (TE).
  3. Переложите подвешенную гранулу в трубку объёмом 2 мл.
  4. Добавьте 100 мкл лизозима (10 мг/мл) и перемешайте, пипетируя вверх и вниз 5 раз, затем аккуратно постукивайте по трубке для равномерного распределения.
  5. Инкубировать смесь при 37 °C на ротационном инкубаторе ночью (~16 ч; меньшее время инкубации может снизить эффективность лизиса и, следовательно, привести к низкому выходу ДНК).
  6. На следующий день приготовьте смесь из 5 мкл протеиназы K (10 мг/мл) и 70 мкл 10% SDS. Например, если образцов пять, приготовьте 350 мкл 10% SDS и 25 мкл протеиназы K. Перемешайте, перевернув трубку, чтобы избежать образования пены.
  7. Добавьте 75 мкл смеси в каждый образец.
  8. Смешивайте с помощью постукивания и инкубировать при 65 °C в течение 10 минут в инкубаторе или нагревательном блоке, с периодическим смешиванием инверсией.
  9. Добавьте 100 мкл 5 млн NaCl.
  10. Добавьте 100 мкл предварительно нагретого раствора CTAB/NaCl при 65 °C.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Нагрейте раствор CTAB/NaCl до 65 °C перед точностью пипетирования, учитывая вязкость вещества при RT.
  11. Смешивайте, постукивая до тех пор, пока раствор не станет молочным.
  12. Инкубировать при 65 °C в течение 10 минут в инкубаторе или нагревательном блоке, с периодическим смешиванием путём инверсии.
  13. Добавьте равный объём (~ 675 мкл) раствора хлороформа/изоамил-спирта (24:1) в каждый образец и смешайте постуком.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Выполните этот шаг в выхлопной вытяжке, так как хлороформ токсичен при вдыхании и требует осторожного обращения.
  14. Центрифугуйте образцы при температуре 12000 x г в течение 10 минут при комнатной температуре.
  15. Аккуратно аспирируйте 550–600 мкл водной (верхней) фазы в стерильные трубки по 1,5 мл и соответствующим образом маркируйте их.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Будьте осторожны, чтобы не потревожить другие слои. Если какие-либо слои случайно нарушаются, снова центрифугуйте трубку.

3. Осаждение и элюция ДНК

  1. Добавьте равный объём (550–600 мкл) ледяного изопропанола и перемешайте, инвертируя трубки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если концентрация ДНК высокая, при смешивании может образоваться белый осадок.
  2. Инкубировать трубки при -20 °C в течение 30 минут — 1 часа.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Более длительное время инкубации может усилить осадкиДНК 18 , но также может привести к совместному осадке солей. Таким образом, при ожидании низкой концентрации ДНК можно провести ночную инкубацию.
  3. Центрифуга на максимальной скорости (~21130 x g) в течение 30 минут при комнатной температуре для гранулирования нерастворимой ДНК.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что передняя сторона трубок 1,5 расположена внутрь в роторе центрифуга. На этом этапе ДНК осаждается внизу и вдоль задней части трубок. Это важно, чтобы не нарушить возможно невидимую гранулу на следующем этапе. При высокой концентрации ДНК может быть видно белый осадок или гранула. Отсутствие гранулы не свидетельствует о неудачной экстракции; Переходите к оставшимся шагам.
  4. Аспирируйте супернатант с передней стороны трубки, не нарушая ДНК-гранулу и быстро декантируя её, при этом следите за тем, чтобы гранула оставалась нетронутой.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Лучше аспирировать супернатант, если начальная культура небольшая и ожидается низкая концентрация ДНК.
  5. Добавьте 1000 мкл ледяного этанола 75%.
  6. Смешивайте, несколько раз инвертируя трубки.
  7. Центрифуга при 12000 × г в течение 30 минут (в той же ориентации, что и на этапе 3).
  8. Аспирируйте или декантуйте весь этанол, не нарушая гранулу.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Шаги 5-8 могут быть повторены при ожидании высокого количества соленых осадков.
  9. Дайте трубкам высохнуть на RT на ночь или не менее 30 минут.
  10. Добавьте 25-50 мкл буфера TE (pH 8) в каждую трубку для восстановления суспензии ДНК.
    ПРИМЕЧАНИЕ: ДНК может быть повторно суспендирована в буфере Tris (10 мМ, pH 8) или в воде без нуклеазы, если применения ниже по течению чувствительны к EDTA.
  11. Дайте грануле ДНК восстановиться на ночь при 4 °C.
  12. Храните при 4 °C в течение 2-3 дней перед проведением оценки качества.
  13. Храните при -80 °C длительное время.

4. Квантификация и контроль качества ДНК

ПРИМЕЧАНИЕ: Контроль качества ДНК обычно проводится с помощью микрообъёмного спектрофотометра и гелевого электрофореза. Для количественного определения экстракции ДНК также может использоваться система количественной оценки на основе флуоресценции.

  1. Метод спектрофотометра
    1. Измерьте концентрацию ДНК и определите качество в соответствии с инструкциями производителя.
      ПРИМЕЧАНИЕ: в идеале образец ДНК имеет соотношение 260/280 от 1,7 до 2,0. Значение 1,8 обычно считается чистым для ДНК. Значения ниже этого диапазона указывают на загрязнение остаточным белком, гуанидином или другими реагентами, которые сильно поглощаются на или около 280 нм. Соотношение 260/230 между 2.0 и 2.2 идеально подходит. Если соотношение ниже ожидаемого, это может указывать на наличие загрязнителей, которые поглощаются на 230 нм, таких как ЭДТА, фенол и углеводы. Проверьте графики поглощения, полученные для образца.
  2. Гель-электрофорез
    1. Проведите электрофорез агарознымгелем 19 для оценки целостности ДНК и определения, произошла ли фрагментация или деградация.
    2. Чтобы визуализировать ДНК в системе документации по УФ-гелю, используйте 1,0% агарозный гель, содержащий краситель SYBR Safe. Пусть гель будет при 80 В в течение 45 минут.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Цель — иметь чёткие, чёткие, высокомолекулярно-массовые полосы над самой высокой полосой лестницы ДНК. Используйте свежий буфер 1× TAE каждый раз.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Этот протокол экстракции ДНК с использованием метода CTAB (см. рисунок 1) был оценён на различных видах микобактерий, таких как M. tuberculosis, M. abscessus и M. chelonea. ДНК была извлечена и сравнивалась по результатам, чистоте и целостности извлеченной ДНК по образцам.

Концентрация ДНК варьировалась у разных видов микобактерий и в некоторых случаях составляла от 190 до 600 нг/мкл до >1000 нг/мкл, что...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Репрезентативные результаты демонстрируют полезность метода CTAB для извлечения ДНК из видов микобактерий и решении задач, связанных с извлечением ДНК из этих организмов. Микобактерии хорошо известны своими сложными и богатыми липидамиклетковыми стенками 2. Текущие результаты выделяют несколько ключевых аспектов, способствующих успеху этой методики, поскольку она обеспечивает высококонцентрационную, высококачественную целостную ДНК, подходящую для последующих прил...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликтов интересов, которые нужно раскрывать.

Благодарности

Авторы выражают искреннюю благодарность команде по геномике туберкулёза: Набиле Исмаил, Мелани Гроббелаар, Эмилин Коста и Робу М. Уоррену за их вклад в разработку и оптимизацию этого протокола, а также за неоценимую поддержку на протяжении всего исследования. Эта работа и участники были поддержаны грантами и финансированием Южноафриканского медицинского исследовательского совета (SAMRC), Национального исследовательского фонда (NRF) и Университета Стелленбоша (SU). Спонсоры не участвовали в проектировании исследования, сборе данных, анализе или подготовке рукописей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Наконечники пипеток объёмом 1 млЛюбой поставщик
10 & микро; Наконечники L пипеткиЛюбой поставщик
10% натрий додецилсульфат (SDS)Merck (Sigma-Aldrich)71736-100 ML
Полипропиленовые трубки объёмом 15 млЛюбой поставщик
2 мл и 1,5 мл пробиркиЛюбой поставщик
200 и микро; Наконечники пипетки IЛюбой поставщик
2-ПРОПАНОЛ, биореагент, для молекулярного B&Merck (Sigma-Aldrich)I9516-1L Хранить при -20 и градусах; C
37°; Инкубатор CЛюбой поставщик
5 M NaClMerck (Sigma-Aldrich)S6546 - 100 ML
65°; Инкубатор CЛюбой поставщик
Агарозный гельMerck (Sigma-Aldrich)
Система документации UV-гелей Bio-Rad,BioRad
Центрифуга (для трубок 15 мл или 50 мл) и Microfuge (для пробирок 2 мл)Любой поставщик
ХЛОРОФОРМ ДЛЯ АНАЛИЗА, EMPARTA® ACSMerck (Sigma-Aldrich)1070242500
Хлороформ/изоамиловый спирт (24:1)В выхлопчике смешайте 384 мл хлороформа и 16 мл изоамилового спирта
Решение CTAB/NaClMerck (Sigma-Aldrich)52370-100 GРастворите 4,1 г NaCl в дистиллированной воде объёмом 80 мл. Во время помешивания добавьте 10 г CTAB. Тепловой раствор при 65°; Инкубатор C. Отрегулируйте объём до 100 мл с дистиллированной водой. Храните при комнатной температуре до 6 месяцев.
Лестница ДНК 1 КбТермо Фишер Сайентифик
ЭТИЛОВЫЙ СПИРТ, ЧИСТЫЙ, 200 PROOF, ДЛЯ MOL&;Merck (Sigma-Aldrich)E7023-500MLСмешайте 75 мл абсолютного этанола и 25 мл дистиллированной воды
Лизоцим (10 мг/мл)Merck (Sigma-Aldrich)10837059001Восстановить лиофилизированный лизоцим (доведённый до комнатной температуры) с помощью дистиллированной воды до 10 мг/мл
Медиа Middlebrook 7H9Merck (Sigma-Aldrich)M0178Следуйте рекомендациям производителя по подготовке жидкой среды
MIDDLEBROOK OADC ENRICHMENT 6 x 100 мл F BD212240
Среда индикатора роста микобактерий (MGIT)BD245122
Система NanoDropТермо Фишер Сайентифик
Пипетка P10Любой поставщик
Пипетка P1000Любой поставщик
Пипетка P200Любой поставщик
Протеиназа K, рекомб, ПЦР 2x250 мг Merck (Sigma-Aldrich)3115801001Восстановить флакон лиофилизированной протеиназы K с дистиллированной водой до 10 мг/мл. Заморозить аликвоты в пробирках по 2 мл при -20 и градусах; C
SYBR-safeТермо Фишер Сайентифик
pH буфера Tris/EDTA (TE) 8.0Merck (Sigma-Aldrich)8890-OP или 382499997
ВихрьЛюбой поставщик

Ссылки

  1. FBouso, J. M., Planet, P. J. Complete non-tuberculous mycobacteria whole genomes using an optimized DNA extraction protocol for long-read sequencing. BMC Genomics. 20 (1), 793(2019).
  2. Daffé, M., Marrakchi, H. Unraveling the structure of the mycobacterial envelope. Microbiol Spectr. 7 (4), 7.4.1(2019).
  3. Wayne, L. G., Sohaskey, C. D. Nonreplicating persistence of Mycobacterium tuberculosis. Annu Rev Microbiol. 55 (1), 139-163 (2001).
  4. Mohammadi, S., et al. Optimal DNA isolation method for detection of non-tuberculous mycobacteria by polymerase chain reaction. Adv Biomed Res. 6 (1), 133(2017).
  5. Van Soolingen, D., et al. Occurrence and stability of insertion sequences in Mycobacterium tuberculosis complex strains: Evaluation of an insertion sequence-dependent DNA polymorphism as a tool in the epidemiology of tuberculosis. J Clin Microbiol. 29 (11), 2578-2586 (1991).
  6. Wilson, K. Preparation of genomic DNA from bacteria. Curr Protoc Mol Biol. 56 (1), 2.4.1-2.4.5 (2001).
  7. Van Embden, J. D., et al. Strain identification of Mycobacterium tuberculosis by DNA fingerprinting: Recommendations for a standardized methodology. J Clin Microbiol. 31 (2), 406-409 (1993).
  8. Wang, W. -F., et al. Genomic analysis of Mycobacterium tuberculosis isolates and construction of a Beijing lineage reference genome. Genome Biol Evol. 12 (2), 3890-3905 (2020).
  9. Epperson, L. E., Strong, M. A scalable, efficient, and safe method to prepare high quality DNA from mycobacteria and other challenging cells. J Clin Tuberc Other Mycobact Dis. 19, 100150(2020).
  10. Warren, R., et al. Safe Mycobacterium tuberculosis DNA extraction method that does not compromise integrity. J Clin Microbiol. 44 (1), 254-256 (2006).
  11. Amaro, A., Duarte, E., Amado, A., Ferronha, H., Botelho, A. Comparison of three DNA extraction methods for Mycobacterium bovis, Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium subsp. avium. Lett Appl Microbiol. 47 (1), 8-11 (2008).
  12. Arslan, N., Demiray-Gurbuz, E., Ozkutuk, N., Esen, N., Özkütük, A. A. Comparison of four different DNA isolation methods from MGIT culture for long-read whole genome sequencing of Mycobacterium tuberculosis. Jundishapur J Microbiol. 17 (9), e148070(2024).
  13. Opperman, C. J., et al. Mycobacterium avium DNA extraction: Implications for NTM identification and amplicon sequencing. South Afr J Infect Dis. 40 (1), 5(2025).
  14. Froenicke, L. Illumina and Aviti sample and library requirements. DNA Technol Core. , https://dnatech.ucdavis.edu/illumina-aviti-sample-and-library-requirements (2015).
  15. Froenicke, L. PacBio Revio and Sequel II library prep & sequencing. DNA Technol Core. , https://dnatech.ucdavis.edu/pacbio-revio-and-sequel-ii-library-prep-sequencing (2016).
  16. Dippenaar, A., et al. Droplet-based whole genome amplification for sequencing minute amounts of purified Mycobacterium tuberculosis DNA. Sci Rep. 14, 9931(2024).
  17. Doig, C. The efficacy of the heat-killing of Mycobacterium tuberculosis. J Clin Pathol. 55 (10), 778-779 (2002).
  18. Li, Y., et al. A systematic investigation of key factors of nucleic acid precipitation toward optimized DNA/RNA isolation. Biotechniques. 68 (4), 191-199 (2020).
  19. Green, M. R., Sambrook, J., Sambrook, J. Molecular cloning: A laboratory manual. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. N.Y. (2012).
  20. Van Soolingen, D., Hermans, P. W., De Haas, P. E., Van Embden, J. D. Insertion element IS1081-associated restriction fragment length polymorphisms in Mycobacterium tuberculosis complex species: A reliable tool for recognizing Mycobacterium bovis BCG. J Clin Microbiol. 30 (7), 1772-1777 (1992).
  21. Doig, C., Seagar, A. L., Watt, B., Forbes, K. J. The efficacy of the heat killing of Mycobacterium tuberculosis. J Clin Pathol. 55 (10), 778-779 (2002).
  22. Dippenaar, A., et al. Exploring the potential of Oxford Nanopore Technologies sequencing for Mycobacterium tuberculosis sequencing: An assessment of R10 flowcells and V14 chemistry. PLOS ONE. 19 (6), e0303938(2024).
  23. Chang, A., et al. Metagenomic DNA sequencing to quantify Mycobacterium tuberculosis DNA and diagnose tuberculosis. Sci Rep. 12, 16972(2022).
  24. Forbes, J. D., Knox, N. C., Ronholm, J., Pagotto, F., Reimer, A. Metagenomics: The next culture-independent game changer. Front Microbiol. 8, 1069(2017).
  25. Marshall, J. E., et al. Methods of isolation and identification of non-tuberculous mycobacteria from environmental samples: A scoping review. Tuberculosis. 138, 102291(2023).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

CTABK
Экстракция дезоксирибонуклеиновой кислоты целого генома из видов Mycobacterium с помощью техники бромида цетилтриметиламмония
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.