Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Система двойной экспрессии на основе комплементации GFP для оценки межклеточного контакта, опосредованного цитонемами в имагинальных дисках крыльев живой дрозофилы

897 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68411

⸱

22 августа 2025 г.

 , 
1Institut de recherches cliniques de Montréal (IRCM), 2Programmes de biologie moléculaire, Université de Montréal, 3Département de Médecine, Université de Montréal

В этой статье

Краткое содержание

Мы описываем протокол измерения контактов между клетками в соседних эпителиальных слоях в имагинальных дисках крыльев живой дрозофилы с использованием подхода, основанного на восстановлении GFP.

Аннотация

Рост и структура эмбриональных тканей в значительной степени контролируются сигналами, которыми обмениваются местные клеточные популяции внутри самих тканей. Цитонемы — это тип сигнальных филоподий, впервые выявленных у дрозофил, которые соединяют и опосредуют обмен между клетками, производящими и принимающими сигнал. В развивающемся имагинальном диске крыла дрозофилы цитонемы участвуют в обмене сигналами между различными популяциями клеток внутри эпителия собственно диска (DP), который образует взрослое крыло, а также между клетками DP и клетками в соседних тканях, связанных с диском. Цитонемы синапс с клетками-мишенями образуют интимные мембранные контакты.

В данной работе мы представляем протокол количественной оценки цитонем-опосредованного контакта между клетками ДП и клетками эпителия прилегающей периподиальной мембраны (ПМ), который отделен от клеток ДП просветом диска, с использованием подхода восстановления GFP в дисках живых крыльев. С помощью систем GAL4-UAS и LexA-LexAop комплементарные фрагменты расщепленного GFP (spGFP1-10, spGFP11), каждый из которых слитый с трансмембранным доменом CD4, экспрессируются по обе стороны от просвета диска. Визуализация восстановленной флуоресценции GFP в живых препаратах диска крыла с помощью конфокальной микроскопии затем используется для создания стеков изображений, из которых можно локализовать и количественно оценить восстановленную флуоресценцию GFP. С помощью этой системы можно совместно экспрессировать трансгены, кодирующие белки или РНК-интерференции, как в клетках, продуцирующих цитонему, так и в клетках-мишенях, чтобы оценить их влияние на контакты с клетками DP-PerM. Эта система, легко адаптируемая к другим тканям, таким образом, позволяет идентифицировать факторы, важные для образования или функции цитонего.

Введение

Развитие эмбриональных тканей контролируется клетками, расположенными в «организующих центрах», которые подают сигналы удаленным клеткам внутри ткани, контролируя их решения о пролиферации (т.е. росте и делении) или принятии определеннойсудьбы. Эта клеточная неавтономная передача сигналов опосредована лигандами, вырабатываемыми центральными клетками, которые формируют градиенты концентрации в тканях и вызывают реакции, зависящие от концентрации. Во многих случаях эти лиганды либо доставляются, либо улавливаются через длинные сигнальные филоподии на основе актина, называемые цитонемами, которые соединяют сигнализирующие и принимающие клетки в тканях 2,3. Впервые обнаруженные в имагинальном диске4 крыла дрозофилы, цитонемы также были идентифицированы у млекопитающих и других позвоночных 5,6,7,8,9. Лучшее понимание роли цитонемы в клеточной неавтономной передаче сигналов, хотя и на ранней стадии, имеет решающее значение для расшифровки того, как клетки взаимодействуют, организуясь в ткани, и как эти коммуникационные линии модифицируются при различных патологических состояниях, включая пороки развития и рак.

Цитонемы могут распространяться от исходных клеток для доставки лигандов к клеткам-мишеням или от клеток-мишеней для получения лигандов вблизи их источников 2,3. Цитонемы вступают в интимные контакты со своими мишенями, где они, как полагают, образуют синапсические структуры, где может происходить перенос лиганда 3,10,11. Этот контакт может происходить между кончиками исходных и целевых цитонем, или между цитонемамии клеточными телами. Хотя клеточная адгезия через молекулы адгезии или через рецептор-лигандные взаимодействия в некоторых случаях не охарактеризована, она необходима для правильной активации нисходящих сигнальных событий 12,13,14, что делает ее важным аспектом биологии цитонемы.

В нескольких исследованиях для анализа контактов цитонемы применялся метод «восстановления GFP через синаптических партнеров» (GRASP). Этот метод был разработан для идентификации и картирования синаптических партнеров в сложных нервных системах15. Он основан на экспрессии двух комплементарных фрагментов расщепленного GFP (spGFP1-10 и spGFP11), каждый из которых слит с внеклеточным участком трансмембранного домена (например, CD4), в различных популяциях клеток. Если плазматические мембраны клеток в этих двух популяциях вступают в прямой контакт, это приводит к тому, что комплементарные домены spGFP становятся ближе, что приводит к восстановлению флуоресценции GFP. Этот подход был использован у дрозофил для идентификации существования контактов цитонемы между клетками внутри диска крыла и между диском крыла и другими близко прилегающими тканями 12,16,17,18,19,20,21.

В данной статье описывается применение GRASP для характеристики контактов между двумя морфологически различными эпителиальными слоями имагинального диска крыла дрозофилы, собственно диском (DP) и периподиальной мембраной (PerM). Эти эпителиальные слои образуют мешочек, окружающий центральный просвет, с псевдостратифицированными столбчатыми клетками DP, расположенными с одной стороны, и плоскоклеточными клетками PerM с другой, причем их апикальные мембраны обращены внутрь к просвету (рис. 1A). Существуют некоторые доказательства транслюменальной передачи сигналов между двумя слоями 22,23,24,25, и недавно мы задокументировали передачу сигналов от DP для контроля пролиферации клеток PerM, которая опосредована апикальными цитонемами в DP21. Этот протокол предполагает использование трансгенных экспрессионных систем GAL4/UAS и LexA/LexAop для экспрессии комплементарных фрагментов spGFP, слитых с CD4, на мембранах клеток DP и PerM. Он использует восстановленную флуоресценцию GFP для считывания мембранного контакта между двумя клеточными популяциями.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Драйвер nubbin-GAL4 используется для экспрессии CD4-spGFP1-10 конкретно в области крыльевого мешка DP (рис. 1A). Драйвер21 PerM-LexA используется для экспрессии CD4-spGFP11 конкретно в PerM (рисунок 1A). Эти две системы экспрессии независимы друг от друга, что позволяет одновременно и специфично экспрессировать различные трансгены в DP и PerM (рис. 1B, C).

Основная генетическая схема предполагает скрещивание мух для получения личинок генотипа nub-GAL4/UAS-CD4-spGFP1-10; PerM-LexA/LexAop-CD4-spGFP11. В качестве отрицательного контроля мы не учитываем трансген LexAop-CD4-spGFP11 . Другие трансгены (например, кодирующие белки, двухцепочечные РНК) могут экспрессироваться по желанию в слое DP (под контролем последовательностей UAS ) или в PerM (под контролем оператора LexA).

Это протокол визуализации в реальном времени, который не может быть прерван. Подготовка материала оценивается в ~10 мин. Вскрытие не следует проводить более чем за 20 минут до получения изображения. Визуализация занимает ~30 минут и не должна длиться более ~1 часа. При нескольких условиях или большом количестве образцов процедура должна проводиться в несколько раундов, чтобы обеспечить наилучшие результаты.

1. Подготовка материала

  1. Перед вскрытием очистите пинцет, стеклянную пластину для вскрытия на 9 лунок (или другой контейнер, подходящий для сбора и очистки личинок) и многоразовую чашку Петри, покрытую силиконом, используемую для вскрытия 70% этанолом.
  2. Подготовьте предметные стекла микроскопа, выполнив промывку с содержанием этанола 70%, а затем приклейте к высохшему предметному стеклу визуализирующий спейсер . Вырежьте ножницами отдельные лунки из 8-луночной полосы и разрежьте пополам (рисунок 2А). Снимите защитную подложку с одной стороны каждой половины и приклейте прокладки к затвору, расположенные на небольшом расстоянии друг от друга, чтобы создать защищенное пространство посередине, где будут размещены диски (Рисунок 2B).
    ПРИМЕЧАНИЕ: По нашему опыту, это упрощает монтаж образца, так как точный объем среды, передаваемой на предметное стекло, менее критичен. Любой небольшой лишний объем при скольжении покрова будет просто вытекать через зазор. Поскольку мы снимаем изображение в течение относительно короткого времени (обычно ~1 час), мы не испытывали никаких проблем со средней сушкой.
  3. Разморозьте среду для визуализации в реальном времени (недополненную среду Schneider's Drosophila , хранящуюся в замороженных аликвотах объемом 10 мл) и храните ее в легкодоступном ведре для льда.
  4. В микроцентрифужной пробирке объемом 2 мл смешайте 1,5 мл среды с 20 мкл 200 мкг/мл Hoechst 33342 (конечная концентрация 2,7 мкг/мл). Держите трубку на льду.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Эта специфическая форма красителя Hoechst используется, потому что она обладает высокой мембранопроницаемостью. ВНИМАНИЕ: При работе с Hoechst 33342 следует использовать перчатки. Инструменты следует мыть после использования.

2. Рассечение диска крыла и подготовка скольжения

  1. После генетического скрещивания и выращивания при 25°C выберите блуждающих личинок третьего возраста из пробирки и промойте их в холодной среде для визуализации в 9-луночной стеклянной депрессионной точечной пластине.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Цитонемы очень хрупкие. На следующих этапах следует проявлять осторожность при работе с тканями вокруг дисков, стараясь избегать прямого контакта между дисками и инструментами для препарирования. Мы готовим три или четыре личинки за раз, так как повреждение нескольких дисков неизбежно, и это может стать заметным только на этапах визуализации.
  2. Под микроскопом для препарирования перенесите личинки в каплю среды для визуализации в реальном времени на чашку Петри, покрытую силиконом, и начните препарирование с помощью двух щипцов для препарирования. Для этого сначала удерживайте голову и переднюю часть тела в устойчивом положении, зажимая личинок одной парой щипцов примерно на одну треть длины тела (от передней). С помощью второй пары щипцов сожмите тело прямо позади первых щипцов. Затем оттяните заднюю часть личинок в сторону, чтобы изолировать переднюю «половину».
  3. Переверните переднюю половину, закрепив ее одной парой пинцетов с обеих сторон от разрезанного конца и протолкнув головку другой парой (как будто выворачивая носок наизнанку), чтобы обнажить внутренние структуры, включая имагинальные диски, трахею, слюнные железы, жировое тело и кишечник.
  4. Осторожно удалите слюнные железы, жировое тело и кишечник, стараясь не потревожить боковые стволы трахеи, которые должны перекрывать и защищать диски крыльев.
  5. С помощью щипцов осторожно перенесите очищенные передние половинки с прикрепленными крыльевыми дисками в каплю чистой среды для визуализации в режиме Хёхста, помещенную между прокладками на подготовленном предметном стекле (рис. 2C). Изолируйте диски крыльев от остальных тканей, аккуратно рассекая их вдали от тонких ветвей трахеи, которые соединяются с диском, используя либо одно лезвие щипцов для препарирования, либо тонкую вольфрамовую проволоку, прикрепленную к держателю иглы для рассечения. Оставшуюся часть тушки выбросить.
  6. Ориентируйте диски с помощью одного лезвия рассекающих щипцов или иглы для рассечения вольфрамовой проволокой. Из-за их уплощенной каплевидной формы диски крыльев будут падать либо DP, либо PerM вверх. Для этого протокола все диски должны быть ориентированы стороной PerM вверх.
  7. Отрегулируйте объем среды, чтобы она заполнила лунку полностью, немного выше уровня прокладки изображения, добавляя или удаляя среду по мере необходимости. Снимите защитную подложку с верхней стороны каждой половины распорки для визуализации, а затем осторожно опустите покровное стекло на образец. Осторожно надавите на покровное стекло в месте его контакта с распорками для визуализации (например, закругленным концом рассекающих щипцов), чтобы убедиться, что покровное стекло прилипает к спейсеру.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Средний уровень должен быть немного выше высоты распорки, чтобы избежать улавливания пузырьков воздуха, но не настолько высоким, чтобы создать значительный поток при опускании покровного стекла.

3. Визуализация

  1. Изображение образцов при комнатной температуре с помощью конфокального микроскопа (аргон-ионный лазер с длиной волны 488 нм для GFP, УФ-лазер с длиной волны 350 нм для Hoechst), оснащенный масляной иммерсионной линзой 40x/1.30 NA и программным обеспечением для микроскопии. Получение стеков изображений с шагом 1 мкм, которые простираются от чуть выше самого высокого уровня PerM (где флуоресценция Хёхста уменьшается) до базальной стороны DP, что обычно составляет более 100 изображений на стек. Получайте повторяющиеся стеки изображений для создания видеороликов с интервальной съемкой.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Мы визуализируем слайд не более ~1-2 часов.
  2. Для настройки программного обеспечения микроскопа можно получить изображения с использованием 8-битного кодирования, усреднения линий 2, усиления детектора в диапазоне от 650 до 750 и разделения дорожек каналов для уменьшения просачивания сигнала. Используйте идентичные настройки лазера и детектора для всех условий, предварительно заданные путем предварительного проведения тестов для каждого условия.
    ПРИМЕЧАНИЕ: При 40-кратном увеличении наши изображения имеют разрешение 5,0386 пикселей на мкм (размер пикселя: 0,1985 x 0,1985мкм2). В нашей установке оптимальные настройки конфокального микроскопа включали максимально возможную интенсивность лазера (без повреждения ткани) для захвата как можно большего количества сигнала, в то же время практически не давая насыщения; и минимально возможный уровень шума при отрицательном контроле, достигаемый за счет уменьшения смещения детектора и скорости захвата (при необходимости). Обычно мы используем менее 5% мощности лазера и максимальную скорость сканирующей головки («9» в настройках программного обеспечения Zen). Для создания одного стека изображений обычно требуется ~1 минута 45 секунд, а для покадрового анализа изображения делаются каждые 2-3 минуты.

4. Анализ изображений

  1. Стеки проектов с использованием функции проекции максимальной интенсивности программного комплекса ImageJ (нажмите на изображение | Стеки | Z, выберите в меню Максимальная интенсивность ).
  2. На изображениях MIP определите площадь крыльевого мешка на основе схемы складывания диска крыла (с использованием канала Хёхста) с помощью параметра «Выделение полигона». Используйте то же выделение на канале GFP с помощью функции «Очистить снаружи » (нажмите на «Редактировать» | Очистить снаружи), чтобы установить значение каждого внешнего пикселя равным 0.
  3. В изображениях MIP используйте канал Hoechst для очистки изображений GFP, в частности, удаляя любые артефактные пятна, которые появляются в обоих каналах, установив значение соответствующего пикселя на 0 (нажмите на Выделение полигона, затем Редактировать | очистить).
  4. В очищенных MIP-изображениях используйте функцию «Гистограмма » (нажмите на «Анализ» | Гистограмма | List) для получения и копирования списка всех значений пикселей в таблицу в таблице.
  5. Установите пороговое значение на основе анализа фонового сигнала в отрицательных элементах управления (а затем проверенного в других образцах; см. обсуждение).
  6. Рассчитайте процент GFP-положительной поверхности по следующей формуле:
    %GFP-положительная поверхность = figure-protocol-1 × 100
  7. Нормализуйте данные в конце, разделив каждое значение на среднее значение эталонного условия (которое установлено равным 1).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Допустимый пиксель = пиксель со значением ≥ 1, фактически игнорируя любой удаленный пиксель, значение которого было установлено равным 0. Значения пикселей 0 не возникают естественным образом.
  8. Чтобы определить, где на дисках локализуется восстановленный сигнал GFP, используйте XZ-срезы стеков изображений, чтобы посмотреть на апикобазальную ось эпителия диска. Выполните повторные срезы на Фиджи без интерполяции и увеличьте высоту изображения по оси Z с помощью функции «Масштаб» с билинейной интерполяцией для улучшения видимости.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Чтобы проверить полезность процедуры GRASP для измерения контактов между клетками DP и PerM, мы исследовали диски крыльев четырех различных генотипов: диски негативного контроля дикого типа (генотип: w1118), которые будут отображать только фоновые уровни автофлуоресценции в канале GFP; диски, экспрессирующие CD4-spGFP1-10 в слое DP, но не имеющие трансгена CD4-spGFP11, который будет демонстрировать уровень флуоресценции, производимой только GFP1-10 (который, как мы ожидали, будет пренебрежимо малым, т...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Цитонемы играют важную роль в распределении лигандов, контролируя рост и организацию развивающихся тканей. Обмен сигналами происходит при том, что кончики цитонемы вступают в интимные мембранные контакты со своими мишенями. В этом протоколе мы описываем простой метод анализа цитонем-опосредованных контактов между эпителиальными слоями в диске крыла с использованием методики GRASP.

Представленная здесь методика требует, как минимум, четырех компонентов - драйве...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конкурирующих интересов, о которых они могли бы заявить.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантом CIHR (PJT-162109) для D.H. M.J. получил докторскую стипендию от Фонда Institut de Recherches Cliniques de Montréal и от Программы молекулярной биологии Монреальского университета. Авторы высоко оценивают помощь платформы IRCM для микроскопии и визуализации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Диссекционный микроскоп Discovery V12ЦейссДиссекционный микроскоп
Щипцы Dumont #55, Советы по биологииИнструменты для точной науки11255-20Рассекающие щипцы
EP-Slik (slik20358)БРСКPanneton et al. 2015 штамм от мух для сцеживания Slik
ФИДЖИSchindelin J. et al. (2012) Программное обеспечение для анализа изображений
Hoechst 33342 ThermoFisher ScientificH3570 Визуализация ядерного пятна в реальном времени 
LexAop-CD4-spGFP11  БРСК93018штамм мухи
Конфокальный микроскоп LSM 700 ЦейссКонфокальный микроскоп
nub-GAL4Блумингтонский фондовый центр дрозофил (BDSC)86108штамм мухи
PerM-LexAРамбо, Жозеф и др., 2025штамм мухи
PYREX 9-депрессионная стеклянная точечная пластинаCorning Медико-биологические науки7220-85для сбора и промывки личинок
Дрозофила Шнайдера МедиумThermoFisher Scientific21720024Среда для визуализации в реальном времени
Прокладки для визуализации SecureSeal, 8-луночные, толщина 0,12 мм;Био-лаборатории Грейс654008проставка
Комплект силиконовых эластомеров SYLGARD 184Сильгард3097358-1004для изготовления пластин для препарирования
UAS-CD4-spGFP1-10  БРСК93017штамм мухи
Черный дзенЦейссПрограммное обеспечение для сбора данных

Ссылки

  1. Ng, J. K., Tamura, K., Buscher, D., Izpisua-Belmonte, J. C. Molecular and cellular basis of pattern formation during vertebrate limb development. Curr Top Dev Biol. 41, 37-66 (1999).
  2. Kornberg, T. B. Cytonemes and the dispersion of morphogens. Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 3 (6), 445-463 (2014).
  3. Daly, C. A., Hall, E. T., Ogden, S. K. Regulatory mechanisms of cytoneme-based morphogen transport. Cell Mol Life Sci. 79 (2), 119(2022).
  4. Ramirez-Weber, F. A., Kornberg, T. B. Cytonemes: cellular processes that project to the principal signaling center in Drosophila imaginal discs. Cell. 97 (5), 599-607 (1999).
  5. Hall, E. T., et al. Cytoneme delivery of Sonic Hedgehog from ligand-producing cells requires Myosin 10 and a Dispatched-BOC/CDON co-receptor complex. Elife. 10, e61432(2021).
  6. Sanders, T. A., Llagostera, E., Barna, M. Specialized filopodia direct long-range transport of SHH during vertebrate tissue patterning. Nature. 497 (7451), 628-632 (2013).
  7. Stanganello, E., et al. Filopodia-based Wnt transport during vertebrate tissue patterning. Nat Commun. 6, 5846(2015).
  8. Hall, E. T., et al. Cytoneme signaling provides essential contributions to mammalian tissue patterning. Cell. 187 (2), 276-293.e23 (2024).
  9. Zhang, C., Brunt, L., Ono, Y., Rogers, S., Scholpp, S. Cytoneme-mediated transport of active Wnt5b-Ror2 complexes in zebrafish. Nature. 625 (7993), 126-133 (2024).
  10. Huang, H., Liu, S., Kornberg, T. B. Glutamate signaling at cytoneme synapses. Science. 363 (6430), 948-955 (2019).
  11. Wood, B. M., et al. Cytonemes with complex geometries and composition extend into invaginations of target cells. J Cell Biol. 220 (5), e202101116(2021).
  12. Gonzalez-Mendez, L., Seijo-Barandiaran, I., Guerrero, I. Cytoneme-mediated cell-cell contacts for Hedgehog reception. Elife. 6, e24045(2017).
  13. Du, L., Sohr, A., Li, Y., Roy, S. GPI-anchored FGF directs cytoneme-mediated bidirectional contacts to regulate its tissue-specific dispersion. Nat Commun. 13 (1), 3482(2022).
  14. Roy, S., Huang, H., Liu, S., Kornberg, T. B. Cytoneme-mediated contact-dependent transport of the Drosophila decapentaplegic signaling protein. Science. 343 (6173), 1244624(2014).
  15. Feinberg, E. H., et al. GFP Reconstitution Across Synaptic Partners (GRASP) defines cell contacts and synapses in living nervous systems. Neuron. 57 (3), 353-363 (2008).
  16. Yang, S., et al. Competitive coordination of the dual roles of the Hedgehog co-receptor in homophilic adhesion and signal reception. Elife. 10, e65770(2021).
  17. Patel, A., et al. Cytonemes coordinate asymmetric signaling and organization in the Drosophila muscle progenitor niche. Nat Commun. 13 (1), 1185(2022).
  18. Chen, W., Huang, H., Hatori, R., Kornberg, T. B. Essential basal cytonemes take up Hedgehog in the Drosophila wing imaginal disc. Development. 144 (17), 3134-3144 (2017).
  19. Huang, H., Kornberg, T. B. Myoblast cytonemes mediate Wg signaling from the wing imaginal disc and Delta-Notch signaling to the air sac primordium. Elife. 4, e06114(2015).
  20. Hatori, R., Kornberg, T. B. Hedgehog produced by the Drosophila wing imaginal disc induces distinct responses in three target tissues. Development. 147 (22), dev195974(2020).
  21. Rambaud, B., et al. Slik sculpts the plasma membrane into cytonemes to control cell-cell communication. EMBO J. 44 (8), 2186-2210 (2025).
  22. Gibson, M. C., Schubiger, G. Peripodial cells regulate proliferation and patterning of Drosophila imaginal discs. Cell. 103 (2), 343-350 (2000).
  23. Gibson, M. C., Lehman, D. A., Schubiger, G. Lumenal transmission of decapentaplegic in Drosophila imaginal discs. Dev Cell. 3 (3), 451-460 (2002).
  24. Pallavi, S. K., Shashidhara, L. S. Egfr/Ras pathway mediates interactions between peripodial and disc proper cells in Drosophila wing discs. Development. 130 (20), 4931-4941 (2003).
  25. Pallavi, S. K., Shashidhara, L. S. Signaling interactions between squamous and columnar epithelia of the Drosophila wing disc. J Cell Sci. 118 (Pt 15), 3363-3370 (2005).
  26. Pedelacq, J. D., Cabantous, S. Development and applications of superfolder and split fluorescent protein detection systems in biology. Int J Mol Sci. 20 (14), 3479(2019).
  27. Panneton, V., et al. Regulation of catalytic and non-catalytic functions of the Drosophila Ste20 kinase Slik by activation segment phosphorylation. J Biol Chem. 290 (34), 20960-20971 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Контактопосредованный цитонемамиимагинальный диск крыла Drosophilaвизуализация живых объектовконфокальная микроскопиясистема Split GFPпериподиальная мембранасигнализация роста тканейэкспрессия белков
Система двойной экспрессии на основе комплементации GFP для оценки межклеточного контакта, опосредованного цитонемами в имагинальных дисках крыльев живой дрозофилы
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.