Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Быстрая идентификация Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis и Ureaplasma urealyticum с помощью анализа бокового потока с амплификацией РНК

698 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68413

⸱

20 июня 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The First People's Hospital of Foshan

В этой статье

Краткое содержание

В данной статье мы представляем протокол, демонстрирующий анализ бокового потока амплификации РНК и оцениваем эффективность для быстрого обнаружения Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis и Ureaplasmaurealyticum.

Аннотация

Neisseria gonorrhoeae (NG), Chlamydia trachomatis (CT) и Ureaplasma urealyticum (UU) являются распространенными патогенами, связанными с заболеваниями, передающимися половым путем (ЗППП). НГ является возбудителем гонореи, которая может привести к различным нарушениям со стороны мочеполовой системы, включая эпидидимит, простатит, цервицит и бесплодие. КТ – это микроорганизм, ответственный за негонококковый уретрит и воспалительные заболевания органов малого таза. НЯ связан с негонококковым уретритом, цервицитом, простатитом и бесплодием. Современные молекулярные технологии для анализа NG, CT и UU часто являются сложными и трудоемкими. Быстрое молекулярное тестирование на эти патогены может способствовать ранней диагностике ЗППП. Анализ бокового потока амплификации РНК (РГТ) — это метод, не требующий экстракции нуклеиновых кислот. В этом процессе образцы лизируются для высвобождения фрагментов нуклеиновой кислоты, которые затем амплифицируются с помощью обратной транскрипции и транскрипции. Амплифицированный продукт РНК распознается и захватывается специальными зондами, образуя комплекс РНК-зонд-золотой зонд, который может быть иммобилизован на нитроцеллюлозной мембране с помощью бокового потока для получения видимых полос. Вся процедура занимает менее 1 часа. Целью данного исследования была оценка эффективности РГТ для быстрого выявления НГ, КТ и НЖК. Всего было включено 1 416 образцов. Консистенция NG, CT и UU при анализе с помощью РГТ по сравнению с методом флуоресцентного зондирования методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) составила 99,03% (307/310), 99,38% (159/160) и 99,02% (303/306) соответственно. Консистенция NG, CT и UU при анализе с помощью РГТ по сравнению с секвенированием генов составила 99,17% (238/240), 98,95% (188/190) и 98,30% (173/176) соответственно. По сравнению с методом культивирования выделения патогена, частота выявления анализов НГ, КТ и НВП составила 100,00% (9/9, 17/17, 8/8). Высокая чувствительность и специфичность, простота использования и сокращение времени делают этот анализ идеальным для быстрого и точного обнаружения НГ, КТ и НХ.

Введение

Инфекции, передающиеся половым путем (ИППП), представляют собой серьезную глобальную проблему общественного здравоохранения, приводящую к серьезной заболеваемости и смертности в области гениталий и репродуктивной системы1. Возбудителем гонореи является Neisseria gonorrhoeae (NG), ежегодно во всем мире регистрируется около 87 миллионов новых случаевзаболевания2. Этот патоген в первую очередь вызывает воспаление, проникая в столбчатый эпителий мочеполового тракта3. Chlamydia trachomatis (CT), еще один микроорганизм, является причиной негонококкового уретрита и инфекций органов малого таза, на долю которых ежегодно приходится около 130 миллионов новых случаев4. Ureaplasma urealyticum (UU), простейшая и самая маленькая самовоспроизводящаяся клетка, легко проникает в поврежденную ткань шейки матки и связана с негонококковым уретритом, цервицитом, простатитом и бесплодием5. Все эти инфекции часто протекают бессимптомно как у женщин, так и у мужчин, но при отсутствии своевременного лечения они могут привести к серьезным осложнениям. Материнские инфекции могут привести к серьезным неблагоприятным исходам беременности, включая мертворождение, выкидыш, преждевременные роды и прямую инфекцию плода6. Поэтому разработка быстрого, чувствительного, специфического и удобного для пользователя метода обнаружения патогенов имеет первостепенное значение.

Быстрое и точное обнаружение патогенов имеет решающее значение для эффективной диагностики и лечения заболеваний. Традиционные методы культивирования, требующие выделения, культивирования и идентификации патогенов, имеют существенные недостатки, в том числе трудоемкие и низкую чувствительность. Несмотря на то, что секвенирование генов отличается высокой точностью, оно требует сложной среды и оборудования, что делает его дорогостоящим и трудоемким. Традиционные молекулярные технологии для анализа NG, CT и UU получили широкое признание; Однако эти методы часто являются сложными и трудоемкими, требуют сложных инструментов, обученных техников и увеличенного времени обработки. Таким образом, существует острая потребность в простом и надежном методе молекулярной диагностики для устранения ограничений традиционных подходов. Анализ бокового потока с амплификацией РНК (РГТ) предлагает быструю, чувствительную и специфичную альтернативу без необходимости проведения сложных процедур 7,8. В этом методе образцы подвергаются прямому лизису для высвобождения фрагментов нуклеиновых кислот без экстракции нуклеиновых кислот, и эти фрагменты амплифицируются с помощью обратной транскрипции и транскрипции. Затем амплифицированный продукт РНК распознается и захватывается специфическими зондами, образуя комплекс РНК-детектирующий зонд-золотой зонд, который может быть иммобилизован на нитроцеллюлозной мембране с помощью бокового потока для создания видимых полос9. Весь процесс занимает менее 1 часа, что делает его очень подходящим для экстренных лабораторных испытаний.

В этом исследовании мы набрали 1416 образцов для оценки использования РГТ для выявления НГ, КТ и НХ. Образцы анализировали с помощью методов РГТ, флуоресцентного зондирования ПЦР, секвенирования генов и культивирования выделения патогенов. Результаты показали, что метод РГТ является точным и согласуется с традиционными методами диагностики. В заключение следует отметить, что высокая чувствительность и специфичность, простота использования и сокращение времени делают этот анализ идеальным для быстрого и точного обнаружения НГ, КТ и НХ, что предполагает его многообещающее применение в предварительной медицинской диагностике заболеваний, передающихся половым путем.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Это исследование было проведено в соответствии с этическими принципами и одобрением, предоставленным Институциональным наблюдательным советом Первой народной больницы Фошаня, провинция Гуандун, Китай (Документ этического обзора No. LR (2025) 136). В общей сложности 1416 образцов мазка из гениталий (716 от пациенток женского пола, 700 от пациентов мужского пола) были проспективно собраны у лиц с клиническим подозрением на ЗППП, которые не проходили антибиотикотерапию в течение предшествующих 14 дней (дополнительная таблица 1). Для каждого участника одновременно были получены и проанализированы парные мазки: один тестовым методом (РГТ), а другой референсным методом (флуоресцентное зондирование ПЦР, секвенирование генов и культура выделения патогена соответственно). Межметодное согласование было количественно определено с использованием коэффициента Каппа Коэна (κ), а интерпретация основывалась на критериях Лэндиса и Коха.

ПРИМЕЧАНИЕ: Протокол анализа для КТ и УН следует тем же процедурным шагам, что и для НГ, с модификациями, ограниченными специфическими для патогена реагентами. Подробные рецептуры реагентов приведены на шаге 2.1 (Дополнительная таблица 2, Дополнительная таблица 3 и Дополнительная таблица 4).

1. Забор образцов

  1. Применимый тип образца: Соберите мазки из гениталий (женский мазок из шейки матки, мужской мазок из уретры).
  2. Сбор образцов
    1. Введите мазок из половых органов в отверстие мужской уретры на 2-3 см или в женское шейное отверстие примерно на 1-2 см.
    2. Поверните один раз и удерживайте в течение 10 секунд.
    3. Извлеките тампон и вставьте его в пробирку для сбора, содержащую 1 мл физиологического раствора.
    4. Отломите и выбросьте хвостик тампона, затем затяните крышку трубки.
    5. Запишите время сбора и своевременно проведите тест.
  3. Хранение и транспортировка образцов
    1. Транспортировка образцов при комнатной температуре (RT) в течение 4 ч или при температуре 2-8 °C с пакетом льда в течение 24 ч.
    2. Храните оставшиеся гранулы клеток обработанных образцов при температуре -20 °C в течение 3 месяцев или при температуре -80 °C до 6 месяцев, если испытания не могут быть проведены своевременно.

2. Подготовка

  1. Реагентов
    1. Реагенты для анализа нуклеиновых кислот ПГ см. в дополнительной таблице 2.
    2. Реагенты для анализа нуклеиновых кислот КТ см. в дополнительной таблице 3.
    3. Реагенты для анализа нуклеиновых кислот UU приведены в дополнительной таблице 4.
    4. Хранение: Хранить все реагенты при температуре от -40 °C до -15 °C, а карты обнаружения - при температуре от 2 °C до 30 °C.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Буфер усиления и раствор для обнаружения должны быть сбалансированы до RT перед использованием в соответствии с ежедневными требованиями к обнаружению. После достижения RT их следует хранить при температуре 4 °C и можно использовать для следующего обнаружения. Избегайте многократного замораживания и размораживания. Фермент амплификации следует хранить при температуре -20 °C, за исключением экспериментального процесса. Повышение температуры хранения может привести к снижению или потере активности ферментов.
  2. Требования к экспериментальной среде
    1. Проведите эксперимент в четырех физически разделенных зонах:
      1. Зона приготовления реагента: Поддерживайте температуру 22 ± 1°C при положительном давлении воздуха (расход воздуха, отфильтрованного высокоэффективными частицами (HEPA) ≥ 0,3 м/с). Храните предварительно аликвотированные реактивы в шкафах, стерилизованных ультрафиолетом.
      2. Зона подготовки образцов: Выполняйте все операции с образцами в шкафу биологической безопасности класса II, предварительно обработанном 70% этанолом.
      3. Зона усиления: Управление термоамплификаторами на антивибрационных столах.
      4. Зона анализа продукта: Используйте УФ-стерилизованный стол (30 минут воздействия до/после использования).
    2. Регулируйте персонал и поток воздуха в каждой секции для предотвращения перекрестного загрязнения следующим образом:
      1. Поддерживайте однонаправленный поток воздуха от подготовки реагента к зонам анализа продукта.
      2. Обеспечьте отрицательное давление в зоне пробоподготовки (-5 Па относительно соседних зон).
      3. Ограничение передвижения персонала; Обеззараживайте перчатки 75% этанолом перед переходом между зонами.
      4. Установите шлюзовые двери с системами блокировки (минимальная задержка 30 с между открытиями).
    3. Используйте расходные материалы для конкретных зон (например, пробирки для центрифуг, наконечники для пипеток и т. д.) и выбрасывайте расходные материалы после однократного использования.
    4. Поддерживайте чистоту и контроль качества:
      1. Ежедневно очищайте скамейки 10% гипохлоритом натрия, а затем 75% этанолом или дистиллированной водой.
      2. Подтвердите стерильность расходуемых материалов с помощью тестирования на эндотоксины (анализ лизата амебоцитов Limulus, <0,25 ЕД/мл).
      3. Еженедельно контролируйте качество воздуха с помощью оседающих пластин (триптический соевый агар [TSA], ≤5 колониеобразующая единица (КОЕ)/планшет после 4-часового воздействия).
  3. Квалификация персонала
    1. Обладать сертификатами или квалификациями, связанными с технологией ПЦР, чтобы гарантировать точность и надежность данного эксперимента.

3. Лизируйте клетки для извлечения РНК

  1. Обработка образцов
    1. Сделайте вихревое воздействие на пробирку для сбора образцов со скоростью 2 600 раз/мин в течение 10 с, чтобы вытеснить клетки из головки тампона в раствор.
    2. Переведите 1 мл раствора в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл с помощью калиброванной пипетки, рассчитанной на 1000 мкл.
    3. Центрифугируйте при 12 000 × г в течение 2 мин при 25 °C.
    4. Аспирируйте 950 мкл надосадочной жидкости, не нарушая гранулы. Повторно суспендируйте гранулы в 25 мкл остаточного раствора путем пипетирования вверх и вниз 10 раз с помощью калиброванной пипетки объемом 200 мкл 50 мкл.
  2. Лизис образца и материалы для контроля качества
    1. Предварительно уравновесить буфер для лизиса клеток и отрицательный контроль при 25 °C в течение 15 мин.
    2. Центрифугируйте материалы контроля качества при 1000 × г в течение 10 с при 25 °C, чтобы убедиться, что все порошки осели на дне пробирки.
    3. Добавьте 30 мкл лизисного буфера в материалы для контроля качества и 20 мкл в образцы.
    4. Выдерживать в течение 10 минут при температуре 25 °C.
      ПРИМЕЧАНИЕ: При использовании буфера для лизиса клеток необходимо тщательно его перемешать. Перемешайте с помощью пипетирования 15 раз (наконечник 200 μл) и добавьте частицы и жидкость в осадок. Обеспечьте положительный контроль в шкафу биобезопасности класса II, обработанном ультрафиолетом, с последующим обеззараживанием 10% гипохлорита натрия.

4. Изотермическая амплификация РНК

  1. Предварительное уравновешивание амплификационного буфера
    1. Разморозьте амплификационный буфер и уравновесьте при температуре 25 °C ± 1 °C в течение 15 минут.
  2. Настройка управления
    1. Включайте как положительный, так и отрицательный контроль в каждый экспериментальный прогон.
  3. Маркировка туб
    1. Пометьте амплификационные трубки в соответствии с количеством образцов.
  4. Реакционная сборка
    1. Пипетка вводит 17 мкл амплификационного буфера в каждую пробирку с помощью калиброванного пипетки объемом 20 мкл. Добавьте 2 мкл образца или контрольный лизат непосредственно в буферную каплю.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что лизат поступает в буфер, не соприкасаясь со стенкой пробирки (при необходимости кратковременно центрифугируйте при 500 × г в течение 5 с). Немедленно закройте пробирки, чтобы предотвратить загрязнение аэрозолем.
  5. Термическая активация
    1. Инкубируйте пробирки в предварительно разогретом термоамплификаторе по следующей программе:
      Шаг 1: 95 °C в течение 2 мин (денатурация)
      Шаг 2: 42 °C в течение 2 мин (отжиг грунтовки).
  6. Ферментативная амплификация
    1. Добавьте 1 мкл амплификационного фермента в каждую пробирку и перемешайте, перевернув пробирку 5 раз, с последующим кратковременным центрифугированием (500 × г в течение 5 с). Немедленно перенесите трубки во второй предварительно нагретый термоамплификатор при температуре 42 °C на 45 минут.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Во избежание колебаний температуры используйте отдельные инкубаторы, один из которых установлен на 95 °C, а другой — на 42 °C. Для прогонов нескольких образцов поддерживайте температуру в оставшихся амплификационных трубках на уровне 42 °C, добавляя фермент амплификации в последнюю амплификационную трубку.

5. Анализ бокового потока

  1. Решение для предварительного уравновешивания детектирования
    1. Перенесите раствор для обнаружения в инкубатор при температуре 42 °C в течение 10 минут.
  2. Гомогенизация
    1. Нагнетайте раствор для обнаружения со скоростью 2 600 раз/мин в течение 15 с до тех пор, пока цвет не станет однородным.
  3. Поддержание температуры
    1. Перед использованием держите раствор для обнаружения при температуре 25 °C ± 2 °C в течение ≤30 минут.
  4. Инициация реакции
    1. Добавьте 30 μL раствора для детектирования в каждую амплификационную пробирку с помощью калиброванной пипетки объемом 20-200 μL.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Наконечник пипетки должен соприкасаться со стенкой трубки под углом 45° во время дозирования, чтобы предотвратить образование пузырьков.
  5. Гибридизация
    1. Перемешайте раствор с помощью пипетирования вверх и вниз 5 раз и инкубируйте в предварительно разогретом инкубаторе при температуре 53 °C в течение 10 минут.
  6. Подготовка пробирного прибора
    1. Извлеките платы обнаружения из пакетов из фольги.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Не прикасайтесь к зоне нанесения образца.
  7. Пример приложения
    1. Перенесите всю смесь в отверстие для отбора образцов карты обнаружения с помощью пипетки объемом 20-200 мкл.
    2. Немедленно поместите карту обнаружения в инкубатор при температуре 42 °C на 15 минут.

6. Анализ результатов

  1. Контролируемая среда для считывания
    1. Поддерживайте карты обнаружения в предварительно нагретом инкубаторе при температуре 53 °C во время визуальной интерпретации для стабилизации интенсивности сигнала.
  2. Протокол визуального перевода
    1. Считывайте результаты теста непосредственно путем визуального осмотра полос на картах обнаружения в течение 10-20 минут.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Результат становится недействительным через 20 минут.
  3. Матрица интерпретации для интерпретации результатов РГТ приведена в Дополнительной таблице 5.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Визуальная интерпретация результата показана на рисунке 1.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Согласованность методов флуоресцентного зондирования методом РГТ и ПЦР
Всего на НГ было проанализировано 310 образцов, в которых приняли участие 161 самка и 149 самцов. Коэффициент положительного совпадения составил 98,78% (95% ДИ: 93,39%-99,97%), в то время как коэффициент отрицательного совпадения составил 99,12% (95% ДИ: 96,87%-99,89%). Общий коэффициент совпадения составил 99,03% (95% ДИ: 97,20%-99,80%). Значение консистенции Каппа составило 0,975 (95% ДИ:...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом исследовании РГТ использовалась для обнаружения патогенов ИППП, включая НГ, КТ и НФК. При проведении в соответствии со строгими операционными протоколами анализ РГТ продемонстрировал тесное соответствие с установленными методами диагностики, такими как флуоресцентное зондирование ПЦР, секвенирование генов и методы культивирования выделения патогенов. Чувствительность и специфичность анализа РГТ были сопоставимы или превысили таковые у ранее опубликованных методологий, о чем свидет...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.

Благодарности

Мы благодарим Wuhan Zhongzhi Bio-technologies Inc. за реагенты и техническое руководство, предложенные для этого исследования.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
10% (w/v)  Препарат гипохлорита натрияв лаборатории.Подготовка в лаборатории.Разбавленный раствор хлорной извести для обеззараживания и инактивации болезнетворных микроорганизмов на оборудовании или поверхностях.
75% (v/v) этанолAnte Food Co., Ltd (Аньхой, Китай)http://www.antegroup.com/product_detail_cn/id/81.htmlВодный раствор этанола, используемый для дезинфекции поверхностей
Пипетка регулируемого объема (0,5– 10 μ L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101004Одноканальная микропипетка для точной работы с микролитровыми объемами.
Дозатор с регулируемым объемом (100– 1000 μ L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101014Одноканальный пипетка, откалиброванный для работы с большими объемами жидкости.
Пипетка с регулируемым объемом (10– 100 μ L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101008Одноканальный пипетка, оптимизированный для средних объемов, обычно используемый в протоколах молекулярной биологии.
Дозатор с регулируемым объемом (20– 200 μ L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101009Одноканальная пипетка для переноса средних объемов, подходит для точного аликвотирования реагентов.
Шкаф биобезопасности (HF Safe-1200)HealForce Bio-Meditech Holdings Limited (Гонконг, Китай)HF Safe-1200A класса II, обеспечивающий защиту персонала, образцов и окружающей среды при работе с патогенными микроорганизмами или культурами клеток.
Центрифужные трубкиHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Гуанчжоу, Китай)Гуанчжоу Yuexiu Medical Device Заявка No 20210414Для экстракции нуклеиновых кислот, гранулирования клеток и других лабораторных процедур.
Анализ нуклеиновых кислот Chamydia trachomatis (CT) (амплификация РНК-анализ бокового потока)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (Ухань, Китай)A.10.309-STD-RG-002Для качественного обнаружения РНК нуклеиновой кислоты Chamydia trachomatis в образцах мазков из гениталий и мочевыводящих путей.
CO2 ИнкубаторThermo Fisher Scientific (Asheville, США) LLCSN:300504406Используется для культивирования клеток, обеспечивая стабильную среду с контролируемой температурой (37° C), влажность и концентрацию CO2 (обычно 5%) для обеспечения оптимального роста клеток.
Тарелка для культур Corning Incorporated (Corning, США)50 мм и 9 ммДля адгезивной клеточной культуры и расширения.
Набор для обнаружения нуклеиновой кислоты к Chamydia trachomatis (CT) (ПЦР-флуоресцентное зондирование)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdСвидетельство о регистрации медицинского изделия No 20143402234Для качественного обнаружения нуклеиновой кислоты Chamydia trachomatis в образцах мазков из гениталий и мочевыводящих путей.
Набор для обнаружения нуклеиновой кислоты Neisseria gonorrhoeae (NG) (ПЦР-флуоресцентное зондирование)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdКитайское свидетельство о регистрации медицинского изделия No 20173401080Для качественного обнаружения нуклеиновой кислоты Neisseria gonorrhoeae в образцах мазков из гениталий и мочевыводящих путей.
Набор для обнаружения нуклеиновой кислоты к Ureaplasma urealyticum (UU) (ПЦР-флуоресцентное зондирование)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdСвидетельство о регистрации медицинского изделия в Китае No 20173400536Для качественного обнаружения нуклеиновой кислоты Ureaplasma urealyticum в образцах мазков из половых органов и мочевыводящих путей.
DMEM mediumThermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, США)11965092Для культуры Chlamydia trachomatis.
Наконечники для пипеток с фильтром (10 и мкм; L)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (Гуанчжоу, Китай)TF-10-BXLДля точного пипетирования в экспериментах.
Наконечники для пипеток с фильтром (200 μ L)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (Гуанчжоу, Китай)TF-200-BXLДля точного пипетирования в экспериментах.
Тампон для гениталийHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Гуанчжоу, Китай)Hz112Стерильные тампоны с ватным наконечником для сбора клинических образцов с поверхностей слизистой оболочки гениталий.
Фетальная бычья сыворотка Gibco (FBS)Thermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, США)10270106Для культуры Chlamydia trachomatis.
Стеклянные предметные стеклаHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Гуанчжоу, Китай)Guangzhou Yuexiu Medical Device Filing No. 20210414Стандартные стеклянные стекла с защитой от выцветания для подготовки клеточных мазков или срезов тканей, совместимые с протоколами окрашивания по Граму.
Goldenstar RT6 cDNA Synthesis Kit Ver2Beijing Tsingke Biotech Co., Ltd (Пекин, Китай)TSK302SДля синтеза первой цепи кДНК на первом этапе двухэтапной ОТ-ПЦР. Он содержит все реагенты, необходимые для синтеза кДНК из РНК.
Набор для окрашивания Gram Stain KitBaso Diagnostics, Inc. (Чжухай, Китай)BA4012Набор для окрашивания, содержащий кристаллический фиолетовый, йод, обесцвечиватель и сафранин для дифференциации Neisseria Gonorrhoeae.
IBM SPSS Statistics (V25.0)International Business Machines Corporation (Нью-Йорк, США)Версия 25.0Для анализа данных.
Инфракрасный стерилизаторHuaxixinrui (Qingdao) Analytical Instruments Co., Ltd.MJ-200WДля мгновенного обеззараживания инокуляционных петель или щипцов, сводя к минимуму перекрестное загрязнение в шкафах биобезопасности.
Петля инокуляцииBKMAM Biotechnology Co., Ltd. (Хунань, Китай)110306002Для переноса микробных образцов, полос или инокуляции.
Инвертированный микроскоп (IX-51)Корпорация Olympus (Токио, Япония)Код актива Labortory:  71807101Для наблюдения за адгезивными клетками или динамикой живых клеток в чашках для культур.
Автоматизированная система микробной масс-спектрометрии MALDI BiotyperBruker Daltonics GmbH & Co. KG (Бремен, Германия)Национальная регистрация импорта медицинского оборудования No 20182222017Система на основе масс-спектрометрии MALDI-Tof для быстрой идентификации микроорганизмов с помощью профилирования белков, позволяющая идентифицировать виды бактерий и грибов в клинических микробиологических лабораториях.
Клеточные линии Маккоясохранены в лаборатории.Хранится в лаборатории.Для культуры Chlamydia trachomatis.
Микропланшетный термостатический инкубатор Leopard70-4 (вместимость 4 планшета)Leaptec Scientific Instruments (Beijing) Co., Ltd.Leopard70-4Микропланшетный инкубатор, вмещающий до 4 стандартных микропланшетов, с температурным диапазоном от окружающей среды до 70°С; С,  Используется для этапов инкубации.
Микроскоп (OLYMPUS CX43)Корпорация Olympus (Токио, Япония)https://lifescience.evidentscientific.com.cn/zh/microscopes/upright/cx43-33/Для наблюдения за клиническими образцами (например, морфология клеток, окрашенные образцы).
Мини металлическая ванна MiniG-R100Leaptec Scientific Instruments (Beijing) Co., Ltd.MiniG-R100Для быстрой регулировки температуры во время эксперимента, например, нагрева, инкубации или завершения реакций в образцах небольшого объема.
Анализ нуклеиновых кислот Neisseria gonorrhoeae (NG) (амплификация РНК-анализ бокового потока)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (Ухань, Китай)A.10.309-STD-RG-001Для качественного обнаружения РНК нуклеиновой кислоты Neisseria gonorrhoeae в образцах мазков из гениталий и мочевыводящих путей.
Реагент для экстракции нуклеиновых кислотWuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (Ухань, Китай)A.10.105-SC-001Для экстракции, обогащения и очистки нуклеиновых кислот.
Среда для транспортировки образцовQIAGEN N.V. (Venlo, Netherlands)5128-1220Эта среда специально разработана для сбора, хранения и транспортировки клинических образцов, обеспечивая жизнеспособность Chlamydia trachomatis  и  Neisseria gonorrhoeae  для последующего диагностического тестирования.
Термостатическая центрифугаBeckman Coulter, Inc. (Brea, США)SN: MRZ21L037Для гранулирования клеточных, микробных или нуклеиновых кислот.
ТМ среднийШанхай Ихуа Медицинская наука & Technology Co., Ltd (Шанхай, Китай)Среда Shanghai Pu Medical Device Filing No. 20140081TM может быть использована для выделения, культивирования и идентификации Neisseria gonorrhoeae из клинических образцов, чтобы помочь в диагностике гонореи.
Трипсин-ЭДТА (0,25%)Thermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, США)25200072Для мягкой диссоциации адгезивных клеток во время субкультивирования или экспериментальных процедур.
Анализ нуклеиновых кислот Ureaplasma urealyticum (UU) (амплификация РНК-анализ бокового потока)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (Ухань, Китай)A.10.309-STD-RG-003Для качественного обнаружения РНК нуклеиновой кислоты Ureaplasma Urealyticum в образцах мазков из гениталий и мочевыводящих путей.
Набор для селективной выделения культуры, идентификации и чувствительности к лекарствам Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominisHebei Zhongaisheng Biotechnology Co., Ltd. (Хэбэй, Китай)Регистрационный номер медицинского устройства Hebei Medical Device No. 20152400168Для селективного выделения, культивирования, идентификации и определения чувствительности к лекарственным препаратам Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis.
Вихревой смесительXinkang Medical Instrument Co. Ltd (Цзянсу, Китай)XK80-AЛабораторное устройство для гомогенизации жидких образцов путем быстрого перемешивания.
Шкаф биобезопасности

Ссылки

  1. Hufstetler, K., Llata, E., Miele, K., Quilter, L. A. S. Clinical updates in sexually transmitted infections, 2024. J Womens Health (Larchmt). 33 (6), 827-837 (2024).
  2. Sunkavalli, A., McClure, R., Genco, C. Molecular regulatory mechanisms drive emergent pathogenetic properties of Neisseria gonorrhoeae. Microorganisms. 10 (5), 922(2022).
  3. Quillin, S. J., Seifert, H. S. Neisseria gonorrhoeae host adaptation and pathogenesis. Nat Rev Microbiol. 16 (4), 226-240 (2018).
  4. Rowley, J., et al. Chlamydia, gonorrhoea, trichomoniasis, and syphilis: global prevalence and incidence estimates, 2016. Bull World Health Organ. 97 (8), 548-562 (2016).
  5. Rittenschober-Boehm, J., et al. Intrauterine detection of Ureaplasma species after vaginal colonization in pregnancy and neonatal outcome. Neonatology. 121 (2), 187-194 (2024).
  6. Liu, T., et al. Analysis of Ureaplasma urealyticum, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium and Neisseria gonorrhoeae infections among obstetrics and gynecological outpatients in southwest China: a retrospective study. BMC Infect Dis. 22 (1), 283(2022).
  7. Song, J., Zhang, L., Zeng, L., Xu, X. Visualized lateral flow assay for dual viral RNA fragment detection. Anal Chem. 95 (30), 11187-11192 (2023).
  8. Dighe, K., Moitra, P., Alafeef, M., Gunaseelan, N., Pan, D. A rapid RNA extraction-free lateral flow assay for molecular point-of-care detection of SARS-CoV-2 augmented by chemical probes. Biosens Bioelectron. 200, 113900(2002).
  9. Liu, C. C., Yeung, C. Y., Chen, P. H., Yeh, M. K., Hou, S. Y. Salmonella detection using 16S ribosomal DNA/RNA probe-gold nanoparticles and lateral flow immunoassay. Food Chem. 141 (3), 2526-2532 (2013).
  10. Pereyre, S., Caméléna, F., Hénin, N., Berçot, B., Bébéar, C. Clinical performance of four multiplex real-time PCR kits detecting urogenital and sexually transmitted pathogens. Clin Microbiol Infect. 28 (5), 733.e7-733.e13 (2022).
  11. Morris, S. R., Bristow, C. C., Wierzbicki, M. R., et al. Performance of a single-use, rapid, point-of-care PCR device for the detection of Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, and Trichomonas vaginalis: a cross-sectional study. Lancet Infect Dis. 21 (5), 668-676 (2021).
  12. Pflüger, L. S., Nörz, D., Grunwald, M., et al. Analytical and clinical validation of a multiplex PCR assay for detection of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis including simultaneous LGV serotyping on an automated high-throughput PCR system. Microbiol Spectr. 12 (3), e0275623(2024).
  13. Huang, Y., et al. Droplet digital PCR (ddPCR) for the detection and quantification of Ureaplasma spp. BMC Infect Dis. 21 (1), 804(2021).
  14. Ma, Y., et al. Comparison of analytical sensitivity of DNA-based and RNA-based nucleic acid amplification tests for reproductive tract infection pathogens: implications for clinical applications. Microbiol Spectr. 11 (5), e0149723(2023).
  15. Van Der Pol, B., et al. Multicenter comparison of nucleic acid amplification tests for the diagnosis of rectal and oropharyngeal Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections. J Clin Microbiol. 60 (1), e0136321(2022).
  16. Luo, H., et al. An isothermal CRISPR-based diagnostic assay for Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis detection. Microbiol Spectr. 11 (6), e0046423(2023).
  17. Tu, Q., et al. Point-of-care detection of Neisseria gonorrhoeae based on RPA-CRISPR/Cas12a. AMB Express. 13 (1), 50(2023).
  18. Caruso, G., Giammanco, A., Virruso, R., Fasciana, T. Current and future trends in the laboratory diagnosis of sexually transmitted infections. Int J Environ Res Public Health. 18 (3), 1038(2021).
  19. Yang, J. L., et al. Comparison of an rRNA-based and DNA-based nucleic acid amplification test for the detection of Chlamydia trachomatis in trachoma. Br J Ophthalmol. 91 (3), 293-295 (2007).
  20. Luo, Z. G., Li, R. P., Wang, Y. B., Shang, X. J., Zhu, J. Y. Real-time fluorescence constant-temperature simultaneous amplification and testing of nucleic acid for detection of Mycoplasma genitalium infection in the genitourinary tract. Zhonghua Nan Ke Xue. 25 (6), Chinese 535-538 (2019).
  21. Zhang, T., et al. Light-up RNA aptamer signaling-CRISPR-Cas13a-based mix-and-read assays for profiling viable pathogenic bacteria. Biosens Bioelectron. 176, 112906(2021).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Видео скоро будет доступно
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.