Создание тканевых микрочипов на основе клея для исследования опухолей и заболеваний

Summary

Этот протокол описывает недорогое производство и эффективный метод валидации для создания ТМА на основе клея, обеспечивая удобную платформу для патологической диагностики для исследования опухолей и заболеваний.

Abstract

Технология тканевых микрочипов (TMA) — это высокопроизводительная платформа для одновременного обнаружения и анализа нескольких образцов тканей, что способствует эффективному исследованию биомаркеров опухолей и заболеваний. Тем не менее, традиционные методы построения ТМА часто сталкиваются с ограничениями, такими как сложность эксплуатации, трудоемкие процедуры и переменная точность. Для преодоления этих проблем был разработан метод конструирования ТМА на основе клея, обеспечивающий улучшенную фиксацию ядра ткани и повышенную структурную стабильность. Систематическая валидация включала гистологическую оценку (окрашивание HE), иммуногистохимическое профилирование белков-мишеней и анализ флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Результаты показали, что метод на основе клея поддерживает превосходную целостность среза, улучшенное соотношение сигнал/шум и обеспечивает постоянную воспроизводимость от партии к партии. Несмотря на то, что этот подход ограничен ручным управлением, он представляет собой надежный и экономичный вариант для производства TMA с умеренной производительностью. Этот метод особенно подходит для исследовательских сред, в которых гибкость и разнообразие образцов ценятся по сравнению с крупномасштабной автоматизацией, расширяя полезность ТМА в академических и диагностических условиях.

Introduction

Тканевый микрочип (ТМА) — это высокопроизводительный метод анализа образцов тканей ^1,2,3. Получают множественные ядра донорской ткани и переносят донорские парафиновые блоки в блоки тканей реципиента для одновременного дифференциального и сравнительного молекулярного анализа при теоретически одинаковых условиях производительности ^2,4. Классическим способом создания тканевого микрочипа (ТМА) является использование дырокола для извлечения ядер ткани из образца ткани донора и их последов....

Protocol

Все донорские блоки были получены из архивных патологических образцов, собранных в период с 2016 по 2018 год в Аффилированной народной больнице Хуайань No1 Нанкинского медицинского университета. Образцы были обезличены перед использованием и обработаны в соответствии с утвержденными протоколами (комитет по этике Аффилированной народной больницы Хуайань No1 Нанкинского медицинского университета, KY-2024-250-01).

1. Оценка и маркировка донорской ткани

1. Выбирайте тканевые блоки толщиной ≥5 мм и площадью ≥15 мм × 15 мм. Обеспечьте запас прочности 2 мм по краям и исключите участки с н....

Results

В настоящем исследовании высококачественные тканевые микрочипы были сконструированы с использованием клеевого метода. Чтобы проверить эффективность метода, был проведен ряд экспериментов, включая окрашивание H&E, иммуногистохимическое обнаружение специфических белков и анализ флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Важнейшим компонентом процесса конструирования является наличие точек тканевого ядра в ожидаемых положениях и на расстоянии друг от друга, которое оценивается с помощью визуального осмотра. Ви.......

Discussion

Являясь инновационным методом создания тканевых микрочипов (ТМА), метод клея показал значительные преимущества благодаря простоте строительных процедур и экономичности. По сравнению с традиционным методом игольчатой матрицы, который опирается на сложные инструменты^14,15, метод клея позволяет фиксировать образец путем склеивания, что может быть выполнено только с помощью основных инструментов, что значительно снижает технический п.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Набор для обнаружения рака молочной железы HER2	Anbiping	2502001	Набор для обнаружения рака молочной железы HER2 Антитело
CDHR4 Abcam		ab166914	CDHR4 антитело
CDK1 антитело	Abcam	ab265590	CDK1 антитело
CRTAC1 антитело	Abcam	ab254691	CRTAC1 антитело
DNASE1L3 антитело	Abcam	ab203669	DNASE1L3
Машина для встраивания	P.S.J MEDICAL	BM450A	Машина для встраивания
Полностью автоматический дегидратор тканей	Leica Biosystems	ASP3005	Полностью автоматический дегидратор тканей
Предметные стекла для микроскопа	Citotest	250124A1	Предметные стекла для микроскопа
Клей	TIZO	200	Клей
GPR146 антитела	Abcam	ab117104	Антитело GPR146 Антитело
IGSF10 Антитело	Abcam	ab197671	Антитело IGSF10
Антитело ITIH1 Антитело	Abcam	ab233032	Антитело ITIH1
Низкопрофильные лезвия для микротома	Thermo Fisher	3052835	Низкопрофильные лезвия для микротома
Маркерная ручка	Deli	SK109	Маркерная ручка
Microtome	Leica Biosystems	HistoCore BIOCUT	Микротом
Парафин	воск Solarbio	YA0012	Парафин
Антитело SMAD9 Abcam		ab262940	Антитело SMAD9
Антитело TARBP1 Антитело	Abcam	ab15896	Антитело TARBP1
ZCCHC24 антитело	Abcam	ab88756	ZCCHC24 антитело