Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Мышиный сбор жидкости для промывания носа без загрязнения крови

3.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68451

⸱

11 июля 2025 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Microbiology, Kindai University Faculty of Medicine, 2Department of Arts and Sciences, Kindai University Faculty of Medicine

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

В настоящем протоколе описан новый метод предотвращения загрязнения крови в жидкости для промывания носа мышей (НЛФ). Поскольку этот метод обеспечивает сбор НФОЮВ без загрязнения крови, он позволяет более точно выявлять иммунологические компоненты и различные респираторные патогены.

Аннотация

Образцы верхних дыхательных путей, включая жидкость для промывания носа (NLF) и мазки из носа, полезны для обнаружения патогенов, включая вирусы и бактерии, которые могут вызывать респираторные заболевания. НЛФ использовался для изучения клеточных и гуморальных компонентов дыхательной системы, например, для оценки индукции иммуноглобулина (Ig) А после вакцинации слизистой оболочки. У экспериментальных грызунов образцы НЛФ могут быть собраны либо трансфарингеальным, либо транстрахеальным путем. Несмотря на то, что трансфарингеальный путь, как сообщается, более эффективен при сборе образцов NLF, чем транстрахеальный путь, образцы NLF, собранные трансфарингеальным путем, часто были загрязнены кровью, что влияло на уровни клеточного и гуморального содержимого в исходных образцах NLF. Таким образом, данное исследование было направлено на создание нового метода сбора NLF у экспериментальных мышей для минимизации загрязнения крови. Вкратце, перед тем, как нижняя челюсть мыши была отделена, в рот помещали ватные шарики для впитывания крови. Когда кровотечение было остановлено, образцы NLF собирали путем введения микропипетки в хоану и промывания 200 мкл фосфатно-солевого буфера дважды (конечный объем: 400 мкл/мышь). Для выявления загрязнения крови был использован простой и чувствительный судебно-медицинский тест на люминол, который обнаруживает гемоглобин. Тест на люминол показал, что загрязнение крови было обнаружено в образцах НФОЮВ, собранных традиционным методом (без ватных шариков), но не в образцах, собранных новым методом (с ватными шариками). Из-за загрязнения крови общие концентрации IgA и IgG в образцах NLF были выше при традиционном методе, чем при новом; Известно, что кровь содержит гораздо более высокие уровни IgA и IgG, чем NLF. Таким образом, этот уникальный метод может быть использован в качестве простого и чувствительного метода для сбора образцов NLF у подопытных мышей для предотвращения заражения крови.

Введение

Как в клинических, так и в фундаментальных исследованиях наиболее важными для оценки результатов являются соответствующие методы сбора образцов. Промывание носа – это метод орошения, используемый для анализа клеточного и гуморального компонентов дыхательных путей 1,2,3. Клинически жидкость для промывания носа (НЛФ) используется в качестве эффективного неинвазивного образца для обнаружения биомаркеров, при этом несколько исследований поддерживают ее использование при различных респираторных заболеваниях, включая синусит, муковисцидоз и общие респираторныерасстройства. На экспериментальных животных NLF также использовался для изучения моделей респираторных заболеваний, включая грипп, коронавирусную болезнь-2019 (COVID-19) и аллергические заболевания 3,8,9. Этот метод широко используется для определения ключевых воспалительных биомаркеров, таких как полиморфноядерные клетки и цитокины, которые часто исследуются как индикаторы реакции на аллергены, астму и респираторные инфекции 10,11,12. В последнее время для изучения эффективности и безопасности потенциальных интраназальных вакцин-кандидатов образцы NLF часто собирали у подопытных животных, а уровни патогена и иммуноглобулина (Ig) в образцах NLF были количественно определены как индикаторы13.

У подопытных мышей НЛФ может быть собран с помощью трансфарингеального или транстрахеального метода. При трансфарингеальном методе голова мыши, включая нёбно-глоточную область, отделялась от гортани, а затем катетер вводился через глоточное отверстие в хоану для введения фосфатно-солевого буфера (PBS) и сбора NLF из ноздри14. Транстрахеальный метод получал доступ к дыхательным путям через трахею без отрыва головки, а НЛФ собирали из ноздри, сводя к минимуму риск заражения крови. Несмотря на то, что эти два основных метода были использованы для сбора NLF у экспериментальных мышей, оба традиционных метода имеют свои ограничения. Было продемонстрировано, что транстрахеальный метод дает меньшее количество НЛФ, чем трансфарингеальный метод, из-за утечки транстрахеальной жидкости лаважа в полость рта. Предыдущее исследование показало, что после введения PBS объем восстанавливаемой жидкости при NLF составлял 70%-80% и 90%-100% при транстрахеальном и трансфарингеальном методахсоответственно14. Несмотря на то, что трансфарингеальный метод можно считать лучшим при больших количествах НЛФ, чем транстрахеальный метод, заражение крови во время процедуры было в некоторойстепени неизбежным. Аналогичным образом, в нескольких исследованиях сообщалось, что образцы НЛФ часто были загрязнены высоким уровнем белков сыворотки крови 16,17,18. Это может препятствовать выявлению и количественной оценке биомаркеров, специфичных для НЛФ, респираторных заболеваний19. Это также может повлиять на концентрацию Ig, особенно IgA и IgG, в образцах NLF, поскольку кровь содержит большее количество IgA и IgG, чем NLF.

Для решения этих проблем данное исследование было направлено на создание уникального, простого и надежного трансфарингеального метода сбора образцов NLF у экспериментальных мышей, максимизируя выход образцов и сводя к минимуму заражение крови. Во время экспериментальных процессов ватные шарики помещались в рот мыши для предотвращения заражения крови, а затем вводился PBS для сбора образцов NLF из ноздри. Уровни контаминации крови при НЛФ определяли с помощью судебно-медицинской методики, хемилюминесценции на основе люминола, которая позволяет проводить полуколичественное определение уровней гемоглобина (Hb) в образцах НЛФ; люминольная реакция в НЛФ, собранном новым методом, была отрицательной. Таким образом, новый метод может улучшить качество образцов NLF для различных биологических экспериментов, таких как иммуноферментные анализы антител (ИФА), цитокиновые профили, иммунологические и медицинские биомаркеры, а также модели респираторных заболеваний мышей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все экспериментальные процедуры были одобрены Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию (IACUC) медицинского факультета Университета Киндай и выполнены в соответствии с критериями, изложенными Национальными институтами здравоохранения (NIH)20. В этом исследовании использовались 4-месячные самцы мышей C57BL/6. Информация о реактивах и оборудовании, использованных в данном исследовании, приведена в Таблице материалов.

1. Коллекция NLF

  1. Усыпьте мышь 5% изофлураном21 в соответствии с утвержденными в учреждении протоколами.
  2. Положите мышь на спину на хирургическую пластину и зафиксируйте ее, прижав все четыре конечности.
  3. Возьмите кровь из сердца с помощью шприца объемом 1 мл.
  4. Откройте брюшную полость с помощью ножниц, чтобы обнажить висцеральные органы и диафрагму.
  5. Надрежьте диафрагму и ребра с помощью ножниц, чтобы сделать видимым правое предсердие.
  6. Проколите правое предсердие с помощью ножниц, чтобы удалить кровь дальше.
  7. Поместите три ватных шарика в рот животного, одновременно вытягивая язык.
  8. Отделите нижнюю челюсть ножницами, поднимая голову (положение носа вверх), чтобы предотвратить заражение крови при НЛФ.
  9. Замените ватные шарики на новые, чтобы избежать загрязнения крови.
  10. После остановки кровотечения введите 200 мкл стерильного PBS в хоану и соберите НЛФ, выброшенный из ноздрей, в пробирку объемом 1,5 мл.
  11. Повторите шаг 1.10 еще раз.

2. Выявление контаминации крови методом хемилюминесценции люминола

  1. Растворите 1 мг люминола и 5 мг перекиси натрия (Na2O2) в 1 мл стерильной воды с помощью пробирки объемом 1,5 мл для приготовления исходного раствора.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Конечная концентрация составляет 1 мг/мл люминола и 5 мг/мл Na2O2.
  2. Накройте тюбик алюминиевой фольгой и храните при температуре 4 °C до использования.
  3. Стоковый раствор разбавить в 10 раз деионизированной водой, чтобы получился рабочий раствор.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Конечная концентрация составляет 0,1 мг/мл люминола и 0,5 мг/мл Na2O2.
  4. Пипетка 2 мкл образцов NLF в лунки 96-луночного планшета.
  5. Добавьте по 100 мкл разбавленного раствора люминола в каждую лунку.
  6. Кратковременно встряхните 96-луночный планшет, чтобы смешать образцы с раствором люминола.
  7. Непосредственно наблюдайте хемилюминесценцию люминола в темное время суток.
  8. При необходимости полуколичественно измерьте концентрацию Hb с помощью люминометра.

3. Количественное определение IgA и IgG с помощью ИФА

  1. Покройте лунки 96-луночных планшетов 100 мкл/лунка общим антителом против мышей IgA (20 нг/лунка; 200 нг/мл) или IgG (10 нг/лунка; 100 нг/мл) (см. Таблицу материалов).
  2. Закройте планшеты и инкубируйте их при температуре 4 °C в течение ночи.
  3. Каждый раз трижды вымойте пластины с помощью 300 μл/лунку промывочного буфера, содержащего 0,05% Tween 20 в PBS, а затем промокните пластины на бумажных полотенцах.
  4. Добавьте 200 мкл разбавителя анализа, содержащего 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 0,2% Tween 20 в PBS, в каждую лунку.
  5. Инкубируйте планшеты при комнатной температуре (RT) в течение 60 минут.
  6. Отсадите разбавитель аналитического раствора, а затем промокните пластины на бумажных полотенцах.
  7. Приготовьте 100 нг/мл стандартного IgA или IgG мыши с разбавителем анализа и сделайте двукратные серийные разведения: 50 нг/мл, 25 нг/мл, 12,5 нг/мл, 6,25 нг/мл, 3,13 нг/мл, 1,56 нг/мл и 0,78 нг/мл.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Требуемый объем каждого стандарта составляет 100 мкл на лунку.
  8. Разбавляйте образцы разбавителем анализа в соответствующих разведениях: сыворотке (104 - 106), NLF (10, 50, 200 и 500) и BALF (101 - 104).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Требуемый объем каждого образца составляет 100 μл на лунку.
  9. Добавьте 100 мкл стандартов IgA или IgG и образцы в соответствующие лунки.
  10. Инкубируйте планшеты при RT в течение 75 минут.
  11. Каждый раз вымойте тарелки с 300 мкл/лунку буфера для стирки, а затем промокните тарелки на бумажных полотенцах.
  12. Разбавляют пероксидаза-конъюгированное антитело к мышиному F(ab')2 (см. Таблицу материалов) растворителем анализа при соответствующем разведении:10 4-кратном разведении.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Необходимый объем составляет 100 μл на лунку.
  13. Добавьте 100 мкл разведенного пероксидазы-конъюгированного антитела F(ab')2 мыши в каждую лунку.
  14. Инкубируйте планшеты при RT в течение 75 минут.
  15. Каждый раз промойте пластины пятью раз с концентрацией 300 μл/лунку промывочного буфера, а затем промокните пластины на бумажных башнях.
  16. Добавьте в каждую лунку по 100 мкл субстратного раствора, содержащего тетраметилбензидин (ТМБ) и перекись водорода.
  17. Инкубируйте планшеты при RT в течение 5 минут.
  18. Добавьте в каждую лунку по 50 мкл стоп-раствора, 2 Н серной кислоты (2N H2SO4).
  19. Измерьте поглощение на длине волны 450 нм с помощью считывателя микропланшетов.
  20. Определите концентрации IgA и IgG в каждом образце с помощью стандартных кривых.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Используя традиционный или новый метод, образцы NLF были собраны у мышей C57BL/6 через трансфарингеальный путь. Как показано на рисунке 1, образцы NLF, собранные традиционным методом, имели слегка розовый оттенок (рисунок 1A); образцы НФОЮВ, собранные новым методом, были четкими (рис. 1B). Поскольку разница, по-видимому, была результатом контаминации крови в образцах НФОЮВ традиционным методом, контаминация крови в образцах НФОЮВ бы...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Промывание носа является ценным методом получения биохимической, цитологической и биологической информации о респираторных заболеваниях, таких как грипп и COVID-1923. Помимо идентификации различных инфильтрирующих клеток, неклеточный состав дыхательных путей может быть исследован по образцам NLF с использованием различных методов, таких как ИФА, иммуноблот и количественная полимеразная цепная реакция 1,19,24

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы благодарим Сэйити Омуру, доктора философии, Конг Тхань Нгуен, доктора медицины, доктора философии, Коту Моригути, доктора медицины, доктора философии, Реону Широ, доктора медицинских наук, и Сандеша Римала, доктора медицинских наук, кафедры микробиологии, медицинский факультет Университета Киндай, и Хиротаку Эбину, доктора философии, Шинья Окамуру, доктора философии, и Ясуо Йошиоку, доктора философии, группу вакцин против вирусов, лаборатории альянса инновационных исследований вакцин BIKEN, Научно-исследовательский институт микробных заболеваний, Университет Осаки, за полезные дискуссии. Мы также выражаем нашу благодарность членам Научно-исследовательского института естественных наук Университета Киндай за их прекрасную техническую помощь. Эта работа была поддержана Министерством образования, культуры, спорта, науки и технологий Японии через стипендию Monbukagakusho (MEXT, 2021-2025) (I.A.), грант на научные исследования KAKENHI от Японского общества содействия науке (JSPS) JP23K06493 (F.S.), JP21K07287/JP24K10500 (A.-M. P.) и JP22K18378/JP24K10163 (I.T.), а также грант на расширение исследований Университета Киндай KD2406 (F.S.) и KD2506 (I.T.).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Игла для фиксации животныхNatsume Seisakusho Co., Ltd., Токио, ЯпонияKN-358-AМы зафиксировали мышь с помощью игл для фиксации животных. Нержавеющая сталь; общая длина, 23 мм; и кончик иглы, 15 мм.
BD OptEIATM  Набор субстратных реагентов TMBBD Biosciences, Сан-Диего, Калифорния, США 555214Мы добавили 100 μ Л раствора субстрата TMB на лунку.
Bell JarNA NAМы использовали колокольчик для анестезии.
Прозрачные иммунонестерильные планшеты с плоским дном на 96 лунок ThermoFisher Scientific, Рочестер, штат Нью-Йорк, США 442404Мы использовали прозрачные иммунонестерильные 96-луночные планшеты с плоским дном и обработкой поверхности MaxiSorp для иммуноферментных анализов.
Ватный шарикSansho Co., Ltd., Токио, Япония94-1951Мы использовали ватные шарики, чтобы избежать заражения крови. Диаметр ватных шариков составлял 7 мм.
Фетальная бычья сывороткаSigma-Aldrich Co., Сент-Луис, Миссури, США172012-500 млМы добавили 10% фетальной бычьей сыворотки в разбавитель анализа.
Щипцы (Микропинцет для исследовательских экспериментов, изогнутый кончик)Sansho Co., Ltd., Токио, Япония91-1506Мы использовали щипцы для дисекции. Модель, HSC 551-10; и обернутая по всей длине, 105 мм.
Щипцы (прецизионный пинцет)Sansho Co., Ltd., Токио, Япония91-2772Мы использовали щипцы для дисекции. Модель, HSC 607-12; оберл по всей длине, 120 мм; и диаметр кончика, 0,3 мм.
Goat Anti-Mouse IgA-UNLBSouthernBiotech, Бирмингем, Алабама, США1040-01Мы покрыли прозрачные иммунонестерильные 96-луночные планшеты с плоским дном 100 μ L/лунка (20 нг/лунка) общего иммуноглобулина А.
Изофлуран Viatris Inc., Canonsburg, PA, СШАNAМы использовали изофлуран для анестезии.
Набор реагентов Luminol RectionFUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation, Осака, Япония124-06511Мы использовали набор реактивных реагентов люминола для обнаружения гемоглобина в образцах NLF.
MicrotubeWatson Co., Ltd., Tokyo, Japan131-7155CМы использовали микропробирки для сбора NLF и BALF (микропробирка объемом 1,5 мл с фиксирующим колпачком, круглое дно, soft touch-cap).
Milli-Q waterMerck KGaA, Дармштадт, ГерманияMilli-Q Direct 8Мы использовали воду MilliQ для приготовления люминолового ректиционного раствора.
Мини-шейкер PSU-2TBiosan Ltd., Рига, ЛатвияPSU-2TМы встряхивали 96-луночные планшеты с помощью Mini-Shaler PSU-2T.
Мышиный штаммCLEA Japan, Inc., Tokyo, JapanNAмы использовали 4-месячных мышей-самцов C57BL/6.
Nunc MicroWell 96-луночный, нунклон дельта-обработанный, плоскодонный микропланшетThermo Fisher Scientific Nunc A/S . Камструпвей, Роскилле, Дания136101Для испытания люминола мы использовали микропланшет NuncTM MicroWellTM 96-лунку, Nunclon Delta-Treated, Flat-Bottom.
Пероксидаза-конъюгированный AffiniPure F(ab')2 Fragment Goat Contra-Mouse IgG, F(ab')2 Fragment Specific (минимальная перекрестная реакция на белки сыворотки крови человека, крупного рогатого скота и лошади)Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA, США115-036-072Мы добавили 100 μ L пероксидаза-конъюгированного AffiniPure F(ab')2 фрагмента козы против мышиного IgG, F(ab')2 специфичным фрагментом, в качестве антитела для обнаружения (10 000-кратное разведение) к каждой лунке.
Фосфатно-солевой буферSigma-Aldrich Co., Сент-Луис, Миссури, СШАD8537-500ML Длясбора NLF и BALF мы использовали фосфатно-солевой буфер Dulbecco (модифицированный без хлорида кальция и хлорида магния, жидкий, стерильно-фильтрованный, пригодный для клеточной выбраковки).
Пипетки Watson Co., Ltd., Токио, ЯпонияNAМы использовали 200-μ L пипетка для промывания носа.
Наконечник для пипеткиWatson Co., Ltd., Токио, ЯпонияNAМы использовали 200-μ L наконечник для пипетки multifit для промывания носа.
Монолаурат полиоксиэтилена(20) сорбитана (Tween 20)FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation, Осака, Япония167-11515Мы добавили 0,05% Tween 20 в промывочный буфер и 0,2% Tween 20 в разбавитель для анализа.
Очищенное антитело к мышам IgG (минимальная x-реактивность) Goat BioLegend, Сан-Диего, Калифорния, США 405301Мы покрыли прозрачные нестерильные нестерильные 96-луночные планшеты с плоским дном 100 мкм; L/лунка (10 нг/лунка) общего иммуноглобулина G.
Маленькие ножницы, двухконечные SanshoCo., Ltd., Токио, Япония91-7005Мы использовали ножницы для рассечения. Модель, S-4A; и обернутая по всей длине, 115 мм.
Серная кислотаWako Pure Chemical Industries, Ltd, Токио, Япония192-04755Мы добавили 50 μ Л 2 Н серной кислоты в каждую лунку для остановки реакции.
Внутривенный катетер Surflo Terumo Corporation, Токио, Япония SR-FS2032Мы использовали внутривенный катетер surflo и ввели PBS в трахею для бронхоальвеолярного лаважа. катетер, 20G; длина катетера, 32 мм; внутренний диаметр катетера, 0,80 мм; внешний диаметр катетера, 1,1 мм; и внутренний нидель, 22G.
Хирургические прямые ножницыSansho Co., Ltd., Токио, Япония91-7004Мы использовали ножницы для диссекции. Модель, С-3Б; и обернутая по всей длине, 120 мм.
Сургилькальная пластинаNatsume Seisakusho Co., Ltd., Токио, ЯпонияKN-321-BДля вскрытия использовалась пробковая доска. Глубина, 20 см; ширина, 15 см; и высота 3 см.
Synergy H1 Гибридный многорежимный считыватель микропланшетов Agilent Technologies, Inc., Санта-Клара, Калифорния, СШАNAМы измерили поглощение образцов при длине волны 450 нм с помощью гибридного многорежимного считывателя микропланшетов Synergy H1.
Корпорация SyringeTerumo, Токио, Япония SS-01TМы использовали шприц объемом 1 мл для забора крови из сердца.
Нити  Niccho Kogyo Co., Ltd. Tokyo JapanNAМы перевязали катетер нитью, чтобы обеспечить правильное положение во время процедуры.

Ссылки

  1. Cortegano, I., et al. Age-dependent nasal immune responses in non-hospitalized bronchiolitis children. Front Immunol. 13, 1011607(2022).
  2. Yao, S., et al. Control of pathogenic effector T-cell activities in situ by PD-L1 expression on respiratory inflammatory dendritic cells during respiratory syncytial virus infection. Mucosal Immunol. 8 (4), 746-759 (2015).
  3. Gould, V. M. W., et al. Nasal IgA provides protection against human influenza challenge in volunteers with low serum influenza antibody titre. Front Microbiol. 8, 900(2017).
  4. Casado, B., Pannell, L. K., Viglio, S., Iadarola, P., Baraniuk, J. N. Analysis of the sinusitis nasal lavage fluid proteome using capillary liquid chromatography interfaced to electrospray ionization-quadrupole time of flight-tandem mass spectrometry. Electrophoresis. 25 (8), 1386-1393 (2004).
  5. Hull, J., Skinner, W., Robertson, C., Phelan, P. Elemental content of airway surface liquid from infants with cystic fibrosis. Am J Respir Crit Care Med. 157 (1), 10-14 (1998).
  6. Roponen, M., et al. Inflammatory mediators in nasal lavage, induced sputum and serum of employees with rheumatic and respiratory disorders. Eur Respir J. 18 (3), 542-548 (2001).
  7. Santos Galvão, C. E., et al. Inflammatory mediators in nasal lavage among school-age children from urban and rural areas in São Paulo, Brazil. São Paulo Med J. 122 (5), 204(2004).
  8. Winkler, E. S., et al. SARS-CoV-2 causes lung infection without severe disease in human ACE2 knock-in mice. J Virol. 96 (1), e01511-e01521 (2022).
  9. Kieran, T. J., et al. Exploring associations between viral titer measurements and disease outcomes in ferrets inoculated with 125 contemporary influenza A viruses. J Virol. 98 (2), e01661-e01723 (2024).
  10. Peden, D. B. The use of nasal lavage for objective measurement of irritant-induced nasal inflammation. Regul Toxicol Pharmacol. 24 (1 II), 68-75 (1996).
  11. Rusznak, C., et al. Mechanisms of pollution-induced allergy and asthma. Rev Fr Allergol Immunol Clin. 38 (7 Suppl. 1), 397-402 (1998).
  12. Laumbach, R. J., et al. Nasal effects of a mixture of volatile organic compounds and their ozone oxidation products. J Occup Environ Med. 47 (11), 1182-1189 (2005).
  13. Kawai, A., et al. The potential of neuraminidase as an antigen for nasal vaccines to increase cross-protection against influenza viruses. J Virol. 95 (20), 1180-1201 (2021).
  14. Cho, S. H., et al. Spontaneous eosinophilic nasal inflammation in a genetically-mutant mouse: Comparative study with an allergic inflammation model. PLoS One. 7 (4), e35114(2012).
  15. Puchta, A., Verschoor, C. P., Thurn, T., Bowdish, D. M. E. Characterization of inflammatory responses during intranasal colonization with Streptococcus pneumoniae. J Vis Exp. (83), e50490(2014).
  16. Ghafouri, B., et al. Comparative proteomics of nasal fluid in seasonal allergic rhinitis. J Proteome Res. 5 (2), 330-338 (2006).
  17. Lindahl, M., Ståhlbom, B., Svartz, J., Tagesson, C. Protein patterns of human nasal and bronchoalveolar lavage fluids analyzed with two-dimensional gel electrophoresis. Electrophoresis. 19 (18), 3222-3229 (1998).
  18. Lindahl, M., Ståhlbom, B., Tagesson, C. Identification of a new potential airway irritation marker, palate lung nasal epithelial clone protein, in human nasal lavage fluid with two-dimensional electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight. Electrophoresis. 22 (9), 1795-1800 (2001).
  19. Schoenebeck, B., et al. Improved preparation of nasal lavage fluid (NLF) as a noninvasive sample for proteomic biomarker discovery. Biochim Biophys Acta Proteins Proteomics. 1854 (7), 741-745 (2015).
  20. National Research Council (US) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Guide for the care and use of laboratory animals. , (2011).
  21. Roustan, A., et al. Evaluating methods of mouse euthanasia on the oocyte quality: Cervical dislocation versus isoflurane inhalation. Lab Anim. 46 (2), 167-169 (2012).
  22. Park, A. M., Tsunoda, I. Forensic luminol reaction for detecting fecal occult blood in experimental mice. Biotechniques. 65 (4), 227-230 (2018).
  23. Gao, K. M., et al. Human nasal wash RNA-Seq reveals distinct cell-specific innate immune responses in influenza versus SARS-CoV-2. JCI Insight. 6 (22), e152288(2021).
  24. Kirkeby, L., et al. Immunoglobulins in nasal secretions of healthy humans: Structural integrity of secretory immunoglobulin A1 (IgA1) and occurrence of neutralizing antibodies to IgA1 proteases of nasal bacteria. Clin Diagn Lab Immunol. 7 (1), 31-39 (2000).
  25. Webb, J. L., Creamer, J. I., Quickenden, T. I. A comparison of the presumptive luminol test for blood with four non-chemiluminescent forensic techniques. Luminescence. 21 (4), 214-220 (2006).
  26. Ahmad, I., et al. Exploring the role of platelets in virus-induced inflammatory demyelinating disease and myocarditis. Int J Mol Sci. 25 (6), 3460(2024).
  27. Olsson, T., Bergström, K., Thore, A. A sensitive method for determination of serum hemoglobin based on iso-luminol chemiluminescence. Clin Chim Acta. 122 (2), 125-133 (1982).
  28. Van der Meer, W., Dinnissen, J. M. B., de Keijzer, M. H. Evaluation of the Sysmex XT-2000i, a new automated haematology analyser. Sysmex. (2002), Available at: https://www.sysmex.co.jp/en/products_solutions/library/journal/vol12_no2/summary03.html (2002).
  29. Oshiro, I., Takenaka, T., Maeda, J. New method for hemoglobin determination by using sodium lauryl sulfate (SLS). Clin Biochem. 15 (2), 83-88 (1982).
  30. Hamaguchi, Y., Oshiro, I., Maeda, J. A study on reaction mechanism of sodium lauryl sulfate-hemoglobin (SLS-Hb), Part 1. Rinsho Byori. 40 (6), 649-654 (1992).
  31. McGee, D. W., McMurray, D. N. The effect of protein malnutrition on the IgA immune response in mice. Immunology. 63 (1), 25(1988).
  32. Castigli, E., et al. Impaired IgA class switching in APRIL-deficient mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (11), 3903-3908 (2004).
  33. Matsuo, K., et al. CCL28-deficient mice have reduced IgA antibody-secreting cells and an altered microbiota in the colon. J Immunol. 200 (2), 800-809 (2018).
  34. McDonald, K. G., et al. Aging impacts isolated lymphoid follicle development and function. Immun Ageing. 8 (1), 1-12 (2011).
  35. Abolins, S., et al. The comparative immunology of wild and laboratory mice, Mus musculus domesticus. Nat Commun. 8 (1), 1-13 (2017).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Сбор образцов у мышейфарингеальный путьтрахеальный путьиммуноглобулин Aиммуноглобулин Gлюминольная реакцияхемилюминесцентная детекцияанализ микробиома
Мышиный сбор жидкости для промывания носа без загрязнения крови
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.