Этот протокол позволяет выделить достаточное количество первичных хондроцитов в течение 6-8 часов, что способствует дальнейшим углубленным исследованиям биологии хряща и механизмов заболевания хряща.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Выделение in vitro и культивирование первичных хондроцитов мышей для биологии хряща
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Разрушение суставного хряща приводит к изменению активности хондроцитов, что является основным причинным фактором при различных заболеваниях хряща, включая остеоартрит (ОА) и ревматоидный артрит (РА). Поскольку хондроциты являются наиболее распространенным типом клеток в хрящах, углубленное изучение биологических свойств хондроцитов имеет важное значение для разработки эффективных стратегий лечения заболеваний. Выделение и культивирование первичных хондроцитов обеспечивают важный экспериментальный материал для исследования заболеваний хряща и способствуют разгадке механизмов повреждения и восстановления хряща. Этот протокол содержит подробное описание методов выделения in vitro и культивирования первичных хондроцитов, полученных от мышей. Используя оптимизированный протокол коллагеназы II, выделение хондроцитов может быть завершено в течение 8 ч для образцов хряща коленного сустава новорожденных мышей. Выход клеток составляет примерно 1-2 × 10³ клеток/мг хрящевой ткани, варьируясь в зависимости от свежести ткани и исходной плотности клеток; Выделенные клетки демонстрируют жизнеспособность >90%. В качестве примера в этом протоколе используются первичные хондроциты мыши, показывающие морфологические характеристики и статус адгезии клеток, культивируемых в течение 1, 2 и 5 дней после выделения. Количественная полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (ОТ-кПЦР) и вестерн-блоттинг показали, что лечение интерлейкином-1β (IL-1β) снижает коллаген II типа альфа 1 (Col2a1) и увеличивает экспрессию матриксной металлопептидазы 13 (Mmp13), подтверждая, что изолированные хондроциты реагируют на воспалительные стимулы. По сравнению с традиционными методами, в этом протоколе используется более высокая концентрация коллагеназы, чтобы уменьшить влияние длительного времени изоляции на жизнеспособность клеток, избегая при этом потенциального повреждения клеток в результате лечения трипсином. Полученные первичные хондроциты являются чистыми и жизнеспособными, пригодными для углубленных исследований механизмов, связанных с повреждением хряща, которые имеют важное значение для исследований in vitro и клинического лечения заболеваний хряща.
Введение
Разрушение суставного хряща является основной причиной различных заболеваний хрящей, таких как ОА и РА 1,2. Хондроциты, преобладающий тип клеток в хрящах, необходимы для поддержания гомеостаза и облегчения восстановления в ответ на травму3. Изменения в активности хондроцитов не только влияют на структурную целостность хряща, но и вызывают воспалительные реакции и прогрессирующую дегенерацию тканей4. Поэтому углубленное изучение биологических свойств хондроцитов имеет решающее значение для выяснения этиопатогенеза этих заболеваний.
В последние годы роль хондроцитов в воспалительных реакциях привлекает все большее внимание. Исследования показали, что воспалительные цитокины, такие как IL-1β и фактор некроза опухоли-α (TNF-α), значительно нарушают метаболические процессы хондроцитов, что приводит к увеличению экспрессии ферментов, разрушающих матрикс, и снижению синтеза матрикса 5,6,7. Эти изменения в конечном итоге приводят к постепенной дегенерации хряща и дисфункции суставов. Поэтому исследование биологических изменений хондроцитов в патологических условиях в рамках моделей in vitro стало особенно актуальным. Основываясь на традиционной двумерной (2D) монослойной культуре, последние достижения в трехмерной (3D) культуре хондроцитов и органоидных технологиях все чаще используются в исследованиях, связанных с хрящом. Эти усовершенствованные системы обеспечивают более физиологически релевантную микросреду и дают ценную информацию о поведении хондроцитовв контексте заболевания.
Выбор источника клеток критически определяет, точно ли результаты in vitro повторяют патофизиологию суставов. В отличие от иммортализированных линий хондроцитов или хрящевых эксплантов, первичные хондроциты сохраняют нативный генетический фон, механочувствительные кальциевые сигнальные пути и фенотипическую стабильность суставного хряща, тем самым демонстрируя превосходную хондрогенную способность и биологическое поведение, которое более точно отражает поведение резидентных хрящевых клеток.. Были задокументированы систематические различия в источниках передачи сигналов кальция и ключевых ионных каналах и нисходящих путях между первичными хондроцитами и клеточной линией ATDC510. Следовательно, при исследовании физиологии или патологии суставов приоритет следует отдавать первичным хондроцитам. Таким образом, оптимизация выделения и культивирования первичных хондроцитов имеет важное значение для точного моделирования биологии, связанной с заболеванием, и изучения потенциальных терапевтических препаратов 11,12,13,14,15. Тем не менее, существующие методы ставят под угрозу жизнеспособность клеток или целостность фенотипа из-за длительного пищеварения16,17.
В данной статье мы описываем протокол выделения in vitro и культивирования первичных хондроцитов, полученных из хрящевой ткани мыши, что позволяет быстро получить достаточное количество клеток. По сравнению с обычными протоколами с низкой концентрацией ферментов и длительным пищеварением, это исследование позволило оптимизировать условия переваривания ферментов и этапы предварительной обработки тканей. Такая оптимизация позволила значительно сократить время переваривания до 6-8 часов, предотвратив при этом потенциальное повреждение клеток при лечении трипсином15,17. С помощью этого метода можно получить примерно 1-2 × 10-3 хондроцитов из каждого мг хрящевой ткани мыши. Этот протокол является надежным руководством по выделению и культивированию первичных хондроцитов in vitro, обеспечивая надежную модель для исследований заболеваний хрящей.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике больницы Сиань Хунхуэй (No 202309009), а экспериментальные процедуры строго соответствовали принципам 3R по замене, сокращению и уточнению для экспериментов на животных.
На рисунке 1А показана принципиальная схема приготовления реагентов и оборудования. Таблица материалов содержит информацию о реагентах и оборудовании, используемых в данном протоколе.
1. Подопытные мыши
Примечание: В этом исследовании использовались четыре 3-дневные мыши дикого типа C57BL/6J.
- Поддерживайте постоянную температуру клеток 25 °C ± 2 °C и влажность 50%-60%, с циклом свет/темнота 12 часов. Обеспечьте стерильную мышиную диету класса без специфических патогенов (SPF) (стерилизованную облучением 60Co) и стерильную воду в неограниченном количестве.
- Соберите хрящ коленного сустава (~10 мг/мышь) у четырех 3-дневных мышей после смерти , чтобы выделить первичные хондроциты.
2. Сбор и обработка образцов хряща
- Обработка у мышей и диссекция тканей
- Усыпляйте новорожденных мышей в течение 3 дней после рождения. Простерилизовать поверхность тела, протерев 75% медицинским спиртом.
- Изолируйте коленные суставы мышей стерильными хирургическими инструментами. Поместите их в стерильный 1x PBS.
- Аккуратно иссекайте мышцы, кости, синовиальную оболочку и другие пролиферативные соединительные ткани, окружающие коленный сустав, стерильными хирургическими инструментами. Сохраняют только хрящевую ткань коленного сустава.
- Промойте образцы тканей 3x стерильным PBS. Выбросьте жидкость.
ПРИМЕЧАНИЕ: На рисунке 1B показана упрощенная принципиальная схема получения хрящевой ткани и предварительной обработки.
Рисунок 1: Упрощенный рабочий процесс подготовки материала и обработки образцов хряща. (A) Принципиальная схема настройки реагентов и оборудования, включая реагенты, расходные материалы и основные инструменты. (Б) Пошаговый протокол обработки хрящевых тканей из коленных суставов мыши. Сокращения: PBS = фосфатно-солевой буфер. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
3. Выделение и культивирование первичных хондроцитов
- Перенесите изолированную хрящевую ткань в новую 6-луночную клеточную культуральную пластину. С помощью стерильного хирургического лезвия No 11 измельчите ткань на мелкие кусочки размером примерно 0,25 мм3 дюйма. Промойте один раз предварительно охлажденным стерильным 1x PBS. Выбросьте жидкость.
- Добавьте 2 мл предварительно подогретого (37 °C) раствора для пищеварения, содержащего коллагеназу II высокой концентрации (25 мг/мл, растворенную в стерильной базальной среде Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mix F-12 [DMEM/F12]), чтобы покрыть тканевый блок.
- Инкубируйте планшет для культивирования клеток во увлажненном инкубаторе с 5% содержаниемCO2 при температуре 37 °C в течение 15 минут для ферментативного разложения. После инкубации выбросьте жидкость.
- Повторите шаги 3.2 и 3.3.
ПРИМЕЧАНИЕ: Расщепление ферментов высокой концентрации является предварительным этапом. Он направлен на предварительное переваривание ткани, частичное разрушение ее структуры для лучшего последующего переваривания, а также удаление спаек матрикса, которые могут существовать из-за разреза с периферии ткани. - Добавьте 2 мл предварительно подогретого (37 °C) раствора для пищеварения, содержащего коллагеназу II низкой концентрации (5 мг/мл, растворенную в стерильной базальной среде DMEM/F12), чтобы покрыть тканевый блок.
- Инкубируйте планшет для культивирования клеток во влажном инкубаторе с 5% содержаниемCO2 при температуре 37 °C в течение 6-8 часов для разложения и наблюдайте за ходом разделения клеток. Время от времени выполняйте медленное горизонтальное встряхивание (80-120 об/мин) или щадящее пипетирование для повышения эффективности лизиса.
ПРИМЕЧАНИЕ: Для неонатальной ткани мыши высвобождение клеток наблюдается около 3 ч, а полная изоляция достижима между 6 и 8 ч. Во время 6-8-часового лечения коллагеназой II наблюдайте за лизисом каждый час и прекращайте пищеварение, когда невооруженным глазом не видно явных фрагментов ткани и 90% клеток находятся в свободном состоянии и во взвешенном состоянии под микроскопом. В процессе пищеварения под оптическим микроскопом можно наблюдать, как вакуолиподобные хондроциты постепенно отделяются от массы хрящевой ткани. Этот шаг можно повторить несколько раз, чтобы свести к минимуму повреждение хондроцитов, вызванное длительным перевариванием, и раствор для разложения можно заменить свежим раствором для разложения коллагеназы II с низкой концентрацией для увеличения выхода клеток. - Отфильтруйте все продукты пищеварения через клеточное сетчатое фильтр 100 мкм в стерильную центрифужную пробирку объемом 50 мл.
ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте клеточный фильтр 100 мкм, чтобы предотвратить потерю агрегатов хондроцитов и увеличить выход. Остаточные фрагменты ткани удаляются в процессе обмена среды. - Промойте планшет для клеточной культуры стерильным 1x PBS. Снова профильтруйте через сетчатое фильтр.
- Соберите весь фильтрат с предыдущего этапа в центрифужную пробирку объемом 15 мл. Центрифугировать при 300 × г в течение 5 мин при комнатной температуре при выключенном тормозе. Выбросьте надосадочную жидкость после центрифугирования.
- Добавьте 2 мл стерильного 1x PBS и аккуратно суспендируйте осадок, слегка обдувая и отсасывая с помощью пипетки. Переложите в стерильную центрифужную пробирку объемом 15 мл. Центрифугировать при 300 × г в течение 5 мин при комнатной температуре при выключенном тормозе. Выбросьте надосадочную жидкость после центрифугирования.
- Повторно суспендируйте осадок с этапа 4.10 2 мл свежеприготовленной стерильной среды DMEM/F12, которая содержит 15% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% P/S. Пересчитайте собранную клеточную суспензию с помощью гемоцитометра, затем поместите клетки в стерильную 10-сантиметровую культуральную чашку со скоростью 2-2,5 × 105 клеток/см2. Доведите до конечного объема 10 мл с полной средой.
Примечание: Плотность посева хондроцитов должна составлять 2-2,5 ×10 5 клеток/см2, так как низкая или средняя плотность посева может привести к фенотипическому сдвигу суставных хондроцитов в сторону фибробластов. Пролиферативную активность и жизнеспособность выделенных первичных клеток можно оценить с помощью дополнительных анализов МТТ или экстракционного окрашивания трипановым синим (необязательный этап). - Инкубировать в увлажненном инкубаторе с 5% содержаниемCO2 при температуре 37 °C.
- Замените на свежую полноценную среду DMEM/F12 (содержащую 10% FBS, 1% P/S) после того, как под оптическим микроскопом будет наблюдаться полное прилегание клеток к стенке.
- Меняйте среду каждые 2 дня. Продолжайте культивирование до тех пор, пока слияние не достигнет 70%, после чего можно проводить последующие эксперименты.
ПРИМЕЧАНИЕ: Концентрация сыворотки в питательной среде может быть увеличена до 15% в зависимости от состояния клеток. На рисунке 2 показана упрощенная принципиальная схема переваривания хрящевой ткани, выделения и культивирования первичных клеток.
Рисунок 2: Упрощенная процедура переваривания хрящевой ткани, выделения первичных клеток и культивирования. Хрящи измельчали и непрерывно расщепляли раствором для разложения коллагеназы II в высокой концентрации в течение 15 мин, повторяли один раз, затем расщепляли раствором для разложения коллагеназы II в низкой концентрации в течение 6-8 ч для выделения клеток. Затем переваренную ткань фильтровали, а фильтрат собирали и центрифугировали. Клеточную гранулу промывали 1x PBS и культивировали в среде DMEM/F12 до тех пор, пока слияние не достигало 70%, после чего клетки были готовы к последующим экспериментам. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
4. Функциональная верификация первичных хондроцитов
- Метаболизм и изменения хондроцитов при воспалительных заболеваниях.
- Обрабатывайте клетки 10 нг/мл IL-1β в течение 24 ч для моделирования воспалительных состояний.
- Для ОТ-кПЦР и вестерн-блоттинга извлекают общую РНК или общий белок для определения метаболических показателей внеклеточного матрикса хондроцитов, таких как COL2A1, MMP13.
Примечание: На рисунке 3 показана принципиальная схема функциональной валидации первичных хондроцитов и последующих экспериментальных процедур. Информация об антителах представлена в Таблице материалов. Подробные процедуры вестерн-блоттинга и ОТ-кПЦР представлены в Таблице 1, Таблице 2, Таблице 3, Таблице 4 и Таблице 5. Все методы соответствовали стандартным протоколам11,18.
Рисунок 3: Принципиальная схема программы валидации функции первичного хондроцита. Воспалительные состояния, вызванные лечением IL-1β; влияние на хрящевые фенотипы, оцененные с помощью ОТ-кПЦР и вестерн-блоттинга. Сокращения: IL-1β = интерлейкин-1β; ОТ-кПЦР = количественная полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.
| Условия рабочего процесса Western Blotting | |
| Шаг | Состояние / Реагент |
| Подготовка геля SDS-PAGE | 8 % (мас./об.) Разделительный гель Tris-HCl |
| Стекинговый электрофорез | 80 В, 30–40 мин |
| Рассасывающий электрофорез | 120 В, 1–1,5 ч |
| Перенос | Полусухой, 15 В, 30–60 мин |
| Блокировка | Буфер для быстрой блокировки, 2 ч при комнатной температуре |
Таблица 1: Условия рабочего процесса вестерн-блоттинга. Краткое описание условий вестерн-блоттинга, включая состав SDS-PAGE, параметры электрофореза, настройки переноса и процедуру блокирования.
| Смесь реакций обратной транскрипции | |
| Компонент | Объем (μл) |
| 5× Буфер для реакции обратной транскриптазы | 4 |
| Дезоксинуклеотидная смесь (по 10 мМ) | 2 |
| Протекторный ингибитор РНКазы (40 Ед/мкл) | 0.5 |
| Обратная транскриптаза транскриптора (20 Ед/мкл) | 0.5 |
| Вода без нуклеаз | до 20 |
| Общий объем | 20 |
Таблица 2: Смесь реакций обратной транскрипции. Композиция реакции обратной транскрипции для синтеза кДНК.
| Информация о праймере для ОТ-кПЦР первичных хондроцитов мыши | ||||
| Название гена | Последовательность(5'3 ') | Температура отжига (°C) | ||
| mGapdh | Вперёд | TGGCCTTCCGTTCCTAC | 60 | |
| Обратный | GAGTTGCTGTTGAAGTCGCA | |||
| mCol2a1 | Вперёд | TGACCTCAACTACATGGTCTACA | 60 | |
| Обратный | CTTCCCATTCTCGGCCTTG | |||
| мМмп13 | Вперёд | CTTCTTCTTGTTGAGCTGGACTC | 60 | |
| Обратный | CTGTGGAGGTCACTGTAGACT | |||
Таблица 3: Информация о праймере для ОТ-кПЦР первичных хондроцитов мыши. Последовательности и температура отжига (60 °C) праймеров, используемых для количественного определения транскриптов Gapdh, Col2a1 и Mmp13 в первичных хондроцитах мышей.
| Реакционная смесь ОТ-кПЦР | |
| Компонент | Объем (μл) |
| 2 × SYBR Green кПЦР мастер-микс | 10 |
| Разбавленная матрица кДНК | 8 |
| Прямой праймер (10 μM) | 1 |
| Обратный праймер (10 μM) | 1 |
| Общий объем | 20 |
Таблица 4: Реакционная смесь ОТ-кПЦР. Реакционная смесь ОТ-кПЦР (20 мкл) с мастер-смесью SYBR Green, матрицей и праймерами.
| Протокол циклирования ОТ-кПЦР | ||
| Шаг | Температура (°C) | Время |
| Первичная денатурация (×1) | 95 | 10 мин |
| Денатурация (×40) | 95 | 5 с |
| Отжиг/удлинитель (×40) | 60 | 15 с |
| Добавочный номер (×40) | 72 | 30 с |
| Кривая расплава (×1) | 95 55 95 | 60 с 30 с 30 с |
Таблица 5: Протокол циклического анализа ОТ-кПЦР. Денатурация при 95 °C в течение 5 с, отжиг/растяжение при 60 °C в течение 15 с и окончательный анализ кривой расплава были выполнены в течение 40 циклов.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Как описано на рисунках 1, 2 и 3, мы выполнили протокол и успешно выделили первичные хондроциты из коленных суставов мышей. Из примерно 10 мг неонатального хряща мышей мы получили около 1 × 104 клеток с жизнеспособностью >90%. В первый день культивирования in vitro первичные хондроциты мышей демонстрировали округлую морфологию, при этом большинство клеток находились во взвешенном состоянии и е...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Выделение и культивирование первичных хондроцитов имеют важное значение для выяснения патофизиологии заболеваний хряща22. В культуре первичных хондроцитов оптимизация концентрации коллагеназы и времени переваривания имеет решающее значение, поскольку это уравновешивает деградацию внеклеточного матрикса при одновременном снижениипотенциального повреждения клеток. В данной работе мы описываем надежный и воспроизводимый метод выделения первичных хондроцитов из хрящевых тканей ...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.
Благодарности
Работа выполнена при поддержке Национального фонда естественных наук Китая (No 82370909). Рисунки 1, 2 и 3 были созданы с помощью Figdraw.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 1&раз; Порошок PBS (2 л) | Сервисбио | Г0002-2Л | |
| Чашки для клеточных культур 100 мм | Сервисбио | ПЗС-100 | |
| 100 μ Сито с ячейками М | Сангон Биотех | F613463-0001 | |
| Коническая центрифужная трубка 15 мл (стерильная, без ферментов) | Сервисбио | ЭП-1501-Дж | |
| Коническая центрифужная пробирка объемом 50 мл (стерильная, без ферментов) | Сервисбио | ЭП-5001-Дж | |
| 6-луночный планшет для культивирования клеток | Сервисбио | CCP-6H | |
| Поликлональное антитело к кролику Anti-COL2A1 | Иммуновей | YT1022 | Первичные антитела; ББ: 1/500 |
| Моноклональное антитело мыши против GAPDH | Протеинтек | 60004-1-ИГ | Первичные антитела; ВБ: 1/2000 |
| Поликлональное антитело к кролику Anti-MMP13 | Иммуновей | YT2796 | Первичные антитела; ББ: 1/1000 |
| Асептическая ультрачистая скамья | Термо Фишер | 51029704 | |
| Инкубатор для клеточных культур | Термо Фишер | 51033782 | |
| Коллагеназа II | Соларбио | С8150 | |
| Грунтовки на заказ (Gapdh, Col2a1, Mmp13) | Сангон Биотех | Разработано с использованием Primer BLAST | |
| Средний DMEM/F12 | Гиклон | SH30023.01 | |
| Фетальная бычья сыворотка | ЭксСелл | ФКС500 | |
| HRP-Goat Антимышиное поликлональное антитело | Иммуновей | РС0001 | вторичные антитела; ВБ: 1/10000 |
| HRP-Goat Anti-Rabbit поликлональные антитела | Иммуновей | РС0002 | вторичные антитела; ББ: 1/10000 |
| Инвертированный фазово-контрастный микроскоп | ОЛИМП | СКХ53 | |
| Микропипетка | Термо Фишер | ||
| Миниатюрная настольная центрифуга | САННЕ | СН-ТДЛ-6 | |
| Хирургическое лезвие No 11 | Сервисбио | QXJZ-11 | |
| Раствор пенициллин-стрептомицина (100X) | Бейотим | С0222 | |
| Набор инструментов для вскрытия мелких животных | Сервисбио | КХТЗ01 |
Ссылки
- Makris, E. A., Gomoll, A. H., Malizos, K. N., Hu, J. C., Athanasiou, K. A. Repair and tissue engineering techniques for articular cartilage. Nat Rev Rheumatol. 11 (1), 21-34 (2015).
- Bierma-Zeinstra, S., Van Middelkoop, M., Runhaar, J., Schiphof, D. Nonpharmacological and nonsurgical approaches in OA. Best Pract Res Clin Rheumatol. 34 (2), 101564(2020).
- Urlic, I., Ivkovic, A. Cell sources for cartilage repair-biological and clinical perspective. Cells. 10 (9), 2496(2021).
- Murphy, M. P., et al. Articular cartilage regeneration by activated skeletal stem cells. Nat Med. 26 (10), 1583-1592 (2020).
- Zhao, K., Ruan, J., Nie, L., Ye, X., Li, J. Effects of synovial macrophages in osteoarthritis. Front Immunol. 14, 1164137(2023).
- Wang, B. W., et al. Aucubin protects chondrocytes against IL-1β-induced apoptosis in vitro and inhibits osteoarthritis in a mouse model. Drug Des Devel Ther. 13, 3529-3538 (2019).
- Kuswanto, W., Baker, M. C. Repurposing drugs for the treatment of osteoarthritis. Osteoarthritis Cartilage. 32 (8), 886-895 (2024).
- Heywood, H. K., Thorpe, S. D., Jeropoulos, R. M., Caton, P. W., Lee, D. A. Modulation of sirtuins during monolayer chondrocyte culture influences cartilage regeneration upon transfer to a 3d culture environment. Front Bioeng Biotechnol. 10, 971932(2022).
- Piñeiro-Ramil, M., et al. Generation of human immortalized chondrocytes from osteoarthritic and healthy cartilage : A new tool for cartilage pathophysiology studies. Bone Joint Res. 12 (1), 46-57 (2023).
- Li, W., Zhou, Y., Han, L., Wang, L., Lucas Lu, X. Calcium signaling of primary chondrocytes and atdc5 chondrogenic cells under osmotic stress and mechanical stimulation. J Biomech. 145, 111388(2022).
- Zhao, Y., et al. Protein folding dependence on selenoprotein m contributes to steady cartilage extracellular matrix repressing ferroptosis via PERK/ATF4/CHAC1 axis. Osteoarthritis Cartilage. 33 (2), 261-275 (2025).
- Zhang, H., et al. Mechanical overloading promotes chondrocyte senescence and osteoarthritis development through downregulating FBXW7. Ann Rheum Dis. 81 (5), 676-686 (2022).
- Tang, H., et al. The IRF1/GBP5 axis promotes osteoarthritis progression by activating chondrocyte pyroptosis. J Orthop Translat. 44, 47-59 (2024).
- Bittner, N., et al. Primary osteoarthritis chondrocyte map of chromatin conformation reveals novel candidate effector genes. Ann Rheum Dis. 83 (8), 1048-1059 (2024).
- Ramser, A., Greene, E., Rath, N., Dridi, S. Primary growth plate chondrocyte isolation, culture, and characterization from the modern broiler. Poult Sci. 102 (1), 102254(2023).
- Mao, J., et al. Insufficiency of collagenases in establishment of primary chondrocyte culture from cartilage of elderly patients receiving total joint replacement. Cell Tissue Bank. 24 (4), 759-768 (2023).
- Lau, T. T., Peck, Y., Huang, W., Wang, D. A. Optimization of chondrocyte isolation and phenotype characterization for cartilage tissue engineering. Tissue Eng Part C Methods. 21 (2), 105-111 (2015).
- Pagani, S., et al. Rna extraction from cartilage: Issues, methods, tips. Int J Mol Sci. 24 (3), 2120(2023).
- Goldring, M. B., Otero, M., Tsuchimochi, K., Ijiri, K., Li, Y. Defining the roles of inflammatory and anabolic cytokines in cartilage metabolism. Ann Rheum Dis. 67 (Suppl 3), 75-82 (2008).
- Wang, G., et al. TGFbeta attenuates cartilage extracellular matrix degradation via enhancing FBXO6-mediated MMP14 ubiquitination. Ann Rheum Dis. 79 (8), 1111-1120 (2020).
- Pang, Y., Zhao, L., Ji, X., Guo, K., Yin, X. Analyses of transcriptomics upon IL-1β-stimulated mouse chondrocytes and the protective effect of catalpol through the NOD2/NB-κb/MAPK signaling pathway. Molecules. 28 (4), 1606(2023).
- Naranda, J., Gradisnik, L., Gorenjak, M., Vogrin, M., Maver, U. Isolation and characterization of human articular chondrocytes from surgical waste after total knee arthroplasty (TKA). PeerJ. 5, e3079(2017).
- Koyama, N., et al. Pluripotency of mesenchymal cells derived from synovial fluid in patients with temporomandibular joint disorder. Life Sci. 89 (19-20), 741-747 (2011).
- Lawrence, J. E. G., et al. Single-cell transcriptomics identifies chondrocyte differentiation dynamics in vivo and in vitro. Dev Cell. , (2025).
- Huang, C., et al. Single-cell transcriptomic analysis of chondrocytes in cartilage and pathogenesis of osteoarthritis. Genes Dis. 12 (2), 101241(2025).
- Wu, C. L., et al. Single cell transcriptomic analysis of human pluripotent stem cell chondrogenesis. Nat Commun. 12 (1), 362(2021).
- Zhang, H., Huang, J., Alahdal, M. Exosomes loaded with chondrogenic stimuli agents combined with 3d bioprinting hydrogel in the treatment of osteoarthritis and cartilage degeneration. Biomed Pharmacother. 168, 115715(2023).
- Mahapatra, C., Jin, G. Z., Kim, H. W. Alginate-hyaluronic acid-collagen composite hydrogel favorable for the culture of chondrocytes and their phenotype maintenance. Tissue Eng Regen Med. 13 (5), 538-546 (2016).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.