В настоящее время не хватает моделей in vivo , поддающихся скринингу лекарств против хронических бактериальных инфекций. В данной статье мы описываем протокол инфицирования раны клиническим изолятом Pseudomonas aeruginosa с целью создания персистирующей инфекции у личинок рыбок данио.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Моделирование стойкой инфекции Pseudomonas aeruginosa у раненых личинок данио-рерио
В этой статье
Уведомление об исправлении
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Краткое содержание
Аннотация
Pseudomonas aeruginosa является основным патогеном человека, особенно при хронических раневых инфекциях и хронических легочных инфекциях (особенно у пациентов с муковисцидозом (МВ)). Хронические бактериальные инфекции не поддаются лечению антибиотиками, и существует острая потребность в моделях хронических инфекций in vivo , поддающихся медикаментозному скринингу, для разработки эффективных методов лечения. Здесь мы описываем протокол инфицирования клиническим изолятом P. aeruginosa от пациента с муковисцидозом, конститутивно экспрессирующим зеленый флуоресцентный белок (GFP), для создания стойкой раневой инфекции у личинок рыбок данио. Эмбрионы, поврежденные хвостовым плавником, погружают в бактериальную суспензию на 1,5 ч, промывают и контролируют бактериальную нагрузку в течение 3 дней. Бактериальную нагрузку количественно оценивали ежедневно путем подсчета флуоресцентных колониеобразующих единиц (КОЕ) из лизированных инфицированных личинок, что способствовало персистирующей инфекции. Кроме того, стойкие бактерии P. aeruginosa были резистентны к лечению антибиотиками. Эта новая in vivo модель персистирующей инфекции P. aeruginosa дает возможность оценить эффективность инновационных методов лечения хронических инфекций.
Введение
Pseudomonas aeruginosa — грамотрицательная патогенная бактерия, ответственная за хроническую колонизацию у пациентов с муковисцидозом (МВ) и ранами 1,2. P. aeruginosa принадлежит к группе патогенов ESKAPEE и признана Всемирной организацией здравоохранения в качестве критического приоритета для новых терапевтических средств3. Хронические бактериальные инфекции трудно поддаются лечению антибиотиками из-за адаптивной лекарственной устойчивости, которая связана с множеством факторов, включая биопленочный образ жизни, замедленный рост, низк....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все эксперименты с рыбками данио-рерио, описанные в настоящем исследовании, были проведены в Университете Монпелье в соответствии с принципами 3R (Замена, Сокращение и Уточнение) в соответствии с рекомендациями Европейского Союза по обращению с лабораторными животными и были одобрены Управлением санитарии и статистики в области здравоохранения и Этического комитета по использованию животных в области научных плавников под ссылочным документом CEEA-LR-B4-172-37. Все эксперименты с инфекцией проводились на эмбрионах в период до 5 дней после оплодотворения. Разведение взрослых рыбок данио (Danio rerio) из рыб AB или Golden Lines соответствовало междунар....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Эмбрион рыбки данио является подходящей моделью для мониторинга персистирующей инфекции изолятами муковисцидоза P. aeruginosa
Мы использовали режим погружения поврежденных эмбрионов для оценки in vivo вирулентности трех изолятов CF (A6520, B6513 и C6490)9. Мы также оценили поведение хорошо охарактеризованного позднего изолята CF, RP73, известного своей долгосрочной колонизацией дыхательных путей мышей14,15
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Моделирование бактериальной хронической инфекции in vivo имеет важное значение для понимания патогенеза и оценки эффективности лечения. Здесь мы создали модель персистирующей раневой инфекции у рыбок данио, подходящую для тестирования препаратов против P. aeruginosa. Это восполняет пробел в современной методологии из-за недостатка in vivo моделей, поддающихся скринингу лекарств против хронических бактериальных инфекций. Примечательно, что эта модель имитирует о.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.
Благодарности
Мы благодарим Стефана Пона (Stéphane Pont) (LPHI, Монпелье), который внес значительный вклад в разработку методологии и получение результатов, показанных на рисунке 3, как описано в сопутствующей статье13. Благодарим P. Plésiat (Французский национальный референс-центр по устойчивости к противомикробным препаратам, Безансон, Франция) за предоставление клинических штаммов A6520, B6513 и C6490 и A. Bragonzi (Милан, Италия) за предоставление штамма RP73. Благодарим К. Гонсалеса и В. Гулиана за водный модельный комплекс ZEFIX от ЛФИ. Эта работа была поддержана Vaincre La Mucoviscidose (RF20200502703....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Этил-3-аминобензоат метансульфонат | Сигма | Е50521 | |
| Поршневые шарики | Eppendorf, Dutscher | 33522 | |
| морская соль | Мгновенный океан, аквариумные системы | 218035 | |
| Тритон | Евромедекс | 2000-Б |
Ссылки
- Garcia-Clemente, M., et al. Impact of Pseudomonas aeruginosa Infection on Patients with Chronic Inflammatory Airway Diseases. J Clin Med. 9 (12), 3800(2020).
- Serra, R., et al. Chronic wound infections: the r....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Исправление
Formal Correction: Erratum: Modeling Persistent Pseudomonas aeruginosa Infection in Wounded Zebrafish Larvae
Posted by JoVE Editors on 7/21/2025. Citeable Link.
This corrects the article 10.3791/68464
