Методическая статья

Ookluc: линия Plasmodium berghei для идентификации соединений, блокирующих трансмиссию

716 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68466

⸱

11 июля 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Parasitology, Institute of Biomedical Sciences, University of São Paulo

В этой статье

Краткое содержание

Половое развитие плазмодия происходит в средней кишке комара. Нацеливание на половые стадии паразита является многообещающей стратегией для блокирования передачи. Мы разработали Ookluc, трансгенный P. berghei , экспрессирующий нанолюциферазу после образования зиготы, что позволяет проводить высокопроизводительный скрининг соединений, блокирующих трансмиссию. В этой статье подробно описаны методы скрининга с помощью Ookluc.

Аннотация

Малярия остается одной из мировых проблем здравоохранения; В 2023 году по всему миру было зарегистрировано 263 миллиона случаев заболевания и 597 000 смертей. Жизненный цикл паразита сложен, и для эффективного контроля над болезнью необходимы целенаправленные вмешательства на критических стадиях развития. Стратегии блокирования передачи инфекции (ТБ) направлены на прерывание передачи плазмодия путем воздействия либо на комаров-переносчиков, либо на половые стадии паразита с помощью вакцин и лекарств. Мероприятия по борьбе с туберкулезом могут быть сосредоточены на гаметоцитах в организме человека-хозяина или на других формах средней кишки комара, таких как гаметы, зиготы, оокинеты и ооцисты.

Разработка новых подходов к борьбе с туберкулезом сталкивается со значительными трудностями. Изучение половых стадий паразита по своей природе является сложной задачей, и высокопроизводительный скрининг (HTS) на гаметоцитоцидные соединения в основном основан на культурах P. falciparum . Тем не менее, надежные инструменты in vitro для оценки вмешательств на поздних сексуальных стадиях остаются ограниченными. Чтобы ускорить открытие противотуберкулезных соединений, наша группа разработала новый анализ HTS для активации гаметоцитов и оплодотворения с использованием P. berghei, мышиной модели инфекции Plasmodium . Трансгенный паразит Ookluc экспрессирует нанолюциферазу исключительно после образования зиготы, с пиком люминесценции во время развития оокинеты. Этот анализ, основанный на люминесценции, обеспечивает количественное считывание дифференцировки гаметы в зиготу и дифференцировки зиготы в оокинету, где повышенная люминесценция напрямую коррелирует с образованием оокинеты. В данной видеостатье представлены методы скрининга соединений малярийного туберкулеза с помощью Ookluc.

Введение

Малярия – это древняя болезнь, которая глубоко повлияла на историю человечества. Только в 2023 году в 85 эндемичных странах было зарегистрировано 263 миллиона случаев заболевания, в результате которых 597 000 человекумерли1. Заболевание вызывается простейшими паразитами рода Plasmodium, относящимися к типу Apicomplexa. Среди пяти видов, которые заражают человека — P. falciparum, P. vivax, P. knowlesi, P. ovale и P. malariae — на P. falciparum и P. vivax приходится большинство случаев. P. falciparum ассоциируется с тяжелой малярией и преобладает в Африке, в то время как P. vivax имеет самое широкое географическое распространение, будучи более распространенным в Южной Америке и Азии2.

Сложность жизненного цикла плазмодия , который включает в себя несколько стадий развития у двух хозяев, способствует его передаче и персистенции в эндемичных регионах3. Важнейшим этапом в этом цикле является переход от человека к комарам-переносчикам, что делает его ключевой мишенью для вмешательства. Передача начинается внутри человека-хозяина, где развиваются половые стадии Plasmodium , когда мерозоиты дифференцируются в мужские и женские гаметоциты. При проглатывании комаром сигналы окружающей среды запускают активацию гаметоцитов и образование гамет, что приводит к оплодотворению в просвете средней кишки. Образовавшаяся зигота дифференцируется в подвижную оокинету, которая активно проникает в эпителий средней кишки и развивается в ооцисту внутри базальной пластинки. Внутри ооцисты образуются тысячи спорозоитов, которые впоследствии высвобождаются в гемолимфу, что позволяет им мигрировать в слюнные железы. Там спорозоиты проникают в ацинарные клетки и перемещаются в просвет железы, где они остаются до тех пор, пока комар не примет следующую кровавую пищу, передавая паразитана кожу человека.

Поиск новых стратегий блокирования передачи инфекции (ТБ) имеет решающее значение, учитывая ограниченность имеющихся лекарств и растущую устойчивость к противомалярийным препаратам5. Традиционные методы скрининга, такие как инфекции комаров, ручной микроскопический анализ или введение радиоактивного гипоксантина, трудоемки, трудно поддаются стандартизации и не подходят для высокопроизводительных применений 6,7. Более поздние подходы, использующие флуоресцентное обнаружение (например, окрашивание ДНК или репортеры GFP), повысили эффективность, однако остаются значительные проблемы в оценке соединений, нацеленных на половыестадии паразита.

Для решения этих проблембыла разработана трансгенная линия P. berghei, экспрессирующая нанолюциферазу (nLuc), получившая название Ookluc8. В этой системе ген nLuc находится под контролем оокинет-специфичного промотора белка, связанного с циркумспорозоитом и TRAP (CTRP) P. berghei, который активируется в зиготах, что приводит к производству nLuc, начинающемуся примерно через 6 ч после активации гамет и достигающему пика через 24 ч после конверсионного анализа8. Такая конструкция позволяет проводить автоматизированную количественную оценку жизнеспособности паразитов на основе люминесценции вскоре после оплодотворения, устраняя необходимость в прямых манипуляциях с векторами, и способствует высокопроизводительному скринингу тысяч соединений8.

Несмотря на то, что экспрессия nLuc происходит независимо от жизнеспособности ookinete, ограничивая обнаружение соединений, которые специфически влияют на более поздние стадии, такие как морфогенез ookinete, Ookluc остается очень эффективным для идентификации соединений туберкулеза, которые нацелены на гаметогенез, половую рекомбинацию или выживание паразитов внутри комаров, включая агенты, которые индуцируют производство активных форм кислорода. Предыдущие исследования подтвердили эту систему, успешно идентифицировав соединения, которые, как известно, ингибируют половые стадии Plasmodium 9,10,11,12,13,14,15. Таким образом, Ookluc представляет собой надежную и инновационную платформу для высокопроизводительного скрининга половых стадий Plasmodium, способствуя открытию новых соединений туберкулеза и продвижению усилий по элиминации малярии в ближайшие годы8. В этом протоколе описывается применение системы Уклюка для скрининга лекарственных препаратов и определения ингибиторной концентрации 50% (IC50).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты на животных проводились в строгом соответствии с этическими принципами и были одобрены Комитетом по этике использования животных Института биомедицинских наук Университета Сан-Паулу (CEUA-ICB/USP). Животные размещались и содержались в соответствии со стандартами, установленными этим комитетом. Эксперименты с генетически модифицированными паразитами Plasmodium , а также их криоконсервированное хранение при температуре -80 °C проводились в соответствии с правилами, установленными Институциональным комитетом по биобезопасности Института биомедицинских наук Университета Сан-Паулу (CIBio-ICB/USP). В этом исследовании были использованы в общей сложности три самки мышей BALB/c в возрасте 3-5 недель - две инфицированные и одна неинфицированная.

1. Материалы и реактивы

  1. Приготовьте оокинетическую среду, добавив в RPMI 1640 0,025 М HEPES, пенициллин-стрептомицин-неомицин (PSN), 50 мг/л гипоксантина и 100 мкМ ксантуреновой кислоты. Отрегулируйте pH до 8,3 8,16.
  2. Готовьте рабочий раствор для люминесцентного анализа путем смешивания 1 объема субстрата с 50 объемами буфера для лизиса, предоставленного в системе люциферазного анализа.
  3. Установите инкубатор на 21 °C.

2. Забор инфекции и паразитированной крови

  1. Инфицировать двух самок мышей BALB/c (в возрасте 4-6 недель) 150 мкл криоконсервированного штамма Ookluc путем внутрибрюшинной инъекции (день 0).
    ПРИМЕЧАНИЕ: В этом протоколе мы рекомендуем использовать мышей BALB/c из-за их доступности и широкого использования в помещениях для животных. Тем не менее, любая линия мышей дикого типа, которая восприимчива к инфекции P. berghei и поддерживает гаметоцитогенез, должна быть пригодна для использования.
  2. Начиная с 3-го дня, оценивайте паразитемию и гаметоцитемию с помощью микроскопического исследования мазков крови, окрашенных по шкале Гимзы.
  3. Когда паразитемия и гаметоцитемия достигают примерно 5% и 0,5% соответственно (обычно на 4-й день), соберите кровь с помощью пункции сердца с помощью гепаринизированных шприцев и объедините кровь у обеих инфицированных мышей.
    Примечание: Хотя это трансгенная линия P. berghei, ее рост и профиль гаметоцитемии аналогичны тем, которые наблюдаются у штамма ANKA. В этом контексте доля гаметоцитов по отношению к общей паразитемии примерно в 10 раз ниже.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В идеале составной планшет (см. ниже) подготавливается до сбора паразитированной крови, поэтому кровь пипетируется в планшет сразу после сбора. Если кровь мыши должна быть собрана в другом помещении или по какой-либо другой причине ее невозможно немедленно дозировать в компаундную тарелку, собранную кровь следует хранить при температуре 37 °C не более 30 минут.

3. Конверсионный анализ - скрининг в 96-луночных планшетах

ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы обеспечить стабильные результаты, весь эксперимент следует повторить три раза в разные дни для подтверждения результатов.

  1. Приготовьте образцы соединения с использованием среды оокинете в качестве разбавителя (конечная концентрация 10 мкМ). Разбавьте составной материал до 1 мМ и подготовьте рабочие образцы, разбавив 1 мМ массу 1:100 v:v в среде Ookinete. Для одного анализа в двух экземплярах готовят итоговый объем 200 мкл рабочего образца.
  2. Если соединение разбавлено в растворителе, отличном от воды, включите контрольный образец, содержащий растворитель, разведенный в среде оокинета, в той же пропорции, что и в испытуемом образце, чтобы убедиться, что любое наблюдаемое ингибирование относится к соединению, а не к растворителю.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В качестве примера мы проверим 90 соединений.
  3. Используя два 96-луночных планшета, поместите по 80 мкл образцов в каждую лунку, как показано на рисунке 1, в двух экземплярах (две пластины): Положительный контроль: 80 мкл оокинетической среды; Отрицательный контроль: 80 мкл оокинетической среды; Контроль растворителя: 80 μл оокинетической среды с 1% ДМСО; Образцы: 80 мкл 10 мкМ каждого соединения в среде оокинете.

figure-protocol-1
Рисунок 1: Схематическое изображение компоновки 96-луночного планшета, предназначенного для грохочения компаундов. Схема планшета включает положительный контроль (C+), отрицательный контроль (C-), контроль плюс растворитель разбавления (C+S) и 90 тестовых соединений (S1-S90). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

  1. Добавьте 4 мкл паразитированной крови мыши в каждую лунку 96-луночного планшета в соотношении 1:20 v:v, за исключением отрицательного контроля (C-). Аккуратно гомогенизируйте с помощью пипетирования.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Учитывая потери, мы рассчитываем потребность в ~400 мкл паразитированной крови для каждой пластины.
  2. Для отрицательного контроля добавьте неинфицированную кровь мыши в соотношении 1:20 (v:v, кровь:образец). Аккуратно гомогенизируйте.
  3. Инкубировать при 21 °C в течение 6 или 24 часов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: активность nLuc обнаруживается через 6 часов инкубации и достигает пика на 24 час после анализа8. Анализ не способен идентифицировать соединения с активностью после образования зигот, такие как соединения, которые ингибируют морфогенез оокинеты, поскольку сформированные зиготы будут накапливать nLuc независимо от завершения морфогенеза. Таким образом, 6-часовой инкубации достаточно для обнаружения всех соединений, которые блокируют активность nLuc путем ингибирования гаметогенеза, половой рекомбинации или имеют раннюю цитотоксичность. Тем не менее, мы обычно предпочитаем инкубацию продолжительностью 24 часа, чтобы получить более сильные сигналы и лучшее соотношение сигнал/шум.

4. Люминесцентный анализ

  1. После инкубационного периода гомогенизируйте образцы с помощью пипетирования вверх и вниз, чтобы обеспечить тщательное смешивание крови и среды.
  2. Непосредственно перед использованием приготовьте смесь буфера для лизиса/субстрата люциферазы в соотношении 1:50 (v:v, субстрат:буфер для лизиса).
  3. Смешайте смесь субстрата с образцами в соотношении 1:1 (v:v), обеспечивая бережное перемешивание во избежание образования пузырьков. Выдерживать при 37 °C в течение 3-5 минут.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В этом примере мы добавили 84 μL буфера substrate:lysis в каждую лунку.
  4. Перенесите образцы на 96-луночный белый планшет с плоским дном. Измерьте люминесценцию с помощью планшетного ридера. Используйте следующую конфигурацию параметров: фильтр излучения: линза; время интервала измерения: 1 с на скважину.

5. Анализ данных - скрининг

  1. После анализа люминесценции запишите полученные исходные данные (Рисунок 2).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Получаемые относительные световые единицы (RLU) зависят от используемого люминометра. В нашем случае значения RLU для положительного контроля варьировались от 10 000 до 500 000 в 24-часовом инкубационном анализе. Более короткое время инкубации (6 часов) приведет к снижению значений RLU.

figure-protocol-2
Рисунок 2: Результаты, полученные в результате моделирования конверсионного анализа для скрининга соединений. На изображении представлены смоделированные показания люминесценции из анализа, проведенного после конверсии оокинетов в присутствии панели из 90 соединений. Более низкие значения Relative Light Unit указывают на снижение образования оокинеты. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

  1. Используя электронную таблицу, рассчитайте среднее значение каждого измерения, используя приведенную ниже формулу. Замените XX адресом первой измерительной ячейки, а YY — адресом второй измерительной ячейки. Повторите формулу для всех образцов.
    =(СРЕДНИЙ(XX:YY)
  2. Преобразуйте данные в % ингибирования для лучшего анализа результатов. В таблице используйте приведенную ниже формулу. Замените A значением RLU образца, а B — значением RLU управления. Повторите формулу для всех тестируемых составов:
    = 1 - (А/В) х 100
    ПРИМЕЧАНИЕ: Данные будут выглядеть так, как показано на рисунке 3.

figure-protocol-3
Рисунок 3: Результаты, полученные в результате моделирования конверсионного анализа для скрининга соединений, представлены в процентах ингибирования для каждого соединения. Процент ингибирования конверсии для каждого тестируемого соединения, рассчитанный как описано выше. Выделенные квадраты обозначают соединения, которые способствуют ингибированию преобразования более чем на 95%. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

  1. Определите соединения, которые проявляют ингибирование более чем на 95%.
    Примечание: Эти соединения проявляют высокую активность в отношении половых стадий при концентрации 10 мкМ. В нашем примере мы обнаружили пять соединений с высокой активностью против половых стадий.
  2. Для идентифицированных соединений выполните определение IC50 , как описано ниже.

6. Конверсионный анализ - определение IC 50

  1. Заражайте мышей Ookluc и собирайте паразитированную кровь, как описано в разделе 2.
  2. Приготовьте образцы с использованием оокинетической среды в качестве разбавителя. Используют исходную концентрацию, при которой наблюдается 100% ингибирование превращения соединением.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку активные соединения были идентифицированы в скрининге с концентрацией 10 мкМ, мы используем 20 мкМ в качестве начальной концентрации для первой кривой «доза-реакция». Для получения точной кривой «доза-реакция» важно, чтобы анализ включал начальные концентрации, которые приводят к 100% ингибированию конверсии, и конечные концентрации, которые приводят к 0% ингибированию. Такой подход обеспечивает точный расчет IC50 . Первая кривая «доза-реакция» будет информировать о самых низких концентрациях соединения с ~100% ингибированием. В этом протоколе в качестве примера мы будем использовать PyAz90, недавно идентифицированный с помощью Ookluc13.
  3. В 96-луночный планшет добавьте в трех экземплярах (см. рис. 4): положительный контроль (C+): 80 мкл окинетической среды; Отрицательный контроль (С-): 80 мкл окинетической среды; Первое разведение образца (Cpd D1): 160 мкл соединения в начальной концентрации в среде оокинета, что приводит к 100% ингибированию конверсии; Лунки от D2 до D12: 80 μл оокинетовой среды.
  4. Проводите двукратные последовательные разведения путем пипетирования 80 мкл лунки D1 в D2, гомогенизации и пипетирования 80 мкл лунки D2 в D3 и так далее. Убедитесь, что во всех лунках имеется 80 мкл общего объема, поэтому выбросьте последние 80 мкл, удаленные из лунки D12.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Проведите эксперимент по крайней мере с тремя повторами для всех образцов, как показано на рисунке 4. Чтобы обеспечить надежность и воспроизводимость результатов, весь эксперимент следует повторять каждый раз в три отдельных дня с использованием вновь инфицированных животных.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если на первом экране результаты показывают отсутствие влияния растворителя на конверсию, нет необходимости включать эти элементы контроля в серийные разведения. В противном случае необходимо также включить серийное разведение растворителя.

figure-protocol-4
Иллюстрация 4: Схема расположения 96-луночных планшетов, предназначенных для определения компаунда IC50 . Схема планшетов включает в себя положительный контроль (C+), отрицательный контроль (C-) и составные (Cpd) разведения (от D1 до D12). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

  1. Добавьте паразитированную кровь мыши в 96-луночный планшет в соотношении 1:20 v:v. Аккуратно гомогенизируйте с помощью пипетирования.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Всего в каждую лунку будет добавлено 4 мкл паразитированной крови, за исключением отрицательного контроля (С-). Учитывая потери, мы рассчитываем потребность в ~200 мкл паразитированной крови для каждого исследуемого соединения.
  2. В лунки с отрицательным результатом добавьте неинфицированную кровь мыши в соотношении 1:20 (v:v, кровь:образец). Аккуратно гомогенизируйте.
  3. Инкубировать при 21 °C в течение 6 или 24 часов.
  4. Проведите анализ люминесценции, как описано в разделе 4.

7. Анализ данных - определение IC 50

ПРИМЕЧАНИЕ: IC50 определяется как концентрация соединения, необходимая для ингибирования 50% биологической активности/ингибирования. В этом анализе ингибирование относится к снижению конверсии оокинеты. Данные представлены в виде сигмоидальной кривой "доза-реакция", где ось X представляет концентрацию соединения (логарифмическое преобразование), а ось Y представляет % ингибирования.

  1. Рассчитайте % ингибирования, как описано в разделе 5, шаг 5.3.
  2. Откройте программу и создайте таблицу XY.
  3. Задайте для параметра Ось Y значение Введите 3 повторяющихся значения в параллельных подстолбцах.
  4. Вставьте данные, где X представляет концентрацию соединения, а Y представляет % ингибирования (рис. 5A).
  5. В строке меню нажмите на кнопку Анализ и выберите Нелинейная регрессия (аппроксимация кривой), а затем Кривые Доза-реакция - Ингибиция и [ингибитор] в сравнении с нормализованной реакцией -- переменный наклон; нажмите OK.
  6. На левой панели обратите внимание на кривую «доза-реакция» данных. Примените желаемую персонализацию, например изменение цвета и форматы точек.
  7. Найдите таблицу аппроксимации Nonlin , чтобы найти рассчитанный IC50 и 95% доверительный интервал (95% ДИ) (рис. 5B).

figure-protocol-5
Рисунок 5: Кривая «доза-реакция» PyAz90. Процентное ингибирование измеряли в зависимости от концентрации PyAz90 (мкМ) по логарифмической шкале. Сигмоидальная кривая представляет собой подогнанные данные, использованные для определения IC50, который составил 0,013 мкМ (95% доверительный интервал: 0,012-0,014 мкМ). Точки данных представляют собой среднее значение ± стандартную ошибку среднего значения по результатам экспериментальных повторов. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этой цифры.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Генерация паразитов Ookluc позволяет оценить новые кандидаты в противотуберкулезные препараты с точки зрения, не предлагаемой существующими анализами, в частности, при оценке влияния соединений на активацию гамет, оплодотворениеи образование зигот. Рисунки 2 и 3 иллюстрируют способность метода проводить скрининг группы соединений по половым стадиям паразита с высо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Большинство методов HTS, используемых для разработки новых противотуберкулезных соединений, сосредоточены на ингибировании гаметоцитогенеза или гаметоцитидной активности. На сегодняшний день разработаны только две модели P. berghei, позволяющие оценить функцию гаметоцитов, гаметогенез, образование зиготы и морфогенез оокинеты5.

Одна из этих моделей похожа на Ookluc, поскольку в ней используется флуоресцентный репортер,...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.

Благодарности

Этот проект был поддержан грантами от Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP 2021/06769-0) и Instituto Serrapilheira (грант G-1709-16618).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Диметилсульфоксид (ДМСО)Сигма-ОлдричД8418
GraphPad Prism версии 10.0.0 для WindowsGraphPad Software, Бостон, Массачусетс, США
Гепариновая натриевая соль из слизистой оболочки кишечника свиньиСигма-ОлдричН3393
ГЕПЕС (1 М)Термо Сайентиал15630106
ГипоксантинСигма-ОлдричН9636
Мышей------Самки мышей BALB/c в возрасте от 3 до 5 недель
Система анализа нано-Glo люциферазыКомпания PromegaН1110
Пенициллин &минус; Стрептомицин &минус; Стабилизированный раствор неомицинаСигма-ОлдричП4083
Считыватель микропланшетов POLARStar Omega BMG Labtech----
RPMI 1640 Medium, добавка GlutaMAXТермо Сайентиал61870036
Ксантуреновая кислотаСигма-ОлдричD120804

Ссылки

  1. World malaria report 2024: addressing inequity in the global malaria response. , World Health Organization. https://www.who.int/teams/global-malaria-programme/reports/world-malaria-report-2024 (2025).
  2. Miller, L. H., Ackerman, H. C., Su, X., Wellems, T. E. Malaria biology and disease pathogenesis: insights for new treatments. Nature Med. 19 (2), 156-167 (2013).
  3. Tsoumani, M. E., Voyiatzaki, C., Efstathiou, A. Malaria Vaccines: From the Past towards the mRNA Vaccine Era. Vaccines. 11 (9), 1452(2023).
  4. Ménard, R., et al. Looking under the skin: the first steps in malarial infection and immunity. Nature Rev. Microbiol. 11 (10), 701-712 (2013).
  5. Appetecchia, F., et al. Transmission-blocking strategies for malaria eradication: Recent advances in small-molecule drug development. Pharmaceuticals. 17 (7), 962(2024).
  6. Baniecki, M. L., Wirth, D. F., Clardy, J. High-throughput Plasmodium falciparum growth assay for malaria drug discovery. Antimicrob Agents Chemother. 51 (2), 716-723 (2007).
  7. Delves, M., et al. The activities of current antimalarial drugs on the life cycle stages of Plasmodium: A comparative study with human and rodent parasites. PLoS Med. 9 (2), e1001169(2012).
  8. Calit, J., et al. Screening the pathogen box for molecules active against Plasmodium sexual stages using a new nanoluciferase-based transgenic line of P. berghei identifies transmission-blocking compounds. Antimicrob Agents Chemother. 62 (11), e01053-e01118 (2018).
  9. Calit, J., et al. Novel transmission-blocking antimalarials identified by high-throughput screening of Plasmodium berghei Ookluc. Antimicrob Agents Chemother. 67 (4), e0146522(2023).
  10. Lima, M. N. N., et al. Integrative multi-kinase approach for the identification of potent antiplasmodial hits. Front Chem. 7, 773(2019).
  11. Ferreira, L. T., et al. Computational chemogenomics drug repositioning strategy enables the discovery of epirubicin as a new repurposed hit for Plasmodium falciparum and P. vivax. Antimicrob Agents Chemother. 64 (9), aac.02041-aac.02119 (2020).
  12. Krishnan, K., et al. Torin 2 derivative, NCATS-SM3710, has potent multistage antimalarial activity through inhibition of P. falciparum phosphatidylinositol 4-kinase (Pf ACS Pharmacol). Transl Sci. 3 (5), 948-964 (2020).
  13. Calit, J., et al. Pyrimidine azepine targets the Plasmodium bc1 complex and displays multistage antimalarial activity. JACS Au. 4 (10), 3942-3952 (2024).
  14. Lima, M. N., et al. Chalcones as a basis for computer-aided drug design: Innovative approaches to tackle malaria. Future Med Chem. 11 (20), 2635-2646 (2019).
  15. Ferreira, L. T., et al. A novel 4-aminoquinoline chemotype with multistage antimalarial activity and lack of cross-resistance with PfCRT and PfMDR1 mutants. PLoS Pathog. 20 (10), e1012627(2024).
  16. Blagborough, A. M., et al. Assessing transmission blockade in Plasmodium spp. Methods Mol Biol. 923, 577-600 (2013).
  17. Azevedo, R., et al. Bioluminescence method for in vitro screening of Plasmodium transmission-blocking compounds. Antimicrob Agents Chemother. 61 (6), aac.02699-aac.02616 (2017).
  18. Gaitán, X. A., et al. Characterisation of the merozoite thrombospondin related anonymous protein (MTRAP) of Plasmodium berghei as a transmission-blocking antigen. Mem Inst Oswaldo Cruz. , 119(2024).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

IC50

Похожие статьи