Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Изучение анатомических особенностей ганглиозных клеток сетчатки при индуцированной N-метил-D-аспарагиновой кислотой (NMDA) эксайтотоксичностью

1.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68537

⸱

19 сентября 2025 г.

 ,  , 
1Ruiz Department of Ophthalmology and Visual Science, McGovern Medical School, University of Texas Health Science Center at Houston (UTHealth)

В этой статье

Краткое содержание

В данной работе мы описываем использование метода мечения генетически направленной щелочной фосфатазы (АФ) для изучения анатомических особенностей и фенотипов сетчатки мышей в условиях NMDA-индуцированной эксайтотоксичности. В сочетании с несколькими подтип-специфичными репортерными линиями ганглиозных клеток сетчатки (РГК) мы раскрываем новые фенотипы у умирающих РГК на протяжении всего дегенеративного процесса.

Аннотация

Ганглиозные клетки сетчатки (РГК) — это выходные нейроны сетчатки, отвечающие за передачу визуальной информации в мозг. В зрелой сетчатке мыши на основе геномных, морфологических и функциональных характеристик было идентифицировано более 40 типов РГК. Дегенерация РГК является отличительной чертой различных изнурительных заболеваний сетчатки, включая глаукому и травматическую нейропатию зрительного нерва. Получение более глубокого понимания клеточных и молекулярных механизмов, лежащих в основе дегенерации, выживаемости и устойчивости РГК при различных заболеваниях, имеет решающее значение для разработки эффективных терапевтических вмешательств. Для изучения дегенерации РГК мы применили простую, но мощную методику, ранее широко использовавшуюся в исследованиях развития сетчатки для морфологии РГК и центральной проекции. В данной работе мы применяем этот метод для оценки анатомических фенотипов РГК в условиях NMDA-индуцированной эксайтотоксичности. Этот подход позволяет визуализировать большое количество вырождающихся РГК с течением времени, что позволяет нам составить карту последовательности дегенеративных событий, идентифицировать характерные фенотипы умирающих РГК и различать РГК, устойчивые к повреждениям, вызванным NMDA.

Введение

Черепно-мозговая травма (ЧМТ) — это внезапная травма, которая вызывает повреждение нейронов головного мозга. При тяжелых формах ЧМТ, таких как вызванные автомобильными авариями или спортивными столкновениями и взрывными травмами в результате взрыва, механические силы могут нарушить клеточную архитектуру, что приведет к воспалению, окислительному стрессу, эксайтотоксичности и, в конечном итоге, к гибели нейронов.

Сетчатка, наиболее доступная часть центральной нервной системы (ЦНС), послужила моделью системы ЧМТ для изучения молекулярных механизмов, лежащих в основе эксайтотоксичности, и разработки стратегий терапевтического вмешательства 3,4,5. Наиболее подходящими моделями сетчатки для исследований ЧМТ являются модель сдавливания зрительного нерва и индуцированная N-метил-D-аспарагиновой кислотой (NMDA) эксайтотоксичность сетчатки. В модели сетчатки, индуцированной NMDA-индуцированной эксайтотоксичностью, ганглиозные клетки сетчатки (РГК) были идентифицированы как наиболее восприимчивый тип нейронов сетчатки, поскольку РГК используют глутамат в качестве основного возбуждающего нейромедиатора и различные типы глутамат-рецепторов, включая рецепторы AMPA (AMPARs), рецепторы KAPA (KAPARs) и рецепторы NMDA, для запуска аксонного потенциала6. В дополнение к РГК, другие клетки сетчатки и нейронные сети также могут быть затронуты NMDA-лечением 7,8,9. Внутристекловидное введение NMDA вызывает длительное открытие NMDA-рецептора, что приводит к избыточному притоку кальция в клетки, вызывая сверхвозбуждающую активность нейронов и дисбаланс гомеостаза кальция 10,11,12,13.

NMDA-рецептор представляет собой гетеромерный комплекс, состоящий из трех субъединиц: GluN1, GluN2 и GluN3 14,15,16,17,18. GluN1, кодируемый Grin1, содержит восемь изоформ у мышей из-за альтернативного сплайсинга Grin1. Существует четыре различные субъединицы GluN2 (a-d), которые кодируются четырьмя отдельными генами: Grin2a-2d. Существуют две различные субъединицы GluN3 (a и b), которые кодируются Grin3a и 3b. Согласно данным scRNA-seq19,20, Grin1 высоко экспрессируется в большинстве подтипов RGC (рисунок 1A), а также в нескольких подтипах амакриновых клеток (AC) со слабым или умеренным уровнем экспрессии (рисунок 1B). Grin2a обогащен меньшим количеством подтипов RGC и AC, в то время как Grin2b экспрессируется умеренно в большинстве подтипов RGC и многих подтипах AC (рис. 1A, B). Уровни экспрессии Grin2c, Grin2d и Grin3b в РГК и АК крайне низки (рис. 1A, B). Экспрессия Grin3a может наблюдаться в нескольких подтипах RGC и слабо в некоторых AC (рис. 1A, B). В дополнение к роли NMDA-рецепторов, эксайтотоксичность, вызванная притоком кальция через кальциевые проницаемые AMPAR, была описана в нескольких моделях заболеваний21. Экспрессия субъединиц NMDA-рецепторов может дать ключ к пониманию того, почему индуцированная NMDA эксайтотоксичность нацелена в основном на RGC, а также на ACs 9,10,14,22,23.

Традиционные методы оценки общих NMDA-индуцированных фенотипов сетчатки включают окрашивание гематоксилином и эозином (H&E) для выявления гистологических аномалий, анализ TUNEL на гибель клеток и иммунофлуоресцентное (ИФ) окрашивание с использованием биомаркера, специфичного для клеточного типа 8,10,24,25,26 . На клеточном уровне методы конфокальной визуализации и наполнения красителями использовались для исследования последовательности событий в умирающих РГК в NMDA-индуцированной модели сетчатки. Эти методы предоставили ценную информацию о субклеточных компартментах умирающих РГК и позволили идентифицировать типы устойчивых РГК, которые выживают при NMDA-инсульте27,28.

В данной работе мы используем окрашивание генетически активированной щелочной фосфатазой (АФ) для исследования анатомических особенностей и фенотипов нейронов сетчатки мышей в условиях NMDA-индуцированной эксайтотоксичности 29,30,31. Обоснование выбора этого метода обусловлено его простотой, экономичностью и способностью получить всесторонний обзор анатомических особенностей подтипов нейронов по всей сетчатке, что делает его хорошо подходящим для общих оценок и крупномасштабных сравнительных анализов. Этот подход позволяет по-новому взглянуть на то, как различные, генетически маркированные нейроны сетчатки реагируют на NMDA как на валовом, так и на субклеточном уровнях. Мы ожидаем, что эта стратегия будет широко применима для оценки морфологических изменений в различных моделях заболеваний, которые влияют на архитектуру нейронов и синаптическую организацию 4,26,32,33.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры на животных соответствовали Политике Службы общественного здравоохранения США по гуманному уходу и использованию лабораторных животных и были одобрены Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию в Медицинской школе Макговерна Техасского университета в Хьюстоне. Составы растворов приведены в Таблице материалов.

1. Инъекция тамоксифена

  1. Смешайте 30 мг тамоксифена с 30 мкл этанола. В кипящей воде нагрейте 1 мл подсолнечного масла и смесь тамоксифена и этанола.
  2. После того как тамоксифен растворится в этаноле, быстро добавьте в раствор тамоксифена 1 мл подогретого подсолнечного масла. Хорошо перемешайте с помощью пипетки.
  3. Использовались мыши обоего пола в разном возрасте от 2 до 6 месяцев. Раствор тамоксифена вводят в дозе 100 мкг/г массы тела внутрибрюшинно с помощью инсулинового шприца. Определяют количество инъекций тамоксифена исходя из мышиной линии. В этом протоколе тамоксифен вводился один раз в день в течение четырех дней подряд.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку раствор тамоксифена смешивается с густым маслом, с ним трудно обращаться с помощью шприца, который имеет съемную иглу. Таким образом, для инъекции тамоксифена предпочтение отдает инсулиновый шприц с прикрепленной иглой.
  4. Размещайте мышей группами не более 5 человек в индивидуально проветриваемых клетках. до инъекции NMDA.

2. Введение раствора NMDA в глаза мыши

  1. Приготовьте 20 мМ раствора NMDA в стерильном 1x PBS. Промойте нано-инъектор с прикрепленной иглой 35G с использованием 100% этанола 20x, затем промойте еще 20x стерильной сверхчистой водой. Заполните наноинъектор 1 μл раствора NMDA.
  2. Обезболивайте мышь путем внутрибрюшинного введения кетамина/ксилазина в смеси раствора 1X PBS (80/10 мг на кг массы тела). Оценивайте потерю сознания по рефлекторной реакции отмены на щипание хвоста и пальца ног.
  3. Поместите мышь под наркозом на стереомикроскоп. Расположите мышь правым глазом вверх, а носом — правой стороной. Нанесите каплю 0,5% раствора пропаракаина гидрохлорида на правое глазное яблоко для местной анестезии.
  4. С помощью стерильной инъекционной иглы 30G проколите лимб в положении «7 часов», создав небольшое отверстие. Следите за положением и направлением иглы под стереомикроскопом. Убедитесь, что размер инъекционной иглы немного больше, чем у наноинъекционной иглы, чтобы обеспечить легкое введение.
  5. Осторожно извлеките иглу для инъекции из глазного яблока и утилизируйте ее надлежащим образом. Используйте стереомикроскоп для наведения, введите наноинъекционную иглу в стекловидное тело через лимб под углом 45°.
  6. Медленно введите 1 мкл раствора NMDA в стекловидное тело. После инъекции держите наноинъекционную иглу в стекловидном теле примерно 10 с, чтобы предотвратить отток введенного раствора.
  7. Осторожно и медленно извлеките наноинъекционную иглу из глаза. Нанесите 0,5% эритромициновую офтальмологическую мазь на роговицу инъекционного глаза.
  8. Поместите мышь в клетку на грелку. Наблюдайте за мышью каждые 15 минут, пока она полностью не оправится от анестезии. Держите мышь в течение одной-двух недель до сбора ткани.

3. Сбор тканей и окрашивание щелочной фосфатазой (АФ)

  1. Усыпьте мышь с помощью асфиксииСО2 с последующим вывихом шейки матки. Аккуратно разрежьте мышцы, соединяющиеся с глазным яблоком и зрительным нервом, ножницами Vanna.
  2. Затем глазное яблоко собирали щипцами и переносили в отдельные пробирки объемом 2,0 мл.
  3. Зафиксируйте глазные яблоки в 10% нейтральном буферном формалине на 10 минут при комнатной температуре. Установите сетчатку на плоский мембранный фильтр из нитрата целлюлозы, как описано ниже.
    1. Перенесите глазные яблоки в 10-сантиметровые чашки Петри, содержащие 1x PBS. Удерживайте любую мышечную ткань, прикрепленную к глазному яблоку, с помощью щипцов. Создайте отверстие в лимбе с помощью инъекционной иглы 30G. Вставьте кончик ножниц Vanna в отверстие и разрежьте вокруг ora serrata. Снимите линзу с наглазника с помощью щипцов.
    2. Сделайте 3-4 надреза на наглазнике и с помощью щипцов удерживайте РПЭ и аккуратно удалите РПЭ из сетчатки.
    3. Отрежьте небольшой кусочек мембранного фильтра из нитрата целлюлозы и замочите его в 1x PBS. Поместите изолированную сетчатку на фильтр. Аккуратно надавите на периферический участок сетчатки кончиком тонкой кисти, чтобы прикрепить край сетчатки к фильтру.
    4. Возьмитесь за край фильтра и медленно вытяните его из 1x PBS, следя за тем, чтобы сетчатка оставалась прикрепленной и прилегала к фильтру. Поместите сетчатку/фильтр на бумажное полотенце на 1 минуту, чтобы закрепить прикрепленную сетчатку к фильтру.
    5. Перенесите сетчатку/фильтр обратно в чашку Петри с 1x PBS. Осторожно удалите мусор, волосы и стекловидное тело с сетчатки с помощью щипцов и/или тонкой кисти, насколько это возможно. Чтобы различать инъецированную и неинъекционную сетчатку, обрезайте фильтры разной формы.
  4. Перенесите сетчатку/фильтр обратно в чашку Петри. Зафиксируйте сетчатку в 10% нейтральном буферном формалине на 5 минут при комнатной температуре с легким перемешиванием.
  5. Приготовьте водяную баню при температуре 65 °C. Разогрейте 30 мл 1x PBS в стеклянном стакане объемом 50 мл. Перенесите сетчатку/фильтры непосредственно в предварительно нагретый 1x PBS. Инкубируйте сетчатку при температуре 65°C в течение 30 минут.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Термическая обработка инактивирует эндогенную активность AP, которая вызывает фоновое окрашивание сетчатки. Крайне важно обрабатывать сетчатку в подогретом растворе, чтобы эффективно устранить этот фон.
  6. После термической обработки перенесите сетчатку в 30 мм чашку Петри, содержащую буфер AP (100 мМ Трис, pH 9,5, 100 мМ NaCl, 50 мМ MgCl2).
  7. Инкубируйте сетчатку в буфере AP при комнатной температуре в течение 5 минут с легким перемешиванием.
    ПРИМЕЧАНИЕ: На этом этапе буфер в сетчатке заменяется с 1x PBS на буфер AP, предотвращая выпадение химических веществ во время развития цвета.
  8. Замените буфер AP раствором для окрашивания (30 мкл 10 мг/мл BCIP и 60 мкл 10 мг/мл NBP в 10 мл буфера AP).
  9. Поместите чашку Петри в непроницаемую для света коробку. Развивайте реакцию AP при комнатной температуре в течение 1–2 дней с легким перемешиванием до тех пор, пока интенсивность окрашивания AP не станет удовлетворительной для визуализации.
  10. Остановите реакцию, промыв сетчатку 1x PBS в течение 5 минут, 2x, при комнатной температуре с легким перемешиванием.
  11. Закрепите сетчатку 10% нейтральным буферизованным формалином на 10 минут при комнатной температуре с легким взбалтыванием.
  12. Промойте сетчатку 1x PBS в течение 5 минут, 3x, при комнатной температуре с легким перемешиванием. Обезвоживайте сетчатку, инкубируя ее в 30% этаноле, а затем в 50% этаноле в течение 30 минут при комнатной температуре при слабом перемешивании.
  13. С помощью тонкой кисти аккуратно удалите сетчатку с фильтровальной бумаги. Обезвоживайте сетчатку без фильтра в 70% этаноле в течение 30 минут, а затем проведите две 30-минутные инкубации в 100% этаноле при комнатной температуре с легким перемешиванием.
  14. Очистите сетчатку в стеклянной чашке Петри очищающим раствором бензилбензата/бензилового спирта (2:1, v/v) в течение 30 минут до 2 часов при комнатной температуре с легким перемешиванием.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Эту процедуру очистки не следует проводить в течение ночи, так как длительная инкубация часто может привести к потере окрашивания AP. Очищающий раствор может расплавить пластик, поэтому процедуру следует выполнять в стеклянной таре.
  15. Чтобы закрепить сетчатку на предметном стекле, наклейте на предметное стекло двусторонний скотч, чтобы создать платформу для покровного стекла и сетчатки. Поместите сетчатку на предметное стекло, заполните пространство очищающим раствором, нанесите защитное стекло и запечатайте предметное стекло лаком для ногтей, чтобы закрепить сетчатку глаза и покровное стекло.
  16. Получите изображение окрашенной AP сетчатки с помощью микроскопа Zeiss Apotome.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Применение NMDA в стекловидном теле вызывает смерть РГК, которая традиционно выявляется с помощью гистологического окрашивания или иммунофлуоресцентного (ИФ) окрашивания маркерами РГК. В наших экспериментальных условиях, используя традиционную стратегию IF с пан-RGC-маркером RBPMS, мы подтвердили, что количество RGC уменьшилось примерно на 65% через 1 неделю после введения NMDA (рис. 2E-G). Предыдущие исследования показали, что Tbr2-экспрессирующие РГК действительно являются...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом исследовании мы использовали генетически направленную систему разреженной маркировки AP в сочетании с рядом генетически модифицированных линий мышей для изучения NMDA-индуцированных дегенеративных событий в различных подтипах RGC и AC и выявили несколько отличительных фенотипов 29,31,39. Наиболее заметным фенотипом является значительное снижение РГК и АК в сетчатке, введенной NMDA (

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами Национального института здравоохранения и Национального института глаза для C.A.M. (EY024376) и частично грантами Национального института глаза Vision Core Grants P30EY028102 (UTHealth). Мы также выражаем признательность за финансовую поддержку от Фонда Стивена Лэшера (UTHealth) и Фонда Рэя Уайта (UTHealth).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
0,5% эритромицин офтальмологическая мазь Бауш+Ломб24208-910-55
0,5% пропаракаина гидрохлорида Бауш+Ломб24208-730-06
10% нейтральный буферизованный формалин ВВР89370-094
10 см петридишКорнинг430167
10x PBSНаучный центр ФишераБП399Разведите в воде до создания 1x PBS и автоклава.
Туба 2,0 млВВР525-1136
Игла для инъекций 30 калибраЭКСЕЛИНТ Интернэшнл26437
30 мм петридишСокол35208
Бензиловый алкоголь Акрос Органик447000010
БензилбензатАкрос Органик105860010
Мембранный фильтр из нитрата целлюлозыЦитива7188-002
КрышкаНауки электронной микроскопии72204-01
Двусторонний скотчШотландский597020
ЭтанолЛаборатории Decon2716Избегайте биореагентов Fisher (Cat#: BP2818) для дегидтриации после окрашивания AP. Этот реагент искажает сетчатку глаза.
ЩипцыТЕД ПЕЛЛА505
ГрелкуTheratherm710298-001
Инсулиновый шприцБД329424
КетаминДехра17033010110
МикроскопЦейссСканер Axio Imager 2
ЛакНауки электронной микроскопии72180
Инжектор NanofilМировые прецизионные приборыНАНОФИЛ
Игла NanofilМировые прецизионные приборыНФ25БЛ
Набор реагентов NBT/BICPИнвитрогенН6547
NMDAСигма-ОлдричМ3262
Малярная кистьКингарт6650
Слайд-стеклоНаучный центр Фишера12-550-15
СтереомикроскопМотикДМ143
Подсолнечное маслоСигма-ОлдричС5007
ТамоксифенСигма-ОлдричТ5648Хранить раствор тамоксифена при температуре 4°°С; C в светонепроницаемой коробке. Используйте раствор тамоксифена в течение одной недели.
Ножницы Vanna Инструменты для точной науки15000-00
Водяная баняЛаб-Лайн18052
КсилазинДехра17033-0099-05Название продукта: Rompun

Ссылки

  1. Blennow, K., et al. Traumatic brain injuries. Nat Rev Dis Primers. 2, 16084(2016).
  2. Zetterberg, H., Blennow, K. Fluid biomarkers for mild traumatic brain injury and related conditions. Nat Rev Neurol. 12 (10), 563-574 (2016).
  3. Mohan, K., Kecova, H., Hernandez-Merino, E., Kardon, R. H., Harper, M. M. Retinal ganglion cell damage in an experimental rodent model of blast-mediated traumatic brain injury. Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (5), 3440-3450 (2013).
  4. Lund, B. J., Rule, G. T. Pressure wave dosimetry for "Retinal ganglion cell damage in an experimental rodent model of blast-mediated traumatic brain injury". Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (3), 1348-1349 (2014).
  5. Peterson, S. L., et al. Retinal Ganglion Cell Axon Regeneration Requires Complement and Myeloid Cell Activity within the Optic Nerve. J Neurosci. 41 (41), 8508-8531 (2021).
  6. Boccuni, I., Fairless, R. Retinal Glutamate Neurotransmission: From Physiology to Pathophysiological Mechanisms of Retinal Ganglion Cell Degeneration. Life. 12 (5), 638(2022).
  7. Shen, Y., Luo, X., Liu, S., Nawy, S. Rod bipolar cells dysfunction occurs before ganglion cells loss in excitotoxin-damaged mouse retina. Cell Death Dis. 10 (12), 905(2019).
  8. Lambuk, L., et al. Dose-dependent effects of NMDA on retinal and optic nerve morphology in rats. Int J Ophthalmol. 12 (5), 746-753 (2019).
  9. Asami, Y., et al. Age-dependent changes in the severity of capillary degeneration in rat retina following N-methyl-D-aspartate-induced neurotoxicity. Curr Eye Res. 40 (5), 549-553 (2015).
  10. Siliprandi, R., et al. N-methyl-D-aspartate-induced neurotoxicity in the adult rat retina. Vis Neurosci. 8 (6), 567-573 (1992).
  11. Chidlow, G., Osborne, N. N. Rat retinal ganglion cell loss caused by kainate, NMDA and ischemia correlates with a reduction in mRNA and protein of Thy-1 and neurofilament light. Brain Res. 963 (1-2), 298-306 (2003).
  12. Shi, J. M., Jiang, Y. Q., Liu, X. Y. Morphological changes of retina after N-methyl-D-aspartate induced damage in rats. Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 29 (3), 287-291 (2004).
  13. Nakazawa, T. Mechanism of N-methyl-D-aspartate-induced retinal ganglion cell death. Nippon Ganka Gakkai Zasshi. 113 (11), 1060-1070 (2009).
  14. Shen, Y., Liu, X. L., Yang, X. L. N-methyl-D-aspartate receptors in the retina. Mol Neurobiol. 34 (3), 163-179 (2006).
  15. Bai, N., et al. NMDA receptor subunits have different roles in NMDA-induced neurotoxicity in the retina. Mol Brain. 6, 34(2013).
  16. Cull-Candy, S., Brickley, S., Farrant, M. NMDA receptor subunits: diversity, development and disease. Curr Opin Neurobiol. 11 (3), 327-335 (2001).
  17. Wang, J. X., Furukawa, H. Dissecting diverse functions of NMDA receptors by structural biology. Curr Opin Struct Biol. 54, 34-42 (2019).
  18. Chou, T. H., Kang, H., Simorowski, N., Traynelis, S. F., Furukawa, H. Structural insights into assembly and function of GluN1-2C, GluN1-2A-2C, and GluN1-2D NMDARs. Mol Cell. 82 (23), 4548-4563.e4 (2022).
  19. Tran, N. M., et al. Single-Cell Profiles of Retinal Ganglion Cells Differing in Resilience to Injury Reveal Neuroprotective Genes. Neuron. 104 (6), 1039-1055.e12 (2019).
  20. Yan, W., et al. Mouse Retinal Cell Atlas: Molecular Identification of over Sixty Amacrine Cell Types. J Neurosci. 40 (27), 5177-5195 (2020).
  21. Guo, C., Ma, Y. Y. Calcium Permeable-AMPA Receptors and Excitotoxicity in Neurological Disorders. Front Neural Circuits. 15, 711564(2021).
  22. Lucas, D. R., Newhouse, J. P. The toxic effect of sodium L-glutamate on the inner layers of the retina. AMA Arch Ophthalmol. 58 (2), 193-201 (1957).
  23. Karl, M. O., et al. Stimulation of neural regeneration in the mouse retina. Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (49), 19508-19513 (2008).
  24. DeParis, S., Caprara, C., Grimm, C. Intrinsically photosensitive retinal ganglion cells are resistant to N-methyl-D-aspartic acid excitotoxicity. Mol Vis. 18, 2814-2827 (2012).
  25. Fogo, G. M., Shuboni-Mulligan, D. D., Gall, A. J. Melanopsin-Containing ipRGCs Are Resistant to Excitotoxic Injury and Maintain Functional Non-Image Forming Behaviors After Insult in a Diurnal Rodent Model. Neuroscience. 412, 105-115 (2019).
  26. Cui, Q., Ren, C., Sollars, P. J., Pickard, G. E., So, K. F. The injury resistant ability of melanopsin-expressing intrinsically photosensitive retinal ganglion cells. Neuroscience. 284, 845-853 (2015).
  27. Christensen, I., et al. The Susceptibility of Retinal Ganglion Cells to Glutamatergic Excitotoxicity Is Type-Specific. Front Neurosci. 13, 219(2019).
  28. Yang, N., Young, B. K., Wang, P., Tian, N. The Susceptibility of Retinal Ganglion Cells to Optic Nerve Injury is Type Specific. Cells. 9 (3), 677(2020).
  29. Badea, T. C., Nathans, J. Quantitative analysis of neuronal morphologies in the mouse retina visualized by using a genetically directed reporter. J Comp Neurol. 480 (4), 331-351 (2004).
  30. Badea, T. C., Nathans, J. Morphologies of mouse retinal ganglion cells expressing transcription factors Brn3a, Brn3b, and Brn3c: analysis of wild type and mutant cells using genetically-directed sparse labeling. Vision Res. 51 (2), 269-279 (2011).
  31. Jamal, L., Kiyama, T., Mao, C. A. Genetically Directed Sparse Labeling System for Anatomical Studies of Retinal Ganglion Cells. Methods Mol Biol. 2092, 187-194 (2020).
  32. Hinds, J. W., Hinds, P. L. Early ganglion cell differentiation in the mouse retina: an electron microscopic analysis utilizing serial sections. Dev Biol. 37 (2), 381-416 (1974).
  33. Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. The microbead occlusion model: a paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (1), 207-216 (2010).
  34. Mao, C. A., et al. T-box transcription regulator Tbr2 is essential for the formation and maintenance of Opn4/melanopsin-expressing intrinsically photosensitive retinal ganglion cells. J Neurosci. 34 (39), 13083-13095 (2014).
  35. Chen, C. K., et al. Characterization of Tbr2-expressing retinal ganglion cells. J Comp Neurol. 529 (15), 3513-3532 (2021).
  36. Zhang, X. M., et al. Highly restricted expression of Cre recombinase in cerebellar Purkinje cells. Genesis. 40 (1), 45-51 (2004).
  37. Kiyama, T., et al. Essential Roles of Tbr1 in the Formation and Maintenance of the Orientation-Selective J-RGCs and a Group of OFF-Sustained RGCs in Mouse. Cell Rep. 27 (3), 900-915.e5 (2019).
  38. Kiyama, T., Chen, C. K., Zhang, A., Mao, C. A. Differential Susceptibility of Retinal Neurons to the Loss of Mitochondrial Biogenesis Factor Nrf1. Cells. 11 (14), 2203(2022).
  39. Badea, T. C., Wang, Y., Nathans, J. A noninvasive genetic/pharmacologic strategy for visualizing cell morphology and clonal relationships in the mouse. J Neurosci. 23 (6), 2314-2322 (2003).
  40. Mao, C. A., et al. Eomesodermin, a target gene of Pou4f2, is required for retinal ganglion cell and optic nerve development in the mouse. Development. 135 (2), 271-280 (2008).
  41. Shi, M., et al. Genetic interactions between Brn3 transcription factors in retinal ganglion cell type specification. PLoS One. 8 (10), e76347(2013).
  42. Muzyka, V. V., Brooks, M., Badea, T. C. Postnatal developmental dynamics of cell type specification genes in Brn3a/Pou4f1 Retinal Ganglion Cells. Neural Dev. 13 (1), 15(2018).
  43. Liu, S., Aldinger, K. A., Cheng, C. V., Kiyama, T., Dave, M., McNamara, H. K., Zhao, W., Stafford, J. M., Descostes, N., Lee, P., et al. NRF1 association with AUTS2-Polycomb mediates specific gene activation in the brain. Mol Cell. 81 (22), 4663-4676.e8 (2021).
  44. Kiyama, T., Altay, H. Y., Badea, T. C., Mao, C. A. Pou4f1-Tbr1 transcriptional cascade controls the formation of Jam2-expressing retinal ganglion cells. Front Ophthalmol. 3, 1175568(2023).
  45. Park, K. K., et al. Promoting axon regeneration in the adult CNS by modulation of the PTEN/mTOR pathway. Science. 322 (5903), 963-966 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Эксайтотоксичность NMDAдегенерация ганглионарных клеток сетчаткисетчатка мышиморфология клетоквыживаемость клетокустойчивость клетокзаболевания сетчаткианатомические фенотипымаркировка клеток
Изучение анатомических особенностей ганглиозных клеток сетчатки при индуцированной N-метил-D-аспарагиновой кислотой (NMDA) эксайтотоксичностью
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.