Для массового выращивания чили трипсов с использованием модифицированного метода отдельных листьев в стеклянных контейнерах, содержащих агар, был разработан протокол биотестирования с отрывными листьями, что обеспечивает высокую выживаемость и синхронное развитие. Эта система обеспечивает эффективный скрининг вирулентности энтомопатогенных грибов против личинок2-го возраста и обеспечивает надежную подачу трипсов для лабораторных, тепличных и полевых исследований.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Создание системы выращивания чили трипсов (Scirtothrips dorsalis hood) для скрининга вирулентности энтомопатогенных грибов
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Чилийский трипс (Scirtothrips dorsalis Hood) является экономически значимым вредителем декоративных и продовольственных культур на Тайване. Энтомопатогенные грибы (EPF) работают как экологически чистый биологический агент борьбы с трипсами. Крайне важно провести скрининг вирулентности изолятов EPF против трипсов чили в лабораторных условиях перед применением в полевых условиях. Тем не менее, ограниченные данные о методе выращивания трипсов чили создают проблемы для широкомасштабного лабораторного скрининга. Чтобы решить эту проблему, мы разработали модифицированный метод лабораторного выращивания для массового производства S. dorsalis.
В методе используется система выращивания отдельных листьев с использованием стеклянного контейнера, содержащего агар, который подходит для оценки EPF против трипсов чили. Эта оптимизированная система биотестирования отдельных листьев подходит для оценки эффективности EPF против трипсов чили. Система способна производить большое количество трипсов на одной и той же стадии развития для скрининга вирулентности. Согласно тесту, результат показал, что изолят Cordyceps cateniannulata (Cc-NCHU-213) показал наибольшую вирулентность (53,6%) в отношении личинок трипсоввторого возраста через 7 дней после инокуляции (d.p.i.). Кроме того, листовые диски, встроенные в агар, оставались свежими в течение более 7 дней, что позволяло трипсам выживать (90% выживаемость при контрольной обработке) в течение всего периода наблюдения, что указывает на стабильность системы выращивания. Этот протокол демонстрирует стабильную систему выращивания для массового производства и для оценки вирулентности изолятов EPF против трипсов чили, и это может быть полезно для других трипсов, позволяя проводить скрининг потенциальных изолятов EPF для борьбы с трипсами в полевых условиях.
Введение
Трипсы чили (Scirtothrips dorsalis Hood; Thysanoptera: Thripidae) — многоядный вредитель, поражающий более 100 видов растений в 40 различных семействах растений, включая овощи, декоративные и плодовые культуры1. Он произрастает в тропической и субтропической Азии-Юго-Восточной Азии, Индии, Японии и Тайване2. Насколько нам известно, трипс чили является вредителем сельскохозяйственных и декоративных культур, включая манго, чай, чернику и лотос на Тайване. За последние два десятилетия трипсы чили стали серьезным экономическим вредителем в нескольких странах из-за растущей глобализа....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Полная экспериментальная блок-схема показана на рисунке 1.
1. Сбор стручкового трипса в полевых условиях и содержание колонии
- Сбор перца чили трипса
- Визуально осмотрите обе стороны листьев и внутри цветов на предмет заражения трипсами чили на растениях голубики на пораженной черничной ферме.
- Запишите детали каждого образца (например, часть растения и степень заражения) и подтвердите методы производства с фермерами, такие как традиционное сельское хозяйство или органическое земледелие, включая применение минерального ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Экспериментальная блок-схема, представленная в этом исследовании, показала, что может быть создана стабильная система выращивания стручкового трипса, начиная с полевого сбора и заканчивая скринингом вирулентности изолятов EPF (рис. 1). Несмотря на то, что морфологическое наблюдение позволяет отличить трипсов чили от других цветочных трипсов, использование частичной последовательности COI в качестве молекулярного маркера, включая размер ампликона ПЦР и секвени.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Стручковый трипс является глобально значимым вредителем, поражающим многочисленные экономически важные культуры, такие как кукуруза, арахис, перец, соя, клубника, сладкий картофель и помидоры 1,11,19. Современные стратегии борьбы основаны на комплексных подходах, включающих культурные практики, агенты биологического контроля и химические обработки, включая использование естественных врагов, нема.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что в данной работе нет конфликта интересов.
Благодарности
Мы выражаем особую благодарность господину Линю, Хуанф-Жэню из черничной фермы Хуми (район Вуфэн, город Тайчжун), который предоставил растения голубики. Это исследование было поддержано 113-2313-B-005 -024 -MY3 от Национального совета по науке и технике (NSTC).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| #00 Булавка для насекомых | Энтосфинкс | DMM0220 | Сделано в Великобритании |
| Центрифужная пробирка объемом 1,5 мл | Корнинг инкорпорейтед | MCT-175-C | Сделано в США |
| 10 μ L Контур инокуляции | НЕСТ Научный | 718201 | Сделано в США |
| 100.н. Лестница ДНК III | Генеаид | ДЛ007 | Сделано на Тайване. |
| 2x SuperRed PCR Master Mix | Биоинструменты | ТЭ-СР01 | Сделано на Тайване |
| Чашка Петри 6 см | Альфа Плюс Сайнтикал | 16021 | Сделано на Тайване |
| агар | Биоман Сайентифик | АГР001.1 | Степень по микробиологии |
| агароза | Биоман Сайентифик | ПБ1200 | Сделано на Тайване |
| BioGreen Safe DNA Гелевый буфер | Биоман Сайентифик | SDB001T | Сделано на Тайване |
| Набор для высокоскоростной экстракции ткани Easy DNA | Фишер Биотек | ЭТ-100 | https://www.fisherbiotec.com.au/wp-content/uploads/2021/11/FB-EDNA-DNA-Kits-flyer-11Nov21.pdf (Сделано в Австралии) |
| Передний праймер: LCO 1490 | Геномика | ПО-PR220919G6 | Последовательность: 5'-GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G-3' |
| Набор для геля/ПЦР GenepHlow | Генеаид | ДФХ300 | http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf |
| Контейнер для выращивания стекла | Компания «Саншайн Лаб Экипировка» | Размеры: 35 мм в высоту, 45 мм в внутренний диаметр. Может быть использован любым размером из пластика или стеклянной чашки. | |
| гемоцитометр | Пауль Мариенфельд | 640030 | Сделано в Германии |
| инкубатор | Хипоинт | Ф740 | Сделано на Тайване |
| Резчик кожи | Настоящая мастерская ручной работы | https://shopee.tw/jj891004? categoryId=100636& entryPoint=ShopByPDP& itemId=16023929406 | |
| Термоамплификатор MiniAmp | Thermo Fisher Scientific | А37834 | Сделано в США |
| Оптический микроскоп | Компания Nikon | Ки-Л | Сделано в Японии |
| кисть для рисования | Компания по производству щеток Tian Cheng | 4716608400352 | Может быть заменена акварельной кистью с тонким наконечником, эквивалентной размеру 0 или 1 круглой кистью. |
| бумажное полотенце | Майский цветок | BLS007-8 | Сделано на Тайване |
| Парапленка М | Бемис | ПМ-996 | Сделано в США |
| пеллетный пестик | Биоман Сайентифик | ГТ100Р | Сделано на Тайване |
| Обратный праймер: HCO 2198 | Геномика | ПО-PR220919G6 | Последовательность: 5'-TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA-3' |
| Бульон из декстрозы Sabouraud | HiMedia | МН033-500Г | Сделано в Индии |
| Стереомикроскоп | Соптоп | СЗН71 | Сделано на Тайване |
| Буфер TAE 50X | Биоман Сайентифик | TAE501000 | Сделано на Тайване |
| Подросток 80 | PanReac AppliChem | 142050.1661 | Сделано на Тайване |
| сумка на молнии | Компания Wenchen Plastic | 1809000061 | Размер: 12 см в ширину и 17 сантиметров в длину. (Сделано в Тайване) |
Ссылки
- Kumar, V., Kakkar, G., McKenzie, C. L., Seal, D. R., Osborne, L. S. Weed and pest control-conventional and new challenges. , 53-77 (2013).
- Hoddle, M. Scirtothrips dorsalis (chilli thrips). CABI Compendium. , Wallingford, CT, USA. (2022).
- Liburd, O. E., Panthi, B. R., Phillips, D. A.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
