Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Мышиная мезентериальная лимфаденэктомия для селективного нарушения лимфатической коммуникации с регионально-специфическим кишечником

1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/68696

⸱

30 декабря 2025 г.

 ,  ,  ,  , 

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает процедуру выживаемости при безопасной и хорошо переносимой мышиной мезентериальной лимфаденэктомии на каждой из четырёх станций вдоль цепи брыжейковых лимфатических узлов. Эта процедура адаптируется для селективного нарушения лимфатической коммуникации с дистальной кишкой, проксимальной кишкой и/или тонкой кишкой.

Аннотация

Иммунонадзор против толерантности к антигенам — это тонкий баланс в микросреде кишечника, в ходе которого критически важная роль циркулирующего Т-клеточного прайминга в локальных лимфатических узлах хорошо известна. После прайминга Т-клеток недавняя литература начала демонстрировать уникальную, неизбыточную роль нециркулирующих Т-клеток, проживающих в дренирующем лимфатическом узле органа. Это особенно характерно для кишечника, где лимфодренаж известен своей высокой специфичностью. Однако, чтобы по-настоящему понять уникальное влияние этих локальных клеток по сравнению с системной функциональной избыточностью, научному сообществу необходима хорошо описанная процедура по выделению и селективному воздействию этих узлов. Здесь описана процедура выживаемости при безопасной и хорошо переносимой мышиной мезентериальной лимфаденэктомии на каждой из четырёх станций цепи брыжейковых лимфатических узлов. Эта процедура адаптируется для селективного нарушения лимфатической коммуникации с дистальной кишкой, проксимальной кишкой и/или тонкой кишкой. Включены подробные инструкции, наглядные пособия, полезные советы для улучшения успеха и устранение неполадок при неоптимальном выживании. Удаленные лимфатические узлы немедленно готовы к дальнейшей обработке, если это необходимо. Эта техника лучше всего подходит для исследований, требующих селективного нарушения лимфодренажа из дистального отдела толстой кишки, проксимальной кишки и/или тонкого кишечника.

Введение

Т-клетки являются одним из основных типов эффекторных клеток адаптивного иммунитета, с описанными ролями в различных категориях заболеваний, включая инфекции, аутоиммунность излокачественность 1,2,3. Критическим шагом для функционирования Т-клеток является трёхфазное прайминг антиген-презентирующими клетками внутри вторичных лимфатических органов, таких как локальныелимфатические узлы 4. В современной медицине основой правильной онкологической резекции в нескольких органах является определённая степень локального отбор....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры выполняются в соответствии с протоколами Комитета по уходу и использованию животных Йельского института. Для разработки этой процедуры использовались 8-12-недельный штам C57BL/6, дикие мыши и фальшивые контрольные методы с сопоставлением возраста/пола/генотипов. Были включены как самцы, так и самки мышей. Вес тела варьировался от 18 до 25 г. Реагенты и используемое оборудование перечислены в Таблице материалов.

1. Подготовка инструментов, животных и операционной

  1. Стерилизуйте все хирургические инструменты. Убедитесь, что рабочая поверхность и носово....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Для подтверждения точности этой процедуры были проведены мезентериальные лимфаденэктомии на одиннадцати 4-6 недельных, возрастных, половых и генотипных родственников из штамма C57BL/6J. Время процедуры составляло от 5 до 15 минут на мышь. Все мыши хорошо переносили процедуру, обеспечивая 100% периоперационную выживаемость. Вырезанные образцы были помещены в PBS на льду. Все образцы сразу же погрузились, что подтвердило низкое содержание жира. Вырезанные образцы (и четыре отдельных висцер.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Здесь описана процедура выживаемости при безопасной и хорошо переносимой мышиной мезентериальной лимфаденэктомии на каждой из четырёх узловых станций. Основным ограничением этой процедуры является косвенная связь между воздействием и прогрессированием лимфатических узлов вдоль брыжейной цепи. Первая станция лимфатических узлов легко и легко обнажается полностью. Вторая станция лимфатических узлов часто видна, а воздействие на 2–4-й станции можно улучшить, удлинив ра.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Р.А.Ф. является советником компаний GlaxoSmithKline, Plythera Inc. и Ventus Therapeutics. Все остальные авторы не заявляют о конкурирующих интересах.

Благодарности

Мы выражаем признательность Дж. Олдерману, Б. Кадугану, Э. Хьюз-Пикару и Дж. Хорроксу за административную помощь, а также К. Хьюзу за управление колониями мышей. H.N.B. является стипендиатом Программы подготовки хирургов Йельского университета, которая частично финансировала и поддерживала этот проект. Эта работа также была профинансирована Медицинским институтом Говарда Хьюза (к R.A.F.) и Премией ординаторов Американского колледжа хирургов (H.N.B.).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Анестезиологический контурЛюбойИли инъекционный анестетик
Проточный цитометр BD LSRII (или его эквивалент)BD BiosciencesОснащён программным обеспечением FACS Diva (для проточной цитометрии) и nbsp;
Бупренорфин XRЛюбойДля обезболивающей
Среда клеточной культуры Любой(для техники живых клеток; то есть DMEM или RPMI)
DAPIБиолегенда422801Рабочая концентрация: 15 мкг/мл
Этанол (70% в воде)ЛюбойДля уборки
FITC-конъюгированный антимышиный CD45.2 (104)Биолегенда109806Рабочая концентрация: 5 мкг/мл
Щипцы: щипцы с углом с мелким концомРобозRS-5058Материал: Дюдоксель; Узор #5, угол 45 градусов; размер наконечника 0,1 x 0,06 мм
Щипцы: щипцы с тонким наконечникомРобозRS-4960Материал: Dumostar; Выкройка #1; Размер наконечника: 0,20 x 0,12 мм
Щипцы: щипцы с тонким наконечникомРобозRS-4966Материал: Dumostar, совет по биологии; Выкройка #3; Размер наконечника: 0,08 x 0,04 мм
ЛидокаинЛюбойДля обезболивающей
Металлическая вводная иглаЛюбойМногоразовая игла с прямой ротовой вводной иглой калибра 20/22, нержавеющая сталь.
Игольчатые драйверыРобозRS-6410Держатель для игл Castroviejo; Стрейт
OPTIONAL:      Двойные/двойные светодиодные лампы с микроскопом с гусиной шеейЛюбой
OPTIONAL: Evans Blue красительSigmaE2129-10GДля опционального трассировки лимфы.
OPTIONAL: Рабочий микроскопLeicaMZ9.5Стереоголовочный микроскоп Leica Mz9.5
Фосфатно-буферный физиологический раствор (PBS)Любой
Раствор повидона/йодаЛюбойДля подготовки/стерилизации кожи
Ножницы: Очень тонкие ножницыРобозRS-5605Макферсон-Ваннас; 3 мм режущей кромки; изогнутый (для узлов 3/4 станции)
Ножницы: Ножницы с тонким наконечникомРобозRS-5650SCSurecut Castroviejo scissors (для узлов станции 1/2/3)
Ножницы: средние ножницыРобозRS-5676Нойес; режущая кромка 13 мм; Прямая
Хирургический клейЛюбойКлей для тканей 3M Vetbond
Шов: 6-0 синий монофиламент полипропиленексЛюбой
Шв: чёрный монофиламентный нейлоновый шов 9-0Любой(по выбору) Можно также использовать чуть более крупный 8-0 Размер шва.
Фиксатор тканейЛюбой(для планируемой гистологии; то есть 10% нейтрального буферизованного формалина или 4% параформальдегида)
Тепловодная циркуляционная грелкаЛюбой

Ссылки

  1. Chopp, L., Redmond, C., O'shea, J. J., Schwartz, D. M. From thymus to tissues and tumor: A review of T cell biology. J Allergy Clin Immunol. 151 (1), 81-97 (2023).
  2. Rouiz-Argüelles, A. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).
  3. C....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Кишечный иммунный надзорпрайминг Т-клетокрезекция лимфатических узловцепочка лимфатических узловпроточная цитометрияперевязка швомабдоминальная хирургияCD45-положительные клетки