Методическая статья

Исследование механизма β-элемен-опосредованной модуляции LINC00511 для подавления резистентности к цисплатину при раке легкого

DOI:

10.3791/68825

⸱

19 августа 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Changchun University of Traditional Chinese Medicine, 2Health Care Department, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Teaching Department, The Third Affiliated Clinical Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, 4The Research Center of The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 6Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Резистентность к цисплатину (DDP) ограничивает эффективность химиотерапии при раке легких. Это исследование было направлено на выяснение того, как β-Elemene(β-Ele) обращает вспять резистентность в клетках A549/DDP путем подавления LINC00511. Анализ in vitro и РНК-секвенирования показал, что эта регуляция ингибирует аэробный гликолиз и передачу сигналов Wnt/β-катенина, предлагая потенциальную стратегию преодоления химиорезистентности.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Резистентность к цисплатину значительно ограничивает эффективность химиотерапии при немелкоклеточном раке легкого, что обуславливает необходимость разработки новых стратегий для преодоления этого барьера. Это исследование in vitro было направлено на выяснение механизма, с помощью которого β-Ele обращает вспять резистентность к цисплатину в клетках аденокарциномы легкого с помощью LINC00511-опосредованного гликолиза и сигнальных путей Wnt/β-катенина. Резистентная к цисплатину клеточная линия аденокарциномы легкого человека (A549/DDP) с LINC00511 гиперэкспрессией или нокдауном была установлена путем плазмидной трансфекции. Эффективность трансфекции оценивали с помощью количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (qRT-PCR) для определения уровней экспрессии LINC00511. Оценка с помощью анализа на 5-этинил-2'-дезоксиуридин (EdU) показала значительное β-Ele-опосредованное ингибирование пролиферации клеток A549/DDP. Дальнейший анализ РНК-секвенирования показал, что ингибирующее действие β-элемена на резистентность к цисплатину тесно связано с интерференцией клеточного гликолиза и подавлением активации сигнального пути Wnt/β-катенина. Вестерн-блоттинг ключевых белков, включая транспортер глюкозы 1 (GLUT1), пируваткиназу M2 (PKM2), лактатдегидрогеназу A (LDHA), β-катенин и гликогенсинтазукиназу 3β (GSK-3β), показал, что β-элемен обращает вспять резистентность к цисплатину, ингибируя аэробный гликолиз и блокируя активацию сигнального пути Wnt/β-катенина за счет подавления LINC00511. В совокупности эти результаты демонстрируют, что β-элемен преодолевает резистентность к цисплатину при раке легких, нацеливаясь на LINC00511 и связанный с ним путь аэробного гликолиза/Wnt/β-катенина. Это создает теоретическую основу для будущих доклинических и клинических исследований, выявляя при этом потенциальные терапевтические мишени.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Среди злокачественных опухолей во всем мире рак легких демонстрирует исключительно высокие показатели заболеваемости и летальности, характеризующиеся злокачественной трансформацией и инвазивным ростом эпителиальных клетокбронхов1,2. На основании гистопатологических особенностей рак легкого классифицируется как немелкоклеточная карцинома (НМРЛ) или мелкоклеточная карцинома (МРЛ)3. Стоит отметить, что на НМРЛ приходится примерно 85% от общего числа случаев ракалегких4,5. В качестве стандарта химиотерапии первой линии при НМРЛ цисплатин (ДДП) является клинически необходимым6. Тем не менее, клинические наблюдения показали, что опухолевые клетки могут развивать лекарственную устойчивость с помощью нескольких механизмов, в первую очередь включающих активацию иммунных путей ускользания, мутации в генах-мишенях лекарств и нарушение регуляции путей метаболизма лекарств 7,8,9.

Длинные некодирующие РНК (lncRNA) представляют собой транскрипты > 200 нуклеотидов (nt), которые не обладают способностью кодировать белки10. Накопленные данные указывают на то, что некодирующие РНК могут обратить вспять резистентность к цисплатину в опухолевых клетках с помощью нескольких механизмов, таких как функционирование в качестве конкурирующих эндогенных РНК (цеРНК) для губки микроРНК и высвобождения их генов-мишеней11, модуляция сигнальных путей апоптоза12, участие в восстановлении повреждений ДНК13 и регуляция клеточной аутофагии14. Кроме того, с развитием исследований по метаболическому перепрограммированию опухолей появились существенные доказательства, свидетельствующие о том, что некодирующие РНК играют решающую регуляторную роль в этом процессе. Эффект Варбурга, обозначающий аэробный гликолиз, представляет собой фундаментальную метаболическую характеристикузлокачественных клеток. Он не только поставляет энергию для быстрой пролиферации клеток, но и генерирует промежуточные метаболиты, которые служат предшественниками для биосинтеза, поддерживая синтез белков и липидов для удовлетворенияпотребностей роста злокачественных опухолей. При раке легкого было подтверждено, что некодирующая РНК оказывает значительное влияние на прогрессирование опухоли и резистентность к химиотерапии, регулируя путь аэробного гликолиза17,18.

Среди них LINC00511, широко изучаемая в последние годы молекула некодирующей РНК, тесно связанная с инициацией и развитием различных злокачественных опухолей19. Эти результаты не только проливают свет на конкретные механизмы участия некодирующей РНК в метаболическом перепрограммировании опухоли, но и обеспечивают теоретическую основу для стратегий лечения опухолей, нацеленных на некодирующую РНК, открывая потенциальные терапевтические возможности.

Полученный из корневищ Curcuma zedoaria, β-Ele является биоактивным сесквитерпеноидом с доказанной противоопухолевой эффективностью. Наши предыдущие исследования показали, что β-Ele служит селективным ингибитором сигнального пути PI3K/Akt/mTOR и оказывает синергетический эффект с цисплатином, нацеливаясь на метаболизм опухоли. Он значительно подавлял рост опухоли в мышином ксенотрансплантате модели20 НМРЛ. Последующие исследования демонстрируют способность β-Ele ослаблять аэробный гликолиз в клетках НМРЛ посредством модуляции сигнальной оси miR-301a-3p/AMPKα, что приводит к онкостатическим исходам21. Основываясь на наших предыдущих выводах, мы подтвердили, что LINC00511 ослабляет резистентность к цисплатину при раке легких; Тем не менее, точный молекулярный механизм действия еще предстоит полностью выяснить.

Учитывая ключевую роль аэробного гликолиза в метаболическом перепрограммировании опухоли и критическую роль LINC00511 в развитии и прогрессировании опухоли, данное исследование направлено на изучение того, может ли β-Ele обратить вспять резистентность к цисплатину при раке легких путем модуляции LINC00511-опосредованного пути аэробного гликолиза.

Предварительные данные указывают на то β-Ele может обратить вспять резистентность к цисплатину и усилить его противоопухолевое действие, активируя апоптотические пути22, регулируя секрецию экзосом23 и останавливая клеточный цикл24. Тем не менее, эти известные механизмы обычно демонстрируют широкие эффекты и не имеют точной регуляции конкретных молекулярных мишеней, что ограничивает их клиническую трансляцию. Таким образом, существует острая необходимость в изучении новых стратегий, которые являются более целенаправленными, имеют четко определенные механизмы и демонстрируют большой потенциал клинического применения для преодоления резистентности к цисплатину. В отличие от предыдущих исследований, подчеркивающих непосредственное биологическое действие β-Ele, это исследование характеризует влияние β-Ele на метаболизм Warburg и сигнальный путь Wnt/β-катенина в клетках A549/DDP через регуляцию lncRNA-опосредованных молекулярных путей, с целью выяснения нового механизма, лежащего в основе его обращения вспять химиосенсибилизации при раке легкого. Эта статья не только раскрывает новый подход к β-Ele для обращения вспять химиорезистентности путем нацеливания на lncRNA, но также обеспечивает новую теоретическую основу и потенциальные мишени вмешательства для клинического лечения рака легких. Эти результаты, благодаря детальному выяснению специфической молекулярной мишени (LINC00511) и ключевых сигнальных путей (Warburg и Wnt/β-катенина), демонстрируют значительно повышенный клинический трансляционный потенциал. Ожидается, что они обеспечат прочную научную основу для улучшения чувствительности к химиотерапии у пациентов с раком легких и улучшения качества их жизни, а также для продвижения разработки стратегий точного лечения рака легких.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Приготовление растворителя

  1. Приготовление раствора среды для клеток A549/DDP: Культивируйте клетки A549/DDP в полной среде Ham's F-12K (подробнее см. Таблицу материалов ) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS, подробнее см. Таблица материалов ), 1% раствора пенициллин-стрептомицина (P/S, подробнее см. Таблицу материалов ) и 2 мкг/мл цисплатина (DDP, подробнее см. Таблицу материалов ).
    1. Приготовление полного раствора среды: Приготовьте раствор полной среды, добавив 50 мл FBS и 5 мл P/S к 500 мл среды F-12K от Ham, после чего тщательно перемешайте.
    2. Приготовление полного раствора среды, содержащего цисплатин: Взвесьте 1 мг порошка цисплатина (DDP, подробнее см. Таблицу материалов ) и растворите его в 1 мл воды двойной дистилляции (ddH2O) для приготовления исходного раствора. Добавьте 200 мкл исходного раствора в 100 мл готовой среды (приготовленной в соответствии с пунктом 1.1.1) и тщательно перемешайте до получения рабочего раствора готовой среды, содержащей 2 мкг/мл цисплатина.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку цисплатин является цитотоксическим веществом, выполняйте все процедуры в вытяжном шкафу или шкафу биобезопасности и надевайте защитные средства, такие как перчатки, лабораторные халаты и очки.
  2. Раствор для введения β-Ele: Концентрация препарата, используемая в этом исследовании, была основана на результатах предыдущих экспериментов, проведенных нашей исследовательской группой20,21. Растворите 1 мг β-Ele (подробнее см. Таблицу материалов) в 20 мкл диметилсульфоксида (ДМСО, подробнее см. Таблица материалов) для приготовления исходного раствора. Разбавьте исходный раствор до 25 мл в полной среде до получения рабочего раствора β-Ele с концентрацией 40 мкг/мл.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку ДМСО может усиливать абсорбцию других веществ через кожу, выполняйте все операции в вытяжном шкафу или шкафу биобезопасности и надевайте защитные средства, такие как перчатки, лабораторная одежда и очки.

2. Культура клеток 

  1. В данном исследовании используйте клеточную линию устойчивой к цисплатину аденокарциномы легкого человека (A549/DDP, Procell, подробнее см. Таблицу материалов ). Подтвердите, что эта клеточная линия была идентифицирована с помощью анализа коротких тандемных повторов (STR) и успешно сопоставлена со стандартными линиями в ATCC и других базах данных.
    1. Для метода STR-анализа соберите примерно 1 x 106 клеток и извлеките геномную ДНК с помощью коммерческого набора для экстракции ДНК (подробнее см. Таблицу материалов ).
    2. Используйте валидированную мультиплексную систему STR, подходящую для типирования ДНК, для амплификации 20 локусов STR вместе с локусом, определяющим пол. Амплификацию ПЦР проводят в следующих условиях термоциклирования: начальная денатурация при 95 °C в течение 2 мин, затем 29 циклов денатурации при 94 °C в течение 30 с, отжиг при 59 °C в течение 45 с и удлинение при 72 °C в течение 45 с, с заключительным этапом удлинения при 72 °C в течение 10 мин.
    3. Проанализируйте полученные продукты ПЦР с помощью капиллярного электрофореза с помощью автоматизированного генетического анализатора в соответствии с инструкциями производителя. В данном случае типирование аллелей проводилось с использованием программного обеспечения для анализа фрагментов (подробнее см. Таблицу материалов ), при этом порог обнаружения пика был установлен на уровне 150 относительных единиц флуоресценции (RFU).
      Примечание: Сгенерированный профиль STR с 20 локусами сравнивался с референсными профилями клеточных линий A549/DDP, доступными в общедоступных базах данных. Коэффициент совпадения, превышающий 80%, считался показателем гомологии. Отсутствие посторонних аллельных пиков еще раз подтвердило отсутствие перекрестной контаминации.
  2. Извлеките клетки из жидкого азота и поместите их в водяную баню при температуре 37 °C для быстрого размораживания до полного таяния жидкости. Переложите клеточную суспензию в центрифужную пробирку объемом 5 мл, добавьте два объема готового раствора среды и осторожно восстановите смесь в качестве суспензии. После центрифугирования (358 × г, 5 мин, комнатной температуры) осторожно выбросьте надосадочную жидкость.
    ПРИМЕЧАНИЕ: При использовании пробирок для криоконсервации клеток из жидкого азота надевайте противозамерзающие перчатки и защитные очки или маску для лица, а также не обращайтесь ко рту трубки.
  3. Повторно суспендируйте клеточную гранулу в 1 мл полной среды с помощью щадящего пипетирования, затем разбавьте суспензию до 10 мл, добавив 9 мл полной среды. Посейте клетки в 100-миллиметровые чашки для клеточных культур и культивируйте их в инкубаторе (подробнее см. Таблицу материалов ) при 37 °C и 5%CO2. Коэффициент пассажа клеток поддерживался в диапазоне от 1:2 до 1:3.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Цисплатин является химиотерапевтическим препаратом платины с цитотоксичностью. В этом методе клетки A549/DDP культивируют средой, содержащей цисплатин. Поэтому собирайте отработанную питательную среду, содержащую цисплатин, в специальную бочку для отработанной жидкости и регулярно отправляйте ее в компанию по переработке опасных отходов для профессиональной утилизации.

3. Трансфекция плазмид 

  1. Используйте плазмидную конструкцию для сверхэкспрессии LINC00511 и ген-специфичную миРНК-нацеливание на LINC00511 (ID гена: 400619; ID транскрипта: NR_033876.1) для трансфекции клеток. Используемые последовательности миРНК представлены в таблице 1.
Последовательности миРНК
ИмяСмысл 5'-3'Антисмысл 5'-3'
LINC00511-Homo-1625
CAGCUGUGAACUUCCUUUUT
UAAAGGAAGUUCACAGCUGTT

Таблица 1: Список последовательностей миРНК

  1. Случайным образом выберите клетки A549/DDP, которые были переведены в третье поколение после реанимации, и равномерно инокулируйте их в 6-луночные планшеты с плотностью 1 x 105 клеток/лунку. Каждая скважина была пронумерована случайным образом, и на основе этих случайных чисел скважины были распределены по экспериментальным группам.
  2. Трансфектируйте клетки с помощью реагента для трансфекции (подробнее см. Таблицу материалов ), когда их плотность достигает примерно 70%.
    1. Приготовьте раствор для трансфекции миРНК.
      1. Смешайте 250 мкл оптимизированной минимально необходимой среды (Opti-MEM, подробнее см. Таблицу материалов ) с 5 мкл реагента для трансфекции, осторожно перемешайте в 3–5 раз для обеспечения однородности и инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 минут.
      2. Разведите 5 мкл миРНК (50 нМ) в 250 мкл Opti-MEM, осторожно перемешайте в 3–5 раз. Соедините разведенный реагент для трансфекции с раствором миРНК и инкубируйте при комнатной температуре в течение 20 минут с образованием комплекса для трансфекции миРНК.
    2. Приготовьте раствор для трансфекции плазмид.
      1. Смешайте 250 μL Opti-MEM с 5 μL реагента для трансфекции, осторожно перемешайте в 3–5 раз для обеспечения однородности и инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 минут.
      2. Разведите 2 г плазмиды в 250 μл Opti-MEM, осторожно перемешайте 3–5 раз, чтобы обеспечить тщательное перемешивание. Разведенный реагент для трансфекции соединить с раствором плазмиды и инкубировать при комнатной температуре в течение 20 мин для приготовления раствора для трансфекции плазмиды.
      3. Добавьте раствор для трансфекции миРНК и раствор для плазмидной трансфекции в 6-луночные планшеты соответственно. Добавьте 1 500 μL готовой среды в каждую лунку. Аккуратно перемешайте клеточные пластины до и после добавления, чтобы обеспечить равномерное распределение. Инкубируйте планшеты при 37 °C, 5%CO2 в течение 24 ч после трансфекции перед анализом.

4. Определение эффективности трансфекции с помощью количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (qRT-PCR)

ПРИМЕЧАНИЕ: Возьмите клетки после трансфекции в течение 24 ч на шаге 3.3 для обнаружения qRT-PCR в соответствии со следующей процедурой. Все эксперименты проводились на трех независимых биологических репликах (n = 3).

  1. Экстракция РНК
    1. Используйте набор для экстракции сверхчистой РНК (подробнее см. Таблицу материалов ). Выбросьте среду из 6-луночного планшета в соответствии с инструкциями к набору и промойте клетки PBS. Затем добавьте в каждую лунку по 500 мкл раствора лизисисного реагента на основе фенол-гуанидина, осторожно продуйте клетки кончиком пистолета до их полной суспензии и переложите смесь в центрифужную пробирку. Оставьте на 5 минут, чтобы обеспечить полный лизис образца клетки.
    2. Добавьте 100 мкл реагента для лизиса фенол-гуанидина изотиоцианата, резко встряхните в течение 15 с и оставьте на 2 минуты при комнатной температуре. Наконец, осторожно отсадите верхнюю водную фазу, перенесите ее в адсорбционную колонну и центрифугируйте при давлении 13 400 x g в течение 10 минут при 4 °C.
    3. Связывают РНК с мембраной силикагеля. Промойте его буфером RW1 и буфером RW2, чтобы удалить белки. Впоследствии добавьте DNase I для расщепления остаточной ДНК и проведите вторичную промывку буфером RW2 для обеспечения полного удаления загрязнений. Наконец, соберите образцы РНК путем элюирования РНК водой, не содержащей РНКазы, и центрифугирования при 13 400 x g в течение 1 минуты.
  2. Измерьте концентрацию РНК.
    1. Поместите каждый 1,5 мкл образца раствора РНК в детектор микронуклеиновых кислот (подробнее см. Таблицу материалов ) и считайте значения A260/A280.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если измеренные значения A260/A280 находятся в диапазоне от 1,8 до 2,0, а концентрация РНК находится в диапазоне от 20 нг/л до 200 нг/мкл, это указывает на приемлемое качество РНК и может быть использована для последующих экспериментов.
    2. На основе измерений разбавьте раствор РНК водой с диэтилпирокарбонатом (DEPC), чтобы обеспечить постоянную концентрацию РНК для всех образцов, используя измеренную минимальную концентрацию РНК в качестве эталона, с последующим проведением экспериментов с помощью ПЦР.
  3. Обратная транскрипция РНК
    1. Используйте выделенную общую РНК в качестве матрицы и синтезируйте кДНК в соответствии с инструкциями набора для обратной транскрипции (подробнее см. Таблицу материалов ). Подготовьте реакционную систему в соответствии с требованиями набора.
    2. Добавьте извлеченный раствор РНК и реакционную систему в восьмирядную пробирку, и установите по две повторяющиеся лунки в каждой группе. Инициируют реакцию в последовательных условиях: 15 мин инкубация при 37 °С, 5 с термическая денатурация при 85 °С, 5 мин охлаждение при 4 °С.
  4. Реакция ПЦР
    1. Проведите амплификацию ПЦР на флуоресцентной количественной ПЦР-системе в реальном времени (подробнее см. Таблицу материалов ) с использованием предварительно смешанной мастер-смеси ПЦР на основе SYBR Green (подробнее см. Таблица материалов ). Используйте GADPH в качестве референсного гена с последовательностями праймеров, перечисленными в таблице 2, и приготовьте реакционную смесь следующим образом: последовательно добавьте 0,4 мкл соответствующего праймера, 2 мкл матрицы кДНК и реакционную смесь в восьмилуночную полосковую пробирку для получения конечного объема реакции.
    2. Запуск ПЦР-амплификации: 95 °C 30 с (1 цикл), 95 °C 5 с (40 циклов), 60 °C 20 с (40 циклов). Рассчитайте относительные уровни экспрессии генов-мишеней с помощью метода 2-ΔΔCt 25. Самостоятельно повторите все эксперименты три раза, чтобы убедиться в достоверности данных.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Химические отходы, образующиеся в ходе экспериментов, должны собираться в специально отведенные контейнеры для опасных отходов и удаляться сертифицированными службами по обращению с опасными отходами в соответствии с институциональной политикой.
Последовательности праймеров
БукварьПоследовательность (5'-3')
человек-LINC00511-FTTTCCCAGCACACAGCTCAATC
человек-LINC00511-рTCCCTTCTCCCTCGGTCA
ГАПДХ-ФAATCCCATCACCATCTTCCA
ГАПДХ-РAAATGAGCCCCAGCCTTCT

Таблица 2: Последовательности праймеров для ПЦР-анализов

5. Обнаружение EdU

  1. Оцените влияние измененной экспрессии LINC00511 на пролиферацию клеток A549/DDP с помощью набора для анализа EdU (подробнее см. Таблицу материалов ).
    1. Случайным образом выберите клетки A549/DDP, которые были переведены в третье поколение после реанимации, и равномерно инокулируйте их в 24-луночные планшеты с плотностью 2 x 104 клеток/лунку.
      Примечание: Здесь все эксперименты проводились на трех независимых биологических репликах (n = 3).
    2. Случайным образом пронумеруйте каждую лунку и распределите лунки по одной из четырех экспериментальных групп на основе этих случайных чисел: контрольная группа, группа β-Ele, группа β-Ele + LINC00511 сверхэкспрессия (β-Ele + OV-LINC00511) и группа β-Ele + LINC00511 нокдаун (β-Ele + si-LINC00511).
  2. Когда плотность клеток достигает примерно 70%, проводят трансфекцию плазмид и интерференционную терапию в соответствии с шагом 3.3. Через 24 ч после трансфекции отбраковывают исходную среду и добавляют 1 мл раствора среды, содержащего β-Ele (40 мкг/мл), в каждую лунку группы лечения препаратом.
  3. Инкубируйте клетки с EdU для мечения после обработки их 40 мкг/мл β-Ele в течение 24 ч. Затем зафиксируйте клетки 4% параформальдегидом на 10 мин и пропитайте их 0,5% Triton X-100.
  4. Добавьте раствор для клик-реакции (полученный путем растворения одного флакона реагента Click Additive, входящего в комплект, в 1,3 мл деионизированной воды с тщательным перемешиванием) в темноте и поддерживайте реакцию в темноте в течение 30 минут. После завершения реакции промойте клетки PBS, после чего последует окрашивание по методу Хёхста в течение 5 минут. Наконец, рассмотрите результаты с помощью флуоресцентной микроскопии (Рисунок 1 и Рисунок 2).
    ПРИМЕЧАНИЕ: ДМСО является высокопроницаемой и легковоспламеняющейся жидкостью. В этой схеме решение для администрирования β-Ele содержит DMSO. Поэтому после использования соберите административный раствор β-Ele в специальную бочку для отработанной жидкости и передайте ее компании по переработке опасных отходов для профессиональной утилизации на регулярной основе.

6. Определение содержания глюкозы 

Примечание: Все эксперименты проводились на трех независимых биологических репликах (n = 3).

  1. Случайным образом выберите клетки A549/DDP, которые были переведены в третье поколение после реанимации, и равномерно инокулируйте их в 6-луночные планшеты с плотностью 1 x 105 клеток/лунку. Случайным образом пронумеруйте каждую лунку и распределите лунки по экспериментальным группам на основе этих случайных чисел.
  2. Когда плотность клеток достигнет примерно 70%, приступайте к трансфекции плазмид и интерференции, как описано в шаге 3.3. Через 24 ч после трансфекции обработайте клетки в обработанных группах 40 мкг/мл β-Ele.
  3. Через 24 ч обработки препаратом собрать верхнюю питательную среду из клеток и центрифугировать ее при 1000 × г в течение 5 мин. Соберите надосадочную жидкость. В соответствии с инструкциями в наборе для тестирования глюкозы (подробнее см. Таблица материалов ) приготовьте реакционный раствор и тщательно перемешайте его с надосадочной жидкостью.
  4. Поместите образцы в 96-луночные планшеты с пятью повторяющимися лунками в каждой группе. Аккуратно встряхните пластины и выдерживайте их при температуре 37 °C в течение 10 минут. Измерьте абсорбцию каждой лунки с помощью микропланшетного ридера на длине волны 505 нм, и рассчитайте содержание глюкозы по формуле, предоставленной в тестовом наборе:
    figure-protocol-1
    Здесьстандарт C = 5,55 ммоль/л, N = коэффициент разбавления.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Химические отходы, образующиеся в ходе экспериментов, должны собираться в специально отведенные контейнеры для опасных отходов и удаляться сертифицированными службами по обращению с опасными отходами в соответствии с институциональной политикой.

7. Определение содержания молочной кислоты 

Примечание: Все эксперименты проводились на трех независимых биологических репликах (n = 3).

  1. Случайным образом выберите клетки A549/DDP, которые были переведены в третье поколение после реанимации, и равномерно инокулируйте их в 6-луночные планшеты (1 × 105 клеток/лунку). Случайным образом пронумеруйте каждую лунку и распределите лунки по экспериментальным группам на основе этих случайных чисел. Когда плотность клеток достигнет примерно 70%, приступайте к трансфекции плазмид и интерференции, как описано в шаге 3.3. Через 24 ч после трансфекции обработайте клетки в обработанных группах 40 мкг/мл β-Ele.
  2. Через 24 ч обработки препаратом соберите верхнюю питательную среду из клеток и центрифугируйте ее при давлении 1000 x g в течение 5 мин. Соберите надосадочную жидкость. В соответствии с инструкциями в наборе для тестирования молочной кислоты (подробнее см. Таблица материалов ) приготовьте реакционный раствор и тщательно перемешайте его с надосадочной жидкостью.
  3. Добавьте в общей сложности 250 мкл образца в каждую лунку 96-луночного планшета, установив пять повторяющихся лунок для каждой группы. Осторожно встряхните тарелку и выдерживайте при 37 °C в течение 10 минут. Измерьте поглощение каждой лунки на длине волны 530 нм с помощью считывателя микропланшетов (подробнее см. Таблицу материалов ), и рассчитайте содержание лактата по формуле, предоставленной в тестовом наборе:
    figure-protocol-2
    Здесьстандарт C = 3 ммоль/л, N = коэффициент разбавления.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Химические отходы, образующиеся в ходе экспериментов, должны собираться в специально отведенные контейнеры для опасных отходов и удаляться сертифицированными службами по обращению с опасными отходами в соответствии с институциональной политикой.

8. Объемный РНК-секвенирование

  1. Создание примера базы данных
    1. Выберите для эксперимента клетки A549/DDP и разделите их на следующие группы: контрольная группа, группа DDP, группа β-Ele (40 г/мл) + группа DDP (48 μM), группа β-Ele+ DDP + OV-LINC00511 и группа β-Ele + DDP +si-LINC00511. Включите по 3 образца в каждую группу.
    2. Извлеките общую РНК из каждой группы клеток. Используйте набор для выделения мРНК на основе магнитных шариков (подробнее см. Таблицу материалов ) для обогащения эукариотической мРНК, в которой покрытые олиго(dT) шарики избирательно связываются с поли(А)-хвостами мРНК через спаривание А-Т оснований. Добавьте фрагментационный буфер (1 мкл/г РНК, подробнее см. Таблицу материалов ) и инкубируйте при 94 °C в течение 7 мин для фрагментации мРНК на короткие сегменты.
    3. Приступайте к синтезу кДНК первой цепи с использованием случайных гексамерных праймеров в соответствии с инструкциями производителя. Для синтеза кДНК второй цепи добавьте соответствующее количество реакционного буфера, РНКазы H и ДНК-полимеразы I, чтобы завершить процесс.
    4. Выполните репарацию концов и А-хвостообразование двухцепочечной кДНК путем инкубации при 25 °C в течение 30 мин (концевой ремонт), а затем при 72 °C в течение 30 мин (А-хвост). Лигатирование секвенирования адаптеров к торцевым восстановленным фрагментам.
    5. Очищайте и подбирайте лигированные продукты с помощью модифицированных карбоксилом магнитных гранул диоксида кремния (подробнее см. Таблицу материалов ). Наконец, создайте библиотеку секвенирования методом ПЦР-амплификации.
    6. После подготовки образца проанализируйте библиотеку секвенирования на платформе DNBSEQ-T7 (подробнее см. Таблицу материалов ). Загрузите образец на микрочип Patterned Array для секвенирования.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Прибор собирал, считывал и идентифицировал оптические сигналы с помощью системы визуализации с высоким разрешением для определения информации о последовательности отдельных оснований. Впоследствии выполните дополнительные циклы секвенирования для получения последовательности следующих оснований. После нескольких циклов были сгенерированы исходные данные секвенирования.
  2. Биоинформатический анализ
    1. Секвенирование выборок на компьютере для получения необработанных данных, также известных как данные вне компьютера. Далее обработаем данные секвенирования с помощью fastp (v 0.21.0). Удалите считывания, содержащие последовательности 3'-адаптеров, и исключите некачественные считывания со средним показателем качества ниже Q20 в рамках основных критериев фильтрации. Проводите все последующие анализы на основе очищенных высококачественных данных.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Проведите первичную фильтрацию данных секвенирования с помощью fastp. Конкретные параметры командной строки см. в официальной документации по транскриптомным наборам данных (https://github.com/OpenGene/fastp#rna-seq-processing).
    2. Используйте FastQC (v 0.12.0) для оценки качества очищенных данных секвенирования. Требования к качеству следующие: не менее 90% оснований должны иметь показатель качества выше Q20, а процент остальных последовательностей адаптеров не должен превышать 1%. Данные, отвечающие этим критериям, считаются квалифицированными и могут быть использованы для последующего анализа.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Оцените качество очищенных данных секвенирования с помощью FastQC, следуя официальным рекомендациям (https://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/).
  3. Анализ экспрессии генов
    1. Используйте программное обеспечение DESeq2 для выполнения анализа дифференциальной экспрессии между двумя группами сравнения.
      1. Во-первых, введите данные в программное обеспечение для создания набора данных DESeq. Затем отфильтруйте гены с общим количеством менее 10 во всех образцах.
      2. Наконец, проведите дифференциальный анализ генов и извлеките результаты. Условия для скрининга дифференциально экспрессируемых генов следующие: кратное изменение экспрессии |log2FoldChange| > 1, а значение падж ≤ 0,05.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Для получения подробных инструкций по работе с программным обеспечением DESeq2, пожалуйста, обратитесь к подробным инструкциям на официальном сайте: https://www.bioconductor.org/packages/release/bioc/html/DESeq2.html.

9. Определение изменений уровня экспрессии белка по методу Вестерн-блоттинга (WB) 

Примечание: Все эксперименты проводились на трех независимых биологических репликах (n = 3).

  1. Выполните вестерн-блоттинг для количественной оценки уровня экспрессии клеточных белков.
    1. Случайным образом выберите клетки A549/DDP, которые были переведены в третье поколение после реанимации, и равномерно инокулируйте их в 6-луночные планшеты с плотностью 1 x 105 клеток/лунку.
    2. Случайным образом пронумеруйте каждую лунку и распределите лунки по одной из шести экспериментальных групп на основе этих случайных чисел: Контрольная, β-Ele, OV-LINC00511, si-LINC00511, β-Ele + OV-LINC00511 и β-Ele + si-LINC00511.
    3. Когда плотность клеток достигнет примерно 70%, проведите трансфекцию плазмид и интерференцию, как описано в шаге 3.3. Через 24 ч после трансфекции подвергают группу лечения воздействию β-Ele (40 мкг/мл), одновременно давая контрольной группе свежую среду. Культивируйте обе группы еще 24 ч.
    4. Затем соберите гранулы ячеек центрифугированием при 1675 × г в течение 5 мин. Лизировать каждую группу клеток 500 мкл буфера для лизиса RIPA, содержащего 1 мМ PMSF, на лед в течение 30 мин (подробнее см. Таблицу материалов ).
  2. Центрифугируйте клеточные лизаты при 13 400 × г в течение 10 мин при 4 °C и соберите надосадочную жидкость. Измерьте концентрацию белка с помощью набора для анализа концентрации белка BCA (подробнее см. Таблицу материалов ). Разделите равное количество образцов белка с помощью 10% SDS-PAGE и перенесите их на мембраны из поливинилиденфторида (PVDF) с помощью электрофореза.
  3. Погрузите мембраны в блокирующий раствор (5% обезжиренное молоко/трис-буферный физиологический раствор с 0,1% Tween-20 (TBST)) на 2 ч при комнатной температуре и инкубируйте их в течение ночи при 4 °C с первичными антителами против GLUT1, PKM2, LDHA, β-катенина, GSK-3β (1:1000) и β-актина (1:2000, подробнее см. Таблицу материалов ).
    1. На следующий день промыть мембраны трижды с TBST, по 5 мин каждая, при комнатной температуре с легким встряхиванием.
  4. На следующий день инкубируйте мембраны с растворами вторичных антител (меченый HRP козий антикроличий IgG, 1:2000) и осторожно встряхивайте при комнатной температуре в течение 1 часа.
  5. Наконец, добавьте 0,1 мл/см2 коммерчески доступного хромогенного раствора ECL, чтобы полностью покрыть мембраны PVDF. Перед экспозицией инкубировать в течение 1 мин при комнатной температуре. Визуализируйте и анализируйте полосы с помощью усовершенствованной хемилюминесцентной системы (подробнее см. Таблицу материалов ). Пожалуйста, обратитесь к Рисунку 4C и Рисунку 5B.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Химические отходы, образующиеся в ходе экспериментов, должны собираться в специально отведенные контейнеры для опасных отходов и удаляться сертифицированными службами по обращению с опасными отходами в соответствии с институциональной политикой.

10. Статистический анализ 

Примечание: Все эксперименты проводились на трех независимых биологических репликах (n = 3).

  1. Систематизируйте экспериментальные данные по группам и введите их в программу GraphPad Prism (версия 8.0.2; подробнее см. Таблицу материалов ). Выполняйте визуализацию данных и анализ статистической значимости в соответствии с рекомендациями по программному обеспечению. Данные измерений были выражены в виде среднего ± стандартного отклонения. Статистические различия между группами оценивали с помощью одностороннего расчета ANOVA с размером эффекта η² (эта-квадрат) с последующим тестом множественных сравненийТьюки 26. Рассмотрим значение **P < 0,01 как статистически значимое.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

β-Ele значительно подавляет пролиферацию ячеек A549/DDP

В данном эксперименте вводимые концентрации β-Ele и DDP были определены на основании результатов наших предыдущих исследований20,21. Клетки A549/DDP обрабатывали β-Ele, отдельно или в сочетании с DDP, чтобы проанализировать его влияние на химиорезистентность DDP. Анализ EdU (рис...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это исследование было сосредоточено на критической клинической проблеме резистентности к цисплатину при раке легких. Рак легких, ответственный за наибольшее число смертей от рака во всем мире, по-прежнему имеет пятилетнюю выживаемость ниже 20%29,30. Цисплатин, являясь краеугольным камнем химиотерапевтических препаратов на основе платины, является эффективным противоопухолевым агентом широкого спектра действия, который ингибирует ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

У всех авторов нет конфликта интересов, о котором можно было бы заявить.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Финансирование этого исследования было предоставлено Фондом естественных наук провинции Цзилинь в рамках гранта No. YDZJ202401058ZYTS.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Элементы A549/DDPПроцеллКЛ-0519URL-адреса:https://www.procell.com.cn/p/a549-ddp--cl-0519
Исключительно чистый верстакСучжоу Антай ЭйртехСВ-CJ-2FDURL-адреса:http://www.sz-antai.com
Набор для анализа концентрации белка BCAСоларбиоПК0020URL-адреса:https://www.solarbio.com
Настольная центрифугаТермоПико17URL-адреса:https://www.thermofisher.com
Камера для культивирования клетокТермо3111URL-адреса:https://www.thermofisher.com
Чашка для клеточных культурБИОФИЛTCD000100URL-адреса:http://www.biofil.com.cn
Хемилюминесцентный анализаторQinxiang Instruments 4300URL-адреса:https://www.clinx.cn/about_us
ЦисплатинАладдинC295225-250мгURL-адреса:https://www.aladdin-e.com/
Прибор для секвенирования генов DNBSEQ-T7MGI Tech CO., LtdТ7URL-адреса:https://www.mgitech.cn/
EasyPure  Набор микрогеномной ДНКТрансГен БиотехЭЭ181-01URL-адреса:https://www.transgen.com/
Хромогенное решение ECLСоларбиоПЭ0010URL-адреса:https://www.solarbio.com
Комплект для обнаружения EDUБейотимС0071СURL-адреса:https://www.beyotime.com
Инструмент с энзимной маркировкойОборудование DetieHBS-1096AURL-адреса:https://www.detiebio.cn/
Фетальная бычья сыворотка FBS)КЛАРКFB15015URL-адреса:https://zn.clarkbio.com/
Буфер для фрага/прайма Йезен11277ЧСURL-адреса:https://www.yeasen.com/products/detail/2151
GeneMapper  Программное обеспечение  6ТермоВерсия 6Программное обеспечение для анализа фрагментов. URL-адреса:https://www.thermofisher.cn/   
Платформа GenReaderПекин Юэвэй Генная Технология Ко., Лтд.https://yyigou.com/product/detail/0000037250.htmlАвтоматизированный генетический анализатор для капиллярного электрофореза
Набор для тестирования глюкозыЦзяньчэн БиографияА154-1-1URL-адреса:http://www.njjcbio.com
Поликлональное антитело GLUT1Группа компаний «Протеинтех»21829-1-АПURL-адреса:https://www.ptglab.com
ГрафПад ПризмаПрограммное обеспечение GraphPadВерсия 8.0.2URL-адреса:https://www.graphpad.com
ГСК-3&бета; АнтителоСходствоАФ5016URL-адреса:https://www.affbiotech.com
F-12K ХэмаПроцеллPM150910URL-адреса:https://www.procell.com.cn/
Бусины для отбора ДНК Hieff NGSЙезен12601ЭСURL-адреса:https://www.yeasen.com/products/detail/939
HieffNGS Мастер-набор для выделения мРНКЙезен12603ЖURL-адреса:https://www.yeasen.com/products/detail/1119
HRP меченый козий антикролиацкий IgGСервисбиоGB23303URL-адреса:https://www.servicebio.cn
Набор для тестов на лактатЦзяньчэн БиографияА019-2-1URL-адреса:http://www.njjcbio.com
ЛДГА-специфическое поликлональное антителоГруппа компаний «Протеинтех»19987-1-АПURL-адреса:https://www.ptglab.com
Легкий амплификатор 96РошЛК96URL-адреса:https://lifescience.roche.com
Липофектамин 2000Инвитроген11668-019URL-адреса:https://www.thermofisher.com/invitrogen
Opti-MEMGibco31985-070URL-адреса:https://www.thermofisher.com/gibco
Пенициллин-стрептомицин(P/S)БиошарпБЛ505АURL-адреса:https://www.biosharp.cn/
PKM2-специфичное поликлональное антителоГруппа компаний «Протеинтех»15822-1-АПURL-адреса:https://www.ptglab.com
PMSF БейотимСТ506URL-адреса:https://www.beyotime.com
Набор реагентов PrimeScript RT (Perfect Real Time)ТакараРР037АURL-адреса:https://www.takarabio.com
Лизат RIPAБейотимP0013BURL-адреса:https://www.beyotime.com
Платформа секвенированияBGIDNBSEQ-T7URL-адреса:https://www.bgi.com/global
TB зеленый премикс Ex TaqТакараРР420АURL-адреса:https://www.takarabio.com
Тестер следовых нуклеиновых кислотИнструмент АошэнНано-100URL-адреса:http://www.hzaosheng.com
ТРИЗОН ПАЙКанвакс БиотехCW0597SURL-адреса:https://www.canvaxbiotech.com
ТрипсинБиошарпБЛ501АURL-адреса:https://www.biosharp.cn/
Набор сверхчистой РНК (ДНКаза I)Канвакс БиотехCW0597SURL-адреса:https://www.canvaxbiotech.com
β-Антитела к актинуГруппа компаний «Протеинтех»60008-1-IgURL-адреса:https://www.ptglab.com
&бета;-катенин Антитела СходствоДФ6794URL-адреса:https://www.affbiotech.com
β-ElemeneСигма63965-25МГURL-адреса:https://www.sigmaaldrich.com

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Thandra, K. C., Barsouk, A., Saginala, K., Aluru, J. S., Barsouk, A. Epidemiology of lung cancer. Contemp Oncol (Pozn). 25 (1), 45-52 (2021).
  2. Huang, J., et al. Distribution risk factors, and temporal trends for lung cancer incidence and mortality: A Global Analysis. Chest. 161 (4), 1101-1111 (2022).
  3. Wang, H., Hu, Y., Lu, H., Wu, Z., Zhang, Y. Association between SOX gene family expression, DNA methylation, and miRNA regulation in lung adenocarcinoma progression. Discov Oncol. 16 (1), 188(2025).
  4. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  5. Qin, Z., et al. Phase separation of EML4-ALK in firing downstream signaling and promoting lung tumorigenesis. Cell Discov. 7 (1), 33(2021).
  6. Wang, X., Wang, H., Jiang, H., Qiao, L., Guo, C. Circular RNAcirc_0076305 promotes cisplatin (DDP) resistance of non-small cell lung cancer cells by regulating ABCC1 through miR-186-5p. Cancer Biother Radiopharm. 38 (5), 293-304 (2023).
  7. La Montagna, M., Ginn, L., Garofalo, M. Mechanisms of drug resistance mediated by long non-coding RNAs in non-small-cell lung cancer. Cancer Gene Ther. 28 (3-4), 175-187 (2021).
  8. Wu, S. G., Shih, J. Y. Management of acquired resistance to EGFR TKI-targeted therapy in advanced non-small cell lung cancer. Mol Cancer. 17 (1), 38(2018).
  9. Altorki, N. K., et al. The lung microenvironment: an important regulator of tumour growth and metastasis. Nat Rev Cancer. 19 (1), 9-31 (2019).
  10. Zhang, H., Wang, Y., Liu, X., Li, Y. Progress of long noncoding RNAs in anti-tumor resistance. Pathol Res Pract. 216 (11), 153215(2020).
  11. Li, H. Q., Fu, X. B., Guo, H. Y., Sun, Y., Wang, D., Zhang, Z. Z. Sevoflurane reverses cisplatin resistance in neuroblastoma cells through the linc00473/miR-490-5p/AKT1 axis. Saudi Medical Journal. 43 (11), 1209-1216 (2022).
  12. Guo, F., Cao, Z., Guo, H., Li, S. The action mechanism of lncRNA-HOTAIR on the drug resistance of non-small cell lung cancer by regulating Wnt signaling pathway. Exp Ther Med. 15 (6), 4885-4889 (2018).
  13. Ren, L., et al. The DDUP protein encoded by the DNA damage-induced CTBP1-DT lncRNA confers cisplatin resistance in ovarian cancer. Cell Death Dis. 14 (8), 568(2023).
  14. Chen, L., et al. H19/miR-107/HMGB1 axis sensitizes laryngeal squamous cell carcinoma to cisplatin by suppressing autophagy in vitro and in vivo. Cell Biol Int. 45 (3), 674-685 (2021).
  15. Peng, X., Li, S., Zeng, A., Song, L. Regulatory function of glycolysis-related lncRNAs in tumor progression: Mechanism, facts, and perspectives. Biochem Pharmacol. 229, 116511(2024).
  16. Kryczka, J., Kryczka, J., Czarnecka-Chrebelska, K. H., Brzeziańska-Lasota, E. Molecular mechanisms of chemoresistance induced by cisplatin in NSCLC cancer therapy. Int J Mol Sci. 22 (16), 8885(2021).
  17. Liu, J., Zhu, Y., Wang, H., Han, C., Wang, Y., Tang, R. LINC00629, a HOXB4-downregulated long noncoding RNA, inhibits glycolysis and ovarian cancer progression by destabilizing c-Myc. Cancer Sci. 115 (3), 804-819 (2024).
  18. Liao, M., et al. Targeting the Warburg effect: A revisited perspective from molecular mechanisms to traditional and innovative therapeutic strategies in cancer. Acta Pharm Sin B. 14 (3), 953-1008 (2024).
  19. Song, Z., Luo, J., Wu, M., Zhang, Z. linc00511 knockdown inhibits lung cancer progression by regulating miR-16-5p/MMP11. Crit Rev Eukaryot Gene Expr. 33 (7), 17-30 (2023).
  20. Cheng, G., et al. β-elemene suppresses tumor metabolism and stem cell-like properties of non-small cell lung cancer cells by regulating PI3K/AKT/mTOR signaling. Am J Cancer Res. 12 (4), 1535-1555 (2022).
  21. Li, L., et al. β-elemene suppresses Warburg effect in NCI-H1650 non-small-cell lung cancer cells by regulating the miR-301a-3p/AMPKα axis. Biosci Rep. 40 (6), BSR20194389(2020).
  22. Yao, C., Jiang, J., Tu, Y., Ye, S., Du, H., Zhang, Y. β-elemene reverses the drug resistance of A549/DDP lung cancer cells by activating intracellular redox system, decreasing mitochondrial membrane potential and P-glycoprotein expression, and inducing apoptosis. Thorac Cancer. 5 (4), 304-312 (2014).
  23. Song, H., et al. β-elemene ameliorates cisplatin resistance of gastric cancer via regulating exosomal METTL3-m6A-ARF6 axis. Cell Biochem Biophys. 83 (2), 2047-2058 (2025).
  24. He, J., et al. β-Elemene promotes ferroptosis and reverses radioresistance in gastric cancer by inhibiting the OTUB1-GPX4 interaction. Front Pharmacol. 15, 1469180(2024).
  25. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  26. Yang, L., Tao, Y., Luo, L., Zhang, Y., Wang, X., Meng, X. Dengzhan Xixin injection derived from a traditional Chinese herb Erigeron breviscapus ameliorates cerebral ischemia/reperfusion injury in rats via modulation of mitophagy and mitochondrial apoptosis. J Ethnopharmacol. 288, 114988(2022).
  27. Zhang, Z., Zhang, Y., Qin, X., Wang, Y., Fu, J. FGF9 promotes cisplatin resistance in colorectal cancer via regulation of Wnt/β-catenin signaling pathway. Exp Ther Med. 19 (3), 1711-1718 (2020).
  28. He, J., et al. Sox2 inhibits Wnt-β-catenin signaling and metastatic potency of cisplatin-resistant lung adenocarcinoma cells. Mol Med Rep. 15 (4), 1693-1701 (2017).
  29. Bray, F., et al. Global cancer statistics 2022: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 74 (3), 229-263 (2024).
  30. Im, J. Y., et al. CYB5R3 functions as a tumor suppressor by inducing ER stress-mediated apoptosis in lung cancer cells via the PERK-ATF4 and IRE1α-JNK pathways. Exp Mol Med. 56 (1), 235-249 (2024).
  31. Manguinhas, R., et al. Impact of the APE1 Redox Function Inhibitor E3330 in non-small cell lung cancer cells exposed to cisplatin: Increased cytotoxicity and impairment of cell migration and invasion. Antioxidants (Basel). 9 (6), 550(2020).
  32. Jiang, L., et al. HCP5 is a SMAD3-responsive long non-coding RNA that promotes lung adenocarcinoma metastasis via miR-203/SNAI axis. Theranostics. 9 (9), 2460-2474 (2019).
  33. Singh, D., Assaraf, Y. G., Gacche, R. N. Long non-coding RNA mediated drug resistance in breast cancer. Drug Resist Updat. 63, 100851(2022).
  34. Sun, W., Zu, Y., Fu, X., Deng, Y. Knockdown of lncRNA-XIST enhances the chemosensitivity of NSCLC cells via suppression of autophagy. Oncol Rep. 38 (6), 3347-3354 (2017).
  35. Lu, Y., Tian, M., Liu, J., Wang, K. LINC00511 facilitates Temozolomide resistance of glioblastoma cells via sponging miR-126-5p and activating Wnt/β-catenin signaling. J Biochem Mol Toxicol. 35 (9), e22848(2021).
  36. Kong, X. Z., et al. Regulation of aerobic glycolysis by long non-coding RNAs in cancer. Biochem Biophys Res Commun. 479 (1), 28-32 (2016).
  37. Mao, Y., Xia, Z., Xia, W., Jiang, P. Metabolic reprogramming, sensing, and cancer therapy. Cell Rep. 43 (12), 115064(2024).
  38. Vaupel, P., Schmidberger, H., Mayer, A. The Warburg effect: essential part of metabolic reprogramming and central contributor to cancer progression. Int J Radiat Biol. 95 (7), 912-919 (2019).
  39. Ward, P. S., Thompson, C. B. Metabolic reprogramming: a cancer hallmark even warburg did not anticipate. Cancer Cell. 21 (3), 297-308 (2012).
  40. Nagao, A., Kobayashi, M., Koyasu, S., Chow, C. C. T., Harada, H. HIF-1-dependent reprogramming of glucose metabolic pathway of cancer cells and its therapeutic significance. Int J Mol Sci. 20 (2), 238(2019).
  41. Xie, Y., Wang, M., Xia, M., Guo, Y., Zu, X., Zhong, J. Ubiquitination regulation of aerobic glycolysis in cancer. Life Sci. 292, 120322(2022).
  42. Hua, G., Zeng, Z. L., Shi, Y. T., Chen, W., He, L. F., Zhao, G. F. LncRNA XIST contributes to cisplatin resistance of lung cancer cells by promoting cellular glycolysis through sponging miR-101-3p. Pharmacology. 106 (9-10), 498-508 (2021).
  43. Yin, D., Hua, L., Wang, J., Liu, Y., Li, X. Long Non-coding RNA DUXAP8 facilitates cell viability, migration, and glycolysis in non-small-cell lung cancer via regulating HK2 and LDHA by inhibition of miR-409-3p. Onco Targets Ther. 13, 7111-7123 (2020).
  44. Vallée, A. Aerobic glycolysis activation through canonical WNT/β-catenin pathway in ALS. Med Sci (Paris). 34 (4), 326-330 (2018).
  45. Rathee, M., et al. Canonical WNT/β-catenin signaling upregulates aerobic glycolysis in diverse cancer types. Mol Biol Rep. 51 (1), 788(2024).
  46. Li, R., Lv, M., Liu, J., Sun, Q. Tumor necrosis factor receptor-associated protein 1 promotes aerobic glycolysis and cisplatin resistance by regulating the Wnt/β-catenin signaling pathway in lung cancer. Histol Histopathol. , (2024).
  47. Zhao, Q., Chen, L., Zhang, X., Yang, H., Li, Y., Li, P. β-elemene promotes microglial M2-like polarization against ischemic stroke via AKT/mTOR signaling axis-mediated autophagy. Chin Med. 19 (1), 86(2024).
  48. Jiang, Z., Jacob, J. A., Loganathachetti, D. S., Nainangu, P., Chen, B. β-Elemene: mechanistic studies on cancer cell interaction and its chemosensitization effect. Front Pharmacol. 8, 105(2017).
  49. Li, J., Li, Y., Meng, F., Fu, L., Kong, C. Knockdown of long non-coding RNA linc00511 suppresses proliferation and promotes apoptosis of bladder cancer cells via suppressing Wnt/β-catenin signaling pathway. Biosci Rep. 38 (4), BSR20171701(2018).
  50. Tan, Z., et al. Small peptide LINC00511-133aa encoded by LINC00511 regulates breast cancer cell invasion and stemness through the Wnt/β-catenin pathway. Mol Cell Probes. 69, 101913(2023).
  51. Ghafouri-Fard, S., Safarzadeh, A., Hussen, B. M., Taheri, M., Ayatollahi, S. A. A review on the role of LINC00511 in cancer. Front Genet. 14, 1116445(2023).
  52. Liu, J., et al. Targeting Wnt-driven cancer through the inhibition of Porcupine by LGK974. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (50), 20224-20229 (2013).
  53. Wang, W. J., et al. Serum lncRNAs (CCAT2, LINC01133, LINC00511) with squamous cell carcinoma antigen panel as novel non-invasive biomarkers for detection of cervical squamous carcinoma. Cancer Manag Res. 12, 9495-9502 (2020).
  54. Fan, K., Liu, Z., Gao, M., Tu, K., Xu, Q., Zhang, Y. Targeting nutrient dependency in cancer treatment. Front Oncol. 12, 820173(2022).
  55. Liu, B., et al. Knockdown of LINC00511 decreased cisplatin resistance in non-small cell lung cancer by elevating miR-625 level to suppress the expression of leucine rich repeat containing eight volume-regulated anion channel subunit E. Hum Exp Toxicol. 41, 9603271221089000(2022).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

WntA549 DDPqRT PCREdU
Видео скоро будет доступно

Похожие статьи