Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Подготовка и оценка модели преждевременной недостаточности яичников у мышей

1.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/69000

⸱

19 сентября 2025 г.

 , 
1The First Hospital of Anhui University of Science and Technology'

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает метод построения мышиной модели преждевременной недостаточности яичников с помощью инъекции циклофосфамида Модель эффективно, легко и адаптивно воспроизводит патологическое прогрессирование преждевременной недостаточности яичников человека, демонстрируя высокую надежность и экономическую эффективность.

Аннотация

Преждевременная недостаточность яичников (ПОИ) является критическим состоянием, приводящим к женскому бесплодию, что требует надежных животных моделей для механистических и терапевтических исследований. В данной статье мы представляем стандартизированный протокол для создания и оценки модели мыши, индуцированной циклофосфамидом (CTX). Были отобраны самки мышей в возрасте от шести до восьми недель с регулярными циклами течки, которые были подвергнуты внутрибрюшинным инъекциям CTX: начальная доза 100 мг/кг в 1-й день, за которой последовали ежедневные дозы 20 мг/кг в течение последующих 14 дней. Динамические изменения эстральных циклов контролировали с помощью цитологического анализа мазка из влагалища с окрашиванием по методу Райта. Сывороточные уровни эстрадиола (Е2), фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) и антимюллерова гормона (АМГ) были количественно оценены с помощью ИФА для оценки эндокринных изменений. Гистопатологию яичников оценивали с помощью окрашивания гематоксилин-эозином (H&E) залитых парафином срезов для количественной оценки фолликулярной атрезии, в то время как иммуногистохимический анализ расщепленной каспазы-3 проводили для выявления апоптоза гранулезных клеток. Результаты продемонстрировали нарушение эстральной цикличности, значительное снижение уровней Е2 и АМГ, повышенные концентрации ФСГ, увеличение атрезии фолликулов и усиление апоптоза гранулезных клеток у мышей, получавших CTX, что подтверждает успешное моделирование POI. Этот метод построения модели может в значительной степени имитировать механизм повреждения яичников, вызванного химиотерапией, с типичными патологическими признаками, такими как истощение резерва фолликулов и нарушения половых гормонов. Он обеспечивает надежную экспериментальную платформу для выявления механизма репродуктивной токсичности химиотерапии, скрининга препаратов, защищающих яичники, и оптимизации стратегий сохранения фертильности. Более того, эта модель относительно проста в эксплуатации, недорога, а также имеет короткий производственный цикл, что облегчает ее проведение и популяризацию. Методология согласуется с требованиями JoVE к визуализируемым, пошаговым экспериментальным демонстрациям.

Введение

Преждевременная недостаточность яичников (ПОИ), наиболее распространенная форма расстройства старения женской репродуктивной системы, не только серьезно угрожает физическому и психическому здоровью пациенток из-за симптомов дефицита эстрогена и репродуктивной дисфункции, но и повышает риск развития сопутствующих заболеваний, включая переломы, аутоиммунные расстройства, сердечно-сосудистые заболевания, сахарный диабет и т. д.1. Таким образом, разработка эффективных и безопасных терапевтических стратегий стала критически важным приоритетом в современной медицине. Учитывая ограниченную доступность клинических образцов, многофакторную этиологию и высокие этические риски, связанные с исследованиями POI, создание надежных животных моделей, позволяющих проводить систематические механистические исследования и валидацию безопасности, стало необходимым.

В настоящее время модели повреждения яичников, вызванного химиотерапией, широко используются для исследований POI. Циклофосфамид (CTX), алкилирующий агент с иммуносупрессивными свойствами, был идентифицирован как мощное гонадотоксичное соединение. Его механизм включает повреждение сшивки ДНК для подавления клеточной пролиферации2, что приводит к апоптозу резервных клеток яичников 3,4. Модели, основанные на CTX, эффективно повторяют клинические признаки POI, включая истощение примордиальных фолликулов, гипоэстрогению и повышенный уровень фолликулостимулирующего гормона (ФСГ). Внутрибрюшинная инъекция CTX у мышей имеет явные преимущества: высокая биодоступность за счет быстрой абсорбции брюшины, стандартизированная операционная способность с минимальной технической вариабельностью и экономическая эффективность для крупномасштабных исследований. Примечательно, что структура яичников мышей очень похожа на человеческую, что способствует динамическому наблюдению за истощением фолликулов и гормональными изменениями. Кроме того, мыши недороги и имеют высокую скорость размножения, удовлетворяя требованиям для крупномасштабных выборочных исследований.

Несмотря на эти преимущества, гетерогенность режимов дозирования CTX (например, однократные болюсные инъекции по сравнению с фракционированными инъекциями) и временные окна введения привели к противоречивым результатам моделирования в разных исследованиях. Чтобы восполнить этот пробел, мы представляем систематический протокол, оптимизирующий дозировку CTX и частоту введения для индукции POI у мышей. Данное исследование направлено на создание воспроизводимой модели путем количественной оценки истощения овариального резерва, гормональной дисрегуляции и гистопатологических коррелятов, тем самым обеспечивая надежную платформу для механистического исследования и терапевтического скрининга.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Настоящий протокол был рассмотрен и одобрен Комитетом по этике компании Anhui Shendong Biotechnology Development Co., Ltd. (Номер этики: SDLL202502281). Это исследование проводится в соответствии с рекомендациями Национальных институтов здравоохранения по уходу за лабораторными грызунами и их использованию во всех процедурах экспериментов на животных. Самки мышей C57BL/6, использованные в этом эксперименте, были в возрасте 6-8 недель и содержались в специфических условиях, свободных от патогенов (SPF). Являясь инбредным штаммом и подштаммом линии C57, мыши C57BL/6 характеризуются черной шерстью. Перед экспериментом мышей акклиматизировали в течение одной недели в лаборатории на животных в условиях контролируемой температуры и влажности, с 12-часовым циклом свет/темнота для имитации естественных циркадных ритмов. На протяжении всего периода акклиматизации мышам был предоставлен свободный доступ к пище и воде.

1. Подготовка животных

ПРИМЕЧАНИЕ: Выберите 24 самки мышей класса SPF C57BL/6 в возрасте 6-8 недель с нормальным эстральным циклом. Собирайте жидкость для промывания влагалища у мышей в 9:00 утра в течение 10 дней подряд для подготовки мазков отслоившихся клеток влагалища. Понаблюдайте за эстральными циклами и выберите мышей, у которых есть хотя бы один непрерывный и полный цикл.

  1. Дайте мышам акклиматизироваться к окружающей среде за 1 неделю до начала экспериментов. Пометьте мышей с помощью ушного прокола после периода адаптации. Записывайте измерения массы тела сразу после маркировки.
  2. Надежно удерживайте мышей до тех пор, пока не произойдет естественное мочеиспускание, вызванное стрессом. Обездвижить, зажав кожу тыльной стороны шеи между большим и указательным пальцами левой руки. Расположите голову мыши вниз, чтобы полностью обнажить брюшную область.
  3. Загрузите стерильный наконечник для пипетки в микропипетку. Аспират 10 мкл стерильного физиологического раствора. Выполните три последовательных цикла промывания через вагинальный канал. Удерживайте жидкость для промывания внутри наконечника пипетки.
  4. Равномерно распределите жидкость для промывания по предметному стеклу стеклянного микроскопа. Сухие слайды на воздухе полностью при комнатной температуре. Зафиксируйте клетки, погрузив их в 95% этанол для сохранения. Этикетируйте предметные стекла комплексно с экспериментальными параметрами и поддерживайте защищенное хранение в светонепроницаемых ящиках при температуре 4 °C в необработанном состоянии.
  5. Протокол окрашивания Райта
    1. Погрузите горки в 95% этанол (на 3-10 минут). Тщательно промойте под струей дистиллированной воды.
    2. Пропустите слайды через ванну с 95% этанолом (продолжительность 1 минута).
    3. Соскребите окисленную пленку с поверхности раствора гематоксилина с помощью чистой фильтровальной бумаги. Погрузите предметные стекла в фильтрованный гематоксилин (на 5 мин).
    4. Промойте горки дистиллированной водой. Кратковременно (<1 с) опустить в 1% раствор HCl. В комплекте с расширенным ополаскиванием дистиллированной водой.
    5. Приготовьте смешанное морилку с помощью растворов Orange G и EA50. Пятно скользит по смеси (на 3 мин).
    6. Пропустите слайды через три последовательные ванны с 95% этанолом (интервал 5 секунд).
    7. Обработку ксилолом проводить в два этапа (по 2 мин каждый).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Работайте в вытяжном шкафу, чтобы избежать вдыхания паров ксилола. Закройте контейнеры сразу после использования.
    8. Постоянная консервация образцов с помощью монтажной среды с нейтральной смолой
  6. При чтении предметного стекла под микроскопом определите клетки с бледно-розовой цитоплазмой и темно-фиолетовыми ядрами как ядроизированные эпителиальные клетки, неправильные чешуйчатые безъядерные бледно-розовые клетки как ороговевшие эпителиальные клетки, а маленькие круглые голубые клетки как лейкоциты.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Определите стадию эстрального цикла на основе следующих цитологических характеристик: (1) Фаза проэструса: Преобладающие ядросодержащие эпителиальные клетки. Отображаются как в виде отдельных ячеек, так и в виде сгруппированных листов. Редкое наличие лейкоцитов (<5% поля зрения); (2) Фаза течки: Обильное количество одревесневших ороговевших эпителиальных клеток. Характеристика: крупная уплощенная морфология с неправильными границами. Практически полное отсутствие лейкоцитов и ядросодержащих клеток (<2% вместе взятых); (3) Фаза Metestrus: уменьшение популяции ороговевших клеток. Возникающая лейкоцитарная инфильтрация. Вновь появляющиеся ядросодержащие эпителиальные клетки (20%-40% состава); (4) Фаза диэструса: доминантные лейкоциты и ядросодержащие клетки (>80%). Практически полное отсутствие ороговевших клеток (<1%)5. Обратитесь к стандартизированному цитологическому атласу на рисунке 1 для проверки шаблона.
  7. Систематизируйте и проанализируйте данные и выберите 24 мыши с нормальным циклом течки.

2. Приготовление циклофосфамида для инъекций

ПРИМЕЧАНИЕ: Циклофосфамид неустойчив к свету, и его следует обрабатывать в темноте на протяжении всего процесса. Циклофосфамид токсичен, поэтому во время операции следует надевать защитную одежду, двухслойные нитриловые перчатки и маски.

  1. Добавьте 200 мг стерильного порошка циклофосфамида фармацевтического класса к 10 мл стерильного физиологического раствора. Тщательно перемешайте до получения раствора циклофосфамида 20 мг/мл. Оставьте одну порцию для немедленного использования; С остатком приготовьте дополнительные концентрации.
  2. Перелейте 200 мкл из 20 мг/мл в центрифужную пробирку объемом 1,5 мл, обернутую алюминиевой фольгой. Добавьте 800 мкл стерильного физиологического раствора, чтобы получить общий объем 1 мл. Вихревую смесь в течение 30 с до получения раствора 4 мг/мл. Подготовьте 14 одинаковых аликвот (по 1 мл каждая). Храните все аликвоты при температуре -20 °C в вертикальном стеллаже.

3. Введение раствора циклофосфамида

ПРИМЕЧАНИЕ: Рандомизируйте 24 мыши на три когорты с помощью компьютеризированной системы: (1) BLANK: Нет лечения (n = 8); (2) NS: контроль физиологического раствора (n = 8); (3) POI: Циклофосфамидная группа (n = 8). Делайте инъекции мышам каждое утро в 9:00. В группе POI внутрибрюшинно вводят 100 мг/кг раствора циклофосфамида в первый день, а затем непрерывно вводят 20 мг/кг раствора циклофосфамида в течение следующих 14 дней. Внутрибрюшинно введите равный объем нормального физиологического раствора в группу NS и оставьте группу BALNK без лечения. Взвешивайте всех мышей перед каждой инъекцией, каждый день, и собирайте отшелушенные клетки влагалища для мазка после инъекции.

  1. Поместите ватный тампон, пропитанный изофлураном, с щипцами в герметичный контейнер. Поместите мышь внутрь контейнера для ингаляционной анестезии в течение 10 с.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Изофлуран является летучим анестетиком с определенной токсичностью и раздражением. Операции должны проводиться в хорошо проветриваемой среде в соответствии с утвержденными в учреждении протоколами.
  2. Рассчитайте объем инъекции: Масса тела (г) × 5 = мкл. Продезинфицируйте правый нижний квадрант с помощью тампона с содержанием этанола 75%. Введите иглу 26 G под углом 30-45° (ориентация скоса вверх). Продвигайтесь на 5 мм через брюшную стенку до ощущения «хлопка». Поставка раствора со скоростью 50 мкл/с.
  3. Поместите остатки жидкости и загрязненное оборудование в светонепроницаемые контейнеры для отходов с маркировкой «СВЕТОЧУВСТВИТЕЛЬНЫЕ ОТХОДЫ». Выбросьте ватные шарики, пропитанные изофлураном, в специальные герметичные контейнеры с прозрачными этикетками «ОПАСНЫЕ ОТХОДЫ».
  4. Разморозьте замороженные аликвоты 4 мг/мл на водяной бане при температуре 37 °C (3 минуты). Пересчитайте суточную дозу: масса тела (г) × 5 = мкл. Проверьте прозрачность раствора перед загрузкой шприца.

4. Сбор сыворотки

ПРИМЕЧАНИЕ: Через 15 дней после введения раствора циклофосфамида соберите кровь из верхушки сердца всех мышей. Центрифуга для получения сыворотки. Мыши в контрольной группе и группе NS должны быть отобраны во время фазы диэструса. Мышам группы POI подверглась согласованной по времени выборке в паре с мышами контрольной группы/группы NS, у которых было подтверждено, что они находятся в диэструсе.

  1. Обезболивание мыши
    1. Поместите мышь в прозрачную воздухонепроницаемую камеру, содержащую ватный шарик, насыщенный изофлураном.
    2. Понаблюдайте за поведением мыши. Потеря выпрямляющего рефлекса (неспособность самостоятельно корректировать осанку при мягком положении на спине) свидетельствует об адекватной индукции анестезии. Этот процесс обычно занимает 2-3 минуты.
    3. Извлеките мышь из контейнера. Зафиксируйте его голову левой рукой, а указательным пальцем аккуратно надавите на верхнее веко. Держите стерильный ватный тампон в правой руке, окуните его в глазную мазь эритромицин, чтобы набрать количество диаметром 1-2 мм.
      1. Равномерно нанесите мазь на поверхность глазного яблока и внутреннее веко. Закройте веко, затем аккуратно помассируйте кончиком пальца в течение 10 с, чтобы мазь равномерно распределилась. Сотрите излишки мази вокруг глаза с помощью сухой ватной палочки.
  2. Расположите мышь в положении лежа на спине на поролоновой доске. Подстригите волосы на груди с помощью хирургических ножниц. Продезинфицируйте грудную клетку и брюшную полость 75% этанолом.
    1. Надрезайте кожу и подкожную клетчатку по средней линии. Разрежьте межреберные мышцы продольно вдоль левой стороны грудины. Обнажите сердце.
  3. Введите шприц (скос иглы вверх) в верхушку сердца под углом около 30°. Продвигайте иглу медленно и осторожно отсасывайте. Введите полученную кровь в центрифужную пробирку объемом 1,5 мл.
  4. Полученную кровь поместите в центрифугу. Установите центрифугу на 850 × г на 10 мин при температуре 4 °C. С помощью пипетки извлеките сыворотку верхнего слоя и поместите ее в центрифужную пробирку объемом 0,5 мл. Хранить его при температуре -80 °C.

5. Определение сывороточных эстрогенов, ФСГ и АМГ

  1. Положите замороженную сыворотку в холодильник при температуре 4 °C на ночь, чтобы она медленно оттаяла.
  2. Достаньте набор ИФА из холодильника за 30 минут, чтобы реагенты в нем вернулись к комнатной температуре.
  3. Согласно инструкции к набору, выполняйте серийные разведения стандарта с использованием стандартного разбавителя. Как правило, задайте несколько градиентов концентрации, таких как 0, 10, 20, 40, 80, 160 пг/мл и т. д.
  4. Добавьте разбавленный стандарт и образцы сыворотки, подлежащие исследованию, в соответствующие лунки планшета ИФА по 100 мкл на лунку. В это же время настройте глухие контрольные лунки и добавьте 100 мкл разбавителя пробы.
  5. Поместите планшет с методом ИФА в инкубатор при температуре 37 °C на 1-2 часа, чтобы антиген и антитела полностью связались.
  6. После того как инкубация закончится, осторожно отсасывайте жидкость в лунки. Промойте пластину ИФА моющим раствором 3-5 раз. После каждой стирки аккуратно промокайте пластину ИФА насухо, чтобы удалить остатки моющего раствора.
  7. Добавьте меченный ферментом рабочий раствор антитела, 100 мкл на лунку. Продолжайте инкубацию в инкубаторе при температуре 37 °C в течение 1 ч.
  8. Повторите описанные выше шаги стирки, промойте 3-5 раз и промокните пластину ИФА насухо.
  9. Добавьте по 100 мкл раствора субстрата в каждую лунку. Аккуратно перемешайте, встряхивая. Выдерживать в темноте при температуре 37 °C в течение 15-30 минут, пока не разовьется прозрачный синий цвет.
  10. Добавьте по 100 мкл концевого раствора в каждую лунку, чтобы остановить реакцию. Наблюдайте за изменением цвета с синего на желтый.
  11. Используйте считыватель микропланшетов для считывания значений поглощения (значений А) каждой лунки на длине волны 450 нм и записи данных.
  12. Чтобы построить стандартную кривую, возьмите концентрацию эталона в качестве абсциссы и соответствующее значение поглощения в качестве ординаты. Как правило, используйте полиномиальную аппроксимацию, чтобы гарантировать, что коэффициент корреляции r² стандартной кривой больше 0,99.
    1. В соответствии со стандартной кривой подставьте значение абсорбции исследуемого образца сыворотки в уравнение стандартной кривой, чтобы рассчитать концентрацию гормона в образце.

6. Забор ткани яичника

  1. Усыпьте мышь, находящуюся под наркозом, путем вывиха шейки матки (в соответствии с утвержденными в учреждении протоколами), а затем с помощью хирургических ножниц вскройте брюшную полость мыши.
  2. Яичники расположены ниже почек и обернуты белыми жировыми пакетами. Аккуратно приподнимите жировые пакеты с помощью щипцов, чтобы обнажить яичники и маточные трубы. С помощью ножниц отделите яичники от окружающих соединительных тканей.
  3. Поместите удаленные ткани яичников в 4% параформальдегид для фиксации на 24 ч.

7. Подготовка парафиновых срезов

  1. Обезвоживание: Выньте яичники и пропустите их через растворы этанола разной концентрации (75%, 85%, 95%, 100%) последовательно, каждый шаг длится 1 ч.
  2. Прозрачная обработка: Сначала обработайте яичники смесью ксилола и этанола в течение 15 минут. Затем погрузите их в ксилол I и ксилол II на 15 минут каждый.
  3. Восковая пропитка: Погрузите яичники в смесь ксилола и парафина. Затем перенесите их в парафин I, парафин II и парафин III на 0,5 ч каждый.
  4. Заделка: Поместите пропитанные воском завязи в форму для заделки. Отрегулируйте ориентацию тканей (поверхностью разреза вниз). Налейте в форму расплавленный парафин и дайте ему остыть и застыть.
  5. Секция: Разрежьте парафиновый блок на секции толщиной 5 мкм с помощью микротома. Выполните последовательное сечение и аккуратно перенесите ленту щеткой, следя за тем, чтобы она образовала однородную полупрозрачную полосу, которая лежит ровно без искажений при плавании на водяной бане

8. Окрашивание H&E

  1. Депарафинизация: Погрузите залитые парафином срезы в ксилол I на 10 минут. Затем переложите срезы в ксилол II и замочите еще на 10 минут.
  2. Регидратация: Пропустите секции через серию растворов этанола различных концентраций в последовательности: 100% этанол, 95% этанол, 85% этанол и 75% этанол, со временем погружения 5 минут для каждого. Наконец, промойте срезы дистиллированной водой в течение 1 минуты.
  3. Окрашивание гематоксилином: Погрузить участки в раствор для окрашивания гематоксилина на 5 минут. Промойте секции под проточной водой в течение 30 с.
  4. Дифференцировка: Погрузите срезы в 1% раствор соляной кислоты-этанола на 1-3 с. Промойте срезы под проточной водой в течение 1-2 минут.
  5. Цитоплазматическое окрашивание: погрузить в раствор эозина Y (1 мин). Промокните излишки пятна фильтровальной бумагой.
  6. Обезвоживание: Пропустите секции через ряд растворов этанола: 85% этанола, 95% этанола и 100% этанола (дважды), время погружения 5 с для каждого.
  7. Очищение: Погрузите срезы в ксилол I на 5 минут. Затем переложите срезы в ксилол II и замочите еще на 5 минут.
  8. Монтаж: Капните нейтральную смолу на окрашенный участок. Аккуратно наденьте на секцию покровную крышку.
  9. Подсчет фолликулов: Наблюдайте за окрашенными участками под микроскопом. Подсчитайте и запишите количество фолликулов на разных стадиях развития.

9. Иммуногистохимия на каспазу-3 в ткани яичников

  1. Извлечение антигена: Поместите депарафинизированные и регидратированные срезы в буфер цитрата натрия (pH 6,0). Разогрейте секции в микроволновой печи на высокой мощности в течение 5 минут. Затем выньте их и дайте остыть.
    1. Повторите процесс нагрева еще 2 раза, всего 3 цикла нагрева. После естественного охлаждения промойте секции PBS 3 раза, каждый раз в течение 5 минут.
  2. Элиминация эндогенной пероксидазы: добавьте 3% H₂O₂ по каплям на срезы. Инкубируйте секции при комнатной температуре в темноте в течение 10 минут. Промойте срезы PBS 3 раза, каждый раз по 3 мин.
  3. Блокирование сыворотки крови и инкубация антител: Добавляйте кроличье первичное антитело к каспазе-3 по каплям на срезы. Инкубируйте секции во влажном боксе при температуре 4 °C в течение ночи. На следующий день дайте секциям вернуться к комнатной температуре в течение 30 минут. Промойте секции PBS 3 раза, каждый раз по 5 минут.
  4. Разработка цвета, противодействие и монтаж: Используйте DAB для обработки цвета, которая обычно занимает около 1-5 минут. Запятнайте участки гематоксилином в течение 2 мин. После удаления пятен промыть срезы в течение 5 минут.
    1. Затем поместите секции в аммиачную воду на 1 минуту, чтобы они стали синими. Наконец, выполните обезвоживание с помощью градиента этанола, очистите срезы и установите их.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Процесс создания мышиной модели POI проиллюстрирован на рисунке 2. Массу тела и эстральный цикл мышей регистрировали, начиная с первого дня введения препарата. После 15 дней инъекции CTX средняя скорость снижения массы тела мышей в группе POI (3,717% ± 1,463%) была значительно выше, чем в группе BLANK (0,2526% ± 0,1469%) и группе NS (0,4305% ± 0,2494%) (p < 0,0001). Статистически значимой разницы в массе тела между группой NS и группой BLANK не выявлено (p > 0,05). (<...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Преждевременная недостаточность яичников (ПОИ) серьезно влияет на физическое здоровье и качество жизни женщин, и ее распространенность во всем мире растет с каждым годом. Однако в настоящее время все еще не хватает безопасных и эффективных методов лечения POI. Создание надежной и воспроизводимой модели на животных имеет решающее значение для продвижения исследований в области POI. Клинически причины возникновения POI разнообразны, и химиотерапевтические препараты являются важными известн...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.

Благодарности

Авторы выражают благодарность за финансовую поддержку, полученную от Медицинского фонда Ву Цзепина в рамках его Специальной программы финансирования клинических исследований (грант No 320.6750.17067). Мы также выражаем признательность за исследовательскую платформу и техническую поддержку, предоставленную компанией Anhui Shendong Biotechnology Development Co., Ltd.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
4% параформальдегидаСангон Биоинженерия Ко., ЛтдA500684-0500
75% алкоголяШаньдун Десинкан Медицинские Технологии Ко., Лтд200603
Безводный этанолЗавод химических реактивов Бэнбу
Центрифужные пробиркиБиошарпБС-15-М
Холодный столКванлин МедикалQL-LT20230003
Ватные шарикиШаньдун Бриллианс Ко., Лтд20241008
Покровные стеклаЦзянсу Шитай Экспериментальное оборудование Ко., Лтд80312-3412
ЦиклофосфамидБакстер Онкология ГмбХ3К645А
ОсушительХубэй Сяогань Хайкуо Медицинские Технологии Ко., ЛтдКХ-ТС
Красильная машинаХубэй Сяогань Хайкуо Медицинские Технологии Ко., ЛтдKH-S101 
Раствор для окрашивания EA50Хубэй Тайкан Медицинское оборудование Ко., ЛтдДж7ЭК20
Плоскогубцы для ушных бирокШэньчжэнь Руйводэ Медико-биологические науки и технологииС22002-10
Эффективное секционирование парафинаТонгсян Хуалинг Восковая Промышленность Ко., Лтд20241018
Электрическая печь для доменной сушки (печь)Шанхайская компания Yuejin Medical Equipment Co., LtdХЧФ-11
Термостатический инкубатор для воды с электрическим подогревомШанхайская компания Yuejin Medical Equipment Co., LtdТШВ-600
Встраиваемый станокПрисстар Чанчжоу Медикал Девайс Ко., ЛтдПМБ-А
Морилка ЭозинСьюэлл Биотехнология Ко., ЛтдГ1005-2
Раствор для дифференцировки гематоксилинаСьюэлл Биотехнология Ко., ЛтдГ1039-500МЛ
Раствор для окрашивания гематоксилинаСьюэлл Биотехнология Ко., ЛтдГ1005-1
ИзофлуранШаньдун Анте Животноводческие Технологии Ко., Лтд2024101501
микроскопАньхой Цзяшан Биотехнология Ко., ЛтдСКС-12П
Набор для антимюллерова гормона (АМГ) мыши ИФАХэнъюань БиотехнологияНВ1334-МУ
Набор для иммуноферментного анализа мышей эстрадиола (Е2)Хэнъюань БиотехнологияНВ975-МУ
Набор для иммуноферментного анализа фолликулостимулирующего гормона мыши (ФСГ)Хэнъюань БиотехнологияНВ967-МУ
Нейтральная камедьНаньчан Юлу Экспериментальное оборудование Ко., Лтд240504
Аппарат патологического отбеливания тканейПрисстар Чанчжоу Медикал Девайс Ко., ЛтдPHY-III
Буфер PBSБиошарпБЛ302А
Наконечники для пипетокБиошарпБС-10-Т
ПипеткиДалонг Медицинское оборудование Ко., ЛтдYE213AT0257922
Быстрый дегидратор тканейХубэй Сяогань Хайкуо Медицинские Технологии Ко., ЛтдКХ-ТС
СрезаГеддиYD-315
СлайдыЦзянсу Шитай Экспериментальное оборудование Ко., Лтд80312-3161
Машина для размазыванияХубэй Тайкан Медицинское оборудование Ко., Лтд131001305
Инъекции хлорида натрияУхань Бинху Шуанхэ Фармацевтическая Компания, Лтд240525К04
шприцЦзянсу Чжиюй Медицинское устройство Ко., Лтд
Вибрационный слайсерШанхай Чжисинь Инструмент Ко., ЛтдЗКП-86
КсилолТяньцзинь Кайтун Химический Реагент Ко., Лтд20240102

Ссылки

  1. Federici, S., et al. Primary ovarian insufficiency: update on clinical and genetic findings. Front Endocrinol. 15, 1464803(2024).
  2. Soleimani, R., Heytens, E., Darzynkiewicz, Z., Oktay, K. Mechanisms of chemotherapy-induced human ovarian aging: Double-strand DNA breaks and microvascular compromise. Aging (Albany NY). 3 (8), 782-793 (2011).
  3. Bellusci, G., et al. Kinase-independent inhibition of cyclophosphamide-induced pathways protects the ovarian reserve and prolongs fertility. Cell Death Dis. 10 (10), 726(2019).
  4. Yuksel, A., et al. The magnitude of gonadotoxicity of chemotherapy drugs on ovarian follicles and granulosa cells varies depending upon the category of the drugs and the type of granulosa cells. Hum Reprod. 30 (12), 2926-2935 (2015).
  5. Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update. Fertil Re Pract. 6, 5(2020).
  6. Wang, Z., Wang, Y., Yang, T., Li, J., Yang, X. Study of the reparative effects of menstrual-derived stem cells on premature ovarian failure in mice. Stem Cell Res Ther. 8 (1), 11(2017).
  7. Shen, J., et al. Transplantation of the LRP1(high) subpopulation of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells improves ovarian function in mice with premature ovarian failure and aged mice. Stem Cell Res Ther. 15 (1), 64(2024).
  8. Letourneau, J. M., et al. Acute ovarian failure underestimates age-specific reproductive impairment for young women undergoing chemotherapy for cancer. Cancer. 118 (7), 1933-1939 (2012).
  9. Nynca, A., et al. Tamoxifen decreases ovarian toxicity without compromising cancer treatment in a rat model of mammary cancer. BMC Genomics. 24 (1), 325(2023).
  10. Feng, Y., et al. Protective effect of Luffa cylindrica fermentation liquid on cyclophosphamide-induced premature ovarian failure in female mice by attenuating oxidative stress, inflammation and apoptosis. J Ovarian Res. 17 (1), 24(2024).
  11. Huang, Y., et al. Bushen Huoxue recipe ameliorates ovarian function via promoting BMSCs proliferation and homing to ovaries in POI mice. Phytomedicine. 129, 155630(2024).
  12. Ai, G., et al. Adipose-derived stem cells promote the repair of chemotherapy-induced premature ovarian failure by inhibiting granulosa cells apoptosis and senescence. Stem Cell Res Ther. 14 (1), 75(2023).
  13. Anderson, R. A., et al. Anti-Müllerian hormone as a marker of ovarian reserve and premature ovarian insufficiency in children and women with cancer: A systematic review. Hum Reprod Update. 28 (3), 417-434 (2022).
  14. Jiao, X., et al. Ovarian reserve markers in premature ovarian insufficiency: within different clinical stages and different etiologies. Front Endocrinol. 12, 601752(2021).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

POI
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.