Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Исследовательская статья
Это исследование демонстрирует, что отвар Янцзин Чжунъюй улучшает результаты вспомогательной репродукции у женщин с уменьшенным овариальным резервом за счет улучшения качества ооцитов и эмбрионов. В модели преждевременной недостаточности яичников на крысах отвар восстанавливал гормональный баланс, способствовал развитию фолликулов и модулировал аутофагию и липидный обмен.
Отвар Янцзин Чжунъюй (YZD), традиционная китайская травяная формула, был предложен для улучшения функции яичников и результатов фертильности, но стандартизированные клинические данные остаются ограниченными. В этом исследовании оценивали эффекты YZD у женщин с уменьшенным овариальным резервом (DOR), перенесших ЭКО/ICSI-ET, наряду с механистической валидацией в модели преждевременной недостаточности яичников (POF) на крысах. В клиническом исследовании пациенты с ДОР получали либо стандартный протокол антагонистов ГнРГ отдельно, либо в комбинации с YZD. Исходные характеристики между группами были сопоставимы, и группа YZD показала большее количество извлеченных ооцитов и высококачественных эмбрионов, а также улучшила показатели синдрома традиционной китайской медицины. Параллельно с этим у крыс индуцировали ПНЯ, и у животных, получавших YZD, наблюдалось улучшение эстральной цикличности, восстановление уровня эстрадиола в сыворотке крови, снижение фолликулостимулирующего гормона и улучшение гистологии яичников. Электронная микроскопия показала, что YZD снижает избыточное образование аутофагосом и накопление липидов в клетках яичников, что свидетельствует о регуляции оси аутофагии-липидного обмена. В совокупности эти данные указывают на то, что YZD усиливает функцию овариального резерва, улучшает развитие эмбриона и может увеличить потенциал беременности у женщин с DOR. Этот стандартизированный протокол обеспечивает воспроизводимую основу для интеграции YZD в циклы вспомогательных репродуктивных технологий, поддерживая его трансляционный потенциал в клинической репродуктивной медицине.
Уменьшенный овариальный резерв (ДОР) является клиническим состоянием, которое ставит под угрозу репродуктивное здоровье женщины и характеризуется снижением количества или качества фолликулов яичников1. Клинически это отражается снижением количества антральных фолликулов, снижением уровня антимюллерова гормона (АМГ) или повышением концентрации фолликулостимулирующего гормона (ФСГ)2. ДОР составляет примерно 10% случаев бесплодия и представляет собой основное препятствие на пути к успешному зачатию3. В контексте вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) распространенность ДОР оценивается в 19%-26% в Соединенных Штатах Америки4, и это связано со снижением частоты наступления беременности, более высокой частотой преэклампсии и повышенным риском повторного выкидыша5. Несмотря на наличие множественных терапевтических подходов, улучшение результатов АРТ у пациентов с ДОР остается серьезной проблемой, что подчеркивает необходимость новых и эффективных вмешательств6.
Отвар Янцзин Чжунъюй (YZD), классическая формула традиционной китайской медицины (ТКМ) из нескольких трав, издавна применяется в репродуктивной практике7. Считается, что он улучшает эндокринный баланс и поддерживает функцию яичников, тем самым улучшая результаты циклов экстракорпорального оплодотворения и интрацитоплазматической инъекции сперматозоида и переноса эмбрионов (ЭКО/ИКСИ-ЭТ)8. Предварительные клинические данные свидетельствуют о том, что YZD может улучшить ответ яичников, но строгие механистические и трансляционные исследования все еще ограничены. Точные биологические пути, через которые действует YZD у пациентов с DOR, остаются неясными 9,10. Современная литература указывает на то, что китайские растительные соединения могут влиять на микроокружение яичников с помощью нескольких механизмов, таких как модуляция экспрессии АМГ, ингибирование сигнальных путей, связанных с фолликулярной атрезией, включая PI3K/AKT/mTOR, и уменьшение окислительного стрессового повреждения. Однако эти механистические гипотезы в значительной степени косвенны и не имеют экспериментального подтверждения.
Данное исследование устраняет эти пробелы путем интеграции клинической оценки с экспериментальной проверкой. В частности, мы изучили эффекты YZD у женщин с ДОР, проходящих АРТ, и исследовали его механистическую основу с использованием модели крыс, индуцированной гликозидом триптеригия. В экспериментах на животных мы контролировали эндокринные маркеры (эстрадиол и ФСГ), количество антральных фолликулов, образование аутофагосом и накопление липидов в ткани яичников. Сочетая клинические результаты с экспериментальными механистическими данными, эта работа обеспечивает стандартизированный протокол для включения YZD в циклы ЭКО/ИКСИ-ЭТ и предлагает новые доказательства, подтверждающие его потенциал в качестве дополнительной терапии для улучшения овариального резерва и репродуктивных исходов у пациентов с DOR. Новизна этого исследования заключается в его двойном подходе, связывающем стандартизированное клиническое применение с механистическими идеями, что способствует как клиническому переводу, так и теоретическому пониманию YZD в репродуктивной медицине.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Все клинические процедуры проводились в соответствии с Хельсинкской декларацией и были одобрены Комитетом по этике Шанхайской больницы Чанхай (Approval No. CHEC2022-156). Письменное информированное согласие было получено от всех участников. Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике Чанхайского медицинского колледжа (Одобрение No. CHEC2022-156) и соответствовали национальным стандартам ухода за лабораторными животными.
Клинические особенности
Набор и группировка пациентов
С августа 2022 года по март 2023 года из Центра репродуктивной медицины Первого аффилированного госпиталя Военно-морского медицинского университета и амбулаторного отделения больницы Юэян Шанхайского университета традиционной китайской медицины было набрано 78 пациентов с диагнозом «Синдром дефицита почек-инь10 » и обратившихся за АРТ. Участники были случайным образом распределены либо в контрольную группу, либо в группу лечения (по 39 случаев в каждой) с использованием генерации случайных чисел SPSS 23.0.
Критерии диагностики
Западный медицинский диагноз последовал заключению Комитета Американского общества репродуктивной медицины (ASRM) 2020 года о показателях овариального резерва11. Критерии включали ФСГ ≥ 10 МЕ/л, эстрадиол ≥ 80 пг/мл, количество антральных фолликулов (AFC) < 7 и АМГ < 0,5-1,1 нг/мл. Диагноз синдрома почечно-иньского дефицита проводился в соответствии с Гинекологией традиционной китайской медицины12 и Критериями диагностической эффективности синдромов ТКМ13.
Критерии включения и исключения
Критериями включения были запланированы ЭКО/ИКСИ-ЭТ с использованием протокола антагонистов; плохой ответ яичников в анамнезе (< 5 извлеченных ооцитов); возраст 20-40 лет; соответствие критериям ДОР и синдрома ТКМ; и подписанное информированное согласие. Критерии исключения включали патологию эндометрия (полипы, туберкулез, дисплазия, рак), мальформацию матки, сопутствующие заболевания (диабет, волчанка), недавнюю гормональную терапию (< 3 месяцев), хирургические операции на органах малого таза в анамнезе, хромосомные аномалии или лекарственную аллергию. Критерии элиминации применялись в случае отклонения протокола, нежелательных явлений, отмены или спонтанного зачатия в течение 2 недель после включения в исследование.
Медикаментозный метод
Обе группы прошли базовую оценку на 2-3-й день менструального цикла с помощью трансвагинального ультразвукового исследования и гормонального тестирования. Контрольная группа получала схему приема антагонистов: рекомбинантный ФСГ или человеческий менопаузальный гонадотропин, начальная доза 225 МЕ/сут внутримышечно в течение 5 дней с последующей коррекцией дозы в зависимости от роста фолликулов. Когда диаметр ведущего фолликула превышал 12 мм, начинали прием антагониста ГнРГ (0,125 мг/сут подкожно) и продолжали до триггера. Когда ≥ 1 фолликул достигал 18 мм, ≥ 2 достигал 17 мм, или ≥ 3 достигал 16 мм, овуляцию запускали с 250 мкг рекомбинантного ХГЧ с последующим извлечением ооцитов через 34-36 ч.
Группа лечения следовала тому же протоколу с добавлением отвара Янцзин Чжунъюй (YZD), вводимого перорально 2 раза в день (утром и вечером), по одному отвару в день, начиная со 2-3 дня менструального цикла до триггерного дня. Клиническая формула содержала Rehmannia 12 г, Paeonia lactiflora 12 г, Cornus officinalis 10 г и Angelica sinensis 12 г.
Индикаторы наблюдения
Клинические исходы включали исходные параметры возраста, ИМТ (рассчитанный как вес (кг)/рост² (м²)), продолжительность бесплодия, ФСГ, доза/продолжительность гонадотропина, баллы по синдрому почечно-иньского дефицита, количество антральных фолликулов (оценено с помощью трансвагинального УЗИ, 2-9 мм в диаметре), извлеченные ооциты, ооциты метафазы II (MII) (идентифицированы при заборе ооцитов), оплодотворенные эмбрионы, спайады, высококачественные эмбрионы (определены стандартными лабораторными критериями эмбриологии). и частота клинической беременности, которая определялась как наличие гестационного мешка на УЗИ на 6-7 неделе беременности.
Подопытные животные
Здесь 30 самок крыс класса SPF Sprague-Dawley (в возрасте 8 недель, 160-200 г) были акклиматизированы в контролируемых условиях (23 ± 2 °C, влажность 40%-45%, 12-часовой цикл света/темноты) с пищей и водой ad libitum .
Приготовление лекарств
YZD готовили из Rehmannia 30 г, Angelica 15 г, Paeonia lactiflora 15 г и Cornus officinalis 15 г. Травы отваривали в воде, фильтровали через фильтр на 200 меш и концентрировали при пониженном давлении при 70 °C. Конечные растворы для низких, средних и высоких доз составляли 0,34 г/мл, 0,68 г/мл и 1,35 г/мл, что соответствует 0,5x, 1,0x и 1,2x клинической дозы YZD. Отвары хранили при температуре 4 °С.
Моделирование и группировка
Модель DOR индуцировали путем внутрибрюшинного введения триптеригийгликозидов (40 мг/кг ежедневно в течение 15 дней). Крысы были случайным образом распределены по холостым (n = 6), модельным (n = 6) и группам лечения YZD (низкая, средняя и высокая дозы; n = 6 каждая). Введение зонда (10 мл/кг массы тела) проводили 1 раз в сутки, начиная с первого дня введения гликозидов триптеригия и продолжая в течение 15 дней.
Цитология влагалища
Стадии эстрального цикла оценивали с помощью вагинальной эксфолиативной цитологии. Мазки из влагалища собирали один раз в день (08:00-10:00) стерильными ватными тампонами, разведенными в 30 мкл физиологического раствора, и исследовали под световым микроскопом при 100-кратном увеличении. Период наблюдения длился 15 дней подряд. Индекс нормального эстрального цикла определялся как доля крыс, демонстрирующих регулярные 4-5-дневные эстральные циклы в течение этого периода.
Анализы на гормоны
Цельную кровь собирали под наркозом с помощью пункции сердца в конце 15-дневного периода лечения, давали свернуться при комнатной температуре в течение 30 минут и центрифугировали при 1000 х г в течение 15 минут при 4 °C для получения сыворотки. Уровни Е2 и ФСГ измеряли методом ИФА в соответствии с инструкциями производителя.
Гистология яичников
Ткань яичников собирали сразу после эвтаназии путем хирургического удаления обоих яичников, промывали в холодном физрастворе для удаления крови, а затем фиксировали в 4% параформальдегиде при 4 °С в течение 24-48 ч. Ткани обезвоживали в сортированном этаноле, очищали в ксилоле, погружали в парафин и срезали при давлении 4-5 мкм. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, обезвоживали, очищали и монтировали.
Статистический анализ
Данные были проанализированы с помощью SPSS 26.0. Нормальные переменные выражали как среднее значение ± SD и сравнивали с помощью t-критерия; ненормальные переменные в качестве медианы (IQR) и сравнения с помощью U-критерия Манна-Уитни. Категориальные переменные выражались в % и сравнивались с помощью критерия хи-квадрат. p < 0,05 считался статистически значимым. Для согласованности те же статистические методы были применены к анализу фигур (без отдельного описания t-критерия Стьюдента).
Безопасность и утилизация отходов
Параформальдегид, ксилол и гликозиды триптеригиума обрабатывались в сертифицированных вытяжных шкафах с перчатками, защитными очками и лабораторными халатами; Разливы и загрязненные одноразовые материалы собирались в контейнеры с маркировкой опасных отходов и утилизировались в соответствии с институциональной СОП по биобезопасности. Все процедуры с использованием параформальдегида, ксилола и гликозидов триптеригиума выполнялись в вытяжных шкафах с соответствующими средствами индивидуальной защиты (перчатки, халаты, защитные очки). Химические отходы и туши животных были утилизированы в соответствии с институциональными рекомендациями по биобезопасности.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Клинические особенности
В ходе исследования 3 пациента в контрольной группе выбыли из-за инфекции COVID-19, а 1 был исключен из-за аномальной функции печени, осталось 35 пациентов. В группе лечения 4 выбыли из-за COVID-19, а 35 пациентов завершили исследование. Таким образом, в итоговый анализ было включено в общей сложности 70 испытуемых. Не было существенных различий между гру...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
В этом исследовании мы изучили потенциальную роль отвара Янцзин Чжунъюй (YZD) в качестве дополнительной терапии при сниженном овариальном резерве (DOR) в вспомогательных репродуктивных технологиях (ВРТ). Клинические данные показали, что пациенты, получавшие YZD в дополнение к стандартному протоколу антагонистов, достигли значительно большего количества извлеченных ооцитов и высококачественных эмбрионов. Хотя частота наступления беременности существенно не различалась между группами, набл...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.
Поддержка этой работы исходит от Национальной программы ключевых исследований и разработок Китая (номер гранта: 2018YFC1004900): исследование влияния и механизма отвара Янцзин Чжунъюй на регулирование микробного метаболита эрукамида в фолликулярной жидкости для улучшения функции яичников у крыс (номер гранта: 2024QN027)
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Центрифуга | Сепарация сыворотки (1000 x g, 15 мин, 4 и °; C) | Eppendorf 5810R | 5811 000.012 |
| Ватные палочки (стерильные) | Коллекция образцов вагинальной цитологии | Медицинские принадлежности Цзянсу Канцзянь | KJ-MW-01 |
| Набор ELISA для E2 | Количественная оценка эстрадиола в сыворотке (rat) | Elabscience Biotechnology Inc. | E-EL-0152 |
| Комплект ELISA для FSH | Количественная оценка ФСГ в сыворотке (rat) | Elabscience Biotechnology Inc. | E-EL-R0391 |
| Этанол (70– 100%) | Градуированное обезвоживание для гистологии | Sinopharm Chemical Reagent Co., Китай | 100092683 |
| Стеклянные слайды и Coverslips | Монтаж образца | Citotest Scientific, Китай | 7101/1812 |
| Гематоксилин и Эозин | Решение для окрашивания для гистологии | Beyotime Biotechnology, Китай | C0105S |
| Оптический микроскоп | Гистологические и цитологические наблюдения | Olympus (универсальный, без товарных знаков) | CX23 |
| Парафин | Среда встраивания | Leica Biosystems | 39601095 |
| Параформальдегид (4%) | Фиксатор для подготовки тканей | Сигма-Олдрич | P6148 |
| Физиологический раствор (0,9%) | Подготовка к вагинальному мазку | Sinopharm Chemical Reagent Co., Китай | 10019318 |
| Спраг и Ндаш; Крысы Доули | Экспериментальные животные (самки, 8 недель, 160 и далее; 200 г) | Пекинская Weitong Lihua Experimental Animal Tech Co., Ltd. | SCXK (Пекин) 2024-0011 |
| Программное обеспечение SPSS | Статистический анализ (версия 26.0) | IBM Corp. | RRID:SCR_002865 |
| Пропускной электронный микроскоп | Ультраструктурные наблюдения | JEOL Ltd. | JEM-1400Plus |
| Гликозиды триптеригия | Индукция модели крыс DOR | Поставщик дженериков (без товарного знака) | TG-001 |
| Ксилол | Клиринговый реагент для гистологии | Sinopharm Chemical Reagent Co., Китай | 10023418 |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.