Этот протокол демонстрирует, как проводить ампутацию ниже колена у крыс и немедленно проводить таргетную мышечную реиннервацию (iTMR) для изучения стратегий лечения и предотвращения боли, связанной с ампутацией, а также для лучшего понимания болевых механизмов, связанных с ампутацией.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Модель ампутации задних конечностей крысы ниже колена и немедленное целенаправленное мышечное реиннервирование
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Боль, связанная с ампутацией, снижает качество жизни пациента, способствует употреблению опиоидов и может снижать функциональную реабилитацию и использование протезов. Доклинические модели, которые надёжно вызывают боль после ампутации и сохраняют подвижность, необходимы для изучения биологических механизмов, лежащих в основе этих результатов. Здесь мы представляем подробный, воспроизводимый хирургический протокол на грызунах с использованием крыс Спраг-Доули для моделирования ампутации задних конечностей ниже колена. Процедура включает выделение и пересечение ветвей седалищного нерва, включая большеберцовский, общий малокостный и суральный нервы, что приводит к длительной послеампутационной патологии нервов и поведению, связанному с болью. Крысы хорошо восстанавливаются после этой процедуры и могут двигаться сразу после операции без проблем с едой и питвём. Животных впоследствии можно оценивать с помощью рефлекторных и спонтанных мер боли. Болевые поведения, возникающие в результате этой процедуры, со временем устойчивы, и стандартные рефлекторные болевые поведения можно получить из пня. Важно, что сохраненная подвижность позволяет проводить продольные поведенческие тесты без запутанного нарушения моторности. Хотя этот протокол основан на ампутации, его можно легко адаптировать для внедрения целенаправленной мышечной реиннервации (ТМР) в постампутационном вмешательстве путём коапции пересечений нервов к близлежащим моторным ветвям нервов к бицепсу бедра и полумембранозу, что позволит исследовать реиннервационные вмешательства и их влияние на боль после ампутации. Ранее мы успешно использовали эту модель для оценки специфических по полу различий в болевом поведении после ампутации и для изучения эффектов TMR. Этот протокол предоставляет надёжную и гибкую платформу для изучения боли, связанной с ампутацией, формирования невром и функциональных исходов, с применимостью к трансляционным исследованиям, направленным на улучшение боли после ампутации.
Введение
Хроническая боль — одно из самых тяжёлых осложнений после крупной ампутации конечности, затрагивающее до 70% пациентов 1,2,3. Традиционные методы управления болью, такие как фармакологические вмешательства, физиотерапия, нервные блокады и психологическая терапия, часто обеспечивают ограниченное или временноеоблегчение 4. Таким образом, существует значительная клиническая необходимость в эффективных долгосрочных стратегиях управления болью.
Таргетная мышечная реиннервация (TMR), изначально ра....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все процедуры с животными должны быть одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) и соответствовать Руководству Национального института здоровья (NIH) по уходу и использованию лабораторных животных.
1. Предоперационная подготовка
ПРИМЕЧАНИЕ: Использовались самцы и самки крыс рода Спраг-Доули (Charles River Laboratories) возрастом 8–10 недель и весом 250–300 г.
- Включите грелку и подготовьте стерильное хирургическое поле. Разместите стерильную подушечку перпендикулярно телу крысы для оптимальной экспозиции.
- О....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Эта модель ампутации задних конечностей надёжно вызывала невропатическое поведение, связанное с болью, сохраняя при этом способность к передвижению и исследованию у крыс. Как показано на рисунке 2, пересечение периферического нерва при ампутации без дистальной цели приводит к дезорганизованному росту аксонов и образованию невром в месте перевязки, что визуализируется с помощью иммуноокрашивания, связанного с генами B-тубулина и кальцитонина (CGRP). В отличие.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Этот протокол подробно описывает основные хирургические шаги для обеспечения воспроизводимости модели ампутации задней конечности и демонстрирует сохранение движения и поведенческого взаимодействия в послеампутационном тестировании. Ключевые хирургические принципы, включая тщательную анатомическую идентификацию, минимальную манипуляцию нервами и безнапряжённое обращение с перерезанными нервами, подчёркиваются для обеспечения согласованности и воспроизводимости среди хирургов. Эти техниче.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не заявляют о конфликтах интересов.
Благодарности
Это исследование было поддержано Медицинским колледжем Висконсинского исследовательского центра нейронаук, Фондом Риты Аллен и Фондом пластической хирургии. Авторы благодарят отделение сравнительной медицины за уход и поддержку по уходу за животными.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 10-0 nylon microsuture (Arosurgical) | AROSurgical | T04A10N07-13 | Мелкая нервная коаптационная шов. 10-0 микрошов. |
| 4-0 полигликолева кислота шов | Ethicon | AQ1268 | Закрывающая шов для мышц и кожи. Растворимая 4-0 шов. |
| 5-0 шелковый хирургический шов | Generic | Generic | Шов для лигирования нервов |
| Взрослые крысы Спрэг-Доуэли | Charles River Laboratories | Generic | Экспериментальное животное |
| Алкогольные подготовительные подушечки | Dukal Corporation | Generic | Антисептик для кожи |
| Бетадин 10% | Avrio Health LP | Generic | Антисептик |
| Костные ножницы | FST | 16030 | Инструмент для резки кости |
| Каuter | FST | 18010-00 | Инструмент для гемостаза |
| Вата с наконечником (ProAdvantage) | ProAdvantage | Ref 76100 | Манипуляция с тканями |
| Изгибные микродиссекторные ножницы | FST | 15019-10 | Тонкие ножницы для нейролиза |
| Пинцет (тонкий Dumont) | FST | 11254-20 | Инструмент для работы с нервами |
| Пинцет (Dumont для связывания швов) | FST | 11063-07 | Инструмент для работы с швами |
| Марля USP тип VII (Cardinal Health) | Cardinal Health | Ref 2146 | Поддерживает стерильное поле |
| Огревающий подушечный нагреватель (контроллер температуры TC1000) | Generic | TC1000 | Устройство для контроля температуры |
| Индукционная камера (Braintree Scientific) | Braintree Scientific Inc. | Generic | Для индукции анестезии |
| Изофлуран (Isospire) | Phoenix | Generic | Анестезирующее средство |
| Мелоксикам (Ostilox) | VetONE | 5 мг/мл | Аналгезирующее средство |
| Линейка | Generic | Generic | Инструмент для измерения анатомических ориентиров |
| Стерильный физиологический раствор | Baxter | 0.9 Sodium Lot Y425131 | Раствор для ирригации |
| Хирургическая лезвие 15 | FST | 10015-00 | Инструмент для разреза кожи |
| Туберкулиновая шприцевая игля | Generic | Generic | Для введения лекарственных средств |
| Испаритель (модель 100 Surgivet) | Surgivet | Model 100 S/N W2211123 | Для поддержания анестезии |
| Ветбонд тканевой клей | World Precision Instruments | Generic | Клей для кожи |
Ссылки
- Balakhanlou, E., Webster, J., Borgia, M., Resnik, L. Frequency and severity of phantom limb pain in veterans with major upper limb amputation: results of a national survey. PM R. 13 (8), 827-835 (2021).
- Resnik, L., Ekerholm, S., Borgia, M., Clark, M.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
