Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Исследовательская статья

Сигнализация нейрегулина1-ErbB4 участвует в акупунктуре, способствующей регенерации миелина у крыс, пострадавших от травм спинного мозга.

450 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/69166

⸱

20 февраля 2026 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Emergency and Intensive Care Unit, Beijing Anzhen Nanchong Hospital of Capital Medical University & Nanchong Central Hospital, 2Department of Neurology, Beijing Anzhen Nanchong Hospital of Capital Medical University & Nanchong Central Hospital, 3Department of Emergency and Intensive Care Unit, First Affiliated Hospital, Kunming Medical University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Данное исследование направлено на изучение влияния электроакупунктуры на регенерацию миелина в модели ТСМ у крыс и проверку роли в этом процессе сигнального пути Neuregulin1 (NRG1)-ErbB4.

Аннотация

Травма спинного мозга (ТСМ) часто приводит к тяжелой неврологической дисфункции, и восстановление миелина является важным этапом восстановления неврологических функций. Электроакупунктура (ЭА), терапевтический метод, сочетающий традиционную акупунктуру с электрической стимуляцией, широко применяется в области восстановления нервов. Однако конкретные сигнальные пути, участвующие в ЭА, до конца не прояснены. Цель данного исследования — изучить влияние ЭА на регенерацию миелина у крыс с ТСМ, а также проверить, играет ли сигнальный путь Neuregulin1 (NRG1)-ErbB4 в этом процессе. Крысы ТСМ были индуцированы травмой аневризмы в сегменте позвоночника T10. В позвоночный канал между межпозвоночными пространствами L5-6 был имплантирован полиэтиленовый катетер и зафиксирован подкожно для создания долгосрочной системы доставки лекарств. Экзогенный NRG1 и его антагонист вводились через катетер ПЭ через день, при объёме 20 мкл на инъекцию. Лечение ЭА проводилось в точках акупунктуры Дачжуй (GV14) и Минмэнь (GV4) через день, каждая сессия длилась 30 минут в течение 4 недель подряд. Результаты показали, что лечение ЭА значительно способствовало экспрессии миелинового базового белка (MBP) в ткани спинного мозга и улучшало моторную функцию задних конечностей у крыс. Кроме того, экзогенный NRG1 вызывал схожие эффекты с EA. В заключение, сигнальный путь NRG1-ErbB4 играет важную роль в регенерации миелина, индуцированной ЭА, у крыс у ТСМ.

Введение

ТСМ — это травматическое состояние, приводящее к тяжелым неврологическим нарушениям, обычно проявляющимся в проявлениях моторных нарушений, сенсорной потери и автономной дисфункции, с годовым уровнем заболеваемости примерно 40-80 случаев на миллион человек по всему миру 1,2. После травмы основными патологическими особенностями, затрудняющими проводящий нейронный сигнал 3, являются разрыв аксонала и потеря миелина. Миелин образуется олигодендроцитами центральной нервной системы (ЦНС) и клетками Шванна в периферической нервной системе (ПНС), и его целостность имеет решающее значение для быстрой проводимости нервныхимпульсов 4. Однако воспалительная реакция, окислительный стресс и формирование глиальных рубцов в локальной микросреде после ТСМ значительно подавляют регенерацию миелина, приводя к хронической неврологической дисфункции. В то же время гибель олигодендроцитов (ОЛ) после ТСМ приводит к демиелинизации аксонов — процессу, который развивается хронически и постоянно. Исследования показали, что аксональная демиелинизация как в человеческой, так и в животной моделях может быть эффективно восстановлена с помощью регенерациимиелина 6. Поэтому изучение стратегий стимулирования восстановления миелина является одним из ключевых направлений в лечении ТСМ.

Акупунктура, как древняя традиционная медицинская техника, широко применялась в клинической практике во многих странах, включая Китай, Корею иЯпонию 7,8. EA, сочетающая традиционную акупунктуру с электрической стимуляцией, широко применяется в клинических условиях. Всё больше данных свидетельствуют о терапевтическом эффекте ЭА при различных заболеваниях, особенно в стимулировании регенерации миелина после повреждения спинного мозга. Выбор точек акупунктуры критически важен при лечении ЭА, таких как GV14 иGV4 9. GV14 расположен ниже колючего отростка7-го шейного позвонка, близко к средней линии позвоночника, а GV4 — между шипистыми отростками2-го и3-го поясничных позвонков. Предыдущие исследования показали, что воспалительные сигнальные пути, окислительный стресс, нейротрофические факторы и аутофагия играют роль в восстановлении миелина, вызванномЭА 10,11,12. Кроме того, растущие данные свидетельствуют о том, что определённые точки акупунктуры, такие как GV14 и GV4, играют активную роль в стимулировании регенерации миелина во время леченияЭА 13,14,15. Однако молекулярные механизмы, с помощью которых ЭА регулирует регенерацию миелина после повреждения спинного мозга, до конца не прояснены.

NRG1 относится к семейству эпидермальных факторов роста, и на основе своей аминоконцевой области его можно классифицировать на шесть типов (I-VI)16. NRG1 и его семейство рецепторов, ErbB (ErbB1/2/3/4), играют значительную роль в развитии и восстановлении нервной системы, включая такие процессы, как миграция нейронов, дифференциация, ремиелинизация и синаптогенез. Во время развития ПНС клетки Шванна (СК) размножаются и мигрируют по аксонам нейронов, образуя миелин, а сигнальный путь NRG1-ErbB4 играет ключевую роль в созревании предшественников PNSSchwann 17,18. Предыдущие исследования показали, что сигнальный путь NRG1 участвует в дифференцировке нейронных стволовых клеток в клетки Шванна и способствует восстановлению миелина нейронных клеток послеSCI 19. Кроме того, одно исследование показало, что после повреждения спинного мозга сигнальный путь NRG1-ErbB4 способствует трансформации прогениторных клеток олигодендроцитов (OPC) в клетки, подобные Шванну, с потенциалом ремиелинизации20. Алекс и соавт. создали кокультурную систему индуцированных плюрипотентными сенсорными нейронами, полученными из стволовых клеток, и крысиных клеток Шванна и обнаружили, что блокировка сигнального пути NRG1-ErbB препаратами значительно ингибирует нейронную миелинизацию, что дает прямое доказательство роли этого пути в стимулировании миелинизации сенсорных аксонов человека21. Другое исследование также показало, что лечение ЭА может повышать экспрессию NRG1 в спинном мозге и облегчать воспалительныеболи 22.

Исследования влияния ЭА на сигнальный путь NRG1-ErbB4 при ТСМ ограничены, а основные механизмы остаются неясными. Цель данного исследования — выяснить, может ли стимуляция ЭА в точках акупунктуры GV14 и GV4 регулировать трансляцию сигнала NRG1-ErbB4, а также изучить её потенциальную роль в стимулировании регенерации миелина и восстановлении неврологических функций у крыс с ТСМ. Это первое исследование, изучающее связь между сигнальным путём NRG1-ErbB4 и регенерацией миелина, индуцированной ЭА, у крыс с ТСМ, предоставляя экспериментальные доказательства разработки новых и эффективных стратегий лечения ТСМ.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Во время эксперимента были соблюдены все этические нормы, чтобы минимизировать страдания животных. Экспериментальный протокол и дизайн были утверждены Комитетом по экспериментам на животных Куньминского медицинского университета (Одобрение No KMMU2021051) и проводились в соответствии с руководящими принципами университета по исследованиям на животных. Взрослые самцы крыс рода Спраг-Доули (8 недель, вес 250-270 г, n = 60) были получены в Медицинском университете Куньмина (Юньнань, Китай).

Приготовление животных

Животных содержали в контролируемой среде с постоянной влажностью, умеренной температурой и 12-часовым циклом света и темноты. Животные были случайным образом распределены по 11 группам: фиктивная операционная группа (S, n = 6), группа SCI (M, n = 6), SCI с группой лечения ЭА (M + EA, n = 6), SCI с группой обработки NRG-1β (M + NRG-1β, n = 6), SCI с 5% группой растворителя DMSO (M + D, n = 6), SCI с ингибитором PD158780 и группа лечения NRG-1β (M + PD+NRG-1β, n = 6), ТСМ с группой лечения PD158780 ингибитором и ЭА (М + ЭА + ПД, n = 6), ТСМ с группой растворителя и ЭА (М + ЭА + D, n = 6), ТСМ с группой лечения шРНК и ЭА (М + ЭА + шРНК, n = 6), ТСМ с лентивирусом, содержащим нетаргетируемую шРНК и группу лечения ЭА (M + ЭА + НК, n = 6), ТСМ с группой лечения шРНК (М + шРНК, n = 6). Текущий размер выборки был определен на основе нашего предыдущего опыта с аналогичными моделями и вмешательствами, которые стабильно показывали значимые эффекты с этим числом. Кроме того, несмотря на размер выборки, мы наблюдали статистически надёжные и значимые различия в ключевых результатах, что укрепляет доверие к опубликованным результатам.

Модель крысы SCI

Для создания крысиной модели ТСМ использовался клипс Ясаргила (титан, стандартная сила сжимания 70 г) с использованием техники зажимного типа (см. рисунок 1A). Крыс были анестезиированы 2% пентобарбитала натрия (30 мг/кг, внутрибрюшинно) и положены на операционный стол. Был сделан разрез длиной 3-4 см на коже задняя, затем слой за слоем рассечение подкожной ткани и мышцы для обнажения грудных колючих отростков T9-11 и дуг позвоночника. Сосудистый клипс был использован для удаления грудного колющего отростка T10 и дуги позвоночника, полностью обнажив спинной мозг. Клип для аневризмы Ясаргила был располагался вертикально по всему сегменту T10 и быстро освобождался после 60 секунд. Модель считалась успешной, если наблюдались два или более из следующих признаков: (1) спазматический тремор тела, (2) рефлекс виляния хвоста и (3) видимые чёрные следы щипки на спинном мозге. После обеспечения достаточного гемостаза разрез был дезинфицирован и зашит. В группе фиктивных операций выполнялась та же процедура, но спинной мозг не был зажат. После операции крысы получали нормальный физиологический раствор (3 мл, внутрибрюшинно) для регидратации и пенициллин (100 000 единиц, внутрибрюшинно) утром и один раз вечером в течение трёх последовательных дней для предотвращения инфекции. Ручная помощь при мочеиспускании предоставлялась до восстановления спонтанного мочеиспускания (2 раза в день).

Интратекальная трубка крыс и доставка лекарств

Следуя методу Сторксона и др. 23, катетер был имплантирован в субарахноидальное пространство крысам за неделю до индукции модели ТСМ. После анестезии крысы были закреплены на операционном столе, и межпозвоночное пространство L5-6 обнажалось. Для вертикального проникновения в твердую орудость и арахноидальную мембрану использовалась игла 19G. Игла была продвинута примерно на 1–2 мм, и после прорыва арахноидальной мембраны ощущалось ощущение пространства, за которым следовал чистый поток спинномозговой жидкости, что указывало на успешный прокол. В субарахноидальное пространство вдоль иглы был введён катетер PE-10 (полиэтилен, внутренний диаметр 0,38 мм, внешний диаметр 1,09 мм). Катетер был продвинут примерно до 3 см длины, при этом кончик катетера располагался рядом с телом позвонка L3. Во время установки у крыс наблюдалось дергание хвоста и подёргивания задних конечностей, а спинномозговая жидкость вытекала через катетер, подтверждая расположение катетера в субарахноидальном пространстве.

И NRG-1β, и PD158780 растворялись в диметилсульфоксиде (DMSO) и затем разбавлены искусственной спинномозговой жидкостью (ACSF), обеспечивая сохранение конечной концентрации DMSO ниже 0,5%. Окончательные рабочие концентрации составляли 20 нМ для NRG-1β и 20 мкм для PD15878024. На второй день после ТСМ крысы группы M + NRG-1β получали интратекальные инъекции 20 мкл NRG-1β через день. Крысам в группе М + ЭА + ПД вводили 20 мкл PD158780 внутритековоза 25 часов до лечения ЭА.

Лечение ЭА

Натретий день после операции крыс фиксировали на лечебном столе для электроакупунктуры (EA) в точках акупунктуры GV14 и GV4 (рисунок 1B). В эти точки были введены две иглы акупунктуры (0,25 мм x 13 мм) на глубину 3–4 мм. Терапия электроакупунктурой проводилась с помощью электроакупунктурного устройства с разредённой волновой диаграммой (разредённая волна при 2 Гц и плотная на 10 Гц, с частотным отношением 1:5)26. Мощность выхода была установлена на 5 (примерно 0,5 мА) на 30 минут, через день.

Поведенческая оценка

Локомоторная функция оценивалась по шкале Бассо, Бити и Бреснахана(BBB) 27, которая оценивает движение конечностей, походку, координацию и расположение лап в следующие временные моменты: 0, 3, 7, 14, 21 и 28 дней после операции ( см. рисунок 2D). Шкала BBB варьируется от 0 (что означает полный паралич) до 21 (указывает на нормальную походку). Все оценки проводились независимо двумя исследователями, которые были ослеплены заданиями по экспериментальной группе.

Сбор образцов

После завершения эксперимента анестезированные крысы были закреплены на платформе для вскрытия тканей. Брюшная полость была открыта для полного открытия диафрагмы, которая была аккуратно разрезана ирисовыми ножницами для предотвращения повреждения сосудов. Затем грудную клетку разрезали вдоль обоих реберных краёв, чтобы открыть сердце, после чего в левый желудочек на вершине вводили иглу, и примерно 300–400 мл предварительно охлаждённого PBS быстро перфузировалось для очистки системной крови, пока из правого предсердия не потекла прозрачная жидкость. Для анализа молекулярного белка перфузия была прервана на этой стадии, а позвоночник был вскрыт. После удаления соседних рёбер и мышц для обнажения позвонков был обнаружен сегмент T10, и сегмент спинного мозга примерно 1 см ростральной и хвостовой к T10 был собран с помощью радужных ножниц, затем заморожен в жидком азоте и хранён при -80 °C. Для морфологического исследования перфузия была заменена на 4% параформальдегид после ПБС, при этом успешная фиксация была отмечена сокращением мышц и жёсткостью туловища. Тот же сегмент позвоночника затем тщательно рассекали для сохранения структуры ткани и постфиксировали в 4% параформальдегиде при 4 °C в течение 48 часов.

Окрашивание гематоксилином и эозином

Срезы парафина спинного мозга были помещены в духовку при температуре 60 °C для предварительного нагрева 30 минут. Девоскация: ксилол I на 15 минут, затем ксилол II на 15 минут. Регидратация: обработано 100% этанолом в течение 2 минут, затем 95% этанолом в течение 2 минут, затем 80% этанола в течение 2 минут, затем 70% этанола в течение 2 минут, и наконец дистиллировала воду в течение 5 минут. Окрашивание гематоксилином проводилось в течение 7 минут, затем промывалось дистиллированной водой для удаления остаточного раствора для окрашивания. Дифференцировка в 1% солянокислотном спирте проводилась в течение 3 секунд, после чего промывали дистиллированной водой для удаления остаточного раствора для окрашивания. Промывая 5% аммиачной водой в течение 2 минут, после чего смывали остаточный раствор синения. Было проведено окрашивание эозином в течение 30 секунд, затем промывалось дистиллированной водой для удаления остаточного раствора окрашивания. Обезвоживание секций проводилось с помощью 70% этанола в течение 10 секунд, затем 80% этанола на 10 секунд и, наконец, 100% этанола в течение 30 секунд. Очистка проводилась с помощью обработки ксилолом в течение 5 минут. После установки слайды сушили на воздухе, а изображения были сделаны после сушки.

Люксол быстрое синее окрашивание

Секции были дважды обезвощены ксилолом по 10 минут каждая, затем окрашивались раствором LFB для окрашивания миелина и инкубировали ночью при 37 °C. На следующий день излишки раствора для окрашивания были удалены с использованием 90% этанола. Срезы дифференцировались раствором дифференцировки Luxol в течение 10 секунд (C0631S), затем погружением в 75% этанол в течение 30 секунд, пока серое вещество не стало прозрачным. В конце концов секции были покрыты раствором эозинового окрашивания в течение 1 минуты.

Вестерн блоттинг

Образцы белка варили в воде в течение 5 минут. В электрофорезный гель сначала загружалось 5 мкл белкового маркера, затем последовательная загрузка пробных образцов белка. Электрофорез инициировался при 80 В до чёткого разделения маркерных полос, после чего напряжение увеличивалось до 130 В и поддерживалось до завершения электрофореза. Заранее нарезанные мембраны PVDF активировались в метаноле в течение 1 минуты, затем помещались на фильтрующую бумагу и накрывались подготовленным гелем. Перенос белка проводился при постоянном токе 300 мА, с корректировкой времени переноса в зависимости от молекулярной массы (± 10 мин). После переноса мембрана PVDF помещалась в инкубационную коробку, промывалась буфером TBST в течение 5 минут, а затем блокировалась 5% обезжиренным молоком комнатной температуры на шейкере в течение 2 часов. Мембрану затем промывали три раза буфером TBST по 5 минут после инкубации первичными антителами, включая GAPDH (1:2000), Tubulin (1:2000), NRG1 (1:1000), ErbB4 (1:1000) и MBP (1:1000), ночью при 4 °C с лёгким встряхиванием. На следующий день мембрану промывали трижды буфером TBST по 5 минут каждая, затем инкубировали вторичным антителом — козьим анти-кроликом (1:4000) при комнатной температуре на шейкере в течение 2 часов. После промывания с помощью TBST белковые полоски визуализировали с помощью хемилюминесценции. Импортируйте изображение WB в программное обеспечение ImageJ и выполните фоновый вычитание с радиусом вращающегося шара в 50 пикселей. Для наклонных лент используйте инструмент Segmented Line для выпрямления полос. Используйте инструмент Rectangle, чтобы выбрать целевые полосы и создать профиль плотности, выбрав Plot Lanes , чтобы визуализировать значения оттенков серого диапазона. Используйте инструмент Magic Wand для сегментирования пиков и извлечения значений серого. После сохранения данных используйте программное обеспечение GraphPad Prism для создания столбчатых графиков.

Иммунофлуоресценция

Парафиновые срезы были дважды обезвощены ксилолом по 10 минут каждая и регидратированы с помощью серии градированного этанола. Забор антигена проводился путём кипячения срезов в растворе 5% лимонной кислоты в течение 15 минут, затем блокировки 10% козьей сывороткой в течение 2 часа. Затем срезы инкубировали ночью при 4 °C с первичными антителами: мышиный моноклональный NRG-1 (1:200), кроличий моноклональный ErbB4 (1:300) и человеческий моноклональный MBP (1:300). После трёх промывок с фосфатно-буферным физиологическим раствором с по 0,1% Triton X-100 (PBST) в течение 10 минут каждая, секции инкубировали 1 час в темноте с помощью следующих вторичных антител: FITC-меченый козёлый антимышиный IgG (1:500), FITC-меченый козьий анти-кроличий IgG (1:500) и FITC-меченый козий анти-человеческий IgG (1:500). Секции промывались 3 раза PBST по 10 минут каждая, затем фиксировались и установлены антифейдным реагентом для сохранения флуоресцентных сигналов. Слайды хранились при 4 °C в темноте. После обнаружения целевых клеток под объективной линзой 10x с помощью флуоресцентного микроскопа переключайтесь на линзу 40x для захвата флуоресцентного изображения.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени (RT-PCR)

Праймеры для ErbB4 и эталонного гена GAPDH были разработаны на сайте NCBI. Последовательности праймеров были следующими: прямой праймер ErbB4 : ACAGCCCCTCTCCTGCCTAC; Обратный праймер ErbB4 : ATCTCAGCCGTTGCACCCT; Прямой праймер GAPDH : CCCAGCTTAGGTTCATCATCAGGT; Обратный праймер GAPDH : TACGCCAAATCCGTTCACA. Ткань спинного мозга размером примерно соевого размера была помещена в центрифугную трубку объёмом 1,5 мл, а также добавлено 600 мкл реагента для экстракции РНК. Ткань была полностью гомогенизирована и инкубирована на льду в течение 5 минут, после чего центрифугировали при 12 000 x г в течение 5 минут при 4 °C. Супернатант был переведён в новую трубку объёмом 1,5 мл, добавлено 400 мкл хлороформа. Смесь была тщательно перемешана и центрифугирована при 12 000 x г в течение 5 минут при 4 °C. Супернатант снова был переведён в новую трубку, и добавлено 400 мкл изопропанола. Раствор инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут, затем центрифугировали при 12 000 x г в течение 10 минут. Супернатант был отброшен, а РНК-гранулу промыли 400 мкл этанола 75%. После центрифугирования при 7 500 x g в течение 5 минут при 4 °C супернатант был убран, а трубка перевернулась для сушки на чистой поверхности. РНК-гранула растворялась в 60 мкл воды без РНК, тщательно смешивалась и измерялась концентрация РНК. Чистота и концентрация РНК фиксировались путём измерения поглощения на 260 нм и 280 нм, что обеспечивало соотношение 260/280 примерно 2,0. Для синтеза кДНК Реакция 1 (содержащая гДНК-ластик и др.) и Реакция 2 (с обратной транскриптазой и т.д.) были тщательно смешаны, а смесь инкубировала при 95 °C в течение 15 минут. Система флуоресцентной ПЦР-реакции была подготовлена в соответствии с инструкциями набора для синтеза кДНК. Образец объемом 2 мкл был добавлен к 23 мкл смеси ПЦР, и амплификация проводилась согласно протоколу флуоресцентного количественного ПЦР-набора. Температура отжига была установлена на уровне 60 °C, а условия усиления были следующими: предденатурация: 95 °C в течение 30 с, 1 цикл; ПЦР-реакция: 95 °C 3 с, 60 °C 30 с, 40 циклов; Анализ диссоциационной кривой проводился следующим образом: 95 °C в течение 5 с, 60 °C в течение 30 с, после чего постепенно увеличивалось с 60 °C до 95 °C с непрерывным приёмом флуоресцентного сигнала. Значения КТ измерялись и рассчитывались с помощью программного обеспечения Bio-Rad, а относительные уровни мРНК определялись методом 2-ΔΔCt .

Рекомендации по безопасности и обращению

Фиксация параформальдегида: Используйте параформальдегид исключительно в хорошо проветриваемой вытяжке. Всегда носите соответствующие средства индивидуальной защиты (СИЗ), включая маску, перчатки, лабораторный халат и защитные очки. Храните раствор параформальдегидов в плотно запечатанном контейнере, вдали от прямых солнечных лучей и источников тепла. Утилизировать параформальдегид отходов в соответствии с лабораторными рекомендациями по безопасности Медицинского университета Куньмина, поместив их в контейнер для опасных отходов.

Решение DMSO: ДМСО может всасываться через кожу и попадать в организм. Во время обращения носите соответствующие средства индивидуальной защиты, включая перчатки и защитные очки. Храните DMSO в герметичном контейнере при комнатной температуре, вдали от сильных окислителей. Утилизировать отходы DMSO в соответствии с рекомендациями лаборатории по безопасности Медицинского университета Куньмина, поместив их в контейнер для опасных отходов.

Пентобарбитальная анестезия: Пентобарбитал — это контролируемое вещество, и с ним должен обращаться только уполномоченный персонал. Избегайте случайного контакта при обращении и обеспечивайте правильную вентиляцию во время использования. Носите соответствующее защитное снаряжение. Храните пентобарбитал в запертом шкафу при комнатной температуре под наблюдением уполномоченного персонала. Утилизировать отходы пентобарбитала в соответствии с рекомендациями Медицинского университета Куньмина по контролируемым веществам, обеспечивая правильное разрешение на использование и процедуры утилизации отходов.

Общая утилизация отходов: Все опасные химикаты и реагенты должны быть утилизированы в соответствии с руководящими принципами управления лабораторией Куньминского медицинского университета. Убедитесь, что все отходы правильно маркированы и помещены в подходящие контейнеры для безопасной утилизации.

Статистический анализ

Все эксперименты проводились в трёх и более экземплярах. Значения плотности полос целевых белков были нормализованы по сравнению с значениями контрольной группы для облегчения сравнений между группами. Данные представлены как медиана (межквартильный диапазон) или среднее ± стандартное отклонение, где n обозначает количество крыс. Для нормально распределённых данных значимые различия между группами оценивались с помощью одностороннего анализа дисперсии (ANOVA). Для ненормально распределённых данных для сравнения групп применялся тест Крускаля-Уоллиса H. Статистическая значимость была установлена на уровне p < 0,05.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

H&E окрашивание и оценка BBB демонстрируют защитное действие EA на крыс с ТСМ

Окрашивание H&E использовалось для изучения морфологии и структуры задних роговых клеток спинного мозга (рисунок 2D). Результаты H&E показали, что в группе S задние роговые клетки были аккуратно расположены, с чётко очерченными контурами клеток и центрально расположенными ядрами. В отличие от этого, количество задних роговых клеток в гру...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Это исследование показывает, что лечение ЭА облегчает кавитацию и демиелинизацию спинного мозга после ТСМ, способствуя ремиелинизации за счёт повышения экспрессии белка MBP и, соответственно, улучшает моторную функцию задних конечностей у крыс. Кроме того, мы выявили сигнальный путь NRG-1/ErbB4 как критический посредник ремиелинизации нейронов и потенциальный терапевтический механизм, посредством которого ЭА способствует ремиелинизации и восстановлению моторной функции задних конечностей...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Благодарим авторов за их вклад в это исследование. Это исследование было финансово поддержано Национальным фондом естественных наук Китая (NSFC 81960817, 82260387) и Специальной программой фундаментальных исследований в рамках Плана науки и технологий провинции Юньнань (202301AS070020). Научно-исследовательский проект и разработок Северного Сычуанского медицинского колледжа (CBY22-QNA20)

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Набор для обнаружения белков BCA;Beyotime BiotechnologyP0012SКоличественный анализ белков
Электроакупунктурное устройствоЭлектроакупунктурный прибор Huatuo, SDZ-V, Сучжоу—Терапевтическое оборудование
IgG с маркировкой FITC для коз против человекаBeyotimeA0556Флуоресцентное вторичное антитело
IgG с маркировкой FITC против козBeyotimeA0568Флуоресцентное вторичное антитело
IgG с маркировкой FITC для коз против кроликовBeyotimeA0562Флуоресцентное вторичное антитело
Флуоресцентный микроскопОлимп——
Человеческий моноклональный MBPAbcamab209328Специфические антитела
Раствор для окрашивания миелина LFBSolarbioG3240Окрашивание миелиновой оболочки
Миллипор ECLМиллипорWBKLS0100Реагенты для обнаружения
Мышиный моноклональный NRG-1  Санта-КрусSC-57384Специфические антитела
Nanodrop ND-1000LabTech—
Бета NRG1-1Novoprotein Technology CoC753Рекомбинантный человеческий NRG1-1 бета
PD158780Технология GlpBioGC15925Ингибитор тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста (EGFR)
Трубопровод PE-10Бектон, Дикинсон и компания427401Интратекальная инъекция
Пенициллин натрия для инъекцийХарбинская биотехнологическая компания Чжунцзин80451182Послеоперационная противоинфекционная терапия
Моноклональный кролик ErbB4Abcamab109273Специфические антитела
Набор RNAiso PlusТакара9109РТ-ПЦР-реагенты
Комплект реагентов RTТакараRR037AРТ-ПЦР-реагенты
Вторичные антителаBeyotime Biotechnology—Специфические антитела
Пентобарбитал натрияСигма-Олдрич69020100Анестезия для животных
Клип аневризмы ЯсаргилаRebstock Instruments GmbH—Построение модели травмы спинного мозга у крыс

Ссылки

  1. McDonald, J. W., Sadowsky, C. Spinal-cord injury. Lancet. 359 (9304), 417-425 (2002).
  2. Mohammadi, E., Villeneuve, L. M., Smith, Z. A. Spinal Cord Injury: The Global Incidence, Prevalence, and Disability From the Global Burden of Disease Study 2019. Spine. 48 (24), 1767(2023).
  3. Anjum, A., et al. Spinal Cord Injury: Pathophysiology, Multimolecular Interactions, and Underlying Recovery Mechanisms. Int J Mol Sci. 21 (20), 7533(2020).
  4. Fang, M., Chen, L., Tang, T., Qiu, M., Xu, X. The committed oligodendrocyte precursor cell, a newly-defined intermediate progenitor cell type in oligodendroglial lineage. Glia. 71 (11), 2499-2510 (2023).
  5. Hellenbrand, D. J., et al. Inflammation after spinal cord injury: a review of the critical timeline of signaling cues and cellular infiltration. J Neuroinflammation. 18 (1), 284(2021).
  6. Pukos, N., et al. Chronic demyelination and myelin repair after spinal cord injury in mice: A potential link for glutamatergic axon activity. Glia. 71 (9), 2096-2116 (2023).
  7. Birch, S., Robinson, N. Acupuncture as a post-stroke treatment option: A narrative review of clinical guideline recommendations. Phytomedicine. 104, 154297(2022).
  8. Jiang, K., Sun, Y., Chen, X. Mechanism Underlying Acupuncture Therapy in Spinal Cord Injury: A Narrative Overview of Preclinical Studies. Front Pharmacol. 13, 875103(2022).
  9. Wang, X., et al. Electroacupuncture at Dazhui (GV14) and Mingmen (GV4) protects against spinal cord injury: the role of the Wnt/β-catenin signaling pathway. Neural Regen Res. 11 (12), 2004-2011 (2016).
  10. Li, S. S., et al. Electroacupuncture treatment improves motor function and neurological outcomes after cerebral ischemia/reperfusion injury. Neural regen res. 17 (7), 1545-1555 (2022).
  11. Liu, C., et al. Electroacupuncture promotes oligodendrocyte differentiation and myelin repair in a rat model of vascular dementia: Investigation of the mechanism from NF-κB-mediated inflammation. Neuroscience. 572, 21-34 (2025).
  12. Tong, T., et al. Electroacupuncture ameliorates chronic unpredictable mild stress-induced depression-like behavior and cognitive impairment through suppressing oxidative stress and neuroinflammation in rats. Brain Res Bull. 206, 110838(2024).
  13. Ahn, S. M., et al. Electroacupuncture ameliorates memory impairments by enhancing oligodendrocyte regeneration in a mouse model of prolonged cerebral hypoperfusion. Sci Rep. 6, 28646(2016).
  14. Kong, Y., Yang, J., Fan, Y. Q., Wang, W. S., Zhang, Y. T. "Huayu Tongluo" moxibustion improves learning-memory ability and promotes myelin regeneration by regulating Sonic Hedgehog signaling pathway in vascular dementia rats. Zhen Ci Yan Jiu. 48 (6), 578-584 (2023).
  15. Chen, W. C., et al. Influence of electroacupuncture of Dazhui (EX-B2) and Mingmen (GV4) on NR2B expression in anterior horns of spinal cord in rats with acute spinal cord injury. Zhen Ci Yan Jiu. 44 (2), 95-101 (2019).
  16. Mei, L., Nave, K. A. Neuregulin-ERBB signaling in the nervous system and neuropsychiatric diseases. Neuron. 83 (1), 27-49 (2014).
  17. Birchmeier, C., Bennett, D. L. Neuregulin/ErbB Signaling in Developmental Myelin Formation and Nerve Repair. Curr Top Dev Biol. 116, 45-64 (2016).
  18. Chen, S., et al. Neuregulin 1-erbB signaling is necessary for normal myelination and sensory function. J Neurosci. 26 (12), 3079-3086 (2006).
  19. Bartus, K., et al. ErbB receptor signaling directly controls oligodendrocyte progenitor cell transformation and spontaneous remyelination after spinal cord injury. Glia. 67 (6), 1036-1046 (2019).
  20. Tao, F., et al. Role of neuregulin-1/ErbB signaling in stem cell therapy for spinal cord injury-induced chronic neuropathic pain. Stem cells. 31 (1), 83-91 (2013).
  21. Clark, A. J., et al. Co-cultures with stem cell-derived human sensory neurons reveal regulators of peripheral myelination. Brain. 140 (4), 898-913 (2017).
  22. Wan, C., et al. Neuregulin1-ErbB4 Signaling in Spinal Cord Participates in Electroacupuncture Analgesia in Inflammatory Pain. Front Neurosci. 15, 636348(2021).
  23. Tseropoulos, G., et al. Immobilized NRG1 Accelerates Neural Crest like Cell Differentiation Toward Functional Schwann Cells Through Sustained Erk1/2 Activation and YAP/TAZ Nuclear Translocation. Adv Sci (Weinh). 11 (33), e2402607(2024).
  24. Luo, M., et al. Neuronal activity-dependent myelin repair promotes motor function recovery after contusion spinal cord injury. Brain Res Bull. 166, 73-81 (2021).
  25. Hesp, Z. C., Goldstein, E. Z., Miranda, C. J., Kaspar, B. K., McTigue, D. M. Chronic oligodendrogenesis and remyelination after spinal cord injury in mice and rats. J Neurosci. 35 (3), 1274-1290 (2015).
  26. Levy, G., et al. Gtf2i-encoded transcription factor Tfii-i regulates myelination via Sox10 and Mbp regulatory elements. Nat Commun. 16 (1), 8518(2025).
  27. Cescon, M., et al. Gut microbiota depletion delays somatic peripheral nerve development and impairs neuromuscular junction maturation. Gut Microbes. 16 (1), 2363015(2024).
  28. Ayar, Z., et al. The effect of low-level laser therapy on pathophysiology and locomotor recovery after traumatic spinal cord injuries: a systematic review and meta-analysis. Laser Med Sci. 37 (1), 61-75 (2022).
  29. Ghane, N., Beigi, M. H., Labbaf, S., Nasr-Esfahani, M. H., Kiani, A. Design of hydrogel-based scaffolds for the treatment of spinal cord injuries. J Mater Chem B. 8 (47), 10712-10738 (2020).
  30. Laskin, J. J., Waheed, Z., Thorogood, N. P., Nightingale, T. E., Noonan, V. K. Spinal Cord Stimulation Research in the Restoration of Motor, Sensory, and Autonomic Function for Individuals Living With Spinal Cord Injuries: A Scoping Review. Arch Phys Med Rehabil. 103 (7), 1387-1397 (2022).
  31. Li, G., et al. Epidural Spinal Cord Stimulation Promotes Motor Functional Recovery by Enhancing Oligodendrocyte Survival and Differentiation and by Protecting Myelin after Spinal Cord Injury in Rats. Neurosci Bull. 36 (4), 372-384 (2020).
  32. Csomó, K. B., et al. A Minimally Invasive, Fast Spinal Cord Lateral Hemisection Technique for Modeling Open Spinal Cord Injuries in Rats. J Vis Exp. (181), e63534(2022).
  33. Li, J. J., et al. Animal Models for Treating Spinal Cord Injury Using Biomaterials-Based Tissue Engineering Strategies. Tissue eng part b-re. 28 (1), 79-100 (2022).
  34. Coman, I., Barbin, G., Charles, P., Zalc, B., Lubetzki, C. Axonal signals in central nervous system myelination, demyelination and remyelination. J Neurol Sci. 233 (1-2), 67-71 (2005).
  35. Inouye, H., Kirschner, D. A. Evolution of myelin ultrastructure and the major structural myelin proteins. Brain Res. 1641 (Pt A), 43-63 (2016).
  36. Chen, X., Li, H. Neuronal reprogramming in treating spinal cord injury. Neural Regen Res. 17 (7), 1440-1445 (2022).
  37. Huang, S., et al. Protective Effect of Electroacupuncture on Neural Myelin Sheaths is Mediated via Promotion of Oligodendrocyte Proliferation and Inhibition of Oligodendrocyte Death After Compressed Spinal Cord Injury. Mol Neurobiol. 52 (3), 1870-1881 (2015).
  38. Kang, Z., et al. Electroacupuncture promotes regeneration and repair of myelin sheath of corpus callosum in demyelination mice. Zhen Ci Yan Jiu. 45 (1), 1-7 (2020).
  39. Zhu, K., et al. Electroacupuncture Promotes Remyelination after Cuprizone Treatment by Enhancing Myelin Debris Clearance. Front Neurosci. 10, 613(2017).
  40. Lu, J. Y., et al. Effects of electroacupuncture at different acupoints on the histomorphology of neurogenic bladder and the expression of hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels in interstitial cells of Cajal in a rat model of suprasacral spinal cord injury. Ann Palliat Med. 9 (6), 3830-3838 (2020).
  41. Tu, W. Z., et al. The regulatory effect of electro-acupuncture on the expression of NMDA receptors in a SCI rat model. Life Sci. 177, 8-14 (2017).
  42. Ding, Z., et al. Neuregulin-1 converts reactive astrocytes toward oligodendrocyte lineage cells via upregulating the PI3K-AKT-mTOR pathway to repair spinal cord injury. Biomed Pharmacother. 134, 111168(2021).
  43. Kataria, H., et al. Neuregulin-1 promotes remyelination and fosters a pro-regenerative inflammatory response in focal demyelinating lesions of the spinal cord. Glia. 66 (3), 538-561 (2018).
  44. Schmitd, L. B., et al. Deletion of murine Sarm1 results in a microenvironment that delays peripheral nerve regeneration after injury. Sci Transl Med. 17 (819), eadp9155(2025).
  45. Hu, X., et al. Pan-ErbB inhibition impairs cognition via disrupting myelination and aerobic glycolysis in oligodendrocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 121 (45), e2405152121(2024).
  46. Størkson, R. V., Kjørsvik, A., Tjølsen, A., Hole, K. Lumbar catheterization of the spinal subarachnoid space in the rat. J Neurosci Methods. 65 (2), 167-172 (1996).
  47. Rahimi-Movaghar, V., Jazayeri, S. B. When do we start Basso, Beattie, and Bresnahan assessment after experimental spinal cord injury. Acta Med Iran. 51 (8), 5183(2013).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Электроакупунктурное лечениевосстановление нервовосновной белок миелинафункция задних конечностейакупунктурные точкиэкзогенный NRG1сигнальный путь
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.