Методическая статья

Ультразвуковая допплерография для визуализации в реальном времени и количественной оценки сосудистой функции яичников у мышей

683 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/69169

⸱

14 ноября 2025 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Animal Science, Cornell University, 2Biotechnology Resource Center Imaging Facility, Cornell University

В этой статье

Краткое содержание

Изменения кровотока в яичниках в преовуляторный период имеют существенное значение для овуляции. Ультразвуковая допплерография использовалась у людей и крупных животных для оценки гемодинамики и перфузии яичников. Представлен протокол применения ультразвуковой допплерографии для оценки гемодинамики яичников в преовуляторную и периовуляторную фазы у мышей.

Аннотация

Для эффективной оценки сосудистой функции яичников и понимания ее роли в физиологии и патологии яичников необходимы неинвазивные подходы in vivo , позволяющие фиксировать изменения в режиме реального времени без нарушения нормального кровотока. Допплерография является хорошо зарекомендовавшим себя неинвазивным инструментом для оценки кровотока в яичниках у более крупных видов, но ее применение было ограничено у мышей, которые являются одной из наиболее широко используемых животных моделей для исследований биологии яичников, таких как овуляция. Овуляция – это жестко регулируемый процесс, который зависит от скоординированного созревания фолликулов, стимулируемого фолликулостимулирующим гормоном, за которым следует всплеск преовуляторного лютеинизирующего гормона (ЛГ), который приводит к разрыву стенки фолликула и высвобождению ооцитов для оплодотворения. Всплеск ЛГ также вызывает ряд структурных и функциональных изменений в сосудистой сети яичников (сосудистое ремоделирование), таких как ангиогенез и сужение капилляров в месте разрыва фолликула незадолго до овуляции. Кроме того, быстрое увеличение кровотока в яичниках после всплеска ЛГ было зарегистрировано у многих видов, но не у мышей. В этом протоколе используется ультразвуковая допплерография для визуализации сосудистой сети яичников мыши и количественной оценки гемодинамических параметров. Представленный здесь протокол подробно описывает методы гормонального прайминга, анестезии, позиционирования мыши, идентификации яичника и его сосудистой сети с помощью силового и цветного допплера, а также измерения скорости кровотока и параметров сопротивления. Этот метод позволяет в режиме реального времени проводить продольную оценку сосудистой функции яичников у живых мышей, предоставляя мощный инструмент для изучения сосудистой функции яичников как в физиологическом, так и в патологическом контексте.

Введение

Яичник является сильно васкуляризированным органом, и строго регулируемые циклические, структурные и функциональные изменения в его сосудистой сети (сосудистое ремоделирование) имеют важное значение для нормальной физиологии яичников, включая развитие фолликулов, овуляцию и образование желтого тела 1,2,3,4. Сосудистое ремоделирование включает в себя ряд скоординированных процессов, таких как изменения проницаемости сосудов, ангиогенез, вазодилатация, сужение сосудов и изменения кровотока (гемодинамика). Эти процессы позволяют яичникам быстро регулировать кровоснабжение в ответ на гормональные сигналы в течение эстрального цикла 1,2,3,5,6,7,8,9. Нарушения в ремоделировании сосудов и кровотоке яичников нарушают овуляцию и связаны с нарушениями фертильности, такими как синдром поликистозных яичников 2,3,10,11. Также было показано, что ожирение нарушает ангиогенез и снижает экспрессию сосудистых медиаторов, таких как эндотелин-212,13. Кроме того, синдром гиперстимуляции яичников, осложнение, в основном связанное со стимуляцией яичников с помощью лечения гонадотропинами во время экстракорпорального оплодотворения, часто приводит к увеличению стромального кровотока в яичниках, что подчеркивает пагубные последствия нерегулируемойфункции сосудов. В совокупности эти состояния подчеркивают центральную роль ремоделирования сосудов яичников в поддержании женской фертильности и подчеркивают важность гемодинамики в поддержании функции яичников.

Точная оценка сосудистой функции яичников требует измерения гемодинамики в режиме реального времени без нарушения физиологической среды. У людей и крупных животных, таких как крупный рогатый скот, овцы и лошади, допплерография является широко используемым неинвазивным инструментом для оценки кровотока яичников и сосудистой архитектуры 15,16,17,18. Этот метод позволяет проводить динамический анализ васкуляризации яичников и фиксировать гормональные изменения в кровотоке, предлагая ценную информацию о функции и дисфункции яичников 15,16,17,18.

Несмотря на широкое использование лабораторных мышей в качестве модели для исследований в области биологии яичников из-за их короткого репродуктивного цикла и генетической податливости, неинвазивные методы in vivo для изучения кровотока яичников в этой модели остаются ограниченными19,20. Существующие подходы опираются на высокоинвазивные процедуры, требующие экстернализации яичника (прижизненная микроскопия), или на такие методы, как подход CLARITY или визуализация всего монта, которые не имеют временного разрешения и нарушают физиологический контекст 1,2,3,4. Будучи наиболее часто используемой моделью млекопитающих для генетических манипуляций и репродуктивных исследований, мышь предоставляет возможность изучить молекулярные механизмы гемодинамики яичников и оценить целевые вмешательства. Это подчеркивает необходимость неинвазивных, лонгитюдных и количественных подходов к визуализации для мониторинга динамических изменений сосудов яичников in vivo.

Овуляторный процесс, являющийся центральным событием в женской фертильности, иллюстрирует важность ремоделирования сосудов яичников в женской фертильности. Он начинается с индуцированного фолликулостимулирующим гормоном (ФСГ) созревания фолликулов и завершается всплеском ЛГ, который вызывает разрыв фолликулов и высвобождение ооцитов1. После стимуляции хорионическим гонадотропином (ХГЧ) лошадей, который имитирует эффекты ФСГ, сосудистая сеть яичников расширяется2. Этот сосудистый рост прогрессирует наружу от мозгового вещества яичника к коре головного мозга для поддержки развивающихся фолликулов2. Незадолго до овуляции кровеносные сосуды расширяются в слой гранулезных клеток, а локализованная вазоконстрикция наблюдается на верхушке фолликула – месте возможного разрываи высвобождения ооцитов. Эти скоординированные сосудистые изменения имеют решающее значение для успешной овуляции 1,2,3. Допплеровские исследования на крупных животных моделях и людях выявили изменения в гемодинамике в течение преовуляторного периода, в том числе быстрое увеличение перфузии яичников и локализованное перераспределение кровотока в преовуляторном фолликуле, отмеченное увеличением кровотока у основания (ближе всего к строме яичника - противоположно вершине) и снижением кровотока на вершине16. Увеличение скорости кровотока в яичниках сразу после всплеска ЛГ было связано с успешной овуляцией у женщин15. Тем не менее, ни одно исследование еще не отслеживало эти гемодинамические изменения в интактном яичнике мыши, что ограничивает наше понимание сосудистого ремоделирования в этой широко используемой модели.

Чтобы восполнить этот пробел, мы представляем протокол ультразвуковой допплерографии, который позволяет неинвазивно визуализировать яичник мыши и его сосуды, а также количественно оценить гемодинамику яичников, включая индексы скорости и сопротивления. Несмотря на то, что зонд MS-700, используемый в этом исследовании, имеет ограниченное разрешение (осевое/боковое: 30/58 мкм), что препятствует детальному анализу капилляров, он все же позволяет четко визуализировать и количественно оценить основные кровеносные сосуды яичников. Использование контрастных веществ в будущих приложениях может еще больше улучшить визуализацию сосудов. В целом, этот подход позволяет проводить повторные продольные измерения у одного и того же животного в определенные моменты времени, например, в преовуляторный период, сохраняя при этом физиологическую целостность, что является ключевым преимуществом по сравнению с существующими инвазивными методами.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все используемые мыши содержались в строгом соответствии с Руководством Национального института здравоохранения по уходу и использованию лабораторных животных, с этическим одобрением Институционального комитета по уходу за животными и их использованию в Корнельском университете. Все животные, использованные в этом протоколе, были неполовозрелыми (в возрасте 21-23 дней) мышами C57BL6.

1. Гормональная стимуляция для суперовуляции

  1. Мышам в возрасте 21-23 дней с массой тела 10-12 г внутрибрюшинно вводят 5 МЕ гонадотропина сыворотки крови беременной кобылы (PMSG), а затем 5 МЕ хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) через 48 часов. Готовьте каждую инъекцию, разводя 50 мкл гормона (восстановленного из флакона с 5000 МЕ) в 950 мкл стерильного фосфатно-солевого буфера и вводите 0,1 мл на каждую мышь.

2. Последовательность включения ультразвукового аппарата и настройка датчика

  1. Включите основной источник питания, расположенный на задней панели системы визуализации. После загрузки системы переключите переключатель режима ожидания компьютера на левой стороне тележки, чтобы вывести монитор и компьютер из спящего режима.
  2. Подключите нужный преобразователь (здесь используется MS-700 - 30-70 МГц) к порту активного преобразователя на блоке формирования изображения (крайний правый порт). Совместите стопорный штифт на разъеме преобразователя с выемкой в порту, затем полностью вставьте разъем и поверните фиксирующий рычаг в вертикальное положение, чтобы зафиксировать его.
  3. Запустите программное обеспечение для анализа, нажав на значок программного обеспечения. После того как программа откроется и датчик будет обнаружен (автоматически), выберите пакет приложения для яичников . Нажмите кнопку Создать , чтобы создать новое исследование, и выберите соответствующее имя в раскрывающемся меню. В окне «Информация об исследовании » введите обязательные поля: Название исследования; Название серии; Пакет применения: Яичник; Пакет мер: сосудистый.

3. Анестезия, подготовка мыши и подготовка этапа УЗИ

  1. Включите блок физиологического мониторинга (температуры и частоты сердечных сокращений). Убедитесь, что платформа нагрета (37 °C).
  2. Убедитесь, что уровень изофлурана находится выше минимальной линии заполнения на резервуаре испарителя. При необходимости добавьте изофлуран, используя надлежащие средства индивидуальной защиты. Медленно и полностью откройте клапан кислородного баллона. Установите скорость потока кислорода на уровне 1 литра в минуту.
  3. Отрегулируйте запорный кран на трубке с y-образным узлом, чтобы кислород и изофлуран поступали в индукционную камеру. Убедитесь, что запорный кран, ведущий к носовому конусу на платформе мыши, закрыт во время этого шага. Установите регулятор испарителя на подачу 3-4% изофлурана (об/об.) для индукции.
  4. Поместите мышь в индукционную камеру и плотно закройте крышку.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Индукционная камера функционально герметична. Никогда не оставляйте животное в герметичной камере без активного потока газа.
  5. Подготовьте платформу визуализации, нанеся небольшое количество электродного крема на каждый из электродов, чтобы обеспечить надлежащий контакт для мониторинга сердечного ритма.
  6. После того, как животное будет полностью успокоено, перенаправьте поток газа, открыв запорный кран к носовому конусу на платформе визуализации и закрыв запорный кран на индукционной камере.
  7. Аккуратно перенесите мышь на нагретую платформу для обработки изображений. Поместите мышь в положение лежа (тыльной стороной вверх) (рисунок 1A). Надежно поместите носовой конус на нос животного, убедившись, что нос и рот закрыты для поддержания анестезии. Нанесите на каждую ногу крем с электродом на соответствующую электродную подушечку для физиологического контроля. Применяйте офтальмологическую мазь для предотвращения пересыхания роговицы во время анестезии.
  8. Уменьшите концентрацию изофлурана до 1,5-2,0% для поддержания анестезии, повернув ручку влево. Подтвердите адекватную глубину анестезии с помощью метода рефлекса «палец ноги» (не должно наблюдаться отмены). Внимательно контролируйте жизненные показатели животного каждые 5 минут во время сеанса визуализации: (i) частота дыхания; (ii) частота сердцебиения; (iii) любые движения, которые могут указывать на дискомфорт; и (iv) обеспечить нагрев платформы визуализации до нужной температуры на всем протяжении.
  9. Подготовьте нижний правый квадрант спины, побрив эту область электробритвой. Брейте от правой задней конечности до средней линии спины, оставаясь только сбоку от позвоночника. Нанесите тонкий слой крема для удаления волос на ранее выбритый участок на срок от 30 с до 1 минуты, чтобы удалить оставшиеся волосы. Тщательно вытрите влажной марлей. Нанесите обильный ровный слой геля для ультразвука на область бритья, чтобы обеспечить оптимальное акустическое сцепление.
  10. Расположите щуп преобразователя в поперечном положении относительно мыши на механической подставке так, чтобы ориентационная выемка была обращена влево от оператора. Закрепите щуп на месте с помощью зажима.

4. Идентификация кровеносных сосудов яичников и яичников с помощью ультразвуковой допплерографии

  1. На панели управления нажмите клавишу B-Mode , чтобы активировать стандартное окно визуализации в оттенках серого, которое позволяет визуализировать анатомические структуры.
  2. Аккуратно опустите датчик на выбритый участок, покрытый гелем для ультразвука.
    1. Убедитесь, что платформа для формирования изображения и мышь расположены ровно (параллельно поверхности стола), а датчик опущен перпендикулярно (под углом 90° — по вертикали) к мыши и платформе (рис. 1A).
    2. Чтобы определить местоположение яичника, потяните кожу влево, затем расположите датчик рядом с верхней областью выбритого квадранта, ближе к средней линии спины. Выровняйте левый край зонда рядом с позвоночником, при этом правый край немного выходит за правый боковой бок.
  3. Чтобы определить яичник, сначала обнажите почку, крупную, светло-серую яйцевидную структуру (5 мм × 6 мм) с видимой корой и мозговым веществом. Затем слегка сдвиньте платформу визуализации вперед (по направлению к голове мыши), чтобы появился яичник и периовариальная жировая ткань (POAT).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Яичник представляет собой небольшую, круглую, гипоэхогенную (темно-серую) структуру, примерно 1 х 2 мм (в преовуляторной стадии), расположенную латерально к спинному мозгу. ПОАТ выглядит гиперэхогенным (ярко-белым).
  4. Чтобы снять и сохранить видео яичника в режиме B, дождитесь увеличения количества кадров (до 100 кадров) и нажмите кнопку Cine Store на клавиатуре.
  5. Чтобы подтвердить идентификацию яичников и визуализировать кровеносные сосуды с высокой чувствительностью к низкоскоростному потоку, переключитесь из B-режима в режим Power Doppler, нажав соответствующую клавишу на панели управления.
  6. Отрегулируйте следующие параметры мощности допплера для оптимальной визуализации сосудистой сети яичников, поворачивая ручки на клавиатуре: Допплеровское усиление: 32-55 дБ; Чувствительность: 5; Динамический диапазон: 15 DR; Скорость 1 кГц.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Значения можно просмотреть на левой боковой панели, и они изменятся при повороте ручек
  7. В режиме силового допплера или цветном режиме Допплера (нажмите специальную клавишу на клавиатуре) определите следующие сосуды, осторожно перемещая платформу вперед и назад, чтобы визуализировать различные аспекты сосудистой системы: (i) Артерия яичников (ОА), ответвляющаяся от брюшной аорты и идущая со стороны ПОАТ для входа в ворота яичника; (ii) Медуллярные сосуды (МВ) в центральном мозговом веществе; и (iii) корковые сосуды (CV), окружающие развивающиеся фолликулы во внешней коре (рисунок 1B).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Кортикальные сосуды могут быть видны не всегда из-за их небольшого диаметра и низкой скорости потока. Сосуды у основания фолликула легче обнаружить, в то время как сосуды на верхушке часто не видны, особенно непосредственно перед овуляцией.
  8. Нажмите кнопку Cine store для захвата видео яичника и его сосудистой сети в режиме питания или цветного допплера в любое время, чтобы сохранить видео, отображаемое в данный момент на экране.
  9. Чтобы различить артериальный и венозный кровоток, нажмите цветную клавишу режима допплера на клавиатуре. В этом режиме направление потока имеет цветовую кодировку: красный цвет указывает на поток к преобразователю, а синий — на поток от него. Сосудом с более высокой средней скоростью является яичниковая артерия.
  10. Изменения в перфузии крови можно оценить в режиме цветного или силового допплера, визуализируя размер кровеносных сосудов и интенсивность цвета (желтый в режиме допплеровского излучения, красный или синий в цветовом допплеровском режиме).

5. Оценка гемодинамики с помощью цветной и силовой допплерографии

  1. Находясь в режиме цветного допплера или силового допплера, нажмите кнопку допплерографии «Импульсная волна (PW) » на клавиатуре ультразвуковой системы. Это приводит к затвору объема образца (т.е. двум горизонтальным линиям). Нажмите кнопку PW еще раз, чтобы активировать доплеровский спектральный сигнал на нижней панели.
  2. Расположите затвор образца (регулируемый измерительный инструмент - позволяет пользователю определить область, где будут измеряться скорости) в центре просвета сосуда, обеспечивая выравнивание с направлением кровотока. Отрегулируйте угол инсонации так, чтобы он был максимально параллелен судну, и поддерживайте его на уровне ≤60° для обеспечения точных расчетов скорости. Отрегулируйте угол инсонации, повернув соответствующую угловую ручку.
  3. Установите затвор для отбора проб в следующих положениях для каждого типа сосуда. Артерия яичника: внутри сосуда находится проксимальнее точки его входа в яичник. Медуллярный сосуд: в центральной точке ветвления, где МВ разветвляется на кортикальные сосуды. Эта точка разветвления появляется в виде лужи крови сразу после поступления в яичник. Кортикальный сосуд: внутри сосуда у основания растущего фолликула, когда его можно идентифицировать.
  4. После того, как образец будет расположен в нужном месте и станет видна четкая форма импульсной волны, нажмите Cine Store для записи и сохранения как ультразвукового изображения, так и соответствующей спектральной доплеровской волны.
  5. После завершения визуализации аккуратно снимите мышь с платформы для обработки изображений. Сотрите с обратной стороны ультразвуковой гель и положите мышь на грелку, пока она полностью не проснется.

6. Экспорт и сохранение данных

  1. После завершения всей визуализации и сохранения желаемых стоп-кадров и кинопетель с помощью функции Cine Store нажмите кнопку «Управление исследованием », расположенную в верхней левой части клавиатуры ультразвуковой системы. Откроется окно Study Browser , в котором отобразится список всех сохраненных изображений и киноциклов из текущего сеанса.
  2. В окне Study Browser выберите файлы для сохранения.
    1. Чтобы сохранить весь сериал, выберите соответствующее имя сериала - это автоматически выделит все связанные изображения и киноциклы. Нажмите кнопку «Копировать в», чтобы продолжить.
    2. При появлении запроса нажмите на папку назначения или внешний диск, на котором должны быть сохранены экспортированные файлы. Перед завершением экспорта убедитесь в правильности формата файла и пути назначения.

7. Выключите последовательность и очистите

ПРИМЕЧАНИЕ: Эти шаги должны быть выполнены сразу после завершения создания образа, сохранения и экспорта всех данных.

  1. После экспорта всех необходимых данных нажмите на значок «Выключение » в окне «Браузер исследований » программного приложения для анализа. Это обеспечит безопасное выключение компьютера сбора данных и панели управления.
  2. Дайте вентиляторам охлаждения системы поработать в течение 5-10 минут. После завершения охлаждения выключите основное питание с помощью переключателя, расположенного на задней панели тележки для визуализации.
  3. Отключите все вспомогательное оборудование: подачу кислорода, испаритель изофлурана и блок физиологического мониторинга.
  4. Очистите ультразвуковой датчик: сначала сотрите остатки ультразвукового геля с помощью безворсовых салфеток, затем продезинфицируйте поверхность влажными безворсовыми салфетками или дезинфицирующими салфетками, рекомендованными для чувствительного электронного оборудования.
  5. Очистите платформу мыши и клавиатуру дезинфицирующими салфетками. Не используйте этиловый спирт на электродах мышиной платформы, так как он может повредить чувствительные компоненты.
  6. Протрите индукционную камеру влажными бумажными полотенцами. Выбросьте бумажные полотенца в контейнер для биологически опасных отходов.
  7. Утилизируйте все одноразовые материалы (например, перчатки, хирургическую ленту, марлю, аппликаторы с ватным наконечником) в специально отведенный контейнер для биологической опасности.

8. Измерение гемодинамических параметров с помощью доплеровских импульсных сигналов

  1. В приложении для анализа нажмите «Копировать из», выберите соответствующее имя из раскрывающегося меню, перейдите к месту сохранения исследования, выберите его и нажмите кнопку «ОК», чтобы импортировать его.
  2. Откройте нужное изображение PW Doppler и нажмите на значок измерений в левом нижнем углу, чтобы открыть панель измерений.
  3. Нажмите на инструмент измерения скорости в верхнем левом углу измерительной панели, чтобы количественно определить три самые высокие пиковые систолические скорости (PSV) и конечные диастолические скорости (EDV) из спектральной доплеровской формы сигнала, щелкнув в верхней части волн PSV и EDV (инструмент автоматически измерит размер волны от точки щелчка вниз до оси x). Включайте только те формы сигналов, которые отображают как минимум три различных сердечных цикла с четкими и постоянными пиками ПСВ и КДО.
  4. Чтобы рассчитать среднюю скорость, сначала вычислите среднее значение трех выбранных значений PSV и среднее значение трех значений EDV. Затем рассчитайте среднюю скорость по формуле: Средняя скорость = (Средний PSV + Средний EDV)/2.
  5. Для скоростей ниже порога обнаружения 10 мм/с присвойте значение 5 мм/с (средняя скорость ниже порога) или откажитесь от измерения в зависимости от цели исследования.
  6. Для расчета резистивного индекса (RI) используется стандартная формула: RI = (PSV - EDV)/PSV. Этот индекс обеспечивает меру сосудистого сопротивления и должен быть рассчитан с использованием усредненных значений PSV и EDV для точности.
  7. Для расчета индекса пульсации (PI) используйте стандартную формулу: PI = (PSV - EDV)/Средняя скорость

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Целью данного протокола является применение ультразвуковой допплерографии для визуализации яичника мыши и его сосудистой сети, оценки изменений перфузии яичников и количественной оценки гемодинамики яичников.

На рисунке 2 представлены репрезентативные изображения одного и того же яичника в несколько временных точек в течение периовуляторного периода (12 ч до и 12 ч после овуляции) после инъекции ХГЧ. На рисунк...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом исследовании представлен неинвазивный метод визуализации и количественной оценки гемодинамики яичников in vivo с использованием допплерографии. В отличие от существующих методов, этот подход позволяет оценивать кровоток в режиме реального времени без нарушения функции сосудов. Ультразвуковая допплерография является широко используемым и эффективным инструментом для оценки морфологии яичников и функции сосудов у людей и крупных животныхмоделей 15,16...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Данное исследование было поддержано NICHD 1R01HD109392. Данные визуализации были получены с помощью Корнелльского центра биотехнологических ресурсов (BRC) Imaging Facility, а NIH S10OD016191 для ультразвукового исследования VisualSonics Vevo-2100.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Хирургическая лента 3MVWR International LLCMMM1534-3
Aquasonic Clear Ultrasound Transmission Gel ПаркерPKR-03-08
Машинка для стрижки волосSkull Shaver LLCBBT 2020
Человеческий хорионический гонадотропинСигма Олдрич9002-61-3
Средство для удаления волос Nair Body CreamНаирУдаление волос
Optixcare Eye Lube Plus AventixOPX-4252
Крем для электродов Parker SignacremeПаркерPKR-17-05-CS
Сыворотка для беременных кобыл, гонадотропинКреативные ферментыNATE-0969
Система визуализации VisualSonics Vevo 2100VisualSonics Inc.

Ссылки

  1. Duffy, D. M., Ko, C., Jo, M., Brannstrom, M., Curry, T. E. Jr Ovulation: Parallels with inflammatory processes. Endocr Rev. 40 (2), 369-416 (2018).
  2. Feng, Y., et al. Clarity reveals dynamics of ovarian follicular architecture and vasculature in three-dimensions. Sci Rep. 7 (1), 44810(2017).
  3. Migone, F. F., et al. In vivo imaging reveals an essential role of vasoconstriction in rupture of the ovarian follicle at ovulation. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (8), 2294-2299 (2016).
  4. Fan, H. Y., Liu, Z., Johnson, P. F., Richards, J. S. CCAAT/enhancer-binding proteins (C/EBP)-α and -β are essential for ovulation, luteinization, and the expression of key target genes. Mol Endocrinol. 25 (2), 253-268 (2011).
  5. Janson, P. O., Albrecht, I., Ahrén, K. Effects of prostaglandin F2α on ovarian blood flow and vascular resistance in the pseudopregnant rabbit. Acta Endocrinol (Copenh). 79 (2), 337-350 (1975).
  6. Brännström, M., et al. Preovulatory changes of blood flow in different regions of the human follicle. Fertil Steril. 69 (3), 435-442 (1998).
  7. Murdoch, W. J., Nix, K. J., Dunn, T. G. Dynamics of ovarian blood supply to periovulatory follicles of the ewe. Biol Reprod. 28 (4), 1001-1006 (1983).
  8. Siddiqui, M., et al. Temporal relationships of the LH surge and ovulation to echotexture and power Doppler signals of blood flow in the wall of the preovulatory follicle in heifers. Reprod Fertil Dev. 22, 1110-1117 (2010).
  9. Acosta, T. J., Miyamoto, A. Vascular control of ovarian function: Ovulation, corpus luteum formation and regression. Anim Reprod Sci. 82 - 83, 127-140 (2004).
  10. Tal, R., Seifer, D. B., Arici, A. The emerging role of angiogenic factor dysregulation in the pathogenesis of polycystic ovarian syndrome. Semin Reprod Med. 33 (3), 195-207 (2015).
  11. Di Pietro, M., Pascuali, N., Parborell, F., Abramovich, D. Ovarian angiogenesis in polycystic ovary syndrome. Reproduction. 155 (5), R199-R209 (2018).
  12. Velazquez, C., et al. Beneficial effects of metformin on mice female fertility after a high-fat diet intake. Mol Cell Endocrinol. 575, 111995(2023).
  13. Yang, P. -K., et al. Obesity alters ovarian folliculogenesis through disrupted angiogenesis from increased IL-10 production. Mol Metab. 49, 101189(2021).
  14. Agrawal, R., et al. Serum vascular endothelial growth factor and Doppler blood flow velocities in in vitro fertilization: Relevance to ovarian hyperstimulation syndrome and polycystic ovaries. Fertil Steril. 70 (4), 651-658 (1998).
  15. Waseda, T., et al. Hemodynamic response of ovarian artery after hCG injection. Mol Cell Endocrinol. 202 (1), 71-75 (2003).
  16. Acosta, T. J., Hayashi, K. G., Ohtani, M., Miyamoto, A. Local changes in blood flow within the preovulatory follicle wall and early corpus luteum in cows. Reproduction. 125 (5), 759-767 (2003).
  17. Petridis, I. G., et al. Doppler ultrasonographic examination in sheep. Small Rumin Res. 152, 22-32 (2017).
  18. Miro, J. Ovarian ultrasonography in the mare. Reprod Domest Anim. 47 (s3), 30-33 (2012).
  19. Cunha, G. R., et al. Reproductive tract biology: Of mice and. Differentiation. 110, 49-63 (2019).
  20. Bryda, E. C. The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research. Mo Med. 110 (3), 207-211 (2013).
  21. Lee, W., Novy, M. J. Effects of luteinizing hormone and indomethacin on blood flow and steroidogenesis in the rabbit ovary. Biol Reprod. 18 (5), 799-807 (1978).
  22. Janson, P. O. Effects of the luteinizing hormone on blood flow in the follicular rabbit ovary, as measured by radioactive microspheres. Acta Endocrinol (Copenh). 79 (1), 122-133 (1975).
  23. Dowell, R. T., Gairola, C. G., Diana, J. N. Reproductive organ blood flow measured using radioactive microspheres in diestrous and estrous mice. Am J Physiol. 262 (4 Pt 2), R666-R670 (1992).
  24. De Visscher, G., Haseldonckx, M., Flameng, W. Fluorescent microsphere technique to measure cerebral blood flow in the rat. Nat Protoc. 1 (4), 2162-2170 (2006).
  25. Deveci, D., Egginton, S. Development of the fluorescent microsphere technique for quantifying regional blood flow in small mammals. Exp Physiol. 84, 615-630 (1999).
  26. Raz, T., et al. The hemodynamic basis for positional- and inter-fetal dependent effects in dual arterial supply of mouse pregnancies. PLoS One. 7 (12), e52273(2012).
  27. Fiorentino, G., Parrilli, A., Garagna, S., Zuccotti, M. Three-dimensional micro-computed tomography of the adult mouse ovary. Front Cell Dev Biol. 8, e52273(2020).
  28. Christensen-Jeffries, K., Browning, R. J., Tang, M. X., Dunsby, C., Eckersley, R. J. In vivo acoustic super-resolution and super-resolved velocity mapping using microbubbles. IEEE Trans Med Imaging. 34 (2), 433-440 (2015).
  29. Bar-Zion, A., et al. Doppler slicing for ultrasound super-resolution without contrast agents. BioRxiv. , (2021).
  30. You, Q., et al. Contrast-free super-resolution power Doppler (CS-PD) based on deep neural networks. IEEE Trans Ultrason Ferroelectr Freq Control. 70 (10), 1355-1368 (2023).
  31. Harmon, J. N., et al. Quantitative tissue perfusion imaging using nonlinear ultrasound localization microscopy. Sci Rep. 12 (1), 21943(2022).
  32. Welsh, A. W., et al. Three-dimensional US fractional moving blood volume: Validation of renal perfusion quantification. Radiology. 293 (2), 460-468 (2019).
  33. Schnell, D., Darmon, M. Bedside Doppler ultrasound for the assessment of renal perfusion in the ICU: Advantages and limitations of the available techniques. Crit Ultrasound J. 7 (1), 24(2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи