Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Оценка динамики деления митохондрий в клетках проксимальных канальцев почек

1.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/69268

⸱

14 ноября 2025 г.

 ,  ,  ,  , 
1Lewis Katz Medical School at Temple University

В этой статье

Краткое содержание

В данной статье описывается использование конфокальной микроскопии и ImageJ для оценки динамики деления/слияния митохондрий с помощью фотокоммутационной флуоресценции Dendra2.

Аннотация

Митохондрии лучше всего известны своей ролью в синтезе АТФ и служат ключевыми регуляторами клеточного метаболизма. Митохондриальная динамика включает в себя внутриклеточное и межклеточное движение митохондрий, а также процессы деления/слияния. Эти события имеют основополагающее значение для поддержания функции митохондрий путем поддержания клеточного гомеостаза, морфологии, биоэнергетики, контроля качества и реакции на стресс. С другой стороны, нарушение регуляции митохондриальной динамики влияет на морфологию и функцию клеток. Точное измерение событий деления/слияния митохондрий может свидетельствовать о здоровье клеток. Современные методологии измерения динамики митохондрий используют передовые методы визуализации, такие как микроскопия сверхвысокого разрешения, флуоресцентные методы (восстановление флуоресценции после фотообесцвечивания (FRAP)) для установления связи и оптогенетические инструменты для пространственно-временного контроля. Количественный анализ использует вычислительные инструменты для измерения таких параметров, как длина, количество и ветвление, которые указывают на баланс деления/синтеза. Однако эти методы требуют навыков и сложных инструментов. В этой статье мы описываем использование конфокальной микроскопии в сочетании с бесплатными инструментами в ImageJ (Фиджи) для изучения событий деления/слияния с использованием свойства фотопереключения белка dendra2, меченного к митохондриальному цитохрому c.

Введение

Митохондрии — это динамическая органелла, играющая жизненно важную роль в производстве энергии, гибели клеток и передачесигналов. Морфология митохондрий относится к размеру и форме митохондриальных компартментов, которые очень чувствительны к внутриклеточным и внеклеточным условиям и имеют решающее значение для поддержания клеточного здоровья2. Морфология митохондрий может дать ключ к пониманию их функции, однако изменения формы митохондрий могут повлиять на клеточный метаболизм иобщее состояние здоровья. Нарушения морфологии митохондрий связаны с несколькими заболеваниями, включая нейродегенеративные расстройства, рак и метаболические заболевания4. Морфология митохондрий динамически регулируется событиями слияния и деления/слияния, которые имеют решающее значение для поддержания клеточного гомеостаза и реагирования на различные метаболические потребности 5,6.

Митохондриальная динамика помогает органелле реагировать на различные стрессоры и метаболические потребности7. Он включает в себя непрерывное деление/слияние и перемещение митохондрий внутри клеток или между клетками. Митохондрии приспосабливаются к потребностям клеточной энергии через изменения в морфологии через события деления/слияния8. Эти процессы определяют форму митохондрий и влияют на митохондриальные функции, такие как выход энергии, производство активных форм кислорода (АФК) и контроль качества митохондрий 7,9,10. Кроме того, митохондриальное деление/слияние являются уравновешивающими механизмами, которые поддерживают функциональную митохондриальную сеть11. Слияние позволяет обмениваться содержимым митохондрий, способствуя комплементации и буферизации против локальных повреждений, в то время как деление позволяет сегрегировать и удалять поврежденные митохондрии с помощью митофагии 7,12. Кроме того, деление помогает отделить поврежденные компоненты митохондрий, которые затем удаляются с помощью митофагии, селективного процесса аутофагии13. Слияние, с другой стороны, позволяет дополнять содержимое митохондрий, разбавляя любые поврежденные компоненты14. Ключевыми игроками в делении/слиянии митохондрий являются митофузины (MFN1/2), необходимые для слияния внешних митохондриальных мембран15,16 (OPA1): эта динаминоподобная ГТФаза отвечает за слияние внутренних митохондриальных мембран16. В белках деления участвуют динаминовый белок 1 (Drp1), про-делящийся белок13,17. Белок митохондриального деления 1 (Fis1), митохондриальный фактор деления (Mff) и регулятор митохондриального деления1 Like (MTFR1L). Несколько методов, таких как сверхвысокое разрешение ЭМ, были использованы для изучения митохондриальной ультраструктуры18. Одномолекулярная флуоресцентная гибридизация in situ (smFISH) в сочетании с STED и микроскопией сверхвысокого разрешения MINFLUX (наноскопией) были использованы для визуализации отдельных митохондриальных мРНК и ассоциированных белков18. Методы микроскопии локализации одиночных молекул (SMLM) отслеживают изменения в расстоянии между мембранами19. Стохастическая оптическая реконструктивная микроскопия (STORM) сверхразрешающая микроскопия позволяет изучать митохондриальные комплексы внутренних мембран20. Однако использование этого передового оборудования не является легкодоступным. Конфокальная микроскопия доступна и требует меньше знаний. Кроме того, разработка митохондриальных флуоресцентных белков значительно продвинула изучение митохондриальной динамики в живых клетках21, поскольку мы используем фотоактивируемый зеленый флуоресцентный белок (GFP) для визуализации и количественной оценки митохондриального слияния22.

Чтобы изучить деление и слияние митохондрий, клетки подвергаются стрессу или воздействию лекарств, таких как цисплатин, который связывается с ДНК и вызывает повреждение ДНК, кульминацией которого является митохондриально-опосредованный апоптоз23. В этом исследовании мы использовали фотопереключаемые меченые митохондрии Dendra2 от фотоактивируемых митохондрий мышей для изучения событий деления и слияния в обработанных цисплатином клетках почечных канальцев, поскольку они богаты митохондриями и обладают высокой способностью к регенерации. Тем не менее, этот протокол может быть использован в любом типе клеток, которые имеют фотопереключаемые меченые митохондрии Dendra2 (рис. 1A-C).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Вся работа с животными выполнялась в соответствии с протоколами, утвержденными Комитетом по уходу за животными и их использованию Университета Темпл (Протокол для животных-5183). Были приобретены мыши Pham, у которых митохондрии экспрессируют белок Dendra2.

1. Приготовление среды для культивирования клеток

  1. Изолируют проксимальные канальцевые клетки почек в соответствии с протоколом после их отделения от эндотелиальных клеток клубочков с помощью шариков24 (рисунок 1А). Bouchareb et al. разработали метод выделения и культивирования клубочковых эндотелиальных клеток (GEC) из почек трансгенных мышей, экспрессирующих флуоресцентные митохондрии (mito-Dendra2), с помощью магнитных шариков. После выделения ГЭК канальцы, оставшиеся в грануле, изолируют и культивируют.
  2. Культивировали клетки проксимальных канальцев почек в чашке размером 10 см с 10 мл DMF-12 с добавлением 5% FBS (инактивированного при нагревании), пенициллина (100 ЕД/мл) и стрептомицина (100 мкг/мл). Отращивайте трубочки в течение 2-3 дней, пока они не мигрируют из канальцев.
  3. Отбирают канальцевые клетки по морфологии после голодания (с DMF-12 без FBS) в течение 2 дней.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для экспериментов используйте диск с 50-70% сливающихся клеток. Посчитайте клетки гемоцитометром перед посевом.
  4. Посев клеток для экспериментов: Засейте клетки в культуральные планшеты со стеклянным дном при плотности 1-5 ×10 5 клеток на лунку, в зависимости от требований эксперимента. Дайте клеткам прилипнуть и вырасти в течение ночи перед добавлением цисплатина.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Цисплатин является опасным химиотерапевтическим препаратом, поэтому крайне важно соблюдать протоколы безопасности для защиты персонала и окружающей среды. Для этого следуйте инструкциям по шкафу биологической безопасности II класса, средствам индивидуальной защиты (СИЗ), обеззараживанию, контролю разливов и утилизации отходов (отходы опасных лекарств — химиотерапии): надевайте двойные перчатки, гуглите, обеззараживайте рабочую поверхность, а набор для защиты от разливов храните рядом с рабочим местом, четко маркируйте контейнер для отходов. Для ДМСО надевайте СИЗ, работайте в вытяжном шкафу и следуйте процедурам обеззараживания и утилизации разливов.

2. Индукция напряжения с помощью цисплатина

  1. Приготовление среды цисплатина
    1. Приготовьте стоковый раствор 50 мМ цисплатина, растворив в ДМСО.
    2. Планшет 1-5 х 106 проксимальных канальцевых клеток на стеклянное дно культурального планшета, добавить 2 мл среды DMF-12.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Можно использовать любой культуральный диск со стеклянным дном.
    3. Добавьте цисплатин до конечной концентрации 2 мкМ в экспериментальный планшет, чтобы получить 0,004% в качестве конечной концентрации ДМСО.
      Приготовьте 2 мкл 50 мМ цисплатина, разведенного в 1998 мкл среды DMF-12, свободной от FBS, и добавьте 80 мкл в экспериментальный планшет.
    4. Инкубируйте клетки в течение 24 ч.

3. Визуализация

  1. Использование конфокального микроскопа
    1. Настройте лазеры на 405 нм (фотопреобразование Dendra2), 488 нм (непреобразованное возбуждение Dendra2) и 561 нм (фотопреобразованный Dendra2, Alexa 594).
    2. Включите лазеры и дайте время на стабилизацию (~10 мин)
  2. Изучение процессов деления и термоядерного синтеза
    1. Настройте лазеры на 405 нм (фотопреобразование Dendra2), 488 нм (непреобразованное возбуждение Dendra2) и 561 нм (фотопреобразованный Dendra2, Alexa 594).
    2. Поместите диск с культурой в инкубационную камеру.
    3. Добавьте воды вокруг камеры и установите температуру 37 °C. Поставки CO2 должны быть сохранены.
    4. Дайте инкубационной камере прийти в равновесие. Изменение температуры приведет к стрессу для клеток.
    5. Визуализируйте клетки с помощью более высокого увеличения и разрешения для митохондриальной визуализации.
    6. Откройте выпадающее меню в верхнем левом углу и выберите параметры FRAP (рисунок 2A-D).
    7. Определите область интереса (ROI) с помощью программного обеспечения LAS X, где будет выполняться фотообесцвечивание.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Область интереса может быть нарисована любого размера, что не влияет на результаты, так как анализируются отдельные митохондрии.
    8. Получите серию изображений перед отбеливанием при низкой интенсивности лазера, чтобы установить базовую интенсивность флуоресценции. Установите длину волны 405 нм для фотокоммутации (0,00), 48 нм (0,20) и 56 нм (0,20), обеспечивая фокусировку ячеек.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Значения в скобках после длин волн лазера указывают на интенсивность лазера, которую можно установить на любое значение, поскольку это не влияет на фотообесцвечивание.
    9. Чтобы фотоотбелить клетки, примените высокоинтенсивный лазерный импульс для отбеливания в ROI. Установите лазеры FRAP на 405 нм (4,00), 488 нм (0,00) и 561 нм (0,00). Установите предварительное отбеливание на 5,140 с в течение 59 итераций, а последующее отбеливание — на желаемое время (рис. 2B) (в скобках указана интенсивность лазера перед отбеливанием и после отбеливания).
    10. Для визуализации после отбеливания продолжайте получать изображения с низкой интенсивностью лазера, чтобы наблюдать за восстановлением флуоресценции в течение 10 минут. Держите лазеры FRAP на длине волны 405 нм (0,00), 488 нм (0,50) и 561 нм (0,50).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Время обесцвечивания может отличаться в зависимости от типа клеток, в наших руках аналогичные сроки обесцвечивания использовались для митохондрий в канальцевых клетках и клапанных интерстициальных клетках (VIC). После завершения FRAP можно сделать изображения или визуализацию живых клеток (рис. 3 и дополнительное видео 1), а также получить изображения после обесцвечивания.

4. Анализ изображений

Примечание: Поскольку митохондрии помечены белком Dendra2, после фотообесцвечивания необратимое конформационное изменение белка dendra2 приводит к увеличению красной флуоресценции, обнаруженной с помощью лазера с длиной волны 561 нм. Когда красные митохондрии сливаются с необеленными зелеными митохондриями, комбинация дает желтый цвет. Используя это явление, можно измерить динамические события деления/синтеза.

  1. Профилирование слитых красных и зеленых митохондрий
    1. Установите подключаемый модуль RGB-профилировщика, чтобы профилировать красный и зеленый сигнал по всему выделению.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Следуйте инструкциям на сайте, чтобы добавить плагин в раздел Фиджи.
    2. Откройте ImageJ (рис. 4A).
    3. В меню «Файл » найдите и откройте файл для анализа (рисунок 4B).
    4. Выберите композитный цветовой режим, отметьте опцию автоматического масштабирования и откройте видео для анализа (рис. 4C).
    5. Выберите прямоугольную область для анализа (Рисунок 4D).
    6. Наведите курсор на выбранную область прямоугольника, щелкните правой кнопкой мыши и выберите дубликат (Рисунок 4E).
    7. Выберите опцию «Дублировать гиперстек », которая дублирует все стопки изображений (рис. 4F).
    8. Чтобы преобразовать дублированный стек в формат RGB, выберите изображение и выберите параметр RGB в выпадающем списке изображения (рисунок 4G-H).
    9. Изображение RGB дублируется, выбирается только один кадр (рис. 4I).
    10. Если митохондрии на изображении изогнуты, проведите линию по их длине. Затем перейдите в меню «Правка », выберите «Выделение» и нажмите « Выпрямить » (рисунок 5A).
    11. Выберите заголовок для изображения и установите ширину линии равной 20 пикселям (рисунок 5B).
    12. После выпрямления митохондрий проведите линию вдоль интересующих митохондрий, чтобы убедиться, что она находится на одной линии с прямой линией (рис. 5C).
    13. Откройте плагин RGB Profiler (рис. 5D).
    14. После активации плагин сгенерирует график, показывающий интенсивность красной и зеленой флуоресценции вдоль нарисованной линии. Высота каждого пика прямо пропорциональна интенсивности флуоресценции (рис. 5E).
      Примечание: Морфология митохондрий также может быть рассчитана с помощью модуля25 для анализа митохондрий. Выберите области, используемые для воздействия, проанализируйте порог в выбранных областях, а затем измерьте морфологию митохондрий и 2D-анализ. Можно выбрать периметр зоны и другие параметры.

5. Анализ событий слияния

  1. Установите исходный уровень перед слиянием: перед слиянием митохондрий убедитесь, что красная флуоресценция (561 нм) локализована в одной митохондрии, а зеленая флуоресценция (488 нм) — в соседней. Соответствующий график интенсивности должен отображать два отдельных пика, один красный и один зеленый, с минимальным перекрытием.
  2. Подтвердите событие после слияния: После слияния красный сигнал (представляющий содержимое матрицы Dendra2) должен распространиться на соседнюю зеленую митохондрию, указывая на смешивание содержимого. График интенсивности теперь будет показывать перекрывающиеся красные и зеленые пики, подтверждая событие термоядерного синтеза.
  3. Оценка событий слияния может быть определена путем тщательного отбора здоровых митохондрий и фотообесцвеченных митохондрий для слияния на визуализации живых клеток. Изменение соотношения красного/зеленого цветов с течением времени будет указывать на событие слияния.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Первичные эпителиальные клетки канальцев выделяли из почки мыши путем ферментативного расщепления и культивировали в DMF-12 с добавлением 5% FBS, 1% пенициллин-стрептомицина при 37 °C при 5%CO2. По достижении 80% конфлюенции клетки трипсинизировали (0,25% трипсин-ЭДТА) и засеивали с плотностью 5 × 104 клеток на лунку в культуральные планшеты со стеклянным дном, предварительно покрытые коллагеном.

Питательная среда содержала цисплатин в ко...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Деление/слияние митохондрий являются важнейшими динамическими процессами, которые поддерживают гомеостаз митохондрий и клеточную жизнеспособность26. Надлежащая оценка этих процессов требует передовых методов визуализации для визуализации и количественной оценки морфологии, динамики и функции митохондрий27,28. Для измерения митохондриального деления/слияния использовались различные методы. Некоторые из слож...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что им нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана исследовательскими грантами от Национального института здравоохранения No 5R01DK135470-03, грантом ISAC-NIH 5U24DK128851-03 и постдокторской стипендией Американской кардиологической ассоциации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
<сильная>клеточная культура 
DMEM/F12 Базальная среда  (Гибко/Кот. No11320033 ) Культура проксимальных трубчатых клеток 
Сыворотка плода для крупного рогатого скота (FBS) 5-10% добавок  (Biowest/Cat. No.S181B) Обогащение культурных сред  
Пенициллин-стрептомицин и bbsp;100X (Гибко/Кот. No15140122) Защита от антибиотиков  
Коллаген IV покрытие (Sigma-C5533-5M) Покрытие пластин Ибиди 
Trypsin-EDTA 0,25% раствора (Гибко/Кот. No25200056) Отделение ячейки 
Фосфатно-буферный физиологический раствор (PBS) (Гибко/Кот. No10010023 ) Промывка клеток  
<Сильные>Методы лечения 
Cisplatin 2 и микро; Магистр рабочей специализации и bbsp;(Selleck Chemicals/Cat. No.S1166) Индукция напряжений   
Диметилсульфоксид (DMSO) Управление транспортным средством и NBSP;(Фишер Сайентифик/Кат. No.D1391) Контроль растворителя цисплатина 
<сильный>Визуализация  
Phenol Red-Free Medium  Живое изображение и bbsp;(Гибко/Кот. No21041025) Сниженная фоновая флуоресценция 
Молекулярная биология 
TRIzol®  Экстракция РНК (Гибко/Кот. No15596018) Полная изоляция РНК 
SYBR Green Master Mix qPCR химия (Термо Сайентифик/Кат. No.K0221) Экспрессия генов митохондриальной динамики (DNM1L, FIS1, MFN1, MFN2, OPA1) и nbsp;
Флуоресцентные инструменты 
Dendra2 Митохондриальная матрица tag Лаборатория Джаксона (PhAMexcised) Фотокоммутируемый репортер (преобразование 405 нм, изображение 488/561 нм) 
<сильные>микроскопы 
Конфокальный микроскоп и bbsp;Leica DMi8 Живоклеточная визуализация и FRAP лазеры 405 нм/488 нм/561 нм;
Изображение J https://imagej.net/software/fiji/downloads 
Плагин RGB Profiler https://imagej.net/ij/plugins/rgb-profiler.html. Анализ событий слияния (перекрытие сигналов красного и зелёного) 

Ссылки

  1. Liesa, M., Palacin, M., Zorzano, A. Mitochondrial dynamics in mammalian health and disease. Physiol Rev. 89 (3), 799-845 (2009).
  2. Chen, Z., Berquez, M., Luciani, A. Mitochondria, mitophagy, and metabolic disease: towards assembling the puzzle. Cell Stress. 4 (6), 147-150 (2020).
  3. Ding, Y., et al. Mitochondrial segmentation and function prediction in live-cell images with deep learning. Nat Commun. 16, 743(2025).
  4. Jiao, H., et al. Mitocytosis, a migrasome-mediated mitochondrial quality-control process. Cell. 184 (11), 2896-2910.e13 (2021).
  5. Kraus, F., Roy, K., Pucadyil, T. J., Ryan, M. T. Function and regulation of the divisome for mitochondrial fission. Nature. 590 (7844), 57-66 (2021).
  6. He, X., et al. GTPBP8 modulates mitochondrial fission through a Drp1-dependent process. J Cell Sci. 137 (8), jcs261612(2024).
  7. San-Millán, I. The key role of mitochondrial function in health and disease. Antioxidants. 12 (4), 782(2023).
  8. Ponte, S., et al. Drp1-mediated mitochondrial fission regulates calcium and F-actin dynamics during wound healing. Biol Open. 9 (5), bio048629(2020).
  9. Sabouny, R., Shutt, T. E. The role of mitochondrial dynamics in mtDNA maintenance. J Cell Sci. 134 (24), jcs258944(2021).
  10. Huang, H., et al. Mitochondrial dynamics tracking with two-photon phosphorescent terpyridyl iridium(III) complexes. Sci Rep. 6, 20887(2016).
  11. Chen, W., Zhao, H., Li, Y. Mitochondrial dynamics in health and disease: mechanisms and potential targets. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 333(2023).
  12. Sabouny, R., Shutt, T. E. Reciprocal regulation of mitochondrial fission and fusion. Trends Biochem Sci. 45 (7), 564-577 (2020).
  13. Jin, P., et al. Mitochondrial adaptation in cancer drug resistance: prevalence, mechanisms, and management. J Hematol Oncol. 15 (1), 97(2022).
  14. Wai, T., et al. The membrane scaffold SLP2 anchors a proteolytic hub in mitochondria containing PARL and the i-AAA protease YME1L. EMBO Rep. 17 (12), 1844-1856 (2016).
  15. Schiavon, C. R., Shadel, G. S., Manor, U. Impaired mitochondrial mobility in Charcot-Marie-Tooth disease. Front Cell Dev Biol. 9, 624823(2021).
  16. Sivakumar, A., Shanmugarajan, S., Subbiah, R., Balakrishnan, R. Cardiac mitochondrial PTEN-L determines cell fate between apoptosis and survival during chronic alcohol consumption. Apoptosis. 25 (7-8), 590-604 (2020).
  17. Simula, L., et al. Mitochondrial metabolism sustains CD8+ T cell migration for an efficient infiltration into solid tumors. Nat Commun. 15 (1), 2203(2024).
  18. Kopek, B. G., Shtengel, G., Xu, C. S., Clayton, D. A., Hess, H. F. Correlative 3D superresolution fluorescence and electron microscopy reveal the relationship of mitochondrial nucleoids to membranes. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (16), 6136-6141 (2012).
  19. Whelan, D. R., Bell, T. D. Image artifacts in single molecule localization microscopy: why optimization of sample preparation protocols matters. Sci Rep. 5, 7924(2015).
  20. Palmer, C. S., et al. Super-resolution microscopy reveals the arrangement of inner membrane protein complexes in mammalian mitochondria. J Cell Sci. 134 (13), jcs252197(2021).
  21. Liu, F., et al. The interactome of intact mitochondria by cross-linking mass spectrometry provides evidence for coexisting respiratory supercomplexes. Mol Cell Proteomics. 17 (2), 216-232 (2018).
  22. Karbowski, M., Cleland, M. M., Roelofs, B. A. Methods Enzymol. , Elsevier. Netherlands. (2014).
  23. Kleih, M., et al. Direct impact of cisplatin on mitochondria induces ROS production that dictates cell fate of ovarian cancer cells. Cell Death Dis. 10 (11), 851(2019).
  24. Bouchareb, R., Yu, L., Lassen, E., Daehn, I. S. Isolation of conditionally immortalized mouse glomerular endothelial cells with fluorescent mitochondria. J Vis Exp. (187), e64147(2022).
  25. Chu, C. H., Tseng, W. W., Hsu, C. M., Wei, A. C. Image analysis of the mitochondrial network morphology with applications in cancer research. Front Phys. 10, 855775(2022).
  26. Montecinos-Franjola, F., Ramachandran, R. Methods Mol Biol. , Springer, US. (2020).
  27. Gaspar, M. L., Chang, Y. F., Jesch, S. A., Aregullin, M., Henry, S. A. Interaction between repressor Opi1p and ER membrane protein Scs2p facilitates transit of phosphatidic acid from the ER to mitochondria and is essential for INO1 gene expression in the presence of choline. J Biol Chem. 292 (45), 18713-18728 (2017).
  28. Karbowski, M. Adv Exp Med Biol. , Springer, US. (2010).
  29. Yang, X., et al. Mitochondrial dynamics quantitatively revealed by STED nanoscopy with an enhanced squaraine variant probe. Nat Commun. 11 (1), 3699(2020).
  30. Opstad, I. S., et al. Three-dimensional structured illumination microscopy data of mitochondria and lysosomes in cardiomyoblasts under normal and galactose-adapted conditions. Sci Data. 9 (1), 98(2022).
  31. Kunz, T. C., Götz, R., Gao, S., Sauer, M., Kozjak-Pavlovic, V. Using expansion microscopy to visualize and characterize the morphology of mitochondrial cristae. Front Cell Dev Biol. 8, 617(2020).
  32. Teixeira, P., Galland, R., Chevrollier, A. Super-resolution microscopies, technological breakthrough to decipher mitochondrial structure and dynamic. Semin Cell Dev Biol. 159 - 160, 38-51 (2024).
  33. Kirchweger, P., et al. Snapshots of mitochondrial fission imaged by cryo-scanning transmission electron tomography. J Cell Sci. 138 (9), jcs263639(2025).
  34. Collins, H. E., et al. Mitochondrial morphology and mitophagy in heart diseases: qualitative and quantitative analyses using transmission electron microscopy. Front Aging. 2, 670267(2021).
  35. Marshall, A. G., Damo, S. M., Hinton, A. Revisiting focused ion beam scanning electron microscopy. Trends Biochem Sci. 48 (6), 585-586 (2023).
  36. Adebayo, M., Singh, S., Singh, A. P., Dasgupta, S. Mitochondrial fusion and fission: the fine-tune balance for cellular homeostasis. FASEB J. 35 (6), e21620(2021).
  37. Munro, D., Baldy, C., Pamenter, M. E., Treberg, J. R. The exceptional longevity of the naked mole-rat may be explained by mitochondrial antioxidant defenses. Aging Cell. 18 (3), e12916(2019).
  38. Varuzhanyan, G., Chan, D. C. Mitochondrial dynamics during spermatogenesis. J Cell Sci. 133 (14), jcs235937(2020).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

FRAPDendra2ImageJ
Оценка динамики деления митохондрий в клетках проксимальных канальцев почек
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.