Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Сравнительные стратегии обнаружения убиквитинации в лизатах млекопитающих с использованием SMAD2/SMURF2 в качестве модели

975 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/69321

⸱

17 апреля 2026 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Emergency Surgery, Wuhan Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, 2Department of Medical Genetics, School of Basic Medicine, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology

В этой статье

Краткое содержание

Убиквитинация является критически важным регулятором внутриклеточных функций белка. Здесь мы описываем два метода лизиса клеток для обнаружения уровней убиквитинации белков субстрата в клетках млекопитающих и сравниваем их эффективность при анализе уровней убиквитинации. Гиперэкспрессия белка в HEK293T клетках была вызвана временной трансфекцией, а убиквитинированные белки были обнаружены методом анализа вестерн блот.

Аннотация

Убиквитинация, посттрансляционная модификация, является критически важным регулятором функции внутриклеточного белка. Убиквитинация модулирует функции белка, способствуя деградации протеасомы или изменяя локализацию субклеток посредством убиквитин-цепочной сигнализации. Здесь мы описываем два метода лизиса клеток для обнаружения уровней убиквитинации SMAD2 в HEK293T клетках и сравниваем их эффективность при анализе уровней убиквитинации белков. Избыточная экспрессия белков в клетках была вызвана временной трансфекцией. Плазмиды (HA-Ub, FLAG-SMAD2 и MYC-SMURF2) и трансфекционные реагенты отдельно добавлялись в базальную среду, смешивались, и смесь добавлялась в клетки. Перед сбором урожая добавляли MG132 для подавления деградации протеасомы и усиления накопления убиквитинированного белка. Основное различие между двумя экспериментальными методами — их методы лизиса клеток — метод ледяной ванны (при 4 °C) и метод термической обработки (с инкубацией при 95 °C), который существенно влияет на эффективность лизиса белков. После завершения лизиса клетки лизат, агарозные шарики и антитела к FLAG смешивались и инкубировали при температуре 4 °C в течение ночи. Убиквитинированные белки затем были обнаружены методом анализа западного блота. До обнаружения убиквитинированных белков для инкубации вторичных антител использовалось светлоцепочечное антитело. Затем были обнаружены убиквитинационные полосы. Результаты показывают, что для обнаружения уровней убиквитинации можно использовать как метод ледяной ванны, так и метод термической обработки, тогда как метод термической обработки может упростить обнаружение убиквитинации SMAD2. В этом исследовании выделяются и сравниваются два метода лизиса клеток для измерения уровней убиквитинации в клетках млекопитающих, используя SMURF2/SMAD2 в качестве модели, чтобы помочь исследователям выбрать более подходящие методы обнаружения уровней убиквитинации белков субстрата.

Введение

Убиквитинация, незаменимая посттрансляционная модификация, является критически важным регулятором внутриклеточных функцийбелка 1. Система убиквитин-протеасома (UPS), которая опосредует деградацию более 80% белков у эукариот, состоит из убиквитина (Ub), ферментов, активирующих E1, ферментов, конъюгающих E2, лигазов E3, деубиквитилирующих ферментов (DUBs) и протеасомы26S. Эта система регулирует оборот белков с высокой специфичностью, тем самым контролируя важные клеточные процессы, такие как прогрессия клеточногоцикла 3, передачасигнала 4,5 и стрессовыереакции 6,7. Убиквитинация — это многоступенчатый ферментативный процесс. E1 гидролизует АТФ, чтобы аденилировать C-конец Ub, образуя промежуточный продукт Ub-AMP. Затем активированный Ub переносится из E1 в активный центр цистеина конъюгающего фермента E2, образуя тиоэфирную связь. Наконец, E3-лигаза привлекает как комплекс E2-Ub, так и целевой белок, катализируя перенос Ub из E2 в остаток лизина насубстрате 8.

Убиквитин может образовывать разнообразные полиубиквитиновые цепи через связь в семи остатках лизина (Lys6, Lys11, Lys27, Lys29, Lys33, Lys48, Lys63) или Met1(M1)4. Каждый тип связки определяет разные биологические исходы: цепи, связанные с K48, в первую очередь нацелены на белки для деградации протеасом, цепи с K63 регулируют сигнализацию и восстановлениеДНК 10,11, а цепи M1 критически важны для врождённого иммунногоответа 12. Убиквитинация и дейбиквитинация — ключевые процессы посттрансляционной модификации, которые управляют различными клеточными событиями — от деградации белков до передачи сигналов. Например, при колоректальном раке аномальная активация убиквитинации p53, опосредованной MDM2, приводит к чрезмерной деградации p53, что снижает его способность вызывать остановку клеточный цикл и апоптоз, тем самым способствуя прогрессированию опухоли и химиорезистентности13,14. При поражении ишемии-реперфузии печени OTUD1 стабилизирует NRF2, удаляя его связанную с K48 полиубиквитинирование, тем самым снижая уровни внутриклеточного окислительногостресса 15,16. Ряд ингибиторов протеасом, таких как бортезомиб, карфилзомиб и иксазомиб, постепенно входит в клиническую практику при лечении таких заболеваний, как множественнаямиелома 17,18,19.

В настоящее время существует множество методов обнаружения убиквитинированных белков, включая вестерн-блоттинг, анализы на основе радиоактивности и флуоресцентныеанализы 20. Однако в научных исследованиях вестерн блот остаётся предпочтительным методом обнаружения убиквитинации белков благодаря своему относительно быстрому и простому протоколу. Традиционные методы обнаружения убиквитинированных белков схожи с технологией коиммунопреципитации (co-IP): они используют буфер лизиса для инкубации и лизирования клеточных гранул при низкой температуре с целью высвобождения белков, затем антитела обнаруживают убиквитинирование субстратныхбелков 21,22. Однако этот экспериментальный протокол часто требует большого количества клеток. Кроме того, поскольку относительно мягкий метод лизиса при низкой температуре не может полностью нарушить взаимодействия белков, это увеличивает вероятность ложноположительных результатов при обнаружении убиквитинации. Нагрев и использование SDS могут значительно нарушать структуру белка, вызывая их полную денатурацию, тем самым эффективно снижая ложноположительные результаты, вызванные взаимодействием белкови белков 23,24,25. Аналогично, клетки проходят достаточный лизис при нагреве и обработке SDS, высвобождая больше белков и, соответственно, уменьшая количество клеток, необходимых для эксперимента. В итоге, как метод ледяной ванны, так и метод термической обработки лизают клетки и определяют убиквитинации белков субстрата посредством инкубации антител. Однако метод нагрева приводит к большему лизу клеток и более сильной денатурации белка.

TGF-β играет двойную роль в патофизиологических процессах различныхзаболеваний 26,27. SMAD2 — это критически важный транскрипционный фактор TGF-β. SMURF2-опосредованная убиквитина SMAD2 нацелена на деградацию протеасом, тем самым тонко настраивая интенсивность сигнализации TGF-β28. В этом исследовании выделяются и сравниваются два метода лизиса клеток для измерения уровней убиквитинации в клетках млекопитающих с использованием SMURF2/SMAD2 в качестве модели. Здесь избыточная экспрессия белка в HEK293T клетках была индуцирована временной трансфекцией плазмидами HA-Ub, FLAG-SMAD2 и MYC-SMURF2. Клетки лизировали с использованием метода ледяной ванны и термической обработки соответственно. Убиквитинированные белки были обнаружены методом анализа западного блота. Мы обнаружили, что как метод ледяной ванны, так и метод термической обработки могут использоваться для выявления уровней убиквитинации, а метод термической обработки может облегчить обнаружение убиквитинации SMAD2. Этот протокол предлагает новую альтернативу для обнаружения убиквитинированных белков. Кроме того, для некоторых субстратных белков, тесно связанных с убиквитинацией, метод термической обработки обеспечивает лучшую эффективность лиза белка, что облегчает обнаружение убиквитинации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Подготовка буфера для лизиса и реагентов

ПРИМЕЧАНИЕ: Подготовьте все буферы в указанных концентрациях. Следуйте инструкциям производителя по порошкам реактивов, чтобы избежать расхождений в концентрации.

  1. Подготовьте буфер для лизис, содержащий 20 мМ Tris-HCl (pH 7,4), 50 мМ NaCl, 1 мМ EDTA (pH 8,0) и 1% Triton X-100. При необходимости регулируйте концентрацию NaCl в диапазоне 50-150 мМ. Подготовьте все буферы с использованием двойной дистиллляции H₂O.
  2. Приготовьте рабочий раствор, дополнив буфер лизиса 1% коктейлем ингибитора протеазы (без ЭДТА). Тщательно перемешайте и держите на льду до использования.
  3. Подготовьте 10% SDS, растворив 1 г порошка SDS в 10 мл PBS. Смешивайте до полного растворения. Храните при комнатной температуре.
  4. Приготовьте 5× буфер с нагрузкой белка, содержащий 250 мМ Tris-HCl (pH 6,8), 10% SDS, 50% глицерина, 0,5% бромофенол синего и 5% β-меркаптоэтанола. Растворите компоненты в двойном дистиллированномH 20. Тщательно перемешайте перед использованием.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Обращайтесь с SDS и β-меркаптоэтанолом в вытяжке с использованием соответствующего защитного снаряжения. Утилизировать загрязнённые материалы в соответствии с институциональными рекомендациями по химическим отходам.

2. Подготовка клеток

  1. Поддерживайте HEK293T клетки в DMEM с высоким содержанием глюкозы с добавлением 10% FBS и 1% пенициллин-стрептомицина. Инкубировать при 37 °C с 5% CO₂ в стерильных условиях. Проходящие клетки примерно на 90% совпадения.
  2. Семенные клетки в пластинах с 6 колодцами, по 5 × 10⁵ ячейки на колодцу. Пулируйте ячейки из двух скважин для получения одного образца.
  3. Подготовьте трансфекционные смеси, которые представляют 10% от общего объёма культуры, и используйте убиквитинацию SMAD2 в качестве экспериментальной модели. Объедините 1 мкг плазмиды HA-Ub, 1 мкг плазмиды FLAG-SMAD2 и 0,5 мкг пустой векторной или MYC-SMURF2 плазмиды в 100 мкл безсывороточной DMEM. В отдельной трубке разведите 3,75 мкл трансфекционного реагента в 100 мкл безсывороточного DMEM. Добавляйте реагентную смесь по капле в плазмидный раствор, инкубуйте 15 минут при комнатной температуре и равномерно распределяйте по клеткам.
  4. Замените трансфекционную среду через 6-8 часов на 2 мл свежего полного DMEM на каждую скважину. Инкубировать клетки в течение 48 часов.
  5. Обрабатывайте клетки 5 мкм MG132 в течение 12 часов перед сбором.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте MG132 в шкафу с биобезопасностью, надевая перчатки. Утилизация загрязнённых материалов в соответствии с институциональными процедурами безопасности.

3. Сбор клеток

  1. Собирать клетки при соединении 90-100% (~3 × 10⁶ ячейки). Аспирируйте средний слой и промой каждую тщательно 1 мл предварительно охлаждённого PBS. Полностью уберите PBS.
  2. Добавьте 1 мл PBS в каждую ямочку и аккуратно суспензируйте клетки. Перенесите подвеску на трубку объёмом 1,5 мл и поставьте на лёд.
  3. Центрифуга при 380 × г в течение 5 минут при 4 °C. Удалите супернатант и оставьте гранулу.

4. Приготовление бусинок агарозы

  1. Перенесите 50 мкл агарозных шариков белка A/G на образец в новую пробирку. Промывайте шарики 3 раза с 1 мл буфера лизиса. Центрифугите при 100 × г в течение 1 минуты при 4 °C между промывками.
  2. Удалите остатки буфера, не нарушая гранулу. Добавьте 100 мкл рабочего раствора и 5 мкл антитела против FLAG. Инкубировать 6 часов при 4 °C с мягким вращением.

5. Лизис клеток

  1. Метод ледяной ванны
    1. Добавьте 500 мкл предварительно охлаждённого рабочего раствора в пеллету. Инкубировать на льду 30 минут.
    2. Соник на 2 Вт, используя циклы 4 секунды включённые/4 секунды отдыха в течение пяти повторений. Держите образцы на льду во время соникации. Возвращать образцы в лёд на оставшуюся часть инкубации.
      ПРИМЕЧАНИЕ: При слабых белковых взаимодействиях снизите концентрацию NaCl до 50-75 мМ и исключите соникацию.
  2. Метод термической обработки
    1. Добавьте в пеллет 45 мкл рабочего раствора. Добавьте 5 мкл 10% SDS при непрерывном смешивании.
    2. Кратковременно нагревайте вихрь при 95 °C, пока подвеска не станет прозрачной и полностью жидкой. Инвертируйте периодически для обеспечения равномерной денатурации.
    3. Добавьте 450 мкл рабочего раствора. Сониковать при 2 Вт, используя циклы 4 секунды вкл/4 секунды выключения на пять повторений, при этом сохраняя образцы на льду.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Обеспечьте сохранение конечной концентрации SDS <0,1%. Подтвердите полный лизис, проверив исчезновение видимых гранул и равномерную прозрачность раствора.

6. Обнаружение иммунопреципитации и убиквитинации

  1. Центрифуга лизирует при 13 680 × г в течение 15 минут при 4 °C. Перенесите супернатант в новую трубку.
  2. Резервируйте 60 мкл лизата и добавьте 15 мкл 5× буфера нагрузки. Нагрейте при 95 °C в течение 15 минут и маркируйте как вход.
  3. Добавьте 100 мкл шариков, связанных с антителами, к оставшемуся лизату (итоговый объём 540 мкл). Инкубировать при 4 °C в течение 8-12 часов с вращением.
  4. Центрифугные шарики при 100 × г в течение 1 минуты при 4 °C и выбросьте супернатант. Промывайте шарики 3 раза с буфером лизис. Добавьте 75 мкл 1× SDS загрузочного буфера и нагрейте при 95 °C в течение 15 минут, чтобы элюировать белки. Маркируйте как IP.
  5. Обнажить убиквитинированные белки с помощью western blot согласно стандартному протоколу JoVE.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Обратитесь к протоколу западногоблота 29 для подробных процедур передачи и обнаружения. Полноразмерные необрезанные пятна с маркерами молекулярной массы приведены в Дополнительном файле 1.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

В качестве «молекулярного посланника» в сигнальном пути TGF-β SMAD2, после фосфорилирования рецепторами TGF-β, образует комплекс с SMAD3 и SMAD4, транслоцируется в ядро и инициирует транскрипцию следующих целевыхгенов 30. Таким образом, это ключевая молекула, связывающая внеклеточные сигналы с внутриклеточной экспрессией генов. Её деградация опосредована SMURF2 — убиквитин-лигазой E3, которая катализирует полиубиквитинирование мишенного белка, тем самым нацеливая ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В данном исследовании представлены и сравниваются два детальных протокола лизиса белков, специально оптимизированных для обнаружения убиквитинации, опосредованной E3-лигазой субстрата. Для обеспечения обнаруживаемости мы использовали плазмидную гиперэкспрессию (например, помеченную SMAD2, SMURF2 или Ub) в клетках, что обеспечивало достаточный уровень белка для визуализации специфических сигналов убиквитинации, критически важный для проверки взаимодействий E3-лигазы и субстрата в этом исс...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов, которые можно было бы заявлять.

Благодарности

Это исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая, No 82370647 (W.H.), No 82170642 (J-X. Z), No 81801923 (X-F. Z), No 81670575 (J-X. Z), No 81570570 (W.H.) и No 81070355 (J-X. Z), а также программу молодежной команды HUST Academic Frontier при Хуачжунском университете науки и технологий (2018QYTD02). Открытый фонд Хубэйской ключевой лаборатории регенеративной медицины и междисциплинарных трансляционных исследований (2022zsyx003). Национальная программа ключевых исследований и разработок Китая (2024YFA1107601).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Микротрубка объёмом 1,5 млServicebioEP-150-M
Культивированная тарелка с обработкой 100 мм TCServicebioCCD-100
6-ячественный дискServicebioCCP-6H
Антитела к FLAGProteintech20543-1-APразбавление используется 1:200 для IP 1:10000 для WB
Антитела к GAPDHProteintechMA5-15738Разбавление используется 1:10000
Антиантитела к HAProteintech51064-2-APРазбавление используется 1:10000
Анти-IgG-антителаCST#3900разбавление используется 1:200 для IP
Анти-MYC антителаProteintech60003-2-IgРазбавление используется 1:10000
Анти-SMAD2 антителаCST#5339разбавление использовалось 1:200 для IP 1:2000 для WB
Бромофенол синийServicebioGC307006-5g
EDTA (pH=8.0)ServicebioG1207-1L
FBSABW
ГлицеринSinopharm10010618
Сухая ванна с отоплением/охлаждениемГочэн
HEK293T ячейкиATCCCRL-3216
DMEM с высоким содержанием глюкозыServicebioG4515-500ML
HRP-конъюгированный Goat Anti-Mouse IgG Light Chain  AbclonalAS062Разбавление использовалось 1:5000
IgG Light Chain с сопряжённой с HRP-конъюгированной мышью против кроликов и bbsp;AbclonalAS061Разбавление используется 1:10000
Lipo8000BeyotimeC0533
MG132АладдинM421264
МикроцентрифугаLabgicCF1524R
Порошок NaClServicebioGC102004
PBS ServicebioG4202-500ML
pCMV-FLAG-SMAD2Для выражения у млекопитающих
pCMV-HA-UbДля выражения у млекопитающих
pCMV-MYCДля выражения у млекопитающих
pCMV-MYC-SMURF2Для выражения у млекопитающих
Пенициллин-стрептомицинServicebioG4003-100ML
Коктейль с ингибиторами протеазы без ЭДТАTargetMolC0001
Белковые агарозные бусины A/GBeyotimeP2017
Мембрана PVDFВайзмеE801
Порошок SDSSolarbioS8010-500g
Система SDS-PAGEAervicebioBVE4-BVT4
SonicsЯчейка Уибра
Порошок Tris-HClБиотопированныйHST-0372
Triton X-100ServicebioGC204003-100 мл
ТрипсинServicebioG4021-100ML
Вихревой миксерЛюбезно пожертвовано Vayzme
&бета;-меркаптоэтанолАладдинM301573

Ссылки

  1. Popovic, D., Vucic, D., Dikic, I. Ubiquitination in disease pathogenesis and treatment. Nat Med. 20 (11), 1242-1253 (2014).
  2. Han, D., Wang, L., Jiang, S., Yang, Q. The ubiquitin-proteasome system in breast cancer. Trends Mol Med. 29 (8), 599-621 (2023).
  3. Fulcher, L. J., Batley, C., Sobajima, T., Barr, F. A. Time as a danger signal promoting G1 arrest after mitosis. Trends Cell Biol. 36 (2), 142-153 (2025).
  4. Gao, L., et al. The mechanism of linear ubiquitination in regulating cell death and correlative diseases. Cell Death Dis. 14 (10), 659(2023).
  5. Serratore, V., Lucibello, M., Malanga, D., Viglietto, G., De Marco, C. Akt and DUBs: A bidirectional relationship. Cell Mol Biol Lett. 30 (1), 77(2025).
  6. Kwon, Y. T., Ciechanover, A. The ubiquitin code in the ubiquitin-proteasome system and autophagy. Trends Biochem Sci. 42 (11), 873-886 (2017).
  7. Liu, J. Z., et al. BDH2 triggers ROS-induced cell death and autophagy by promoting NRF2 ubiquitination in gastric cancer. J Exp Clin Cancer Res. 39 (1), 123(2020).
  8. Cappadocia, L., Lima, C. D. Ubiquitin-like protein conjugation: Structures, chemistry, and mechanism. Chem Rev. 118 (3), 889-918 (2018).
  9. Li, J., et al. ATRA upregulates OTUD6B to recruit CD8+ T cells to suppress colorectal liver metastasis by stabilizing DDX5/STAT3/CXCL11 axis. Cell Death Dis. 16 (1), 521(2025).
  10. Niu, K., et al. USP33 deubiquitinates PRKN/Parkin and antagonizes its role in mitophagy. Autophagy. 16 (4), 724-734 (2020).
  11. Yan, K., et al. The role of K63-linked polyubiquitination in cardiac hypertrophy. J Cell Mol Med. 22 (10), 4558-4567 (2018).
  12. Guo, Y., Zhao, Y., Cong, Y. S. Met1-linked ubiquitination in cell signaling regulation. Biophys Rep. 10 (4), 230-240 (2024).
  13. Di, Y., et al. The c-Myc-WDR43 signalling axis promotes chemoresistance and tumour growth in colorectal cancer by inhibiting p53 activity. Drug Resist Updat. 66, 100909(2023).
  14. Liebl, M. C., Hofmann, T. G. The role of p53 signaling in colorectal cancer. Cancers (Basel). 13 (9), 2125(2021).
  15. Oikawa, D., et al. OTUD1 deubiquitinase regulates NF-κB- and KEAP1-mediated inflammatory responses and reactive oxygen species-associated cell death pathways. Cell Death Dis. 13 (8), 694(2022).
  16. Zhang, Q., et al. The deubiquitinase OTUD1 stabilizes NRF2 to alleviate hepatic ischemia/reperfusion injury. Redox Biol. 75, 103287(2024).
  17. Moreau, P., et al. Oral ixazomib, lenalidomide, and dexamethasone for multiple myeloma. N Engl J Med. 374 (17), 1621-1634 (2016).
  18. Stewart, A. K., et al. Carfilzomib, lenalidomide, and dexamethasone for relapsed multiple myeloma. N Engl J Med. 372 (2), 142-152 (2015).
  19. Zhu, Y., et al. Targeting gut microbial nitrogen recycling and cellular uptake of ammonium to improve bortezomib resistance in multiple myeloma. Cell Metab. 36 (1), 159-175.e8 (2024).
  20. De Silva, A. R. I., Page, R. C. Ubiquitination detection techniques. Exp Biol Med (Maywood). 248 (15), 1333-1346 (2023).
  21. Choo, Y. S., Zhang, Z. Detection of protein ubiquitination. J Vis Exp. (30), e1293(2009).
  22. Worboys, J. D., Palazón-Riquelme, P., López-Castejón, G. Method to measure ubiquitination of NLRs. Methods Mol Biol. 2696, 105-114 (2023).
  23. DeCaprio, J., Kohl, T. O. Denaturing lysis of cells for immunoprecipitation. Cold Spring Harb Protoc. 2020 (2), 098616(2020).
  24. Bass, J. J., et al. An overview of technical considerations for western blotting applications to physiological research. Scand J Med Sci Sports. 27 (1), 4-25 (2017).
  25. Mahmood, T., Yang, P. C. Western blot: Technique, theory, and troubleshooting. N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).
  26. Crane, J. L., Cao, X. Bone marrow mesenchymal stem cells and TGF-β signaling in bone remodeling. J Clin Invest. 124 (2), 466-472 (2014).
  27. Gough, N. R., Xiang, X., Mishra, L. TGF-β signaling in liver, pancreas, and gastrointestinal diseases and cancer. Gastroenterology. 161 (2), 434-452.e15 (2021).
  28. Tzavlaki, K., Moustakas, A. TGF-β signaling. Biomolecules. 10 (3), 487(2020).
  29. The western blot. J vis exp. , e5065(2025).
  30. Wu, M., Chen, G., Li, Y. P. TGF-β and BMP signaling in osteoblast, skeletal development, and bone formation, homeostasis and disease. Bone Res. 4, 16009(2016).
  31. Jeon, S., et al. The miR-15b-SMURF2-HSP27 axis promotes pulmonary fibrosis. J Biomed Sci. 30 (1), 2(2023).
  32. Zhang, W., et al. SMURF2 predisposes cancer cell toward ferroptosis in GPX4-independent manners by promoting GSTP1 degradation. Mol Cell. 83 (23), 4352-4369.e8 (2023).
  33. Pi, Y., et al. Loss of SMURF2 expression enhances RACK1 stability and promotes ovarian cancer progression. Cell Death Differ. 30 (11), 2382-2392 (2023).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

SMAD2SMURF2HEK293T
Сравнительные стратегии обнаружения убиквитинации в лизатах млекопитающих с использованием SMAD2/SMURF2 в качестве модели
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.