Исследовательская статья

ML385 ослабляет злокачественную прогрессию клеток аденокарциномы легкого, индуцированной диоксидом кремния, через путь оси аутофагии ROS/NRF2

487 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/69382

⸱

31 октября 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Medicine, Anhui University of Science and Technology, 2Department of Medical Laboratory, Huaian Hospital of Huaian City, 3Department of Pathology, The Affiliated Huai'an NO.1 People's Hospital of Nanjing Medical University, 4Department of Medical Laboratory, The Affiliated Huai'an NO.1 People's Hospital of Nanjing Medical University, 5Department of Pediatrics, The Affiliated Huai'an NO.1 People's Hospital of Nanjing Medical University, 6Department of Anesthesiology, The Affiliated Huai'an NO.1 People's Hospital of Nanjing Medical University, 7Key Laboratory of Industrial Dust Deep Reduction and Occupational Health and Safety of Anhui Higher Education Institutes, 8Department of Blood Transfusion, Shanghai Pudong New Area People's Hospital

В этой статье

Краткое содержание

В этом исследовании используются животные и клеточные модели для изучения того, ослабляет ли ингибитор NRF2 ML385 вызванное диоксидом кремния злокачественное прогрессирование аденокарциномы легкого через осевой путь аутофагии ROS/NRF2.

Аннотация

Воздействие диоксида кремния связано с повышенным риском развития аденокарциномы легких, но его молекулярный механизм остается неясным. Данное исследование направлено на создание воспроизводимого экспериментального протокола для изучения того, как ингибитор ML385, связанный с ядерным фактором эритроид-2-ассоциированным фактором 2 (NRF2), ингибирует индуцированное диоксидом кремния злокачественное прогрессирование аденокарциномы легкого путем регуляции оси АФК/NRF2-аутофагии. Во-первых, была создана модель силикоза путем интраназальной перфузии суспензии диоксида кремния у мышей C57BL/6. Степень фиброза легких оценивали с помощью окрашивания по Массону, инфильтрацию иммунных клеток анализировали с помощью иммунофлюоресценции, а экспрессию NRF2, циклин-зависимой киназы 1 (CDK1) и потенциал-зависимого анионного канала 1 (VDAC1) в легочной ткани выявляли с помощью иммуногистохимии. Впоследствии, в экспериментах in vitro , линия макрофагов RAW264.7 была обработана диоксидом кремния. Уровни аутофагического потока и окислительного стресса оценивали с помощью колокализации LC3-лизосом и зондов АФК, а вмешательство проводили с помощью ингибитора NRF2 ML385. Наконец, влияние ML38 на миграцию, инвазию и апоптоз клеток аденокарциномы легкого было проанализировано с помощью анализа царапин, прохождения клеток через поры определенного размера и проточной цитометрии. Результаты показали, что диоксид кремния может индуцировать фиброз легких, инфильтрацию иммунных клеток и повышение регуляции NRF2, CDK1 и VDAC1 у мышей (p < 0,001), а также ингибировать аутофагический поток макрофагов и снижать уровень АФК. ML385 может обратить эти эффекты вспять (p < 0,05). Этот протокол обеспечивает полный экспериментальный процесс от построения модели in vivo до исследования механизма in vitro , предлагая оперативный технический путь для изучения молекулярного механизма аденокарциномы легкого, связанной с диоксидом кремния, и терапевтических стратегий, нацеленных на NRF2.

Введение

Аденокарцинома легких является основной причиной смертности от рака во всем мире: по оценкам, ежегодно регистрируется 2 миллиона новых случаев заболевания и 1,76 миллиона случаевсмерти1. В последние годы заболеваемость аденокарциномой легких среди людей, которые никогда не курили, возросла, что может быть связано с такими факторами окружающей среды, как загрязнениевоздуха. Диоксид кремния является распространенным загрязнителем окружающей среды и был идентифицирован как потенциальный патогенный фактор аденокарциномы легкого человека3. Диоксид кремния может вызывать стойкое хроническое воспаление, приводящее к инфильтрации макрофагов, лимфоцитов и нейтрофилов, а также к высвобождению активных форм кислорода и факторов воспаления4. Это длительное воспалительное микроокружение способствует возникновению аденокарциномы легкого 5,6. Хотя связь между воздействием диоксида кремния и аденокарциномой легких была подтверждена, ее специфический молекулярный механизм не был полностью выяснен.

Транскрипционный фактор NRF2, кодируемый геном NFE2L2, играет решающую роль в качестве главного регулятора в поддержании клеточного окислительно-восстановительного гомеостаза в ответ на окислительный стресс 7,8. В нормальных условиях NRF2 мечется и разрушается комплексом убиквитинлигазы KEAP1-CUL3. При стимуляции окислительным стрессом или электрофильными веществами активность KEAP1 ингибируется, что позволяет NRF2 стабильно накапливаться и проникать в ядро, тем самым оказывая защитную и регуляторную роль ядра9. Тем не менее, чрезмерная активация NRF2 в опухолевом микроокружении может усиливать гликолиз и выживаемость опухолевых клеток за счет остановки накопления АФК и повышения апоптотической резистентности 10,11. Исследования доказали, что воздействие диоксида кремния может привести к аномальной активации сигнального пути NRF2 12,13. Таким образом, нацеливание на NRF2 может быть эффективной стратегией вмешательства в злокачественное прогрессирование аденокарциномы легкого, индуцированной диоксидом кремния14.

Данное исследование направлено на выяснение того, ингибитор NRF2 ML385 ингибирует вызванное диоксидом кремния злокачественное прогрессирование аденокарциномы легкого путем регуляции оси АФК/NRF2-аутофагии. Мы создали мышиную модель, индуцированную диоксидом кремния, для воспроизведения ключевых особенностей заболевания и использовали экспериментальные методы in vitro для изучения взаимодействия между макрофагами и опухолевыми клетками. Мы обнаружили, что диоксид кремния индуцировал экспрессию воспалительных и иммунных молекул и способствовал образованию опухоли через путь оси АФК/NRF2-аутофагии. При использовании ингибитора NRF2 (ML385) стимулирующее действие диоксида кремния на образование опухолей замедлилось, что позволяет предположить, что ингибитор NRF2 может играть роль в лечении опухолей легких, индуцированных диоксидом кремния.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все донорские блоки были получены из архивных патологических образцов, собранных в период с 2016 по 2018 год в Аффилированной Хуайаньской народной больнице No1 Нанкинского медицинского университета. Образцы были обезличены перед использованием и обработаны в соответствии с утвержденными протоколами. Комитет по этике Аффилированной народной больницы Хуайань No 1 Нанкинского медицинского университета, KY-2024-250-01. Разведение, утилизация и применение экспериментальных мышей строго соответствуют Правилам обращения с лабораторными животными и международным рекомендациям.

Построение модели мыши, индуцированной диоксидом кремния
Приготовление мышей и суспензии диоксида кремния: Вырастите самцов мышей C57BL/6 в возрасте 6-8 недель в помещении для животных с комнатной температурой 20-25 °C и циклом 12 ч света / 12 ч темноты. Для приготовления суспензии кремниевой пыли 300 мг порошка кремниевой пыли точно взвешивали и суспензировали в 10 мл стерильного 1-кратного фосфатно-солевого буфера. Затем смесь энергично переворачивали и колебали в течение 5 мин, а затем подвергали ультразвуковой обработке на водяной бане в ультразвуковой машине в течение 30 мин для обеспечения равномерного диспергирования частиц и предотвращения агрегации. Конечная концентрация этой резервной суспензии составляет 30 мг/мл. Стерилизовать путем автоклавирования при 121 °C в течение 30 минут. Перед каждым использованием необходимо сделать вихрь и снова встряхнуть в течение 2-3 минут, чтобы снова взвесить любые осевшие частицы.

Мыши вдыхали суспензию диоксида кремния через нос. С помощью микропипетки раствор медленно и по каплям вводился в носовую полость мышей. Мыши были разделены на 6 групп по 20 мышей в каждой. Объем ингаляции каждой группы составлял 10 мкл, 30 мкл, 50 мкл, 70 мкл, 90 мкл и 200 мкл, с концентрацией 30 мг/мл, один раз в сутки в течение 40 дней подряд. При перфуции обхватывайте кожу за ухом мыши большим и указательным пальцами левой руки, а остальными пальцами фиксируйте корпус и хвост мыши. Убедитесь, что мышь находится в лежачем положении на спине, слегка наклонив голову назад, чтобы суспензия могла естественным образом вдыхаться в дыхательные пути. Мы обнаружили, что после второго дня ингаляции суспензии диоксида кремния 10 мкл, 30 мкл, 50 мкл и 70 мкл суспензии диоксида кремния у мышей не было случая смерти, в то время как после второго дня ингаляции суспензии диоксида кремния 90 мкл и 200 мкл у мышей наблюдался смертельный исход. Таким образом, максимальный объем ингаляции диоксида кремния у мышей составлял 70 мкл в сутки.

При работе с кристаллическим диоксидом кремния его необходимо проводить в шкафу биобезопасности или вытяжном шкафу, а на протяжении всего процесса необходимо носить маски N95, пылезащитные очки, нитриловые перчатки и защитную одежду. При приготовлении суспензии движения должны быть мягкими, а во избежание образования аэрозолей следует использовать камеру для взвешивания. Все отходы, контактирующие с диоксидом кремния, должны собираться в герметичные контейнеры с устойчивостью к проколам и утилизироваться в соответствии с правилами для опасных химических отходов. Категорически запрещается смешивать его с обычным мусором или выливать в канализацию. Биологические отходы, такие как клеточная культуральная среда, должны быть собраны в специальные мусорные баки, содержащие дезинфицирующие средства, и стерилизованы под высоким давлением. Туши и ткани животных должны быть помещены в пакеты для биологических отходов и стерилизованы под высоким давлением для безвредной обработки.

Оцените успешность мышиной модели, вызванной диоксидом кремния. Оценивайте животных в разные моменты времени после вдыхания диоксида кремния, а именно на 3-й, 14-й и 40-й дни. Мышей помещали в профессиональные устройства для эвтаназии животных, а углекислый газ вводили со скоростью наполнения 30%-50% объема/мин. Они постоянно подвергались воздействию до тех пор, пока не переставали дышать. После подтверждения смерти были проведены последующие операции. Легочная ткань была удалена. Легочную ткань фиксировали в 4% растворе параформальдегида при комнатной температуре в течение 48 ч. После фиксации ткань обезвоживали градиентным спиртом, делали прозрачной с помощью ксилола, а затем погружали в парафин. Непрерывные срезы изготавливали с помощью парафиносекционной машины толщиной 4-5 мкм для последующего гистологического окрашивания и иммуногистохимического анализа. Легочная ткань не требует лечения декальциноза. Для оценки успешности создания модели было проведено патологоанатомическое исследование легочной ткани. Критерии успешности построения модели силикоза были следующими: значительное воспаление легких, фиброз и возникновение узелков силикоза.

Анализ инфильтрации иммунных клеток в мышиной модели, индуцированной диоксидом кремния
Легочные ткани мышей на 14-й день после ингаляции диоксида кремния окрашивали флуоресцентными маркерами, содержащими CD3e (коэффициент разведения 1:200), CD8a (коэффициент разведения 1:200), CD86 (коэффициент разведения 1:200), F4/80 (коэффициент разведения 1:200) и Nk1.1 (коэффициент разведения 1:200) для визуализации иммунных клеток. Зафиксируйте срезы клеток или тканей и заблокируйте 5% бычьим сывороточным альбумином (БСА) на 1 ч для уменьшения неспецифического связывания. Используйте обычную сыворотку того же видового происхождения, что и блокирующее антитело, разведите сыворотку с PBS в соотношении 1:10 и добавьте в образец 100 μл разведенной сыворотки. Затем заблокируйте при комнатной температуре на 30 минут, чтобы сыворотка могла блокировать эндогенные антитела. После запечатывания аккуратно промойте 2 раза PBS. Первичные антитела, содержащие CD3e (коэффициент разведения 1:200), CD8a (коэффициент разведения 1:200), CD86 (коэффициент разведения 1:200), F4/80 (коэффициент разведения 1:200) и Nk1.1 (коэффициент разведения 1:200), инкубировали в течение ночи при 4°C или при комнатной температуре в течение 1-2 ч. После промывки PBS флуоресцентное вторичное антитело добавляли и инкубировали в темноте в течение 1 ч.

Окрашивание Массона и иммуногистохимический анализ
Парафиновые срезы депарафинизировали ксилолом и гидратировали градиентным спиртом, а затем проводили забор антигена в буфере цитрата натрия с pH 6,0 методом термообработки под высоким давлением. Для термической коррекции под высоким давлением поместите срезы ткани, смоченные в ремонтном буфере, в микроволновую печь на среднем огне на 8-12 минут. Активность эндогенной пероксидазы блокировали 3% раствором перекиси водорода на 20 мин, а затем неспецифический сайт связывания блокировали 5% БСА при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавьте первичные антитела NRF2 (1:200), CDK1 (1:400) и VDAC1 (1:500) и инкубируйте в течение ночи при 4 °C. После 3-кратной промывки PBS добавьте меченое HRP козье вторичное антитело против кролика (1:500) и инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 часа. Парафиновые срезы подвергали окрашиванию DAB, противоокрашиванию гематоксилином, прозрачности дегидратации и герметизации нейтральным гелем для получения соответствующих результатов молекулярной иммуногистохимии. Когда DAB используется для разработки цвета, умеренное развитие цвета должно быть от коричневато-желтого до коричневато-коричневого, а фон должен быть четким. Как чрезмерное (темно-коричневый), так и недостаточное (светло-желтый) развитие цвета требуют оптимизации времени проявления цвета.

Степень фиброза легких полуколичественно анализировали с использованием метода оценки Эшкрофта15: окрашенные Массоном срезы наблюдали под микроскопом со 100-кратным увеличением, а легочную ткань случайным образом делили на 8 областей. Каждая область оценивалась в соответствии со степенью фиброза (0-8 баллов), при этом итоговый балл представлял собой среднее значение по всем регионам: 0 баллов (нормальная легочная ткань), 1-2 балла (легкий фиброз), 3-4 балла (умеренный фиброз), 5-8 баллов (тяжелый фиброз).

Иммуногистохимические результаты были количественно проанализированы с помощью программного обеспечения Image. Случайным образом были выбраны пять полей с высоким увеличением, и среднее значение оптической плотности (MOD) каждого поля измерялось как показатель уровня экспрессии белка.

Изучение влияния диоксида кремния и ML385 на аутофагию и АФК в клетках RAW264.7
Клетки RAW264.7 и A549 (предоставленные Аньхойским университетом науки и технологии) культивировали с использованием среды DMEM с высоким содержанием глюкозы с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% раствора биспецифических антител пенициллин-стрептомицин. Клетки 1 x 107 равномерно культивировали в инкубаторе с постоянной температурой при 37 °C и 5%CO2. 5 мкл 30 мг/мл суспензии диоксида кремния добавляли к 1 x 105 клеток/мл клеток RAW264.7. После инкубации в течение 24 ч клетки промывали PBS 3x, а аутофагия и окислительный стресс обнаруживались с помощью зондов АФК, LC3 и лизосом. В то же время ML38516, ингибитор NRF2, использовался для ингибирования экспрессии NRF2 (конечная концентрация ML385: 5 мМоль/л). Аутофагия и окислительный стресс были обнаружены в соответствии с вышеуказанными экспериментальными стадиями. Был проведен статистический анализ окислительного стресса и течения аутофагии в обеих группах.

Иммуногистохимический анализ экспрессии VDAC1, CDK1, p62 и NRF2 в тканях аденокарциномы легкого
Экспрессия VDAC1, CDK1, p62 и NRF2 была проверена у 30 пациентов. Ткани с аденокарциномой легкого и прилегающие здоровые ткани были получены из Аффилированной Хуайаньской народной больницы No1 Нанкинского медицинского университета и проанализированы с помощью иммуногистохимии (ИГХ). Статистически проанализированы результаты ИГХ и фиброза легких. Собирайте данные о пациентах в соответствии с информацией о пациенте в больничной системе. Конкретные этапы эксперимента заключаются в следующем: парафиновые срезы депарафинизировали ксилолом и гидратировали градиентным спиртом, а затем проводили ремедиацию антигена в буфере цитрата натрия с pH 6,0 методом термической ремедиации под высоким давлением. Активность эндогенной пероксидазы блокировали 3% раствором перекиси водорода на 20 мин, а затем неспецифический сайт связывания блокировали 5% БСА при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавьте первичные антитела NRF2 (1:200), CDK1 (1:400), p62 (1:500) и VDAC1 (1:500) и инкубируйте в течение ночи при 4 °C. После 3-кратной промывки PBS добавьте меченое HRP козье вторичное антитело против кролика (1:500) и инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 ч. Развитие цвета DAB, противоокрашивание гематоксилином, обезвоженное прозрачное, нейтральное герметизация десен. Когда DAB используется для разработки цвета, умеренное развитие цвета должно быть от коричневато-желтого до коричневато-коричневого, а фон должен быть четким. Как чрезмерное (темно-коричневый), так и недостаточное (светло-желтый) развитие цвета требуют оптимизации времени проявления цвета.

Анализ миграции и инвазии клеток
Изучено влияние ML385 и надосадочной жидкости от совместной инкубации диоксида кремния с клетками RAW264.7 на миграцию и инвазию клеток после инкубации с клеточной линией аденокарциномы легкого A549. К клеткам А549 добавляли надосадочную жидкость клеток RAW264.7, совместно культивируемых с диоксидом кремния в течение 24 ч. Ячейки были разделены на группу кремнезема, группу диоксида кремния + ML385 и группу PBS. Группа диоксида кремния: 5 мкл 30 мг/мл суспензии диоксида кремния добавляли к 1 x 105 клеток/мл клеток RAW264.7. После инкубации в течение 24 ч удалите надосадочную жидкость для последующего использования. Группа диоксида кремния+ML385: 5 мкл суспензии диоксида кремния 30 мг/мл и конечная концентрация 5 мМ/л ML385 добавляли к 1 x 105 клеток/мл клеток RAW264.7. После инкубации в течение 24 ч удалите надосадочную жидкость для последующего использования. Группа PBS: 5 мкл PBS добавляли к 1 x 105 клеток/мл клеток RAW264.7. После инкубации в течение 24 ч удалите надосадочную жидкость для последующего использования. Во время скретч-анализа клетки А549 сначала засеивали в 12-луночные планшеты с плотностью 5 х 105 на лунку. После того, как клетки выросли до 95%-100% слияния, на монослойных клетках были сделаны царапины с помощью кончика стерильной пипетки объемом 200 мкл. Отслоившиеся клетки были аккуратно смыты PBS. Впоследствии условия культивирования были изменены для включения 1% основной среды FBS и надосадочной жидкости каждой группы лечения для поддержания жизнеспособности клеток в течение 7-дневного экспериментального периода. Изображения с одинаковым положением были собраны под инвертированным микроскопом через 0 ч (день 0) и на 7-й день (день 7) после царапины соответственно. Наконец, площадь царапины была количественно проанализирована, и скорость закрытия царапин была рассчитана с помощью программного обеспечения ImageJ для оценки влияния надосадочной жидкости из различных групп обработки на миграционную способность клеток A549.

Для инвазионного анализа клеток, проходящих через поры определенного размера, использовалась мембранная камера из поликарбоната размером 8 мкм, при этом мембрана верхней камеры была предварительно покрыта гелем, имитирующим внеклеточную среду, разбавленным в соотношении 1:8 для создания барьера базальной мембраны. Клетки А549 ресуспендировали в суспензии, полученной путем смешивания бессывороточной среды с надосадочной жидкостью каждой группы лечения в соотношении 1:1, а затем инокулировали в верхней камере (2 х 10,4 клетки на камеру). В нижней камере в качестве химического аттрактанта добавляли раствор, полученный путем смешивания среды, содержащей 20% FBS, с надосадочной жидкостью соответствующих групп обработки (группа Silica+ML385, группа Silica и группа PBS). Надосадочную жидкость соответствующих групп лечения собирали путем отсасывания через дозатор в RAW264.7 Клеточный фагоцитоз диоксида кремния. После непрерывной инкубации клеток при 37 °C и 5%CO2 в течение 7 дней неинвазивные клетки в верхней камере удаляли ватными тампонами, а клетки, проникшие через мембрану и достигавшие нижней камеры, фиксировали 4% параформальдегидом и окрашивали 0,1% кристаллического фиолета. Наконец, количество инвазивных клеток было случайным образом выбрано из 5 полей зрения с помощью оптического микроскопа.

Анализ влияния диоксида кремния и ML385 на апоптоз клеток А549 с помощью проточной цитометрии
Препарирование и группировка клеток: Были собраны клетки А549, обработанные надосадочной жидкостью каждой группы лечения (группа PBS, группа диоксида кремния, группа диоксида кремния + группа ML385). Клетки осторожно промывали 2 раза с помощью предварительно охлажденного PBS, затем ресуспендировали в 1x связывающем буфере, и плотность клеток регулировали до 1 x 106 клеток на пробирку/100 мкл. Затем в клеточную суспензию добавляли 5 мкл аннексина V-FITC и 5 мкл окрашивающего раствора PI, осторожно перемешивали и инкубировали при комнатной температуре в темноте в течение 15 минут. После инкубации в каждую пробирку добавляли 400 мкл связывающего буфера 1x и сразу же тестировали на машине. Детектирование проводилось с помощью проточного цитометра. Возбуждаемый лазером с длиной волны 488 нм, флуоресцентный сигнал Annexin V-FITC собирался по каналу FITC, а флуоресцентный сигнал PI — по каналу PE. Перед экспериментом для корректировки компенсации флуоресценции с целью устранения спектрального перекрытия использовались образцы с одиночным окрашиванием. При проведении анализа данных сначала определите популяцию клеток-мишеней на диаграмме рассеяния FSC-A/SSC-A и исключите фрагменты. Впоследствии клеточные спайки были исключены с помощью диаграммы рассеяния FSC-H/FSC-A; Наконец, были установлены ворота для различения живых клеток, ранних апоптотических клеток, поздних апоптотических/некротических клеток и механически поврежденных клеток. Данные были получены и проанализированы с помощью программного обеспечения FlowJo V10.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Модель мыши из диоксида кремния
На рисунке 1 мышам вводили диоксид кремния интраназально в дозировке 30 мг/мл и 70 мкл в течение 40 дней подряд, что гарантировало, что у мышей не произошло никаких смертельных случаев и можно было успешно установить мышиную модель с диоксидом кремния. Между тем, мышиный зонд с PBS использовался в качестве отрицательного контроля. Цель состояла в том, чтобы устранить влияние операции и самого растворителя и гарантировать, что фенотип специф...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Аденокарцинома легкого является одной из основных причин смертности от рака во всем мире, и показатели заболеваемости и смертности от нее растут из года вгод. Международное агентство по изучению рака классифицирует диоксид кремния как канцероген 1 класса для человека, и риск развития аденокарциномы легких увеличивается при кумулятивном профессиональном воздействии 18,19,20,21.<...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Благодарим членов команды за их поддержку и вклад в это исследование. Это исследование было поддержано Ключевой лабораторией глубокого снижения промышленной пыли и охраны труда и техники безопасности высших учебных заведений провинции Аньхой (No AYZJSGXLK202202006), Фондом стартапов по внедрению талантов в Шанхайской больнице Пудун в новом районе (No PRYYH202501).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
BeyoGold TranswellBeyotime Biotechnology FTW067-48lnsТрансвелл
CD3eБионаука по бакалаврству561827FITC Hamster Anti-Mouse CD3e (145-2C11)
CD86Бионаука по бакалаврству105013CD86
CD8aБионаука по бакалаврству100713CD8a
CDK1AbcamAB133327Анти-CDK1
Набор для обнаружения клеточного апоптозаBeyotime Biotechnology C1062LОбнаружение апоптоза
DAPIBeyotime Biotechnology P0131-25 млDAPI
Машина вложенияP.S.J MEDICALBM450AМашина вложения
F4/80Бионаука по бакалаврству123109F4/80
Полностью автоматический сушитель тканейLeica BiosystemsASP3005Полностью автоматический сушитель тканей
Стеклянные микроскопические стеклиCitotest250124A1Стеклянные микроскопические стекли
H& E-красительBeyotime Biotechnology C0105MH& E-краситель
Комплект IHCАбсиновая биотехнологияabs996-5 млКомплект IHC
Зонд LC3Beyotime Biotechnology C3018MЗонд LC3
Низкопрофильные микротомные лезвияТермо Фишер3052835Низкопрофильные микротомные лезвия
Лизосомный зондBeyotime Biotechnology C1046Лизосомный зонд
Маркерная ручкаГастрономSK109Маркерная ручка
Краситель МассонBeyotime Biotechnology C0189MКраситель Массон
Matrix-GelBeyotime Biotechnology C0371-5 млМатричный клей
МикротомLeica BiosystemsHistoCore BIOCUTМикротом
ML385AbcamAB287109Ингибитор NRF2
NK1.1Бионаука по бакалаврству561117NK1.1
NRF2Abcamab1809YАнти-NRF2
стр. 62Abcamab20735Anti-p62
ПарафинSolarbioYA0012Парафин
Набор для анализа реактивных видов кислородаBeyotime Biotechnology S0033MЗонд ROS
КремнеземСигма ОлдричS5631Кристаллический кремнезем
VDAC1Abcamab34726Anti-VDAC1

Ссылки

  1. Thai, A. A., Solomon, B. J., Sequist, L. V., Gainor, J. F., Heist, R. S. Lung cancer. Lancet. 398 (10299), 535-554 (2021).
  2. Liang, D., et al. Lung Cancer in Never-Smokers: A Multicenter Case-Control Study in North China. Front Oncol. 9, 1354(2019).
  3. Olsson, A., et al. Lung Cancer Risks Associated with Occupational Exposure to Pairs of Five Lung Carcinogens: Results from a Pooled Analysis of Case-Control Studies (SYNERGY). Environ Health Perspect. 132 (1), 017005(2024).
  4. Sato, T., Shimosato, T., Klinman, D. M. Silicosis and lung cancer: current perspectives. Lung Cancer Targets Ther. 9, 91-101 (2018).
  5. Nakano-Narusawa, Y., et al. Single Intratracheal Quartz Instillation Induced Chronic Inflammation and Tumourigenesis in Rat Lungs. Sci Rep. 10 (1), 6647(2020).
  6. Hornung, V., et al. Silica crystals and aluminum salts activate the NALP3 inflammasome through phagosomal destabilization. Nat Immunol. 9 (8), 847-856 (2008).
  7. Dodson, M., et al. Modulating NRF2 in Disease: Timing Is Everything. Ann Rev Pharmacol Toxicol. 59, 555-575 (2019).
  8. Bae, T., Hallis, S. P., Kwak, M. K. Hypoxia, oxidative stress, and the interplay of HIFs and NRF2 signaling in cancer. Exp Mol Med. 56 (3), 501-514 (2024).
  9. Yamamoto, M., Kensler, T. W., Motohashi, H. The KEAP1-NRF2 System: a Thiol-Based Sensor-Effector Apparatus for Maintaining Redox Homeostasis. Physiol Rev. 98 (3), 1169-1203 (2018).
  10. Weiss-Sadan, T., et al. NRF2 activation induces NADH-reductive stress, providing a metabolic vulnerability in lung cancer. Cell Metabol. 35 (3), 487-503.e7 (2023).
  11. Rojo de la Vega, M., Chapman, E., Zhang, D. D. NRF2 and the Hallmarks of Cancer. Cancer Cell. 34 (1), 21-43 (2018).
  12. Chen, G., et al. n-BuOH extract of Bletilla striata exerts chemopreventive effects on lung against SiO2 nanoparticles through activation of Nrf2 pathway. Phytomed Int J Phytother Phytopharmacol. 82, 153445(2021).
  13. Song, J., Meng, H., Deng, G., Lin, H. Sustainable Release Selenium Laden with SiO2 Restoring Peripheral Nerve Injury via Modulating PI3K/AKT Pathway Signaling Pathway. Int J Nanomed. 19, 7851-7870 (2024).
  14. Zuo, L., et al. The Nrf2-HMOX1 pathway as a therapeutic target for reversing cisplatin resistance in non-small cell lung cancer via inhibiting ferroptosis. Cell Death Disc. 11 (1), 287(2025).
  15. Ashcroft, T., Simpson, J. M., Timbrell, V. Simple method of estimating severity of pulmonary fibrosis on a numerical scale. J Clin Pathol. 41 (4), 467-470 (1988).
  16. Xu, C., et al. ML385, an Nrf2 Inhibitor, Synergically Enhanced Celastrol Triggered Endoplasmic Reticulum Stress in Lung Cancer Cells. ACS Omega. 9 (43), 43697-43705 (2024).
  17. Qiu, Z., et al. Proteomic characteristics of lung adenocarcinoma tumors that are small but highly invasive. Med Adv. 1 (4), 340-352 (2023).
  18. Christiani, D. C. Occupational Exposures and Lung Cancer. Am J Respirat Crit Care Med. 202 (3), 317-319 (2020).
  19. Requena-Mullor, M., et al. Association between Crystalline Silica Dust Exposure and Silicosis Development in Artificial Stone Workers. Int J Environ Res Public Health. 18 (11), 5625(2021).
  20. Wang, Z., et al. Erchen decoction alleviates silicosis by attenuating ferroptosis and fibrosis in alveolar macrophages via modulating the P53/HMOX1 pathway. J Ethnopharmacol. 352, 120227(2025).
  21. Zhou, Y., Zhang, W., Wu, D., Fan, Y. The effect of silica exposure on the risk of lung cancer: A meta-analysis. J Biochem Mol Toxicol. 37 (4), e23287(2023).
  22. Liu, W., et al. Nrf2 Protects Against Oxidative Stress Induced By SiO2 Nanoparticles. Nanomedicine. 12 (19), 2303-2318 (2017).
  23. Li, S., et al. SiO2 particles induce pulmonary fibrosis by modulating NLRP3 through the ROS/Keap1/Nrf2 signaling pathway in rats. Food Chem Toxicol Int J Published Brit Ind Biol Re Associat. 202, 115520(2025).
  24. Wang, G., et al. Nrf2 mediates the effects of shionone on silica-induced pulmonary fibrosis. Chinese Med. 19 (1), 88(2024).
  25. Tian, Y., et al. Nebulized inhalation of LPAE-HDAC10 inhibits acetylation-mediated ROS/NF-κB pathway for silicosis treatment. J Controlled Release. 364, 618-631 (2023).
  26. Baird, L., Yamamoto, M. The Molecular Mechanisms Regulating the KEAP1-NRF2 Pathway. Mol Cell Biol. 40 (13), e00099-e00120 (2020).
  27. Kreß, J. K. C., et al. The integrated stress response effector ATF4 is an obligatory metabolic activator of NRF2. Cell Rep. 42 (7), 112724(2023).
  28. Xie, B., Wang, S., Jiang, N., Li, J. J. Cyclin B1/CDK1-regulated mitochondrial bioenergetics in cell cycle progression and tumor resistance. Can Lett. 443, 56-66 (2019).
  29. Odle, R. I., Florey, O., Ktistakis, N. T., Cook, S. J. CDK1, the Other "Master Regulator" of Autophagy. Trends Cell Biol. 31 (2), 95-107 (2021).
  30. Liu, Y., et al. Hypoxia-induced GPCPD1 depalmitoylation triggers mitophagy via regulating PRKN-mediated ubiquitination of VDAC1. Autophagy. 19 (9), 2443-2463 (2023).
  31. Yuan, M., et al. IP3R1/GRP75/VDAC1 complex mediates endoplasmic reticulum stress-mitochondrial oxidative stress in diabetic atrial remodeling. Redox Biol. 52, 102289(2022).
  32. Shi, Q., et al. SPOP mutations promote p62/SQSTM1-dependent autophagy and Nrf2 activation in prostate cancer. Cell Death Differentiat. 29 (6), 1228-1239 (2022).
  33. Zheng, Y., et al. Melatonin Alleviates the Oxygen-Glucose Deprivation/Reperfusion-Induced Pyroptosis of HEI-OC1 Cells and Cochlear Hair Cells via MT-1,2/Nrf2 (NFE2L2)/ROS/NLRP3 Pathway. Mol Neurobiol. 60 (2), 629-642 (2023).
  34. Cords, L., et al. Cancer-associated fibroblast phenotypes are associated with patient outcome in non-small cell lung cancer. Cancer Cell. 42 (3), 396-412.e5 (2024).
  35. Wu, F., et al. Single-cell profiling of tumor heterogeneity and the microenvironment in advanced non-small cell lung cancer. Nat Comm. 12 (1), 2540(2021).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

NRF2NRF2

Похожие статьи